Uporabnost citokeratinov 7 in 20 (CK7 /20) imunohistokemija v razlikovanju kratkega odseka Barrett požiralniku iz želodca intestinalno metaplazijo: Ali je zanesljiv?

Uporabnost citokeratinov 7 in 20 (CK7 /20) imunohistokemija v razlikovanju kratkega odseka Barrett požiralniku iz želodca intestinalno metaplazijo: Je zanesljiv
Abstract
Ozadje
Namen tega korelativna imunohistokemičnim študija? je bil oceniti uporabnost citokeratina (CK7 in CK20) izraz v diagnostiki kratkega odseka Barrett požiralnik, zlasti njene učinkovitosti pri razlikovanju Barrett sluznico z intestinalno metaplazijo od želodca Kardije in korpusa.
Metode
dvema skupinama so bili pregledani endoskopske biopsije osebki, vključno z 20 endoskopske biopsije osebkov kratkega odseka Barrett požiralniku (skupina A) in enako število razstavlja Helicobacter pylori PODJETJA
povezana intestinalno metaplazijo želodčne Kardije in korpusa (skupina B). Vsi so bili raziskati imunohistokemijo uporabo standardnega načina ABC za CK7 in CK20 izražanja. Fisherjev natančni test ni bil uporabljen za statistično analizo Barrett CK7 /20 in želodca CK7 /20 vzorcev med skupinami
Rezultati
pričakovanega vzorca reaktivnosti v Barrett sluznice (CK7. Močno razpršeno pozitivnost v površinskih in globokih žlez; CK20: pozitivnost v površinskih epitela in površinskih žlez), so opazili v 2 primerih osebkov skupine A. Pričakovana želodca vzorec (CK7: neenotno imunskim barvanjem s spremenljivo vključevanjem globokih žlez; CK20: neenotno imunskim barvanjem površinskih in globokih žlez nepopolnih intestinalno metaplazijo /odsotnosti CK7 radioinkorporacijo z močnim CK20 obarvanje v površinskih in globokih žlez v popolni intestinalno metaplazijo) opazili v 8 primerih osebkov iz skupine B. Ustrezne občutljivost in lažno negativnost vrednosti CK7 /20 barvanjem za Barrett vzorca v skupini A je bilo 10% in 90%, v tem zaporedju. Te vrednosti želodčnega vzorca v skupini B je bilo 40% in 60%, v tem zaporedju. Vrednosti specifičnosti in lažno pozitivnost obeh vzorcih so bili enaki (100% in 0%, v tem zaporedju). Ni bilo statistično pomembne razlike v Barrett vzorec med obema skupinama (P
= 0,487), medtem ko je bila opazovanje želodca vzorca v skupini B bistveno višja kot v skupini A (P
= 0,02).
sklepi
sklenili smo, da je to hipotezo, in v zadnjem času uporabljajo diagnostična merila vključujejo CK7 in CK20 radioinkorporacijo niso zanesljivi za razlikovanje kratkih odsekih Barrett požiralnik z intestinalno metaplazijo, kot je razvidno iz želodca Kardije in korpusa.
Ozadje
Barrett požiralnika ( BE) je povezana s povečanim tveganjem za požiralnika adenokarcinoma, malignega obolenja, ki je imel hitro narašča pojavnost pred kratkim [1-3]. Etiologija BE ni znan, vendar pa je genetska predispozicija z ulceroznim spremembami iz refluksne bolezni gastroezofagealne (GERB) je lahko odgovorna [4].
SE je treba sum na endoskopijo, ko je normalno, belkasta, pojavljajo ploščatocelični epitelij nadomesti z rdečo,-žametna pojavljajo sluznico v distalnem požiralniku. Zanesljiva diagnoza BE je težko povezano vzorčnih napak zaradi določitve natančne lokacije gastroezofagealne stičišča kot v hiatal kile. Diagnostični pojavijo težave, ko endoscopist obravnava kratki odseki. Plošcicnih so fundic in specializiranih (črevesnih) vrste žleznega epitela opisano za opredelitev BE s Paulla et al.
