elodec Zdravje > raziskave > Učinek stimulacijo elektroakupunkturne na Zusanli Akupunkturna točka (ST36) na želodcu gibljivost: mogoče prek PKC in MAPK prenos signalov poti

Učinek stimulacijo elektroakupunkturne na Zusanli Akupunkturna točka (ST36) na želodcu gibljivost: mogoče prek PKC in MAPK prenos signalov poti

Učinek stimulacijo elektroakupunkturne na Zusanli Akupunkturna točka (ST36) na želodcu gibljivost: mogoče prek PKC in MAPK prenos signalov poti
Abstract
Ozadje
elektroakupunkturne (EA) stimulacije Dokazano je, da imajo velik terapevtski potencial za zdravljenje prebavil motnje gibljivosti. Vendar pa ni dokazov pojasniti mehanizme, ki prispevajo k učinki stimulacije EA na Zusanli Akupunkturna točka (ST.36). Ta študija je bila zasnovana, da razišče regulativni učinek stimulacije EA na ST.36 na želodca gibljivost in raziskati njene možne mehanizme
Metode
so Trideset Sprague-Dawley naključno razdeljene v tri skupine:. Na ST.36 skupina, skupina ne Akupunkturna točka, in kontrolno skupino. EA stimulacija je bila določena na 2 Hz, neprekinjen način ter 1. V 30 min. Pogostost in povprečno maksimalno amplitudo želodčne gibljivosti smo izmerili s electrogastrography. protein kinazo C (PKC) in mitogen aktivira protein kinaza (MAPK) signalne poti so bili ocenjeni s pomočjo realnem času polimerazo verižne reakcije. Caldesmon (CAD) in calponin (SKP), protein izraz v želodčni antruma so odkrili na Zahodni blot analiz. Izračunane Video sistem za obdelavo je bil ovrednotiti morfološke spremembe v gladkih mišičnih celic (SMC) iz želodca antruma uporabljajo.
Rezultati
EA stimulacijo na ST.36 imela dvojni učinek na frekvenco in povprečno maksimalno amplitudo. Poleg tega EA stimulacija na ST.36 regulirano ekspresijo določenih genov v signalnih poti PKC in MAPK, in regulirano ekspresijo CAD in CAP proteinov. EA serum povzroča SMC kontraktilnost. Spodbujanje želodca gibljivost lahko v korelaciji z up-regulacijo MAPK6 (ERK3), MAPK13 in prostaglandinov-endoperoksid sintazo 2 (PTGS2) izražanje genov, in zmanjšanjem števila kolagena tipa I, alfa 1 gena (COL1A1) in CAD in Cap protein izraz. Zaviranje želodca gibljivost lahko sovpada z zmanjšanjem števila tipa receptorja za interlevkin-1 2 (IL1R2) in Matrix metaloproteinaze-9 (MMP9) genov, in up-regulacijo CAD in Cap beljakovin izražanja.
Sklepe
EA stimulacija na ST.36 urejeno želodca gibljivost in učinki so tako spodbujanje in zaviranjem pri podganah. Možni mehanizmi lahko v korelaciji z signalov v poti PKC in MAPK.
Ključne besede
Electroacupuncture Zusanli želodca gibljivost PKC MAPK Ozadje
želodca gibljivost je eden izmed najbolj kritičnih fizioloških funkcij človeškega črevesja. Brez usklajenega gibljivost, prebavo in absorpcijo prehranskih hranil ne more potekati. Regulacija gastrointestinalne motilitete je zapleten in vključuje krčenja gladkih mišičnih celic (SMC). Krčenje SMC je v prvi vrsti ureja prehodnih sprememb znotrajcelične Ca 2+ koncentracija [1]. Obstajata dve glavni poti, ki sodelujejo pri tem mehanizmu, in sicer RhoA-Rho kinaze in protein kinazo C (PKC) pot [2]. Calponin (SKP), uveljavljeno in vitro
substrat za signalizacijo beljakovine, ki jih PKC [3], neposredno vpliva na PKC [4]. Caldesmon (CAD), je aktin in miozin vezavni protein, ki obstaja v dveh izo-oblik, ki nastanejo z alternativnim spajanje [5]. Obstaja kopičijo dokazi za sekundarno pot pri ureditvi kontrakcijo gladkega mišičja, ki je PKC odvisen, in ta pot je lahko posredovano s pokrovčkom in aktivacijo CAD [6-9]. -Mitogenom aktivirana protein kinaza (MAPK) signalne poti so bili prav tako vpleteni v SMC krčenje [10]. Obstajajo tri glavne skupine izrazito reguliranih MAPKs, ki vodijo do spremenjenega izražanja genov. Ekstracelično povezane signalne kinaze 1 in 2 (ERK1 /2), C-Jun terminalni kinazo (JNK) in p38 MAPK Znano je, da igrajo pomembno vlogo pri odzivu intracelularno signalizacije na zunajcelični dražljaje [11]. Poleg tega lahko Cap olajša ERK-odvisno signalizacijo, tako igra pomembno vlogo pri regulaciji SMC krčenja [12].
