PLOS ONE: CEACAM6 Främjar Gastric cancerinvasion och metastasering genom att inducera Epithelial-Mesenkymala Transition via PI3K /AKT Signa Pathway

Abstrakt

uttryckt CEACAM6 i tumörvävnad spelar viktiga roller i invasion, metastaser och anoikis motstånd i en mängd av humana cancerformer. Vi rapporterade nyligen att CEACAM6 uttryck uppregleras i Magcancer (GC) vävnader och främjas GC metastaser. Här rapporterar vi att CEACAM6 främjar peritoneala metastaser i Málaga vivo
och negativt korrelerad med E-cadherin-uttryck i GC vävnader. Överuttryckta CEACAM6 inducerad epitel-mesenkymala övergång (EMT) i GC, mätt genom ökningar i EMT markörer N-cadherin, vimentin och Slug medan E-cadherin-uttryck minskade CEACAM6-överuttryckande GC-celler; motsatta resultat observerades i CEACAM6-tystas celler. Vidare E-cadherin uttryck negativt korrelerad med djup tumörinvasion, lymfkörtel metastas och TNM stadium i GC vävnader. Dessutom kan CEACAM6 förhöjd matrixmetalloproteinas-9 (MMP-9) aktivitet i GC, och anti-MMP-9-antikropp reversera ökande invasion och migrering inducerad av CEACAM6. CEACAM6 ökade också nivåerna av fosforylerad AKT, som är involverat i utvecklingen av en mängd olika humana tumörer. Vi observerade vidare att LY294002, en PI3K-hämmare, kunde vända CEACAM6-inducerad EMT via mesenkymala-epitelial övergång. Dessa fynd tyder på att CEACAM6 förbättrar invasion och metastas i GC genom att främja EMT via PI3K /AKT signalväg

Citation. Zang M, Zhang B, Zhang Y, Li J, Su L, Zhu Z, et al . (2014) CEACAM6 främjar Gastric cancerinvasion och metastasering genom att inducera Epithelial-Mesenkymala Transition via PI3K /AKT signalväg. PLoS ONE 9 (11): e112908. doi: 10.1371 /journal.pone.0112908

Redaktör: Chun-Ming Wong, University of Hong Kong, Hongkong

emottagen: 7 Augusti 2014; Accepteras: 16 oktober, 2014; Publicerad: 14 november 2014

Copyright: © 2014 Zang et al. Detta är en öppen tillgång artikel distribueras enligt villkoren i Creative Commons Attribution License, som tillåter obegränsad användning, distribution och reproduktion i alla medier, förutsatt den ursprungliga författaren och källan kredit

datatillgänglighet. Det författarna bekräftar att all data som ligger till grund resultaten är helt utan begränsning. Alla relevanta uppgifter inom pappers-

Finansiering:. Detta arbete har finansierats med bidrag från National Natural Science Foundation i Kina (nr 81.172.324, nr 91.229.106, nr 81.272.749, och nr 81.372.231), och nyckelprojekt för Shanghai utbildningsnämnden (nr 12ZZ105 och No.12ZZ102) och vetenskap och teknik kommissionen i Shanghai kommun (nr 13ZR1425600). Finansiärerna hade ingen roll i studiedesign, datainsamling och analys, beslut att publicera, eller beredning av manuskriptet

Konkurrerande intressen:.. Författarna har förklarat att inga konkurrerande intressen finns

