Ekspressionen og kliniske betydning af MIR-132 i gastrisk cancer patients

ekspressionen og kliniske betydning af MIR-132 i mavecancerpatienter Salg Abstract
Baggrund og formål
MIR-132 spiller en rolle i reguleringen af ​​neuronal morfologi og cellulære ophidselse. Der vides kun lidt om virkningerne af miR-132 i kræft. Formålet med denne undersøgelse er at vurdere ekspressionen af ​​MIR-132 og dens kliniske betydning i gastrisk cancer. Salg Metoder
cancervæv og tilsvarende normale væv fra 79 patienter med gastrisk cancer blev undersøgt for ekspression af MIR-132 bruger kvantitativ PCR og sammenhængen mellem miR-132 ekspressionsniveauerne og klinisk-patologiske faktorer og prognose blev analyseret.
Resultater
i 79 kliniske prøver af gastrisk kræftpatienter, miR-132 ekspressionsniveauer i kræft væv var væsentligt højere end i de tilsvarende normale væv (P Salg = 0,001). Højere ekspressionsniveauer af MIR-132 var forbundet med hyppigere lymfeknudemetastase (P
= 0,033), mere lymfatisk tumor emboli (P
= 0,007), og mere fremskredent stadium (P
= 0,016). Derudover udtryk for miR-132 var en uafhængig prognostisk faktor for samlet overlevelse (P
= 0,020).
Konklusion
miR-132 kunne tjene som et effektivt prognostisk faktor for gastrisk kræftpatienter.
Virtual slides
Den virtuelle slide (er) for denne artikel kan findes her: http:... //www diagnosticpathol nologi diagnomx eu /vs /8168577241196050
Emneord
Gastric cancer Prognose biologiske markører Introduktion
Selvom forekomsten af ​​mavekræft er blevet væsentligt faldende i flere årtier, er det stadig den fjerde mest almindelige kræftform og den næsthyppigste årsag til kræft død [1, 2]. Et multiplum af gener synes at bidrage til maligne biologiske opførsel af gastrisk cancer [3, 4]. Det er meget vigtigt at identificere de prognostiske faktorer for at maksimere den terapeutiske virkning og for at minimere de skadelige virkninger ved behandling af kræftpatienter. Salg MikroRNA'er er en klasse af endogene små ikke-kodende RNA, der fungerer som gen-regulatorer ved kontrol af messenger-RNA oversættelse og nedbrydning [5]. MikroRNA'er spille en afgørende rolle i reguleringen af ​​de normale funktioner såsom proliferation, differentiering og apoptose. Endvidere dysregulering af miRNA bidrager til carcinogenese og cancer progression [6, 7]. Som medlem af miRNA familien, MIR-132 spiller en vigtig rolle i inflammation, angiogenese, og neural udvikling [8-10]. For nylig viste nogle undersøgelser, at dysregulering af MIR-132 var relateret til en række humane tumorer, såsom ikke-småcellet lungekræft, osteosarkom, brystcancer, hepatocellulært carcinom, prostatacancer, og pancreascancer [11-16]. Men der er ingen rapporter om udtryk og kliniske betydning af miR-132 i mavekræft.
I denne undersøgelse blev miR-132-ekspression i mavecancerpatienter undersøgt og sammenhængen mellem miR-132 og klinisk-patologiske parametre blev analyseret . Derudover evalueret vi ekspressionen af ​​nogle proteiner involveret i cellecykluskontrol (p21, p53), vævs proliferation og differentiering (c-myc). p21 og p53 proteiner er produkter af tumorsuppressorgener, som aktiveres ved at modulere celleproliferation via kontrol af G1 arrest checkpoint i cellecyklussen [17, 18]. c-myc protein er en type af transskription faktor.