Akupunkturo, ki je bil uporabljen za tisoče let na Kitajskem, se vse pogosteje uporablja po vsem svetu za upravljanje razne bolezni [13]. Menijo, da lahko stimulacija za Akupunkturna točka neposredno vplivajo na ustrezne organe in dosegli učinek zdravljenja akupunktura v. EA je kombiniran postopek, ki stimulira Akupunkturna točka z električno stimulacijo, namesto z ročno manipulacijo igle. Številne študije so ocenili učinke in mehanizme EA na želodcu gibljivost [14-20]. Na osnovi dokazov iz teh študij je bil EA stimulacija izkazalo, da imajo velik terapevtski potencial za zdravljenje gastrointestinalnih motenj motilitete. Zusanli (ST.36) je ena od najbolj pogosto uporabljenih acupoints za bolezni prebavil. Glede na teorijo tradicionalne kitajske medicine (TCM), obstaja povezava med ST.36 in delovanje prebavil. Do danes pa se je ni dokazov pojasniti natančne mehanizme, ki prispevajo k učinki stimulacije EA.
Torej s pregledom morfološke spremembe in mioelektričnih dejavnost, to študijo, ki naj oceni regulacije učinek stimulacije EA na ST.36 Akupunkturna točka na želodca gibljivost pri podganah in raziskati njene možne mehanizme.
Metode
Živali in reagenti
so trideset odraslih moških Sprague-Dawley (SD) podgane s težo 180-220 g vzdrževana na 12-h lahkih zatemnitve pri 25 ± 2 ° C in 60% vlažnosti s prostim dostopom do hrane in vode. SD podgane so bile kupljene pri eksperimentalnem centru živali četrtega vojaške Medical University. Vsi poskusi na živalih so bili opravljeni v skladu s smernicami ustanove četrtega vojaške Medical University za nego in uporabo laboratorijskih živali. Odobritev protokol študije so bile pridobljene iz Odbor za etiko za raziskave živali, četrtega vojaške Medical University, Kitajska. Živali so bile naključno porazdelimo v tri skupine:. V ST.36 skupina je skupina, ki niso Akupunkturna točka in kontrolna skupina
kolagenaza II, zaviralce tripsin, ditiotreitol sladkornih alkohol, goveji serum albumin, kalcijev brez fosfatni pufer s soljo (PBS ), so glutaraldehid in Trypan modra kupili od Sigma Chemical Co. Total RNA Extraction Kit, nadpisano III reverzne transkriptaze in Superarray PCR Master Mix so bili kupljeni od Invitrogen Co anti-koze, anti-miš, in anti-zajec protitelesa so kupili od Shanghai Kangcheng Bio-Engineering Co
EA postopku stimulacije
ST.36 se je nahajal približno 5 mm bočno na fibula z zadnjimi okončinami, medtem ko je bil non-Akupunkturna točka se nahaja na zadnji nogi peš zraven ST.36 odprta 5 mm [21]. Igle so vstavljena 5 mm globoko v mišično plast izbrane Akupunkturna točka in so spodbujena z EA na 2 Hz in 2 V pri električni stimulator (G6805-2A, Shanghai Huayi Medical Instrument Factory, Šanghaj, Kitajska). Vsak stimulacija je trajala 20 minut pri stalnem načinu in stimulacija bila izvedena 1 čas /dan 5 dni. Podgane v kontrolni skupini so bili predloženi samo imobilizacijo brez stimulacije za 30 minut ob istem času vsak dan.
