Plos ONE: β, β-Dimethylacrylshikonin inducira Mitohondrij Odvisna apoptoza skozi ERK Pathway v človekovem želodca Rak SGC-7901 celice

Povzetek

β, β-Dimethylacrylshikonin, ena od aktivnih komponent v koreninske ekstraktov Lithospermum erythrorhizon, posedovati protitumorsko aktivnost. V tej študiji smo obravnavali molekularne mehanizme beta, beta-dimethylacrylshikonin z apoptozo SGC-7901 celic. β, β-Dimethylacrylshikonin zmanjšana sposobnost preživetja celic SGC-7901 celic na od odmerka in časovno odvisni način in inducirane celične apoptoze. β, zdravljenje β-Dimethylacrylshikonin v SGC-7901 celic navzdol regulirano ekspresijo XIAP, cIAP-2 in Bcl-2 in up-urejena izražanje Bak in Bax in povzročila izgubo mitohondrijski membranski potencial in sprostitev citokroma c . Poleg tega β, β-dimethylacrylshikonin zdravljenje privedlo do aktivacije kaspaz-9, 8 in 3 ter cepitev poli (ADP-riboza) polimerazo (PARP), ki je bila odpravljena s predhodno obdelavo z zaviralcem pan-kaspaza Z-VAD-FMK . β, β-Dimethylacrylshikonin inducirano fosforilacijo zunajcelični-signala regulirano kinaze (ERK) v SGC-7901 celic. U0126, specifični zaviralec MEK, blokiral aktivacijo ERK z ß, beta-dimethylacrylshikonin in odpravilo ß, beta-dimethylacrylshikonin inducirano apoptozo. Naši rezultati pokazali, da β, β-dimethylacrylshikonin inhibirana rast rakavih želodca SGC-7901 celic z indukcijo ERK signalne poti, in če je namig za predklinične in klinične ocene beta, β-dimethylacrylshikonin za terapijo raka želodca.

citat: Shen XJ, Wang HB, Ma XQ, Chen JH (2012) β, β-Dimethylacrylshikonin inducira Mitohondrij Odvisna apoptoza skozi ERK Pathway v Human Rak želodca SGC-7901 celic. PLoS ONE 7 (7): e41773. doi: 10,1371 /journal.pone.0041773

Urednik: Salvatore V. Pizzo, Duke University Medical Center, Združene države Amerike

Prejeto: 1. marec 2012; Sprejeto: 25. junij 2012; Objavljeno: 27. julij 2012

Copyright: © Shen et al. To je odprtega dostopa članek razširja pod pogoji Creative Commons Attribution License, ki omogoča neomejeno uporabo, distribucijo in razmnoževanje v katerem koli mediju, pod pogojem, da prvotni avtor in vir knjižijo

Financiranje:. To delo je podprta s sredstvi iz province Zhejiang Natural Science Foundation Kitajske v X-QM (LY12H28005) ter znanosti temelj Zhejiang kitajske medicinske univerze v H-BW (2011ZY05). Med financerji imel nobene vloge pri oblikovanju študije, zbiranje in analizo podatkov, sklep, da se objavi, ali pripravi rokopisa

nasprotujočimi si interesi.. Avtorji so izjavili, da ne obstajajo konkurenčni interesi

Uvod

rak želodca je eden izmed agresivnih malignih tumorjev, čeprav z razvojem radioterapijo, kemoterapijo in bioterapijo, resnih stranskih učinkov so neizogibni [1], zato je bolj učinkovita antitumorskih zdravil z manj stranskimi učinki za zdravljenje raka želodca so potrebni.