Patienter og metoder
Menneskelig mavekræft og tilsvarende normale væv blev opnået fra 79 patienter, som gennemgik gastrektomi ved Institut for mavekræft og bløddelssarkomer, Fudan University Shanghai Cancer center, mellem januar 2007 og december 2009. Delvis gastrektomi blev udført i 36 patienter, og total gastrektomi blev udført i de andre 43 patienter. Mindst 4 cm resektionsrandene fra grov tumor var garanteret for alle patienter. I alt 71 patienter fik adjuverende kemoterapi. Efter resektion blev prøverne straks frosset i flydende nitrogen og opbevares derefter i -80 ° køleskab. Inklusionskriterier for denne undersøgelse var adenocarcinom og komplet patologisk data; Eksklusionskriterier var neoadjuverende terapi, peritoneal udbredelse, og fjern metastaser. Data blev hentet fra deres operative og patologiske rapporter, og opfølgende data blev opnået via telefon ambulant og klinisk database. Den skriftlige informerede samtykke var blevet indhentet fra alle patienter, og denne undersøgelse blev godkendt af Etisk Komité Shanghai Cancer Center of Fudan University.
RNA ekstraktion og kvantitativ real-time PCR
samlede RNA fra væv blev ekstraheret med TRIzol-reagens (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) ifølge producentens anvisninger. Kvantitative real-time PCR (QRT-PCR) blev udført for at detektere den endogene ekspression af MIR-132 ifølge Applied Biosystems metode. Kort beskrevet cDNA blev revers transkriberet fra totalt RNA prøver under anvendelse af en miRNA-specifik hårnåle-primer fra Taqman miRNA tests og reagenser fra TaqMan® MicroRNA Reverse Transcription Kit (ABI, Forest City, CA, USA). Derefter blev PCR-produkter amplificeret fra cDNA prøver under anvendelse af TaqMan miRNA tests sammen med TaqMan® Universal PCR Master Mix og mængden af ​​PCR-produkt blev overvåget ved anvendelse af Applied Biosystems 7900 Sequence Detection System. U6 lille nukleare RNA blev anvendt som en intern kontrol. Den relative mængde af MIR-132 blev beregnet ved anvendelse af 2 (-delta DeltaC (T)) metode [19].
Immunohistokemisk farvning
p21, p53, og c-myc blev påvist ved immunohistokemisk metode. Alle primære antistoffer og monoklonale muse-antistoffer blev anskaffet fra Dako (Hamborg. Tyskland). Immunhistokemisk farvning blev udført ved forbedre mærket polymersystem (ELPS) metode. Efter inkubation natten over ved 4 ° C med anti-p21, p53, og c-myc-antistof blev snit behandlet ifølge standard immunoperoxidase metoder under anvendelse af et streptavidin biotin peroxidise kompleks kit (LSAB + Kit /HRP; Dako). Den peroxidise Reaktionen blev derefter fremkaldt med diaminobenzidin (Dako). Negative kontrolsnit blev underkastet den samme fremgangsmåde, bortset fra at det første antistof blev erstattet af phosphatbuffer saltvand (PBS) [20].
Immunohistokemisk farvning scoring
Alle skiverne blev evalueret af to patologer uden kendskab til kliniske resultater. Procentdelen af ​​immunoreaktivt celler og farvningsintensiteter blev evalueret i hver prøve. Procentdelen af ​​immunoreaktive celler blev gradueret på en skala fra 0 til 4: scores nogen farvning som 0, 1-10% af celler farvet scorede som 1, 11-50% som 2, 51-80% som 3, og 81- 100% som 4. farvningsintensiteter blev gradueret fra 0 til 3: 0 er defineret som negativ, 1 som svag, 2 som modereret, og 3 så stærk, hhv. De rå data blev konverteret til den immunhistokemiske score (IHS) ved at multiplicere mængden og intensitet scoringer. På den sidste ende tilfældene havde en score på mindre end 1 blev betragtet som negative, og ≥ 1 blev betragtet som positiv [20].