Electrogastrography
Electrogastrography je bila uporabljena z uporabo večkanalne Fiziološka signalov Pridobivanje in sistem za obdelavo (način RM-6280), po zadnji stimulacija na peti dan. Po 12-h hiter (s prostim dostopom do vode) in 6 h brez pijače so bile podgane intraperitonealno (i.p.) z 10% uretanom anestetiziramo pri dozi 1 g /kg telesu in nato imobiliziran. Prvo elektrodo je pritrjen na rep in vodene elektrode smo implantirali v serozne površini želodcu 0,3 - 0,5 cm nad pilorus. Elektrode so bile prekrite s 37 ° C normalno solno gaze, ki je povezana z žico. Eksperimentalni parametri so bili naslednji:. Frekvenca 400 Hz, filtra 10 Hz, hitrost skeniranja 2 y /delitev, občutljivost 25 mV, časovna direktno konstanten tok, in osciloskop čas snemanja 1 h [18]
realnem času veriga polimerazo reakcijo analiza (PCR)
po zadnjem stimulaciji z EA, smo žrtvovali podgane. Za kontrolno skupino in niso Akupunkturna točka skupine, je bila ena podgana naključno izbrani oz. Za skupine EA, smo najprej razdelili v EA spodbujanje skupino in EA zaviranjem skupine glede na rezultate electrogastrography. In potem so tam podgane naključno izbrana iz obeh skupin. Želodčne antruma tkiva (od pilorusa 0,8 - 1 cm), smo razrezali na koščke, ki so bile približno 0,3 cm x 0,5 cm v velikosti in takoj postavi v -70 ° tekočem C dušikom. Skupaj vzorce RNA so bili pridobljeni s pomočjo TRIzola iz različnih skupin v skladu z navodili proizvajalca. Kakovost RNA smo ocenili spektrofotometrično na osnovi razmerja A260 /A280. Vzorce RNA smo preverili za celovitost 18S in 28S RNA z elektroforezo v gelu. Skupno RNA (1,5 ug) je bila uporabljena za ustvarjanje prvi verižni cDNA z nadpisano III reverzne transkriptaze (1 ul) iz izoliranega RNA. PCR reakcije v realnem času smo pripravili s pomočjo Superarray PCR Master Mix (kat. Št PA-112), ki vsebuje PKC in MAPK signalni poti, gene. Razredčeno cDNA (102 ul) smo dodali v vsako luknjo, ki ustreza čip PCR. Nato so bili PCR žetoni postavljeni v PCR v realnem času instrument za reakcijo PCR. Pogoji kolesarske so bili naslednji: 95 ° C za 10 minut, 60 ° C 15 sekund in 60 ° C 1 min (40 ciklov). Razlike v izražanju genov, izražena kot zložljiv sprememb, so bili izračunani z uporabo 2 -ΔΔCt metodo.
Western blot CAD in Cap
Ravni CAD in Cap proteinske so odkrili Western blot. Po obdelavi z EA, smo žrtvovali podgane. Podgane smo nato določen, čemur sledi zarezovanje na kožo trebuha in peritonej. Notranji organi so bili izpostavljeni, in osrednji 1/3 želodca telesa je narežemo na majhne koščke, ki so bile približno 0,3 cm x 0,5 cm velikosti. Kosi so bili takoj shranjeni pri -70 ° C v tekočem dušiku. Na kratko smo celične ekstrakte (30 ug) iz zgornjega 1/3 sredi želodca telesa ločeni z natrijevim dodecil sulfat-poliakrilamidnem gelu z elektroforezo (SDS-PAGE) in nato prenesli na nitrocelulozne membrane. Filtre smo blokirali s Tris pufrom (TBS) /5% mleka, čemur sledi inkubacija z poliklonskih protiteles proti CAD (1: 3000 redčenje), pokrov (1: 3000 redčenje) in P-aktin (1: 10.000). Potem ko so membrane sprali smo jih inkubirali s sekundarnimi peroksidazo konjugiranih protiteles razredčenega 1: 5000 v TBS z 0,01% Tween 20. Sistem za detekcijo protiteles je bila uporabljena, in membrane so bile izpostavljene rentgenskim filmom v skladu z navodili proizvajalca.
priprava Serum
seruma smo pripravili kot smo že prej opisali s spremembo [22]. Po zadnjem stimulaciji z EA, smo žrtvovali vse podgane. Naslednji je 6 ml krvi odvzeti iz karotide vsake podgane. Kri smo vzdrževali še 1 uro in nato centrifugirali pri 3000 obratih na minuto za 15 minut. Serum smo zbrani, filtriramo, da odstranimo bakterije in 1,5 ml je pakirana v cevi EP, ki je bila shranjena pri -70 ° C v tekočem dušiku.