Introduktion

GC är en av de vanligaste maligna tumörer och en viktig hälsofråga i hela världen, särskilt i östasiatiska länder som Japan, Korea, Kina, där det är den näst största orsaken till cancerrelaterad död [1] - [3]. Karcinoembryonalt antigen relaterade celladhesionsmolekyl 6 (CEACAM6) är en glykosylfosfatidylinositol (GPI)-kopplad immunoglobulin superfamiljmedlem som överuttrycks i ett flertal humana cancerformer, speciellt gastrointestinal cancer [4], och fungerar som en intercellulär adhesionsmolekyl [4] - [6]. Även CEACAM6 är en GPI-förankrade cellytan glykoprotein saknar en trans eller intracellulär domän, men kan påverka intracellulära signal händelser och spelar en viktig roll i mag-tarmcancer progression [4], [6] - [8]. GPI-förankrade molekyler är ofta samlokaliserade till små membranmikrodomäner i plasmamembranet [9], som kan aktivera nedströms signalerande kaskader såsom integrin-signaleringsvägen [10]. CEACAM6 fungerar som en onkogen i tumörer och främjar cancerinvasion, metastaser, anoikis motstånd och chemoresistance och hämmar differentiering [7], [8], [11]. Vi rapporterade nyligen att CEACAM6 expression uppregleras och associerad med lymfkörtel metastas i GC vävnader [12]. Emellertid de mekanismer genom vilka CEACAM6 influenser intracellulär signaltransduktion i GC återstår att fastställa.

Epithelial-mesenkymala övergång (EMT) är inte bara en fysiologisk process under embryonal utveckling eller regenerering av vävnad, men också en patologisk faktor i cancer progression, involverar tumörmetastas, apoptos och senescens motstånd [13] - [15]. EMT indikerar alltid en dålig klinisk prognos i humana cancerformer. Ett antal mekanismer som är relevanta för EMT initiering har dokumenterats, inklusive TGF-β, IL-6, PI3K /AKT, RAF /MAPK, och SRC vägar [15] - [18]. I vår tidigare studie observerade vi CEACAM6-inducerad SRC aktivering i GC-celler [12], och observerade ett ökat antal spolformad CEACAM6-överuttryckande celler jämfört med kontrollceller. Därför var vi mycket intresserade av att bestämma förhållandet mellan CEACAM6 och EMT i GC-celler. Även negativ korrelation mellan CEACAM6 och EMT har spelats in i pankreas karcinom [19], de mekanismer genom vilka CEACAM6 reglerar EMT är dåligt kända.

I denna studie undersökte vi ytterligare effekter och potentiella vägar CEACAM6 i GC invasion och metastasering, och undersökte dess korrelation med EMT.

Material och metoder

Etik Statement

skriftligt informerat samtycke i studien har erhållits från alla deltagare. Studieprotokollet godkändes av den etiska kommittén i Ruijin Hospital, Shanghai Jiao Tong University School of Medicine. Djurförsök genomfördes i enlighet med ett protokoll som godkänts av Institutional Animal Care och användning kommittén (IACUC) vid Shanghai Jiao Tong University, Shanghai, Kina.

Cellinjer och vävnadsprover

Den mänskliga GC cellinjer SGC-7901, MKN-45 och MKN-28 köptes från Shanghai institut för Biological Sciences, Chinese Academy of Sciences. Cellerna odlades vid 37 ° C i 5% CO _{2 och mättnad fuktighet i RPMI-1640-medium innehållande 10% fetalt bovint serum.}

Gastric tumör och angränsande icke-tumörvävnad erhölls från 93 patienter med GC som genomgick kurativ kirurgi vid Shanghai Jiaotong University School of Medicine Anslutna Ruijin sjukhus från 2010 till 2013. patienterna bestod av 69 män och 24 kvinnor med en medelålder på 62,1 år (intervall 30-85 år). Ingen av patienterna hade fått radioterapi eller kemoterapi före operation. Kliniskt patologiska uppgifterna samlades in och patologisk tumörstadieindelning bestämdes enligt UICC TNM klassificering. Histologisk typning utfördes av minst två expert patologer som arbetar självständigt i en dubbel-blind sätt. Studien godkändes av den etiska kommittén i Shanghai Ruijin Hospital, och alla patienter var fullt informerad om de experimentella procedurer.