Statistisk analyse
Patienternes funktioner og klinisk-patologiske karakteristika blev analyseret ved hjælp af to -tailed Students t
-test for kontinuerlig variabel og χ 2 test for kategoriske variable. Samlet overlevelseskurver blev beregnet af Kaplan-Meier-metoden, og forskellene mellem overlevelseskurverne blev undersøgt med langt rank test. De uafhængige prognostiske faktorer blev undersøgt af den multivariate overlevelse analyse ved hjælp Cox proportional hazard model. Det accepterede signifikansniveau var P
< 0,05. Statistiske analyser og grafik blev udført under anvendelse af SPSS 13.0 statistisk pakke (SPSS, Inc., Chicago, IL) Search Results Salg klinisk-patologisk kendetegn
Der var 62 mænd og 17 kvinder. (3,6: 1) med en gennemsnitlig alder af 58 år. Der var 7 (8,9%) tidlige gastrisk kræft og 72 (91,1%) avancerede gastrisk kræft. Ifølge histologisk type, blev observeret veldifferentierede tumorer i 3 (3,8%) patienter, moderat differentierede i 11 (13,9%) patienter, og dårligt differentierede tumorer i de resterende 65 (82.3%) patienter. Af 79 patienter, 25 (31,6%) havde tumorer placeret i den øverste tredjedel, 15 (19,0%) havde tumorer i den midterste tredjedel, 36 (45,6%) havde tumorer i den nederste tredjedel af maven, og 3 (3,8%) havde tumorer besatte to tredjedele eller mere af maven. Lymfeknudemetastase blev observeret i 57 patienter, metastaser sats var 72,2%. Fordelingen af ​​patologisk etape var som følger: 10 (12,6%) patienter tilhørte iscenesætte I, 24 (30,4%) II, og 45 (57%) III
udtryk og korrelation af miR-132, p21, p53. og c-myc
mIR-132 niveauer i 79 kræft (T) og tilsvarende normale væv (N) blev undersøgt ved QRT-PCR. De fleste tumorvæv (57/79, 72%) viste forhøjede niveauer af MIR-132 sammenlignet med de tilsvarende normale væv, med en gennemsnitlig stigning på 2,3 gange. MIR-132 niveauer i cancervæv (gennemsnit ± SD, 0,35 ± 0,58) signifikant højere end dem i de tilsvarende noncancerous væv (gennemsnit ± SD, 0,15 ± 0,35, P
< 0,05). Udtrykkene for p21, p53 og c-myc blev undersøgt ved immunhistokemisk farvning. p21-ekspression var positiv i 64,6% af alle mavekræft væv. p21 farvning blev observeret i kernen af ​​carcinomceller. p53-ekspression var positiv i 74,7% af alle mavekræft væv. p53 farvning blev observeret i kernen af ​​carcinomceller. c-myc-ekspression var positiv i 44,3% af alle mavekræft væv. c-myc-farvning blev observeret i cytoplasmaet i carcinomceller. MIR-132-ekspression blev associeret med p53 og c-myc. Der var ingen sammenhæng med p21. Derudover p53expression var forbundet med c-myc (tabel 1) .table 1 Positive resultater af sammenhænge blandt biologiske markører
Biologiske markører

Korrelationskoefficienter (r)
P value

miR-132
P53
0.274
0.015
miR-132
c-myc
0.228
0.044
P53
c-myc
0.235
0.038
Klinisk betydning af miR-132 i mavekræft
79 mavecancerpatienter blev inddelt i to grupper, herunder miR-21 high-udtryk gruppe (T /N > 0,5, n = 33) og lav-udtryk gruppe (T /N < 0,5, n = 46) ifølge medianen T /N ration af mIR-132-ekspression. Sammenhængen mellem miR-132 udtryk og patologiske parametre blev analyseret. Resultaterne viste, at patienter med høj MIR-132-ekspression havde hyppigere lymfeknudemetastase (P
= 0,033), mere lymfatisk tumor emboli (P
= 0,007), og mere fremskredent stadium (P
= 0,016 ). Der var imidlertid ingen signifikante forskelle om køn, alder, histologisk type, tumor location, tumorstørrelse, nervøs invasion, og T trin (tabel 2). I den samlede overlevelse, patienterne med MIR-132 høj ekspression havde en signifikant dårligere prognose end dem med MIR-132 lav ekspression (P