Učinki EA seruma za SMC kontraktilnosti
bilo pet običajne podgane SD anesteziji ip z 10% uretanom pri dozi 1 g /kg telesne teže. Potem ko so anestezirali, so zarezati trebušno kožo in trebušne votline, in so bili izpostavljeni v drobovje. Celoten želodec smo izrezali in izoliramo z želodca antruma tkiva in takoj postavi v kisikom nasičeno PBS s penicilinom (100 ie /ml) in streptomicin (100 mg /ml) pri 4 ° C. Po speremo, so tkiva prenese kisikom nasičena HEPES, širjenje in pritrjena na silikagelni plošči, s fino iglo. Mukozni plast smo previdno prekinil, izpostavljanje krožno sluznico, ki je bil transportno letalo v 9 - 10 mišični trakov (1 mm x 4 mm), nameščenih v Tyrode je, in vzdržujemo pri 4 ° C v hladilniku za približno 15 minut. Mišičnih trakovi so pri 1% vrsti kolagenaze razgradili II, 0,05% zaviralca tripsin, 0,05% ditiotreitol alkohola sladkorja in 0,2% goveji serumski albumin encima v vodni kopeli za 25 min pri 36 ° C. Po prebavo zmes splaknemo z HEPES encimov brez, inkubirali 30 min in filtrirali z 200 zaslonom mesh zbiranje prostih enojne želodca SMC. sposobnost preživetja celic smo merili z modro testu Trypan. So žive celice so bile več kot 95% pri gostoti 10 6 celic /ml.
Izolirane SMC smo naključno razdelili v normalnem serumu skupino, ST.36 serumu skupine in ne-Akupunkturna točka serumsko skupino. Prekinitve SMC (50 ul) pri gostoti 1,0 x 10 6 celic /ml so bili dani v 96-vdolbinami. Vsak vzorec seruma deaktivirali po 30 minutah v 56 ° C vodni kopeli in nato razredčimo 1: 2 z HEPES. Serum (50 ul) iz različnih skupin dodamo SMC, pomešamo s pipeto 30 sekund, in pritrjena z 30 ul 2,5% glutaraldehida. Dolžina celica je bila ocenjena z izračunan video sistema za obdelavo (DP2-BSW), ki je bila uporabljena za izračun deleža krčenja. Odstotek celic krčenja = (dolžina celic pred začetkom zdravljenja - dolžina celic po obdelavi). /dolžina celic pred zdravljenjem x 100%
Statistična analiza
Podatki so bili izraženi kot povprečje ± SD Enosmerne analize variance, čemur sledi preizkus multiple primerjave Bonferroni je bila uporabljena z SPSS 10,0 programsko opremo. Vrednosti ΔCt pridobljeni iz PCR v realnem času, ki so bili uporabljeni za izračun razlike v kratna sprememba (izraženo tukaj odstotkov nadzor), so bili uporabljeni tudi za statistično analizo. A p
-vrednost & lt; 0,05 ali kratna sprememba & gt; 2 je bil opredeljen kot statistično značilne za vse analize.
Rezultati
Učinki EA na želodca gibljivost
EA na ST.36 proizvaja pomembne spremembe v absolutni vrednosti povprečne maksimalno amplitudo in frekvenco, v primerjavi s kontrolo ali non-Akupunkturna točka skupine (P
& lt; 0,01). V nasprotju s tem, EA na ne-Akupunkturna točka ni povzročil pomembne spremembe v želodcu gibljivosti v primerjavi s kontrolno skupino (Dodatni datotek 1: Slika S1). za skupino ST.36 v 10-ih podganah testiran po povprečni vrha so opazili dve vrsti želodčnih motornih vzorcev: podgane s pozitivno povprečno vrha so bili ocenjeni za spodbujanje vzorec, medtem ko so bile podgane z negativno povprečno najvišje ocenjeni za spodbujanje vzorec. Rezultati so pokazali 5 (50,0%) podgan pokazali ST.36 spodbuja vzorec in 5 (50,0%) podgane so pokazali ST.36 inhibira vzorec. Pri podganah z ST.36 spodbujanje vzorec, so bile povprečne maksimalne amplitude in frekvence vrednosti 47.13 ± 0.44 in 0.19 ± 0,06, v tem zaporedju. Pri podganah z ST.36 inhibira vzorec, so bile povprečne maksimalno amplitudo in frekvenco vrednosti -43.41 ± 0,62 in 0,17 ± 0,03, v tem zaporedju. (Dodatna datoteka 2: Tabela S1)