[5]. Vendar je bilo pred kratkim poročali, da je odkrivanje slednji zanesljivo merilo za diagnozo BE [4, 6]. Helicobacter pylori
(H. pylori
) so lahko povezana z karditisa in intestinalno metaplazijo v Kardije [7]. Zato lahko črevesne metaplazija vključujejo Cardia v zvezi s Helicobacter
gastritis se histološko ne razlikuje od intestinalno metaplazijo distalnega požiralnika.
Je bilo predlagano, da bi bilo Cytokeratin podmnožice 7 in 20 (CK7 in CK20) koristno razlikovati oba dolgoročne in kratkoročne segment BE z intestinalno metaplazijo proksimalnega želodca [8-11]. Namen te raziskave je bil oceniti Cytokeratin (CK7 in CK20) izraz v diagnostiki kratkega odseka Barrett požiralnik, zlasti svojo koristnost v diferencialno diagnozo Barrett sluznice z intestinalno metaplazijo od želodca Kardije in korpusa.
Metode
endoskopija vzorce bolnikov iz iz Marmara univerzitetnega inštituta za gastroenterologijo so bili pregledani od datotek na oddelku za patologijo na isti univerzi med letoma 1998 in 2002. vsaj 4 biopsije so bili odvzeti iz nepravilnih squamo-nosilni stičišča (SCJ) z polotokov ali na peresih nosilnega epitela in otoki luskaste ali nosilnega epitela za vsak primer posebej. Ko so opazili več polotok ali jezik nosilnega epitela v distalnem požiralniku endoskopsko, je 4 Biopsija iz vsake polotoka in so bili poslani histopatološko preiskavo v ločenih eppendorph cevi. so biopsijo tudi majhne polotokov z linearnimi plovil oddaljeni do SCJ in vse goriščno nenormalnosti.
so požiralnika in želodca Biopsija antegrade ali retrogradno z retroflexion endoskopa, ko je bilo to potrebno. Retroflexed pristop se je raje za vzorčenje Kardije. Zadeve, ki so bile diagnosticirane histopathologically čim krajši odseki so bili vključeni v raziskavo. Short-segment je endoskopsko opredeljen kot jezikov manj kot 3 cm v dolžino nad esophago-želodčni stičišča (EGJ) s svojo spominja na tanko črevo ima dobro oblikovane microvilli in intestinalno metaplazijo bodisi s hematoksilinom in eozinom (H & E) (Slika 1) ali Alcian modra pH2.5 pozitivnih čašo celice (slika 2) na mikroskopske preiskave. Slika 1 oddelek iz gastro-požiralnika križišča, ki prikazuje BE s čašo celic, H & E, × 40
Slika 2 Intense modrega obarvanja Kelih celic z Alcian modro pH 2,5 /PAS, × 40
Študijska skupina sestavljena iz 20 bolniki s kratkimi odseki (skupina A) in enako število bolnikov z razjedo intestinalno metaplazijo (Kardije in korpusa), skupaj s H. pylori
gastritis (skupina B). Biopsije osebki, ki so bili pridobljeni v okviru 5 mm prostora pod EGJ veljale za srčne sluznice.
Vzorci so bile določene v 10% zastalega formalinu in vgrajeni v parafin. Serijski odseki so iz vsakega vzorca izreže. Vsi oddelki smo obarvali z rutinskim H & E madež. Schiff periodično kislino (PAS), Alcian modra pH 2,5 in Alcian modra pH 0,5 smo uporabili za identifikacijo nevtralni mucin, sialomucin in sulphomucin oz. Giemsu bila uporabljena razkriti H. pylori
. Nismo primere brez odkrite čašo celično metaplazijo s Alcian modrenjem tako za skupino A in skupino BH pylori
okužba je bila potrjena z Giemsu v primerih, v skupini B.
endoskopskih biopsij so razvrščeni kot popolno (tipa I) ali nepopolne (tipa II) črevesne metaplazijo glede na predhodno opredeljenih meril [12]. Predlagana Barrett CK7 /CK20 vzorec (CK7: močna difuzna pozitivnost v površinskih in globokih žlez; CK20: pozitivnost v površinskih epitela in površinskih žlez) in želodca CK7 /CK20 vzorec (CK7: neenotno imunskim barvanjem s spremenljivo vključevanjem globokih žlez; CK20: neenotno imunskim barvanjem površinskih in globokih žlez nepopolnih intestinalno metaplazijo /odsotnosti CK7 radioinkorporacijo z močnim CK20 obarvanje v površinskih in globokih žlez v popolni intestinalno metaplazijo) so bili ocenjeni za vse primere. Šest upravljalnih biopsije so bile ustanovljene za nazaj od bolnikov, pri katerih biopsije opažen normalni SCJ (n = 3) in normalno Cardia (n = 3) mikroskopsko.