Lithospermum erythrorhizon je pomemben kitajskih zelišč. Ima nekaj aktivne sestavine: Deoxyshikonin, Isobutyrylshikonin, Acetylshikonin, Isovalerylshikonin, β, β-Dimethylaerylshikonin (. Slika 1a) in shikonin [2]. V tradicionalni kitajski medicini, to kaže več bioloških funkcij, vključno z anti-mikrobne, protivnetno, proti tumorjem, imunsko regulacijo in anti-HIV lastnostmi [3] - [6]. Učinek anti-tumor shikonin in njegovi derivati ​​so bili najprej izkazal njihove aktivnosti proti rasti tumorja pri glodalskega sarkom-180 [7]. Shikonin razstavlja učinek ne samo z ubijanjem tumorske celice neposredno, ampak tudi inhibira tumorsko angiogenezo [8]. Študije so pokazale, da shikonin inducirano apoptozo v človeški malignega melanoma, raka sečnega mehurja, raka materničnega vratu, pljučnega raka in raka na jetrih, in tako dalje [9] - [13]. Vendar pa ima manj stranskih učinkov in več zaščitne učinke na ljudi normalnih celic [14], [15]. Hsu PC et al pokazala, da shikonin privedla do apoptoza celic z up-regulacijo p27, p53, Bax in dol-ureditev Bcl-2 in Bcl-XL v človeški kolorektalnega karcinoma COLO 205 celic [16]. Tumor invazija shikonin zaviral v nekaterih rakavih celic lahko z zmanjšanjem števila NF-κB posredovano MMP-9 izražanja [17]. Shikonin tudi inducira apoptozo preko proizvodnje ROS v karcinomom jetrnih celic [12]. Singh F et al tudi ugotovila, da Shikonin zmanjšala fosforilirane ravni EGFR, ERK in protein tirozin-kinaz in povečane znotrajcelične koncentracije proteinov, povezanih z apoptoze, ki je povzročila epidermoidni karcinom celic opraviti apoptozo [18].

Novi dokazi pokazali, da β, β-dimethylacrylshikonin imela pomembno protitumorsko učinek na karcinomom jetrnih celic z aktiviranjem kaspazo-3 [19]. Vendar pa ni bila zabeležena kot učinek beta, ß-dimethylacrylshikonin o človekovih želodčnih rakavih celic in molekularni mehanizmi še vedno ne razumemo dobro. Tako je v tej študiji, bomo razpravljali učinek beta, beta-dimethylacrylshikonin na človeško rak želodca celic SGC-7901 in z njo povezano signalizacijo za boljše razumevanje mehanizma ß, β-dimethylacrylshikonin na raka želodca.

materiali in metode

materiali in reagenti

SGC-7901 celice so bile kupljene iz Kitajske akademije znanosti Cell banke Type Culture Collection (Shanghai, Kitajska). β, je β-Dimethylacrylshikonin kupili od Tokyo kemično industrijo (Tokio, Japonska). MTT in DAPI so bili kupljeni od Calbiochem (San Diego, CA, ZDA). U0126 je bila kupljena od signalizacijo med celicami (Boston, MA, ZDA). Pan-kaspaze inhibitor (Z-VAD-FMK) je bila kupljena od Beyotime Inštituta za biotehnologijo (Shanghai, Kitajska). Protitelesa citokroma c bila kupljena iz Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA, ZDA). Protitelesa proti ERK, fosfo-ERK, Bcl-2, Bcl-XL, XIAP, cIAP-2, survivn, Bax, Bak, razcepi kaspaze-9, razklani kaspaze-3, razklani PARP in ß-aktina so bile kupljene od signalizacijo med celicami ( Boston, MA, ZDA). FITC-aneksin V Apoptoza Detection Kit je bila kupljena od Becton Dickinson (San Diego, CA, ZDA).

celične kulture in proliferacijo celic testu

so SGC-7901 celice gojimo v RPMI 1640 medija z 10% fetalni goveji serum (Hyclone, UT) in jo vzdržujemo pri 37 ° C v navlaženi atmosferi 5% CO _{2. Nato smo celice zasejali v 96 jamicami posodo do končne koncentracije 5 x 10 ^{3 celic /jamico in inkubiramo v RPMI 1640 medij, ki vsebuje 10% FCS 24 h, potem smo celice obdelali z navedeno koncentracijo β, β-dimethylacrylshikonin 24 h in 48 h. Medij odstranimo in svež medij dodamo v vsako vdolbino, skupaj z 20 ul raztopine MTT (5 mg /ml). Po 4 h inkubacije, smo 150 ul DMSO dodamo v vsako vdolbino. Plošče smo prebrali pri valovni dolžini 570 nm z uporabo Varioskan Flash MultiMode Reader (Thermo Scientific, ZDA). Štiri Ponovil vrtine so bile uporabljene za vsako zdravljenje, in poskusi smo ponovili trikrat.}}

morfološke spremembe

SGC-7901 celice so bili dani v vdolbino šestimi vdolbinami. Po 24 h celični kulturi, so bili zdravljeni z P, P-dimethylacrylshikonin za označenih časovnih obdobjih. Celična morfologija opazili z uporabo obrnjeni mikroskopijo. (Model IX70, Olympus, Tokio, Japonska)