Vektorkonstruktion och transfektion

Full längd CEACAM6 cDNA erhölls genom RT- PCR från totalt RNA extraherat från GC prover. Primersekvenserna var 5'-CCGGAATTCCCATGGGACCCCCCTCAGCCC-3 '(framåt) och 5'-TCCCCCGGGGCTATATCAGAGCCACCCTGG-3' (omvänt). Vi samlat en pIRES2-EGFP-CEACAM6 konstruktion genom att sätta CEACAM6 cDNA i pIRES2-EGFP vektor. Vi transfekterades nästa pIRES2-EGFP-CEACAM6 eller pIRES2-EGFP vektor i SGC-7901 och MKN-45 celler med användning av Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, USA) i enlighet med tillverkarens protokoll. Stabila kloner valdes genom kontinuerlig behandling med G418 (1,2 mg /ml, Gibco, New York, USA) katalog

Lentiviral vektor konstruktion

Baserat på kliniska CEACAM6 gen data, ett par oligonukleotidsekvenser. och negativa kontrollsekvenser utformades och syntetiserades av Shanghai Novobio Scientific Co., Ltd. shRNA sekvenser var enligt följande: CEACAM6, 5'-CACCGCCGGACAGTTCCATGTATACGAATATACATGGAACTGTCCGG-3 '(framåt) och 5'-AAAACCGGACAGTTCCATGTATATTCGTATACATGGAACTGTCCGGC-3' (bakåt); kontroll, 5'-CACCGCTACACAAATCAGCGATTTCGAAAAATCGCTGATTTGTGTAG-3 '(framåt) och 5'-AAAACTACACAAATCAGCGATTTTTCGAAATCGCTGATTTGTGTAGC-3' (omvänt). CEACAM6 shRNA subklonades in pL /shRNA /F lentivirusvektor att erhålla en pL /shRNA /SHR-CEACAM6 konstruktet. Då pL /shRNA /SHR-CEACAM6 eller kontrollera lentivirala vektorer transfekterades in MKN-28 GC-celler. Stabilt transfekterade celler selekterades genom behandling med 5 mikrogram /ml blasticidin och användes för identifiering och ytterligare forskning.

Western blotting

Celler skördades och lyserades med hjälp av RIPA buffert (Solarbio, Beijing, Kina ) innehållande 1% PMSF proteashämmare. En BCA-analys-kit (Pierce, Rockford, USA) användes för att mäta den totala proteinkoncentrationen. Ekvivalenta mängder av protein separerades genom 10% SDS-PAGE, och de upplösta proteinerna överfördes till PVDF-membran. Membranen blockerades med 5% skummjölk i 2 h och inkuberades sedan med primära antikroppar över natten vid 4 ° C. Primära antikroppar var följande: CEACAM6 (1:500; Abcam, USA), E-cadherin (1:500; Cell Signa Technology (CST), USA), N-cadherin (1:500; CST, USA), Vimentin ( 1:1000; CST, USA), Slug (1:500; CST, USA), p-AKT (Ser473) (1:1000; CST, USA), total AKT (1:1000; CST, USA) och GAPDH ( 1:10000, Abcam, USA). Membraner inkuberades sedan med sekundär antikropp under 2 h vid rumstemperatur och visualiserades med användning av förstärkt detektion kemiluminescens (Amersham Bioscience, Piscataway, NJ, USA) i enlighet med tillverkarens protokoll.

immunofluorescerande färgning

Celler odlades på täckglas i 24 h och fixerades sedan med 4% paraformaldehyd under 15 min. Cellerna tvättades med PBS, varefter permeabiliserades med 0,5% Triton X-100 under 20 min och blockerades med 5% BSA under 30 min vid rumstemperatur. Vi färgas nästa cellerna med CEACAM6 antikropp (1:50; Abcam) vid 37 ° C under 2 h, följt av inkubering med fluorescerande sekundär antikropp under 1 h vid rumstemperatur. Kärnorna färgades med DAPI. Rodamin falloidin antikropp (1:150, Cytoskeleton) användes för att visualisera cytoskelettet av GC-celler. Glasen analyserades och avbildas på ett fluorescensmikroskop.