Učinki EA na PKC in MAPK signalnih poti
EA na ST.36 precej urejeno izražanje nekaterih genov v PKC in MAPK signalnih poti. Tabela 1 navaja rezultate analize mikromrež v ST.36 spodbujanja skupina (v primerjavi s kontrolno skupino). Izraz mnogih genov je po stimulaciji EA povečala, vključno ERK3, MAPK13, IL1R1, PRKCA in PTGS2. Drugi geni pokazala zmanjšano izražanje po stimulaciji EA, vključno IL1R2. Tabela 2 navaja rezultate analize mikromrež v ST.36 inhibiranje skupina (v primerjavi s kontrolno skupino). Gen izraz IL1R2 in MMP9 so po EA stimulation.Table sprememba 1 Gene primerjavo EA spodbujanje skupino s kontrolno skupino
signalov poti
Gene
strani
EA zmanjšala /nadzor (Fold sprememba)
EA /nadzor (Zložite navzgor ali navzdol uredbe)
MAPK
MAPK6 (ERK3)
D02
2.39
2.39
MAPK
MAPK13
D10
2.86
2.86
PKC
IL1R1
F08
2.18
2.18
PKC
PRKCA
G01
2.40
2.40
PKC
PTGS2
G02
2.72
2.72
PKC
IL1R2
F09
0.26
-3.85
Zložljiv spremembam (2-ΔΔCt) je normalizirana izražanje genov (2-ΔCt) v testnem vzorcu deljena z normalizirane genske ekspresije (2-ΔCt) v kontrolnem vzorcu. Zložljiv uredba predstavlja rezultate zložljivimi sprememb v biološko smiseln način. Zložljiv sprememba vrednosti več kot eno kažejo prisilni ali regulacijo navzgor in raztegljiv ureditev je enaka kratno-sprememb. Zložljiv sprememba vrednosti manj kot kažejo negativna ali navzdol uredbe, in krat-ureditev je negativna inverzna kratna sprememba.
Tabela 2 sprememb Gene primerjali EA zaviralni skupino s kontrolno skupino
signalov poti

Gene
Sites
EA /nadzor (Zložite spremembo)
EA /nadzor (Zložite navzgor ali down-regulation)

PKC
IL1R2
F09
0.24
-4.26
PKC
MMP9
F11
0.21
-4.68
Zložljiv sprememb (2-ΔΔCt) je normalizirana izražanje genov (2-ΔCt) v preskusnem vzorcu, deljeno s normalizirane genske ekspresije (2-ΔCt) v kontrolnem vzorcu. Raztegljiv uredba predstavlja rezultate kratna sprememba v biološko smiseln način. Zložljiva sprememba vrednosti več kot eno kažejo na prisilni ali up-ureditev in zložljiva ureditev je enaka kratna sprememba. kratna sprememba vrednosti manj kot kažejo negativna ali navzdol uredbe, in pokrovček -regulation je negativna inverzna kratna sprememba.
Preglednica 3 navaja rezultate iz analize mikromrež v ST.36 spodbujanja skupine (v primerjavi s skupino, ki niso Akupunkturna točka). povečana je bila izraz COL1A1 gena po stimulaciji AE. bile izražanje genov IL1R2 in SERPINE1 po stimulaciji AE zmanjšala. Tabela 4 izpiše rezultate analize mikromrež v ST.36 inhibiranje skupino (v primerjavi s skupino, ki niso Akupunkturna točka). Veliko genov pokazala zmanjšala izraz po EA stimulacijo, vključno z ERK3, JNK3, p38bMAPK, MAPK13, p38MAPK, ERK1, FGF2, IL1R1, IL1R2, myc, PRKCA in PTGS2 genov. Izraz COL1A1 gena se je povečala po EA stimulation.Table spremembe 3 Gene primerjali EA spodbujanje skupino z non-Akupunkturna točka skupine
signalov poti
Gene
strani
EA /Non-Akupunkturna točka (Fold sprememba)
EA /Non-Akupunkturna točka (Zložite navzgor ali down-regulation)

PKC
COL1A1
F05
3.60
3.60
PKC
IL1R2
F09
0.39
-2.54
PKC
SERPINE1
G04
0.48
-2.07
Zložljiv sprememb (2-ΔΔCt) je normalizirana izražanje genov (2-ΔCt) v preskusnem vzorcu, deljeno s normalizirane genske ekspresije (2-ΔCt) v kontrolnem vzorcu. Raztegljiv uredba predstavlja rezultate kratna sprememba v biološko smiseln način. Zložljiva sprememba vrednosti več kot eno kažejo na prisilni ali up-ureditev in zložljiva ureditev je enaka kratna sprememba. kratna sprememba vrednosti manj kot kažejo negativna ali navzdol uredbe, in pokrovček -regulation je negativna inverzna kratna sprememba.