Skupina A
kliničnih podatkov v zvezi s starostjo, spol, simptomov refluksa želodca in požiralnika, ter endoskopskih ugotovitve in kratkih odsekih Barrett sluznica so bili pridobljeni iz vsakega primera. Bolniki z BE v zadnjih 3 cm distalnega požiralnika so bili vključeni v skupini A. Bolniki s pozitivnim H. pylori
so bili izključeni iz študije.
Skupina B
kliničnih podatkov, vključno starost, spol, gastro -esophageal refluks simptomi, endoskopski ugotovitve, in H. pylori
stanje so bili pridobljeni iz vsakega primera. Bolniki s pozitivnim H. pylori
so bile vključene v raziskavo. so preučevali dvajset endoskopske biopsije (Cardia, n = 9 in corpus, n = 11) s histološko dokaz intestinalno metaplazijo.
Imunohistokemične študije
je ena tkivo blok, izbranih za vsak primer posebej. Bloki so bile znižane na 5 um odsekih. Ploščice smo deparaffinized in hidracijo skozi razvrščenih alkoholov. Antigen iskanje je bila izvedena s pomočjo citratnega pufra v mikrovalovni pečici tako za CK7 in CK20. Ploščice smo inkubirali v 3% vodikovega peroksida /metanola 20 minut blokirati nespecifično obarvanje ozadja zaradi notranjega peroksidazo. Uporabo standardnega streptavidina-biotin peroksidaze kompleks metoda (ABC), CK7 (klon OV-TL 12/30, Neomarkers, Fremont, CA, ZDA) in CK20 (klon K20.4, Neomarkers, Fremont, CA, ZDA) smo izvedli na vsi diapozitivi. Drsniki inkubiramo 30 minut v sekundarnem raztopine protiteles. Diaminobenzidine (DAB) je služila kot chromagen. Diapozitivi so jih nasprotno z hematoksilinom. Vzorce raka dojke in raka debelega črevesa so bili uporabljeni kot pozitivne kontrole za CK7 in CK20 oz. Negativne kontrole so bili proizvedeni z enako vzorci tumor in metode za barvanje z izpuščanjem primarnih protiteles.
Statistična analiza Poslovni
Fisherjev natančni test ni bil uporabljen za analizo Barrett in želodca vzorcev. Posledica je upoštevati statistično pomembna, če je P
vrednost manjša ali enaka na ravni alfa 0,05.
Rezultati
vsega skupaj 40 bolnikov je bilo vključenih v študijo. Srednja starost bolnikov je bila 46 (razpon 28-77) let v skupini A in 50 (razpon, 25-73) let v skupini B. razmerje med moškimi in žensko je bil 4 proti 1 v skupini A, medtem ko je bila 2 do 3, v skupini B so klinični in imunohistokemičnim funkcije povzete v tabeli 1.Table 1 klinični in imunohistokemijske ugotovitve pri bolnikih s kratkimi odseki in želodca intestinalno metaplazijo

Short-segmenta (n = 20)
želodca črevesnih metaplazijo (n = 20)
Age (yr)
28-77
25-73
Male /Female
4/1
2/3
Barrett CK7 /20 patternb (%)
10
0
želodca CK7 /20 patternc (%)
5
40
Drugi vzorci (%)
85
60
bilo območje b, opredeljeno v referenčnemc, opredeljeno v referenčnem
Skupina A
simptomov refluksa najdemo v 14 primerov (70%) z BE. Visokofrekvenčni hiatal kile (65%) je bilo v tej skupini. Trije primeri so pokazali nizko stopnjo displazije od skupaj. Trinajst primerov je pokazala, nepopolno intestinalno metaplazijo in 7 primerov so bili popolni črevesne metaplazijo s pomočjo Alcian moder madež. Predvidena Barrett CK7 /20 vzorcev je bila ugotovljena le 2 od 20 primerov (slika 3). En primer je pokazala pričakovano želodčne CK7 /CK20 vzorec. Opomnik je imela spremenljive vzorce kamna; kot nobena imunskim barvanjem (n = 