Immunohistokemi

Sektioner av 4 ^ m tjocka skars från paraffininbäddade vävnadsblock och sedan avparaffiniserades och rehydreras. Immunhistokemisk färgning av sektioner utfördes enligt den DAKO-protokollet, med användning av mus-anti-CEACAM6 (1:100; Abcam) och E-cadherin (1:100; CST) vid 4 ° C över natten. Objektglasen inkuberades därefter med HRP-märkt sekundär antikropp och visualiserades genom diaminobensidin. Två patologer som var blinda för alla patientuppgifter oberoende utvärderas och gjorde sektionerna. Immunohistokemi fläck poäng = positiv cell poäng + färgningsintensitetspoäng. Den procentuella andelen positiva celler poängsattes enligt följande: 0 (10%), 1 (10-25%), 2 (26-50%), 3 (51-75%) och 4 (> 75%). Immunohistokemisk färgningsintensitet graderades enligt följande: 0 (ingen färgning), en (svag färgning), 2 (brun färgning), och 3 (mörkbrun färgning). Totalt betyg för ≥3 definierades som positiv för att förenkla analys av data. För att analysera korrelationen mellan CEACAM6 och E-cadherin expression, Image-Pro Plus version 6.0 (Media Cybernetics, Inc., Bethesda, MD, USA) användes för att kvantifiera uttrycket av CEACAM6 och E-cadherin på 20 prover.

gelatin zymografi

För att undersöka MMP-9 aktivitet var zymografi utförs med hjälp av 10% SDS-PAGE-geler som innehåller 1 mg /ml gelatin (Sigma). Kortfattat, GC-celler odlades i serumfritt RPMI-1640-medium under 24 h och supernatanten uppsamlades därefter och centrifugerades vid 1000 rpm under 5 min. Gelerna tvättades två gånger i renatureringsbuffert (2,5% Triton X-100) under 30 minuter varje gång för att ta bort SDS efter elektrofores och inkuberades sedan vid 37 ° C under 24 timmar i en reaktionsbuffert (50 mM Tris-HCl pH 7,5, 5 mM CaCl2, 150 mM NaCl). Vi färgade nästa gelerna med 0,5% Coomassie brilliant blue R-250 under 2 h och avfärgades gelerna i buffert (30% metanol, 10% ättiksyra). Tydliga transparenta band i bakgrunden av blåfärgning representerade gelatinas aktiviteter.

Cell migration och invasionsanalyser

För cellmigration och invasionsanalyser, totalt 1 x 10 ^{5 celler suspenderades i serumfritt RPMI-1640 med eller utan MMP-9-antikropp (Abcam, 2 | ig /200 ul) och ströks ut i Transwell-kamrarna (8 ^ m för 24-brunnar; Corning Costar, NY, USA) med eller utan Matrigel ( BD Bioscience, CA, USA) enligt tillverkarens protokoll. För båda analyserna, var-medium innehållande 10% FBS sattes till den undre kammaren som en kemoattraktant. Efter 24 h odling fixerades cellerna med 10% formalin och färgades med 0,5% kristallviolett. Slutligen, var cellerna i den nedre kammaren fotograferas och räknades med inverterad mikroskopi.}

Näck mus xenograft modell

Fyra veckor gamla BALB /c nakna möss (Institute of Zoology, Kina Academy of Sciences) användes för att utvärdera rollen av CEACAM6 i peritoneal spridning i Málaga vivo
. Nakna möss inhystes vid en specifik patogen miljö i djurlaboratorieenhet, School of Medicine, Shanghai Jiao Tong University, Kina. Mössen fick human vård och studieprotokoll genomfördes i enlighet med ett protokoll som godkänts av Institutional Animal Care och användning kommittén (IACUC) vid Shanghai Jiao Tong University, Shanghai, Kina. Totalt 2 x 10 ^{6 SGC-7901-CEACAM6 eller SGC-7901-NC celler injicerades i fem möss bukhålan hos varje grupp (randomisering). Möss avlivades på den 30: e dagen efter injektionen, och buken avbildades och fotograferades. Alla experiment utfördes i enlighet med de officiella rekommendationerna från den kinesiska djur samhället.}

Statistik över

Students t
-test användes för att undersöka de statistiska skillnaderna mellan de två grupperna . Samband mellan E-cadherin uttryck i GC vävnader och kliniskt patologiska parametrar och CEACAM6 uttryck analyserades med chi-square eller Fishers exakta test eller Pearson korrelationskoefficient analys. Data visas som medelvärde ± SD. P Hotel < 0,05 och P Hotel <. 0,01 ansågs statistiskt signifikant och mycket betydelsefullt, respektive