= 0,000) (figur 1). Univariate analyse af den samlede overlevelse viste, at den relative ekspression af miR-132, nervøs invasion, lymfe tumor emboli, og patologisk stadium var prognostiske prædiktorer. Multivariate overlevelse analyse, herunder alle væsentlige prognostiske faktorer i univariat analyse blev udført for at bestemme de uafhængige prognostiske faktorer for mavekræft. Multivariat analyse viste, at miR-132 ekspressionsniveauet og patologisk stadium var uafhængige prognostiske faktorer (tabel 3) .table 2 miR-132 udtryk og klinisk-patologiske faktorer
Variabler
Høj udtryk n = 33

lav udtryk n = 46
P
Køn
0,618
Mand
25
37
Female
8
9
Age
0,556
< 60
18
22
≥60
15
24
Histologisk sortering
0,412
Dårligt -differentiated
28
36
Moderat-opdelte
5
7
godt differentieret
0
3
Tumor placering
0,467
Øvre tredje
10
15
Mellemøsten tredje
8
7
Lavere tredje
15
21
To tredjedel eller mere
0
3
Tumor størrelse (cm)
0,862
< 5
18
26
≥5
15
20
Nervøs invasion
0,096
Ja
22
22
Ingen
11
24
lymfatisk tumor emboli
0,005
Ja
26
22
Ingen
7
24
T etape
0,070
T1, T2
6
17
T3, T4
27
29
Lymfeknude metastase
0,033
Ja
28
29
Ingen
5
17
Patologisk etape
0,016
jeg
2
8
II
6
18
III
25
20
Figur 1 Sammenligning af overlevelse efter ekspression af miR-132. Der var signifikante forskelle mellem miR-132 høj ekspression og miR-132 lav ekspression (P
= 0,000).
Tabel 3 Multivariate analyse af patienter med Cox model
Variabel
χ2

P
vale
RR
95% CI
miR-132 udtryk
5,447
0,020
2,414
1,152-5,059
Nervøs invasion
1,918
0,166
1.890
0,768-4,655
lymfatisk tumor emboli
0,173
0,677
0,838
0,366-1,923
Patologisk etape
8,742
0.003
4,356
1,642 til 11,555
diskussion
identifikation af prognostiske faktorer i mavekræft var afgørende for at forudsige patienternes overlevelse og bestemme optimale terapeutiske strategier . Dybden af ​​invasion og lymfeknudemetastase var de vigtigste prognostiske faktorer i gastrisk cancer. Som følge af variabiliteten af ​​prognosen inden samme patologiske stadium af mavecancer, har der været en masse undersøgelser for specifikke biologiske markører til at identificere patienter med prognose [21-28]. De biologiske markører, såsom microRNA, c-Met, L1CAM, endothelial lipase-protein, variabelt kopital af mitokondrie-DNA (mtDNA), TIMP3, HK6, og Ezrin er blevet omfattende undersøgt. Som en ny biomarkør, er potentialet i miRNA i at forudsige prognosen i stigende grad undersøgt. MIR-132 er en særdeles konserveret miRNA transskribere fra en intergeniske region på humant kromosom 17 ved transkriptionsfaktoren cAMP responselementet bindende protein [29]. De fleste af rapporterne Bout miR-132 regulering og biologiske funktioner opstået fra de gennemførte undersøgelser i neuronal sammenhæng. Derudover har MIR-132 også blevet beskrevet i en række andre områder, såsom inflammation, celletransformation og tumorgenese. MIR-132 blev vist at være opreguleret eller nedreguleret i forskellige humane cancere [16, 30, 31]. Nogle undersøgelser viste, at MIR-132 kunne fremme celleproliferation [31]. Men der er stadig ingen rapporter om miR-132 i mavekræft.
I denne undersøgelse undersøgte vi miR-132-ekspression i mavekræft og bestemmes, hvis det kunne forudsige patientresultater. Vi fandt, at MIR-132-ekspression var højere i cancervæv sammenlignet med tilsvarende normale væv. Den nøjagtige årsag til MIR-132 høj ekspression i gastrisk cancer ukendt. Park JK et al. rapporteret [31], at B2AR agonist terbutalin øger MIR-132-ekspression. MIR-132 blev transkriptionelt aktiveret af CREB i neuroner [32]. B2AR antagonister inhiberede aktivering af CREB [33]. Derfor er det muligt, at simulering af B2AR øge MIR-132-ekspression efter aktivering af CREB.