6) ali osrednja imunskim barvanjem (n = 11) za CK7 z žariščno ali razpršeno imunskim barvanjem za CK20, ki se ni ujemal s pričakovano Barrett CK7 20 vzorec /(slika 4). Občutljivost, specifičnost, lažna-pozitivnost in umetno negativnost od CK7 /20 barvanjem za Barrett vzorec je bilo 10%, 100%, 0% in 90%, v tem zaporedju. Slika 3 a. Razpršeno zmerno CK7 imunskim barvanjem površinskih in globokih žlez BE, × 40, b. Band, kot CK20 imunskim barvanjem površinskega epitelija in površinskih žlez BE, × 40
Slika 4 a. Odsoten CK7 imunskim barvanjem v BE, × 100, b. Neenotno CK20 imunskim barvanjem površinskih in globokih žlez BE, × 100 ABB Group B
enajst primerov pokazala popolno intestinalno metaplazijo, medtem ko 9 primerov je pokazala, nepopolne intestinalno metaplazijo s pomočjo Alcian moder madež. Osem primerov izrazili želodčne CK7 /20 vzorec (Cardia, n = 5 in corpus, n = 3). Šest jih je pokazala popolna in 2 nepopolna želodca CK7 /20 vzorec. Barrett CK7 /20 vzorcev ni bilo opaziti pri vseh bolnikih z želodčnim intestinalno metaplazijo. Značilnosti barvanje preostalih 12 primerih ni ujemajo s pričakovanim želodca CK7 /20 vzorec; zaradi neenotno CK7 in /ali kontaktna CK20 immunopositivity v primerih s popolno intestinalno metaplazijo in odsotnosti CK7 immunopositivity in /ali razpršenega CK20 immunopositivity v primerih z nedokončano intestinalno metaplazijo. Občutljivost, specifičnost, lažna-pozitivnost in umetno negativnost od CK7 /20 barvanjem za Barrett vzorec je bilo 40%, 100%, 0% in 60%, v tem zaporedju.
Ni bilo bistvene razlike za Barrett vzorec med dve skupini (2/20 v skupino A v primerjavi
0/20 v skupini B, P
= 0.487), medtem ko je bilo opazovanje želodca vzorca v skupini B bistveno višja kot v skupini A (8/20 vs .
20/01, P
= 0,02).
Normal SCJ pokazala neenotno immunopositivity za CK7 brez radioinkorporacijo za CK20, ampak normalno Cardia želodca pokazala immunonegativity za CK7 skupaj z neenotno immunopositivity za CK20, ki je omejeno na površje lahko epitelija.
Razprava
intestinalno metaplazijo razvije v Kardije pri bolnikih, bodisi s kratkimi odseki ali karditisa s H. pylori
predvsem povzroča. Razlika med tema dvema entitetama je pomembno, saj so etiologija in tveganje za nastanek adenokarcinom drugačen [7]. BE naj bi jih GERB povzročena in povezana s povečanim tveganjem požiralnika adenokarcinoma [1, 2, 4]. Mikroskopsko mogoče, KI JIH JE TREBA treba opredeliti kot zamenjavo požiralnika ploščatega epitela, ki ga metaplastic specializiranih (intestinalized) nosilnega epitela. Drugi epitelne tipi so plošcicnih vrste in fundal vrsto epitela. Diagnozo BE zahteva potrditev biopsijo črevesne metaplazijo z Alcian blue pH2.5 pozitivnih čašo celic, poleg tipičnih endoskopskih ugotovitev. Točna stopnja SCJ, proksimalni del želodca gub in linearno usmerjen plovila sluznice v distalnem požiralniku in EGJ bi bilo treba opredeliti [13]. SCJ običajno ustreza k bližnjemu robu linearnih želodca gub kar pomeni EGJ. Majhne posode usmerjeni vzporedno z dolgo osjo požiralnika izginejo na običajno nahaja SCJ. Vendar pa je odkrivanje nenormalno razširitev teh plovil pod SCJ in nad bližnjemu robu želodca gub je dokaz prisotnosti nosilnega epitela v distalnem požiralniku [14].