Resultat

CEACAM6 påverkar cellmorfologi och cytoskelettet

Våra tidigare resultat antydde att MKN-28 GC-celler uttrycker sig höga halter av CEACAM6, medan SGC-7901 och MKN-45 GC-celler uttrycker låga nivåer [12]. Överuttryck av CEACAM6 i SGC-7901 och MKN-45 GC-celler och dämpning av CEACAM6 uttryck i MKN-28 GC-celler av PL /shRNA /SHR-CEACAM6 lentivirala vektorer bekräftades på proteinnivå genom western blot-analys (Fig. 1A). Immun analyser alltid visade att SGC-7901-CEACAM6 celler uttryckte mer CEACAM6 protein än SGC-7901-NC-celler (Fig. 1B).

Intressant nog cellmorfologi ändras efter CEACAM6 dämpning och överuttryck. Jämfört med kontrollcellerna, SGC-7901-CEACAM6 och MKN-45-CEACAM6 celler uppvisade en mer mesenkymala liknande morfologi, och var spindle- och fusiform-formade (fig. 1C). Omvänt var typisk övergång från mesenkymala till epiteliala morfologi detekterades i MKN-28-SH-celler jämfört med MKN-28-nc-celler (Fig. 1C). Det var dock oklart om CEACAM6 uttryck hade en effekt på cytoskelettet, vilket immunofluorescerande färgning av F-aktin färgning utfördes. Intressant nog var större stora spolformade formade celler observeras för MKN-45-CEACAM6 och SGC-7901-CEACAM6 linjer jämfört med kontrollcellerna (Fig. 1D).

CEACAM6 är negativt associerad med E-cadherin i GC vävnader

Immunhistokemisk analys användes för att bestämma nivåerna av E-cadherin-uttryck i cancervävnader och parade angränsande icke-tumörvävnad. Immunohistokemisk färgning visade E-cadherin uttryck var lägre i tumörvävnad än i angränsande icke-tumörvävnad, och avslöjade att E-cadherin är huvudsakligen belägna i cytomembrane av epitelceller (Fig. 2D, E, F). Därefter undersökte vi relationen mellan E-cadherin uttryck och kliniskt patologiska egenskaper hos GC, och fann att nedregleras E-cadherin var associerat med djup invasion ( P
= 0,046), lymfkörtel metastas ( P
= 0,013), och TNM stadium ( P
= 0,035), men inte med andra kliniskt patologiska faktorer, inklusive kön, ålder, eller differentiering (tabell 1). Dessutom CEACAM6 negativt korrelerad med EMT i pankreas karcinom [19] och CEACAM6 dämpning kan öka E-cadherin promotoraktivitet i kolorektal cancer [20].

Dessutom undersökte vi sambandet mellan E-cadherin och CEACAM6 uttryck i GC genom serie avsnitt immunohistokemi (20 prover). CEACAM6 uttryck i tumörvävnad var högre än i matchade icke-tumörvävnad (Fig. 2A, B, C), som är förenliga med våra tidigare resultat [12]. Intressant nog fann vi att CEACAM6 uttryck negativt korrelerad med E-cadherin-uttryck i GC vävnader av Pearson korrelationskoefficient analys ( P Hotel < 0,01; Fig. 2G).

CEACAM6 inducerar EMT i GC celler

EMT relaterade proteiner i GC-celler utvärderades genom Western blot-analys. Vi observerade att den N-cadherin, Vimentin och Slug proteinnivåer ökades, medan E-cadherin minskade hos CEACAM6-överuttryckande celler jämfört med deras respektive kontrollceller (Fig. 3A, B). Motsatsen resultat erhölls efter CEACAM6 slogs ner i MKN-28-celler (Fig. 3C, D). Dessa resultat föreslog en funktionell roll för CEACAM6 vid reglering av EMT i GC-celler. Dessutom är dessa observationer i GC-celler liknade med resultaten i GC vävnad.