DAPI (4 ', 6-diamidino-2-phenylindole) obarvanje

SGC-7901 celic so bili dani v vdolbino šestimi vdolbinami. Po 24 h celični kulturi, so bili zdravljeni z P, P-dimethylacrylshikonin za označenih časovnih obdobjih, nato pa celice so bile določene v hladnem acetonu 30 minut, in inkubiramo z DAPI (1 mg /ml) 30 minut. Apoptoze jedra označen kot intenzivno obarvajo so odkrili s fluorescentno mikroskopijo. (Model IX71, Olympus, Tokio, Japonska)

aneksin V /PI testi za apoptozo

Za aneksin V /PI testov, celice smo obarvali z AnnexinV-FITC in PI ter ocenjevali apoptoze s pretočno citometrijo po strani mannufacturer v protokolu (BD Pharmingen, San Diego, CA, ZDA). Na kratko, 1 x 10 ^{5 celice smo dvakrat izprali s PBS in obarvali s 5 ul iz AnnexinV-FITC in 5 ul s PI v 500 ul vezavnem pufru za 15 min pri sobni temperaturi v temi. Apoptoze celic smo določili s pomočjo BD FACS Diva programsko opremo (BD bioznanosti, Franklin Lakes, NJ). Aneksin V obarvanje služi kot merilo za Fosfatidilserin zunanjega in celice, ki so aneksin V + /PI -. Predstavlja zgodnji apoptotične celice}

Merjenje mitohondrijske membrane potencialne

Cells ( 5 × 10 ^{5 celic /ml) so bili zdravljeni z ali brez ß, β-dimethylacrylshikonin (10 mol /L) za 24 ur in barvanega z JC-1 (BD MitoScreen JC-1 Kit, Becton Dickinson, ZDA) za 15 min pri 37 ° C. membranski potencial mitohondrijski je bila odkrita s pretočno citometrijo (FACSCanto II, Becton Dickinson, ZDA).}

Western Bloting analiza

Celice so zdravili z navedeno koncentracijo beta, beta-dimethylacrylshikonin za navedeni čas v RPMI 1640 mediju z 10% FCS. Celice smo zbrali v ledeno mrzlo PBS in celične ekstrakte smo pripravili v RIPA pufrom s koktajlom zaviralcem proteinaze iz Calbiochem (San Diego, CA). smo določili in kuhamo z gel pufra 10 minut pri 100 ° C koncentracije proteina lizatov celic. Vzorci vsebujejo 30 ig celotnega proteina smo elektroforezo na 10% SDS-poliakrilamidnem gelu in prenesli na PVDF membrano (Millipore, Temecula, CA). Po prenosu bila membrana blokiran TBST (TBS vsebuje 0,1% Tween 20), ki vsebuje 5% posnetega mleka v teku 2 h, čemur sledi inkubacija preko noči pri 4 ° C z ustreznimi primarnimi protitelesi. Po izpiranju trikrat v TBST smo membrane inkubirali 2 uri pri 37 ° C z 1:5000 s hrenovo peroksidazo konjugiranih ustreznih sekundarnih protiteles. Končno smo membrane vizualiziramo z uporabo sistema izboljšano zaznavanje kemiluminescenca (Immun-Star WesternC Kit, Bio-Rad, ZDA).

imunofluorescenco

Immunofluorescene barvanje smo uporabili za analizo subceličnih porazdelitev citokrom c v SGC-7901 celic, P, P-dimethylacrylshikonin induciranih. Celice gojene v sterilnih steklenih coverlips so bile določene v hladnem acetonu 10 minut. Po permeabiliziramo z 0,3% Triton X-100 za 20 minut pri sobni temperaturi, smo celice blokiran 3% serumskega albumina goveje 30 minut in inkubiran preko noči pri 4 ° C z anti-citokrom c protitelesa (1:30). Po trikratnem spiranju v PBS, smo SGC-7901 celice označene s Alexa Fluor 488-konjugiranega sekundarnega protitelesa. DAPI Kasneje je bil dodan za jedrsko obarvanje. Mikroskopska analiza je bila opravljena s pomočjo fluorescenčne mikroskopije (model IX71; Olympus, Tokio, Japonska).