Tabela 4 sprememba Gene primerjavo EA zaviralni skupino, non-Akupunkturna točka skupine
signalov poti
Gene
strani

EA /Non-Akupunkturna točka (Zložite spremembo)
EA /Non-Akupunkturna točka (Zložite navzgor ali navzdol uredbe)
MAPK
MAPK6 (ERK3)
D02
0,18
-5,67
MAPK
MAPK10 (JNK3)
D07
0,42
-2,40
MAPK
MAPK11 (p38bMAPK)
D08
0,39
-2,58
MAPK
MAPK13
D10
0,28
-3,58
MAPK
MAPK3 (ERK1)
G11
0,26
-3,83
MAPK
MAPK14 (p38MAPK)
D11
0.47
-2.13
PKC
FGF2
F07
0.37
-2.67
PKC
IL1R1
F08
0.30
-3.31
PKC
IL1R2
F09
0.36
-2.81
PKC
MMP9
F11
0.22
-4.48
PKC
MYC
F12
0.39
-2.59
PKC
PRKCA
G01
0.23
-4.27
PKC
PTGS2
G02
0.19
-5.36
PKC
COL1A1
F05
4.81
4.81
Zložljiv sprememb (2-ΔΔCt) je normalizirana izražanje genov (2-ΔCt) v preskusnem vzorcu, deljeno s normalizirane genske ekspresije (2-ΔCt) v kontrolnem vzorcu. Raztegljiv uredba predstavlja rezultate kratna sprememba v biološko smiseln način. Zložljiva sprememba vrednosti več kot eno kažejo na prisilni ali up-ureditev in zložljiva ureditev je enaka kratna sprememba. kratna sprememba vrednosti manj kot kažejo negativna ali navzdol uredbe, in pokrovček -regulation je negativna inverzna kratna sprememba.
Učinki EA na CAD in Cap beljakovin izražanja
stimulacijo z EA znatno povečano CAD in Cap beljakovin izražanja v zaviralnega skupini ST.36 v primerjavi z ne-Akupunkturna točka skupina, medtem ko stimulacija z EA bistveno zmanjšala CAD in Cap beljakovin izražanje v ST.36 spodbujanje skupini v primerjavi s skupino, ki niso Akupunkturna točka (slika 1A, B, C, D). Slika 1 Vpliv stimulacije EA na Caldesmon (CAD) in Calponin (SKP) vsebnosti beljakovin. A. Izražanje ravni Caldesmon beljakovin z metodo Western blot. vsebnosti beljakovin B. Denzitometrijska analiza Caldesmon s beta-aktina normalizirale; C. Izražanje ravni Calponin beljakovin z metodo Western blot; D Denzitometrijska analiza Calponin količina beljakovin, ki jih beta-aktina normalizirale. Čad: Caldesmon; Cap: calponin; 1: non-Akupunkturna točka skupine; 2-4: EA inhibicijo skupina; 5-7: EA spodbujanje skupino. * P & lt; 0,05 compard ki niso Akupunkturna točka skupine
učinkov EA seruma za SMC kontraktilnost
Kot je prikazano v dodatni datoteki 3:. Slika S2 in dodatno datoteko 4: Tabela S2, so opazili celična morfologija pod svetlobnim mikroskopom po zdravljenju z drugačno vrste seruma. Ni bilo razlike v dolžini celic pred dodatkom seruma (p & gt; 0,05). ST.36 serum povečala SMC kontraktilnost (60,22 ± 3,84 um) v primerjavi s kontrolno serumu (96,02 ± 6,24 um) ali ne-Akupunkturna točka serumu (97,33 ± 6,97 um). Odstotek zmanjšanja je prišlo 41%, po stimulaciji z ST.36 seruma, medtem ko so bili odstotki krčenje 7% in 10%, po stimulaciji z bodisi niso Akupunkturna točka seruma ali kontrolnega seruma, v tem zaporedju.
Pogovor
tej študiji dokazali da ima EA stimulacija na ST.36 za regulacije učinek na želodčno gibljivost pri podganah, ki je bila bodisi stimulacijski ali zaviralni. Spodbujevalni učinek EA lahko deluje preko signalnih poti PKC in MAPK.