CEACAM6 höjer aktiviteten hos MMP-9 i GC-celler

Det är väl känt att vidhäftningen, nedbrytning och migration är viktiga frågor i cancermetastaser. Gelatin zymografi utfördes för att undersöka effekterna av CEACAM6 på aktiviteten hos MMP-9, vilket är viktigt i ECM nedbrytning. MMP-9 aktivitet i SGC-7901-CEACAM6 och MKN-45-CEACAM6 celler ökat jämfört med deras kontrollgrupper (Fig. 4A, B). Vi undersökte därefter huruvida den ökade aktiviteten hos MMP-9 inducerad av CEACAM6 i GC-celler resulterade i en sann inkrement i antalet invaderande och migrerande celler. Vi undersökte därför bidrag aktiva anti-MMP-9-antikropp eller PBS till CEACAM6-överuttryckande GC-celler. Som väntat fanns det betydande skillnader i antalet invaderande och migrerande celler i antikroppsbehandlade celler jämfört med PBS-behandlade celler ( P Hotel < 0,01; Fig. 4C, D, E, F).

CEACAM6 uppreglerar fosforylerad AKT i GC-celler

Vi observerade tidigare att SRC-aktivitet framkallades av CEACAM6 i SGC-7901 GC-celler. AKT är en nedströms protein av SRC och dramatiskt i samband med EMT, invasion och metastas i tumörprogression. Vi utvärderade därför AKT-aktivitet i CEACAM6-överuttryckande GC-celler. Western blotting visade att AKT fosforylering vid serin 473 markant ökat i CEACAM6-överuttryckande GC-celler jämfört med kontrollgrupperna (fig. 5A, B). För att undersöka huruvida EMT förändringar inducerades genom CEACAM6 via PI3K /AKT pathway, var SGC-7901-CEACAM6 och MKN-45-CEACAM6 celler behandlade med 100 nM LY294002 i 24 h. Intressant nog var E-cadherin ökat och N-cadherin reducerades i LY294002 behandlade CEACAM6-överuttryckande celler jämfört med kontrollerna, mätt genom Western blot-analys (fig. 5C, D).

CEACAM6 främjar peritoneal spridning in vivo

Slutligen undersökte vi effekterna av CEACAM6 uttryck i peritoneal spridning och metastaser i Málaga vivo
. Vi injicerade SGC-7901-CEACAM6 och SGC-7901-NC celler i bakkroppen av nakna möss. Omfattande peritoneal spridning observerades i SGC-7901-CEACAM6 gruppen jämfört med SGC-7901-NC-gruppen (fig. 6A). Det var betydligt mer synliga peritoneala knutor i SGC-7901-CEACAM6 gruppen än i kontrollgruppen (5,400 ± 0,510 vs
1,400 ± 0,245, P Hotel <. 0,01; Fig. 6B ). Dessutom överuttryck av CEACAM6 öka metastas i Málaga vivo
har också rapporterats i bukspottkörtelcancer [19].

Diskussion

GC är den andra orsaken av cancerrelaterad död i världen [1]. Ökande bevis tyder på att CEACAM6 spelar en viktig roll i mag-tarmcancer progression [7], [20] - [22], och CEACAM6 är mer utbrett än CEA (CEACAM5) i normala vävnader, med betydande uttryck i många epitel [4]. CEACAM6 påverkar intracellulära signaleringshändelser genom homofil och heterofila vidhäftning med andra CEACAMs eller integriner [23], [24]. Syftet med denna studie var att undersöka bidragen från GPI-förankrat protein CEACAM6 i GC progression.