Statistična analiza

Podatki o katerih so poročali, so srednja vrednost ± standardni odklon (SD) treh neodvisnih poskusov. So bili ocenjeni z enosmerno analizo variance (ANOVA). Pomembne razlike so bile izdelane na p <. 0,05

Rezultati

β, β-Dimethylacrylshikonin zavira sposobnost preživetja SGC-7901 celic

Za določitev citotoksični učinek ß, β-dimethylacrylshikonin na želodcu rakavih celic. SGC-7901 celice so zdravili z 2,5, 5, 7,5, 10 umol /L beta, beta-dimethylacrylshikonin 24 in 48. uro, zmanjšano sposobnost preživetja celic, ki so se zdravili z beta, beta-dimethylacrylshikonin je bila 92,41 ± 6,06%, 76,49 ± 3,18%, 67,19 ± 1,82% in 61,76 ± 0,18%, oziroma v 24 urah v primerjavi s celicami, zdravljenih z nosilcem (sl. 1B). Pri zdravljenju 48 h, viabilnost celic je bila 52,03 ± 9,45%, 38,99 ± 1,43%, 30,70 ± 1,58% in 27,4 ± 0,31% (sl. 1B). Polovica maksimalne inhibitorne koncentracije (IC _{50) iz ß je β-dimethylacrylshikonin za SGC-7901 celic 11.04 LM in 2,89 LM po 24 h in 48 h oz.}

β, β-Dimethylacrylshikonin inducira SGC -7901 celice apoptoza

SGC-7901 celice so prvič zdravljenih z ß, beta-dimethylacrylshikonin, pokazali celice doživel označena morfološke spremembe po obdelavi z 10 mol /L ß, beta-dimethylacrylshikonin v primerjavi z neobdelano kontrolo za 24 ur. V prisotnosti beta, β-dimethylacrylshikonin, število SGC-7901 celica zmanjšano in celice postali okrogla in majhne oblike in sprosti iz plošče v primerjavi z negativno kontrolno skupino (sl. 2A). β, β-dimethylacrylshikonin povzročil tudi jedrsko kondenzacije z intenzivnim DAPI obarvanja primerjavi z jedrskimi kontrolnih SGC-7901 celic za 24 ur (sl. 2b).

Če želite ugotoviti, ali cytotoxity beta, β-dimethylacrylshikonin vključeni apoptoze smo ocenili apoptotske učinek P, P-dimethylacrylshikonin v SGC-7901 celic z citometrije toka za aneksina in propidijevim jodidom (PI) barvanjem. Odstotek zgodnjih apoptotskih celic (aneksin V ^{+ /PI -) je bila 1,6%, 7,2%, 18,1%, 24,3% in 24,4% v odgovor na vozilu, 2,5, 5, 7,5 in 10 umol /L β, oziroma za 24 h (sl. 2C) β-dimethylacrylshikonin. Zanimivo je, da Pozna apoptotske celice (aneksin V + /PI +) so bile znatno SGC-7901 celic povečal (29,7% z 7,5 mol /L in 33,6% z 10 mol /L ß, β-dimethylacrylshikonin zdravljenja ) (sl. 2C).}

β, β-dimethylacrylshikonin inducira mitohondrijev dogodke, povezane z apoptozo v SGC-7901 celic