Posledice EA na želodcu gibljivost so obširno raziskovali pri živalih in ljudeh zaradi razpoložljivosti electrogastrography. Znano je, da v želodcu mioelektričnih dejavnost predstavlja počasnih valov in konice. Konice so neposredno povezani s pojavom kontrakcije. Počasni valovi ne povezujejo v prebavilih kontraktilnost, vendar pa določi najvišjo frekvenco želodčnih krčev.
Najpogosteje uporablja Akupunkturna točka pri zdravljenju prebavnih motenj je v ST.36. To je splošno prepričanje, da lahko akupunktura izvaja promocijo in zaviranjem učinke na gastrointestinalno gibljivost glede na stimulirano Akupunkturna točka. Pri ljudeh, je bilo dokazano, da je EA stimulacija na ST.36 dvojni učinek na želodčno peristaltika, ki so bodisi lajšanju ali inhibitorno [15, 23]. Čeprav so bolniki, ki trpijo zaradi bolezni prebavil koristi od uporabe akupunkture na ST.36, vendar natančnih molekularni mehanizmi so še vedno nejasne. Pri psih, EA na ST.36 povečala pravilnost želodca počasnih valov [24, 25]. V zavestnih podganah, EA stimulacija na ST.36 povzroča dvojno učinke, ki so bili bodisi lajšanju ali zaviralni na želodčni motiliteto [26, 27]. Nadaljnja študija je pokazala, da je stimulacijski učinek posredovana preko holinergičnih poti, medtem ko je zaviralni učinek je neodvisna od simpatičnega poti [28]. Splošna teorija akupunkturo medicine osnovno izhodišče na konceptu Yin in Yang in akupunktura je verjel, da spremenite neravnovesje med Yin in Yang. Učinki akupunkture za uravnoteženje Yin in Yang se lahko posreduje prek interakcije med živčnega GABA in glutamata v možganskega debla.
V trenutnem dokumentu, je EA stimulacija na ST.36 učinkoviti pri uravnavanju želodčne gibljivost, kar je razvidno ki jih je znatno povečanje maksimalno amplitudo in frekvenco. Poleg tega je bilo pomanjkanje takega odziva, ko je bilo isto stimulacija izvede na ne-Akupunkturna točka kaže specifičnosti ta namen. Glede na maksimalno amplitudo in frekvenco, je ST.36 skupina nadalje delijo na spodbujanje in zaviralnih vzorcev, saj EA pokazala dvojni učinek. Da bi še dodatno raziskati mehanizme, s katerimi EA ureja želodčne gibljivost, smo izolirali SMC iz želodca in opazoval učinek ST.36 seruma na SMC kontraktilnosti uporabo serološke farmakološke testnih metod. Rezultati so pokazali, da ST.36 serum znatno povečala SMC kontraktilnost; . Ker so učinki, ki jih normalno ali ne-Akupunkturna točka serumu niso bile jasno
Nedavne raziskave kažejo, da so učinki stimulacije EA posredovana preko sistema opioidov [29] ali prek stimulativno vpliva na vagalnim dejavnosti [30]; Vendar pa natančne mehanizme, s katerimi EA pojavijo želodčne gibljivost niso v celoti razumeli. Predhodne ugotovitve tudi navedla, da so bile ravni PKC po stimulaciji poveča z EA [31]. Zato smo izbrali poti PKC in MAPK so cilji za posredovanje v stimulativni učinek EA o mobilnosti želodca. Poleg tega lahko SKP in CAD vlogo pri uravnavanju prebavil gibljivosti v fizioloških in patoloških prilagajanja. Up-ureditev skupne kmetijske politike in CAD izražanja zaviral prebavno premičnost in navzdol ureditev skupne kmetijske politike in CAD izražanja spodbuja prebavno premičnost [32, 33]. ERK1 /2, član družine MAPK, je bilo dokazano, da igrajo pomembno vlogo pri uravnavanju kontrakcijo gladkega mišičja, [34]. Po naših rezultatov mikromrež, lahko spodbujanje želodca gibljivost v korelaciji z up-regulacijo MAPK6 (ERK3), MAPK13 in PTGS2 izražanju genov, in down-regulacije COL1A1 genske ekspresije. Zaviranje želodca gibljivost lahko sovpada z zmanjšanjem števila IL1R2 in MMP9 genske ekspresije. Western blots pokazala, up-regulacijo CAD in Cap beljakovin izražanja zaviral želodčne gibljivost, medtem navzdol ureditev CAD in Cap beljakovin izražanja spodbujati želodca gibljivost. Ti rezultati kažejo, da lahko CAD in Cap vlogo pri uravnavanju prebavil gibljivosti v fizioloških in patoloških prilagajanja.