Oznaka BE od drugih subjektov, ki lahko opravlja podobno Histopatološka funkcije, je bistvenega pomena. Ker ni absolutnih histoloških meril za diagnosticiranje Barrett sluznico še ni bila ugotovljena, nedavne raziskave [8-11, 15-19], v glavnem odvisni od vzorcev nekaterih Cytokeratin podskupinah, predvsem dve različni vzorci CK7 /20 barvanjem. Citokeratinov so visoko ohranjeni polipeptide in predstavljajo skupino citoskeletnim strukturnih proteinov prisotnih v vseh epitela. Obstaja vsaj 20 ločenih oblik citokeratinov v epitelijskih celic in spremenljive vzorce izražanja, odvisno od vrste, lokacije in diferenciacije epitela [20]. CK7 bistvu ni izražen v normalnem epitela v prebavnem traktu, medtem ko je CK20 izražena v intestinalnega epitelija, želodca foveolar epitelij in endokrinih celic v zgornjih odsekov pilorično žlez. Barrett CK7 /20 vzorcev je bila prvič opredeljena Ormsby et al. [8]
kot obarvanja površinskega epitelija za CK20 in obarvanje tako površno in globoko metaplastic epitela za CK7. Imenovani želodca CK7 /20 Vzorec je bil razdeljen v dve vzorcev glede na vrsto intestinalno metaplazijo (nepopolna /komplet) s strani istih avtorjev. Glede na njihove predlog, je neenotna CK7 izraz s spremenljivo sodelovanjem globokih žlez videti nepopolno želodca intestinalno metaplazijo, ker je bil močan CK20 izraz v površinskih in globokih žlez z odsotnosti CK7 izražanja kaže v popolni želodca intestinalno metaplazijo. V tem pionirskem študiji je bila Barrett CK7 /20 vzorec zelo občutljiv in specifičen v primerjavi s primeri z želodčno intestinalno metaplazijo. Vendar H. pylori
status primerov ni bil omenjen. Študije, ki jih Glickman et al
[9] in Jovanovic et al.
[15] je potrdila ugotovitve Ormsby v 91% in 94% njihovih primerov z dolgimi odseki oz. Po drugi strani pa so študije, ki jih nekateri drugi raziskovalci niso mogli podpreti ugotovitve Ormsby je; Predlagana Barrett CK7 /20 vzorcev je bilo pri 54% bolnikov z dolgimi odseki, ki jih Mohammed et al.
[16] in le 39% bolnikov z dolgimi odseki El-Zimaity et al.
[17].
Ormsby et al.
[11] kasneje ocenila uporabnost CK7 /20 vzorcev v kratkem odseki v drugi študiji, in ugotovila, da "diagnostični" Barrett CK7 /20 vzorec je bil prisoten v 82 % bolnikov z kratko-segmenta. Čeprav Mohammed et al.
[16] je pokazala, skoraj enak odstotek (81%), za kratek segment primeri z Ormsby et al.
[11], so ugotovili, da isti vzorec pri 30,7% bolnikov s intestinalno metaplazijo v Kardije in bolj zanimivo v 55% biopsij, ki so imeli bodisi normalno ali vnetje želodčne sluznice brez intestinalno metaplazijo.
v tej študiji je 10% bolnikov s kratkim odseki pokazala pričakovano CK7 /20 vzorec in 40 % bolnikov z razjedo intestinalno metaplazijo pokazala pričakovano želodcu CK7 /20 vzorec z ustreznim popoln ali nepopoln intestinalno metaplazijo. Občutljivost Barrett CK7 /20 vzorcev je bila zelo nizka (10%) v skupini BE kljub visoki specifičnosti (100%). Občutljivost želodca CK7 /20 vzorec je bil tudi nizka (40%) v želodčnem črevesnem metaplazija skupino, čeprav je specifičnost visoka (100%) v tej skupini tudi. Želodca CK7 /20 vzorec je v želodčnem črevesnem metaplazijo skupine bistveno višja kot v BE skupino (P
= 0,02), medtem ko Barrett CK7 /20 vzorec ni pomembno razlikovala med obema skupinama (P
= 0,487). Na podlagi teh rezultatov, uporabiti dve različni vzorci CK7 /20 obarvanje ni bilo mogoče sprejeti kot zanesljivo metodo za razlikovanje kratki odseki iz želodca intestinalno metaplazijo, saj imata obe vzorci zelo nizko občutljivost in zelo visoke vrednosti lažno negativnosti.