Bcl-2 družinski proteini vključujejo pro-apoptotičnih beljakovine (Bax, Bak in dvakrat na dan) in antiapoptozne proteini (BCL-2, Bcl-XL, cIAP-2, XIAP in survivin). Ti lahko vključite ali zavirajo sproščanje nadaljnjih dejavnikov, ki vodijo do aktivacije kaspaze-3 in PARP pri izvajanju apoptoze [20]. Da bi odkrili, povezanih z apoptozo beljakovine, pro-apoptotske beljakovine (Bax, Bak) in anti-apoptotične beljakovine (XIAP, cIAP-2, bcl-2, Bcl-XL, survivina) so bile odkrite z Western blot po SGC-7901 celice smo obdelali z različno koncentracijo beta, beta-dimethylacrylshikonin (0, 2.5, 5, 7.5 in 10 mol /L) za 24 h. Rezultati so pokazali, da β, β-dimethylacrylshikonin zmanjša ekspresijo XIAP, cIAP-2, Bcl-2 (sl. 3A). Vendar pa je bila navzdol ureditev XIAP in Bcl-2 manj izrazito, medtem ko je bil dol-ureditev cIAP-2 precej dramatično in odvisna od odmerka. Ni bilo pomembno spremembo Bcl-XL in survivn v SGC-7901 celic. Ali ß lahko β-dimethylacrylshikonin uravnavajo izražanje pro-apoptotskih beljakovine (Bax, Bak) je preučilo tudi. Ugotovili smo, da β, β-dimethylacrylshikonin povečala izražanje Bak na način, ki je odvisen od odmerka, vendar je imel le malo vpliva na Bax (sl. 3B).

kaspazne družine proteini so ključni encimi za izvedbo apoptozo. Med kaspaze družinskih članov, kaspaze-3 je ključni rabelj za apoptoze v celicah sesalcev [21]. To se lahko aktivira s smrtno posredujejo receptorji zunajbesedilno kaspaze-8 poti in mitohondriji odvisno-kaspaze-9 notranja pot [22], [23]. Da bi nadalje razumeli molekulsko mehanizem apoptoze so SGC-7901 celice obdelamo s ß, beta-dimethylacrylshikonin in zazna z Western blot analizo za spremembo izražanja kaspaze-3 kaspaze-8 in kaspaze-9, rezultati pokazali izboklina od odmerka odvisen cepljen kaspaze-3, odcepimo kaspaza-8 in cepimo kaspaza-9 v ß, β-dimethylacrylshikonin obdelan celice. PARP cepitev, druga poznana značilnost apoptoze, je bilo ugotovljeno tudi v P, β-dimethylacrylshikonin obdelane celice (sl. 3C). Moteno delovanje mitohondrijev inducirane apoptoze, ki je pogosto posledica zmanjšanja membranski potencial mitohondrijev. Izkazalo se je, da je osrednji apoptoze poti. V SGC-7901 celice so zdravili z ali brez ß, β-dimethylacrylshikonin (10 mol /L) za 24 ur, rezultati po β, je β-dimethylacrylshikonin obdelan z SGC- pokazala mitohondrije membranski potencial je bila nižja od 98,6% na 56,9% 7901 celic (sl. 3D). Mi poleg preučil distribucijo in subceličnih lokalizacije citokroma c, da ugotovi, ali je mitohondriji pot vključena v P, β-dimethylacrylshikonin inducirane apoptoze. Potem ko so bile SGC-7901 celice obdelamo s ß, β-dimethylacrylshikonin (10 umol /L) 24 h je bila porazdelitev citokrom c vizualizira z konfokalna laserska mikroskopom, da β, β-dimethylacrylshikonin obdelane celice so pokazale, zamegljen morfologijo (sl. 3E) v nasprotju z očitno jasen videz v kontrolnih celicah, ki označuje translokacijo citokroma c iz mitohondrijev v citoplazmo v ß, β-dimethylacrylshikonin obdelamo celice.

Za nadaljnjo določitev vlogo aktivacija kaspaze pri β, β-dimethylacrylshikonin- inducirano apoptozo, smo obdelan SGC-7901 celic z zaviralcem pan-kaspaze z-VAD-FMK (10 mol /L) pred P, P-dimethylacrylshikonin zdravljenja. Inhibitor pan-kaspaze Z-VAD-FMK predobdelava zmanjšala izražanje cepijo kaspaze-3, cepi PARP in zmanjšano ß, β-dimethylacrylshikonin-inducirano apoptozo (slika 3F &. G). Ti podatki so pokazali, da ima mitohondrijsko posredovano kaspaze kaskadnega poti zelo pomembno vlogo pri ß, β-dimethylacrylshikonin inducirane apoptoze.