Je bilo nekatere omejitve v tej študiji, ki jih je treba omeniti. Prvič, ni preučila, ali bi lahko zaviralci PKC in MAPK vplivajo ali blokirati regulatorni učinek stimulacije EA na ST.36 o mobilnosti želodca. Nadaljnje raziskave bodo morali raziskati vplive inhibitorjev PKC in MAPK. Drugič, bodo prihodnje raziskave osredotočil na polno razumevanje vloge vseh sprememb v izražanju genov ob urejanju mobilnosti želodca.
Sklepe
Skratka, naše ugotovitve kažejo, da EA stimulacija na ST.36 urejeno želodca gibljivost. EA stimulacija na ST.36 deluje dvojni učinek na želodčno gibljivost, ki so bili bodisi stimulacijski ali zaviralni. Poleg tega se lahko ureditev želodca gibljivost v korelaciji z signalov v poti PKC in MAPK.
Opombe
Qi Yang, Yan-Dong Xie prav tako prispevali k temu delu.
Deklaracij
Potrditve
Ta študija je bila podprta s sredstvi iz državnega Natural Science Foundation Kitajske (št 30801487)
Electronic dodatno gradivo
12906_2013_1722_MOESM1_ESM.doc Dodatna datoteka 1:. Slika S1: Vpliv stimulacije EA na želodca gibljivost. Želodca gibljivost je bila merjena s electrogastrography. A. Control, B. ST.36, C. Non-Akupunkturna točka. Stimulacija z EA na ST.36 povečalo povprečno maksimalno amplitudo in frekvenco. Želodčne valovi pokazala dvojno spremembe v skupini ST.36 v primerjavi s kontrolo ali ne-Akupunkturna točka skupino. Vrednosti so izraženi kot povprečje ± SD (N
= 10). * P
& lt; 0,05, ** p
& lt; 0,01 vs
. kontrolno skupino. #P
& lt; 0,05, ## str
& lt; 0,01 vs.
non-Akupunkturna točka skupine. (DOC 1 MB) 12906_2013_1722_MOESM2_ESM.doc Dodatna datoteka 2: Tabela S1: Učinki EA na želodcu mioelektričnih dejavnosti. Skupina ST.36 je nadalje razdeljen na EA spodbujanje in EA zaviranjem skupine po želodca valov. Vrednosti so izražene kot povprečje ± S.D (n
= 5). (DOC 26 KB) 12906_2013_1722_MOESM3_ESM.doc Dodatna datoteka 3: Slika S2: Vpliv stimulacije EA na želodcu SMC kontraktilnosti. Celično morfologijo opazili z uporabo svetlobnega mikroskopa (x 200 povečava). Dolžina celico in odstotek krčenja smo merili z analizo sistema računalniške slike. O. SMC; A. SMC + kontrolni serum; B. SMC + ST.36 serum; C. SMC + non-Akupunkturna točka serum. (DOC 1 MB) 12906_2013_1722_MOESM4_ESM.doc Dodatna datoteka 4: Tabela S2: Učinki seruma na SMC kontraktilnosti. Kot je ocenil, izračunano Video sistema za obdelavo, Zusanli serum za posledico znatno kontraktilnosti v SMC. Rezultati so izraženi kot povprečje ± S.D (n
= 10). * P
& lt; 0,05 ** p
& lt; 0,01 vs.
kontrolni serum skupina. #P
& lt; 0,05, ## str
& lt; 0,01 vs.
non-Akupunkturna točka serum. (DOC 28 KB) avtorjev originalnih predloženi datoteke za slike
Spodaj so povezave do avtorjev prvotna predloženih spisov za slike. 12906_2013_1722_MOESM5_ESM.tiff avtorjev izvirna datoteka za slika 1 nasprotujočimi si interesi
Avtorji izjavljajo, da nimajo konkurenčnih interesov.
Avtorjev prispevkov
QY opravi molekularne genetske študije, sodelovala v poravnavo več zaporedij in piše rokopis. YDX, MXZ, BH opravil imunoanalizo. CZ, HYLi, RZ sodelovala v poravnavo več zaporedij. MQ, YXH sodeloval pri oblikovanju študije in izvedli statistično analizo. JJW zasnovan študije in sodeloval pri oblikovanju in usklajevanju in pomagali pripraviti rokopis. Vsi avtorji prebrali in potrdil končni rokopis.

Other Languages