v študiji Couvelard je [10] 31% bolnikov, v študiji Ormsby je 15% bolnikov s kratkega odseka povezana z Barrett CK7 /20 vzorcev je bilo H. pylori
okužbo. Čeprav je delež pozitivnega H. pylori
primerih pri bolnikih z kratek odsek povezan s Barrett CK7 /20 vzorec ni bil omenjen v študiji Mohameda [16], je bilo 6% bolnikov H. pylori
okužba s kratkimi odseki. Ker se črevesna metaplazijo lahko videli tako v H. pylori
okužbe in BE, kombinacija teh subjektov ne sme biti od razlagati za ocenjevanje uporabnosti Cytokeratin podskupinah. Nismo na H. pylori
pozitivne primere, tudi če je bil diagnosticiran kot BE. Zato razlike med našo raziskavo in že poročali rezultati bi lahko bili zaradi tega strogo razlikovanje H. pylori
pozitivnih primerov je v tej raziskavi. Razlike v biopsijo protokolov med prejšnjih študij in te študije (število, velikost ali mestu v vzorec, anterograd ali retroflexed pristop) bi lahko bil še en razlog za razlike v rezultatih. Za identifikacijo je treba uporabiti natančno lokacijo pristopa Cardia anterograd. Vendar pa je v zvezi z normalno srčno epitela, njen obstoj še vedno ni jasno, saj so rezultati različnih študij protislovni [21-23]. Medtem ko sta študije kažejo, da normalna srčna epitelij predstavlja obliko metaplastic epitela sekundarno za gastroezofagealne refluksne [21, 22], druga študija, ki Kilgore et al poročali kažejo, da srčno sluznica obstaja kot nativne strukture [23]. Nadaljnje raziskave lahko posredujejo informacije o srčno sluznice, zlasti njene "odnos s spremembami refluksa in BE.
Sklepi
Na podlagi naših rezultatov, smo manj prepričani uporabe predlaganih CK7 /20 vzorcev za razlikovanje kratki odseki iz želodca intestinalno metaplazijo. Pomembno je, da prepoznamo endoskopsko funkcije, ki so v pomoč diagnozo BE za endoscopists, saj je histologijo z intestinalno metaplazijo v Kardije povezan z drugimi etiologij in Barrett požiralnika enaka. Predlagamo, da se opredelitev temelji na kliniki, endoskopsko in histoloških ugotovitve namesto vzorec CK7 /20 imunskim barvanjem
Seznam kratic
BE:.
Barrett Ezofagus

GERB:
gastroezofagealne refluksne bolezni
H. pylori
:
Helicobacter pylori

CK7:
Cytokeratin 7
CK20:
Cytokeratin 20
SCJ:
Squamo-Columnar Junction
EGJ:
Esophago-želodca Junction
H & E:
Hematoxylin in Eozin

PAS:
Redni Acid Schiff
ABC:
Standardna Streptavidin-Biotin peroksidaze Complex

DAB:
Diaminobenzidine
gej:
gastroezofagealne Junction
Izjave
Avtorji "prvotna predložiti datoteke za slike
Spodaj so povezave do originalnih predloženih spisov avtorjev za slike. "Izvirno datoteko na sliki 1 12907_2003_16_MOESM2_ESM.jpeg avtorjev 12907_2003_16_MOESM1_ESM.jpeg avtorjev prvotni datoteki Slika 2 12907_2003_16_MOESM3_ESM.jpeg avtorjev prvotni datoteki Slika 3 12907_2003_16_MOESM4_ESM.jpeg avtorjev prvotni datoteki številka 4 nasprotujočimi si interesi
Nobena razglašena.

• Zmanjšano izražanje prenil difosfat- sintaze podenote 2 povezana z zmanjšanim preživetjem bolnikov z želodca cancer
• Helicobacter pylori lipopolisaharid modifikacija, Lewis antigen izražanja in želodca kolonizacija so holesterol odvisni