β, β-Dimethylacrylshikonin povzroči trajno aktivacije ERK v SGC-7901 celic

Pokazalo se je, da MAPK signalizacija vpleten v več dogodkov mobilnih napetosti in dražljaje induciranih apoptozo celic [24], [25]. Zato smo pregledali aktivacije ERK, JNK in P38 po P, P-dimethylacrylshikonin zdravljenja. Kot je prikazano na sliki. 4A & B so bile stopnje fosforilacijo ERK in JNK odziv na P, P-dimethylacrylshikonin zdravljenja 2 h očitno povečala in stopnje Fosforilacijske razstavljen način doze odvisni. Poleg tega je raven fosforilacijo ERK zadnjih štiriindvajset ur. Vendar pa so po P, β-dimethylacrylshikonin zdravljenja (sl. 4C) opazili nobenih pomembnih sprememb ravni fosforilacijo p38. Ti rezultati kažejo, da je trajno aktiviranje ERK vključeni v P, β-dimethylacrylshikonin inducirane apoptoze v SGC-7901 celic.

ERK signalizacija steze je vključena v P, β-dimethylacrylshikonin inducirane apoptoze v SGC-7901 celice

Mi je nato preučila, ali je β, β-dimethylacrylshikonin-povzroča trajno aktiviranje ERK signalne poti je igra pomembno vlogo pri apoptozi. Kot je prikazano na sliki. 5A & B, Western blot test je pokazala, da U0126 (posebno MEK inhibitor) inhibira trajno aktiviranje ERK in cepitev kaspaze-3, PARP v ß, beta-dimethylacrylshikonin zdravljenje, medtem ko je imel inhibitor pan-kaspaze Z-VAD-FMK ne vpliva na ß, β-dimethylacrylshikonin inducirane aktiviranje ERK (sl. 5d). Poleg tega U0126 zmanjšana beta, β-dimethylacrylshikonin-inducirano apoptozo v SGC-7901 celic (sl. 5c). Ti rezultati so pokazali, da so β, β-dimethylacrylshikonin-inducirano apoptozo v SGC-7901 celic, posredovane s trajnim aktivacijo ERK signalne poti v.

Diskusija

Shikonin derivati ​​so aktivne sestavine izolirali iz kitajski zeliščni Lithospermum erythrorhizon [5]. Te spojine so obetavne kandidate za zdravila, kot so bili poročali, da imajo več proti raku učinke in vivo in in vitro [5], [26]. Med komponentami Lithospermum erythrorhizon, β, β-Dimethylaerylshikonin ima pomembne učinke protitumorske primerjavi z drugimi aktivnimi sestavinami [27]. Glede na aktivnost proti raku, so-shikonin izdana celično apoptozo preko aktivacije kaspaze-odvisni poti najdemo v številnih malignih tumorjih. V tej študiji smo raziskali vpliv P, P-dimethylacrylshikonin na človeških rakavih želodčni SGC-7901 celic. Naši rezultati so pokazali, da zdravljenje SGC-7901 celic z ß, β-dimethylacrylshikonin pokazali znatno citotoksični učinek proti SGC-7901 celic v odmerku in odvisnosti od časa in ß, je β-dimethylacrylshikonin inducirano apoptozo v SGC-7901 celic dokazujejo povečan zgodaj apoptotske celice (aneksin V ^{+ /PI -). in pozno apoptotske celice (aneksin V + /PI +)}

razmerje anti- in pro-apoptotični protein izraz, kot Bcl-2 /Bax, ki je ključnega pomena za indukcijo apoptoze, ter se odloči, občutljivost celic za poteče apoptoza [28]. Mitohondriji imajo pomembno vlogo pri transdukcije signala apoptoze [29]. Translocalization od apoptotskih proteinov iz citosolu na mitohondrije privede do sprostitve citokroma c in drugo-mitohondrije izhaja aktivator kaspazah z zmanjšanjem membranski potencial mitohondrijev [30], [31]. Shikonin Poročali so, da inducira apoptozo preko mitohondrijev poti HepG2 celic [32]. V tej raziskavi smo pokazali, da β, β-dimethylacrylshikonin navzdol regulirano ekspresijo XIAP, cIAP-2 in Bcl-2 in up-urejena izraz Bak in Bax, in povzročila izgubo mitohondrijski membranski potencial in sprostitev citokrom c v SGC-7901 celic, v skladu s odvisne apoptoze mitohondrijih. Opazovanje ß, β-dimethylacrylshikonin posredovana aktivacija kaspaze-9, kaspaze-3, in naknadno cepitve PARP, kakor tudi za posledico, da pan-kaspaza zaviralec Z-VAD-FMK zmanjša β, β-dimethylacrylshikonin inducirane apoptoze v SGC-7901 celic, kar kaže, da-mitohondrijsko posredovano kaspaze kaskadno poti igra ključno vlogo pri P, β-dimethylacrylshikonin inducirane apoptoze. Skupaj, naši rezultati so pokazali, da β, β-dimethylacrylshikonin uravnava raven izražanja proteinov, povezanih z apoptoze, povzroča citokrom c sprostitev in trigs kaspazo odvisni od celic apoptotske smrt.