Resultaterne viste, at høj MIR-132 ekspression i gastrisk cancer var signifikant korreleret med aggressive klinisk-patologiske karakteristika såsom hyppigere lymfeknudemetastase, mere lymfe tumor emboli, og mere fremskredent stadium. Disse resultater antydede, at opregulering af MIR-132 spillede en vigtig rolle i gastrisk cancer progression. Interessant fandt vi, at MIR-132-ekspression blev associeret med p53 og c-myc. Nogle tidligere undersøgelser viste, at nogle microRNA kunne mediere og regulere tumor suppression udøves af p53 eller c-myc [34, 35]. Jiang L et al. [34] fandt, der har-MIR-125a-3p kunne inducere apoptose via p53 pathway. Zhang N, et al. [35] fandt, at miR-150 kunne fremme udbredelsen af ​​lungekræft celler ved at målrette p53. Wang B et al. [36] fandt, at der var en dobbelt negativ feedback loop mellem miR-122 og c-myc i hepatocellulær cancer. Li X, et al. [37] fandt, at c-MYC fremmet ekspressionen af ​​moden MIR-23a, miR24-2, og miR27a og efterfølgende fremmes brystcarcinom cellemigration og invasion. Men den præcise sammenhæng mellem MIR-132 og p53, c-myc er uklar og er endnu ikke klarlagt i fremtidige studier. Vi undersøgte korrelationen af ​​MIR-132-ekspression med prognose af mavecancerpatienter, fundet, at patienter med høj MIR-132-ekspression havde dårligere samlet overlevelse, at dem med lav MIR-132-ekspression. Vigtigere, multivariat analyse afslørede, at høj MIR-132-ekspression var uafhængig prognostisk indikator. Det var kontroverser om miR-132 spillede samme prognostisk værdi i forskellige former for tumorer. Parker et al. rapporteret [38], at høj ekspression af MIR-132 blev associeret med dårlig prognose hos patienter med primær glioblastoma multiforme. Men Yang et al. [12] rapporterede, at osteosarcom patienter med lav MIR-132-ekspression havde dårligere samlet og sygdomsfri overlevelse. Det var muligt at MIR-132 spillede forskellige funktioner i forskellige tumorer. Wang et al. [39] fandt, at overekspression af MIR-132 undertrykt in vitro celleproliferation og in vivo tumorvækst. Li et al. [13] viste, at overekspression af MIR-132 kunne inhibere proliferationen af ​​brystcancer celle. Omvendt Park et al. [31] rapporterede, at overekspression af MIR-132 forøgede pancreascancer celleproliferation.
Tilsammen vores undersøgelse viste, at MIR-132 blev opreguleret i gastrisk cancer og kan være en uafhængig molekylær biomarkør til forudsigelse af prognose af gastrisk kræft. I mellemtiden, som følge af lille prøve forskning, er behov for en stor sag forskning for at bekræfte den prognostiske værdi af miR-132 i mavekræft.
Erklæringer
Forfattere 'oprindelige indsendt filer til Images of Nedenfor er de links til forfatternes oprindelige indsendte filer til billeder. 13000_2014_947_MOESM1_ESM.tif Forfatternes oprindelige fil til figur 1 Konkurrerende interesser
Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser
Forfattere. Bidrag
udtænkt og designet forsøgene: XWL HMY HC YNW. Udføres forsøgene: XWL. Analyserede data: XWL HMY. Bidraget reagenser /materialer /analyseværktøjer: HC YNW. Skrev papiret: XWL. Alle forfattere læst og godkendt den endelige manuskript.

• Sammenligning af effekten af ​​anden indgivelsesvej af kemoterapi på inoperabel, avanceret gastrisk kræft
• Blandet adeno (neuro) endokrin carcinoma følge af ektopisk maveslimhinden af ​​den øvre thorax spiserøret