Intressant, observerade vi att cellmorfologin och cytoskelettala struktur ändrades genom stabil uppreglering och nedreglering CEACAM6 i GC-celler. CEACAM6-överuttryckande celler var mer mesenkymala liknande och uppvisade en spindel och spolformade form och fler aktin spännings fibrer upptäcktes jämfört med kontrollgrupperna, i en process som definieras som EMT. Den mesenkymala fenotyp förser celler med fler flyttande och invasiva egenskaper [15]. Denna observation överensstämde med den i Málaga vivo
resultat där CEACAM6 inducerade omfattande peritoneal spridning i nakna möss. MET observerades följande tysta CEACAM6 i GC-celler. Dessa observationer visar att CEACAM6 kan vara involverad i att framkalla EMT i GC. Vi undersökte nästa sambandet mellan CEACAM6 och E-cadherin, en markör för EMT, i GC vävnader genom immunohistokemisk färgning. Som väntat var signifikant negativ korrelation observerades mellan CEACAM6 och E-cadherin, och E-cadherin-uttryck i samband med djup tumörinvasion, lymfkörtel metastas och TNM stadium i GC vävnader. Dessutom CEACAM6 främjade lymfkörtel metastas ( P
= 0,001) i 98 GC vävnader i vår tidigare studie [12]. Tidigare resultat visade att CEACAM6 dämpning ökad E-cadherin promotoraktivitet i kolorektal cancer [20]. Baserat på ovanstående slutsatser, postulerade vi att CEACAM6 främjade GC invasion och metastas genom att inducera EMT och kan tjäna som en mesenkymala markör.

Metastas är den vanligaste orsaken till cancerrelaterad död, men har varit svårt att studera eftersom det innebär en serie av sällsynta, stokastiska händelser. Ett antal potentiella signalvägar som är relevanta för cancermetastas har illustrerats, inklusive PI3K /AKT, MAPK /ERK, FAK-SRC, JAK /STAT, NF-kβ, och MMPs vägar [25] - [27]. I denna studie överexpression av CEACAM6 förhöjda MMP-9-aktivitet, och anti-MMP-9-antikropp skulle kunna vända de ökande invasiva och flyttande egenskaper inducerade av CEACAM6. EMT initiering signifikant korrelerad med cancermetastaser, och inducerar stamcellsegenskaper, förhindrar apoptos och åldrande, och bidrar till immunsuppression i cancerutveckling [15]. EMT kan induceras genom aktivering av PI3K /AKT signalväg [28], [29]. CEACAM6 fungerar som en intercellulär adhesionsmolekyl och kan bilda större lipidaggregat genom att interagera med sig själv eller andra CEACAMs, på så sätt aktivera de nedströms belägna signalkaskader, såsom integrin och PI3K /AKT vägar [10], [30]. Därför undersökte vi effekterna av CEACAM6 uttryck på nivåerna av AKT fosforylering i GC-celler. Fosforylerade AKT nivåer ökade i CEACAM6-överuttryckande celler, i linje med tidigare resultat noterades i pankreas karcinom [8], [11]. Enligt dessa observationer, föreslår vi en hypotes där CEACAM6-inducerad EMT sker genom aktivering av PI3K /AKT signalkaskad i GC. Dessutom CEACAM6-överuttryckande celler behandlade med LY294002, en PI3K-hämmare, genomgick en återföring av EMT via MET. Därför drar vi slutsatsen att CEACAM6 inducerar EMT genom att aktivera PI3K /AKT-signalvägen i GC och kan tjäna som ett potentiellt mål i tumörbehandling.

Sammanfattningsvis har vi visat att CEACAM6 fungerar som en onkogen genom att främja EMT via PI3K /AKT aktivering i GC. Vidare är E-cadherin markant nedregleras i GC vävnader än parvisa intilliggande icke-tumörvävnader. CEACAM6 främjar invasion och metastas i Málaga vitro Mössor och i Málaga vivo
, och kan vara en potentiell ny diagnostisk och prognostisk markör och nya mål för GC terapi.

Bakgrundsinformation
checklista S1.
ARRIVE riktlinjer. Alla vivo experiment i vårt manuskript i exporterades i enlighet med de anländer riktlinjer
doi:. 10,1371 /journal.pone.0112908.s001
(DOC) katalog

Tack till

Vi vill tacka Xuehua Chen och Jianian Zhang för tekniskt stöd, till Beiqin Yu för sin materiellt stöd.

• PLOS ONE: RABEX-5 uppregleras och spelar en onkogen roll i Gastric cancerutveckling genom att aktivera VEGF signalväg
• PLOS ONE: är tidig utfodring efter Gastric Cancer kirurgi genomförbart? En systematisk genomgång och metaanalys av randomiserade kontrollerade studier