mitogeni aktiviranih protein kinaze (MAPK) urejajo različni mobilni programi, vključno embriogeneze, proliferacijo, diferenciacijo in apoptozo [33]. MAPK zasebne proteini so sestavljeni iz treh proteinskih kinaz: ERK1 /2 (ekstracelularnih-signalne regulirano kinaze 1 in 2), JNK (c-Jun N-terminalne kinaze) in p38 [34], [35]. Na splošno, prehodna aktivacija ERK povzroča celično proliferacijo, vendar zadržano aktivacija ERK je assoctiated z diferenciacijo [36]. Emerging dokazi kažejo, da aktiviranje ERK prispeva k apoptoze. Jeong sod. je pokazala, da kaempferol povzroča raka celice opraviti apoptozo preko ERK odvisna od poti [21] [37] [38]. V zadnjem času pa so poročali, da icaritin povzroči inhibicijo rasti in apoptozo človeških PSMCs preko ERK signalne poti [39]. Li et al. pokazale, da aktiviranje RAF /MEK /ERK signalne poti igra ključno vlogo pri kalcijev inducirano apoptozo leč epitelnih celic [40]. Tukaj smo tudi ugotovili, da je zadržano aktivacijo ERK vpleten v P, β-dimethylacrylshikonin inducirane inhibicije rasti in apoptozo v SGC-7901 celic. U0126, specifični zaviralec MEK (v MAPK /ERK kinaze), učinkovito blokirana β, β-dimethylacrylshikonin inducirane aktivacije ERK in oslabljene β, β-dimethylacrylshikonin inducirano apoptozo, kar kaže na pro-apoptotične učinke beta, beta-dimethylacrylshikonin v SGC-7901 celice posreduje trajno aktiviranje ERK1 /2 signalne poti v.

na koncu smo ugotovili, da β, β-dimethylacrylshikonin zaviral rast celic in inducirano apoptozo v SGC-7901 celic. Prav tako smo raziskali temeljne mehanizme, ki sodelujejo v P, β-dimethylacrylshikonin inducirane apoptoze. Naši rezultati so pokazali, da β, β-dimethylacrylshikonin-inducirano apoptozo vključuje v zmanjšanju XIAP, cIAP-2 in Bcl-2 proteina izražanja in indukcijo Bak in Bax proteinske ekspresije, in povzročil izgubo potenciala mitohondrijske membrane in sproščanje citokroma c v SGC-7901 celic. Naši rezultati tudi pokazali, da β, β-dimethylacrylshikonin inducirano apoptozo vključuje aktivacijo kaspaze-3, kaspaza-8 in kaspaze-9 in cepitvijo PARP. Poleg tega ERK signalizacija pot je sodelovala tudi v P, β-dimethylacrylshikonin inducirane apoptoze. Naši rezultati so pokazali, da je mogoče β, β-dimethylacrylshikonin razvit kot potencialno sredstvo proti raku, proti raku človeške želodčne.

Zahvala

Radi bi se zahvalil H-BW za njihovo tehnično pomoč, prav tako pa se zahvaljujem X -Qm in J-HC za koristne pripombe o tem članku.

• Plos ONE: Plasma microRNAs, miR-223, miR-21 in miR-218, kot je Nova Potencialni Biomarkerji za Rak želodca Detection
• Plos ONE: Zveza med posameznimi SNP ali haplotipov MMP 1 in želodca raka Dovzetnost, napredovanja in Prognosis