Mechanizmusok gasztroprotekció metanol kivonat Melastoma malabathricum levelek

Mechanizmusok gasztroprotekció metanol kivonat Melastoma malabathricum katalógusa elhagyja katalógusa Abstract Background katalógusa katalógusa Melastoma malabathricum katalógusa L. (Melastomaceae) egy kis cserje különböző gyógyászati ​​célra. A jelen tanulmány végeztük, hogy meghatározzák a gasztroprotektív mechanizmusai metanolos extraktum M. malabathricum katalógusa levelek (MEMM) patkányokban.
Módszerek
Az extraktumot azon mechanizmusok gasztroprotektív (50, 250, 500 mg /kg) alkalmazásával vizsgáltuk a pylorus-ligáláshoz patkány modellben, amelyben térfogata, a pH, a szabad és a teljes savasság gyomornedv, és a gyomor fal nyálka tartalmat meghatároztuk. A bevonása endogén nitrogén-oxid (NO) és a szulfhidril (SH) vegyületek gasztroprotektív hatását MEMM is mértük. MEMM vetettük alá az antioxidáns, gyulladásgátló és fitokémiai analízis és HPLC elemzése. Katalógusa Eredmények katalógusa MEMM tartalmazott különböző növény- tevő kvercitrin azonosítható részük. MEMM és kvercitrin: i) szignifikánsan (p < 0,05) csökkentette a térfogat és a savasság gyomornedv miközben növeli a pH-t és a gyomor fal nyálka tartalom .; II) szignifikánsan (p < 0,05) emelte a SOD, a GTP és GTR miközben jelentősen (p < 0,05) csökkentette a CAT, MPO és TBARS tevékenységek .; iii) a kifejtett gasztroprotektív aktivitást mutatnak, amikor alkalmazásával értékeltük az etanol-indukált gyomorfekély assay, amelyet fordított N G-nitro-L-arginin-metil-észterek (L-NAME; inhibitora NO szintáz) és N
- ethylmaleimide (NEM; szulfhidril (SH) blokkoló). MEMM gátolta a lipoxigenáz (LOX) és xantin oxidáz (XO) tevékenységek a legnagyobb affinitással a volt, míg kvercitrin mutatta, nagy affinitást mutatnak a XO aktivitást.
Következtetések
MEMM mutattak gasztroprotektív aktivitást részben a jelenléte kvercitrin, antioxidáns és gyulladáscsökkentő tevékenységet, és a via modulációs NO és SH csoportokkal.
kulcsszavak
Melastoma malabathricum
Melastomaceae metanolos extraktumot Gastroprotektív mechanizmusok a nitrogén-oxid szulfhidrilcsoport antioxidáns gyulladásgátló alapon
a peptikus fekélyek egy közös rendellenesség a teljes gyomor-bél traktus. Közel 8-10% a globális népesség által érintett peptikus fekélyek, körülbelül 5% -uk szenved gyomorfekély [1]. A fekélyek, amelyek befolyásolják a gyomor-bél rendszer általában súlyosbítja aránytalanság között destruktív és védekező tényezők a gyomorban [1]. Bár a tekintett multifaktoriális betegség, általánosan elfogadott, hogy majdnem az összes peptikus fekélyek kapcsolódik a fertőzés a Helicobacter pylori katalógusa, és a fő terápiás cél az, hogy felszámolása a H. pylori
fertőzés. Jelenleg az első vonalbeli gyógykezelése gyomorfekély célozza H. pylori fertőzés katalógusa, és általában alapul hármas kezelési eljárás, amelynek keretében a használata gyomorfekély-inhibitorok (pl hisztamin H 2-antagonisták, proton pumpa gátlók, vagy szukralfát és bizmut) kombinációban két típusú antibiotikumok [2]. Azonban az a tény, hogy vannak különböző egyéb tényezők, kivéve a H. pylori katalógusa, amelyek kiváltó gyomorfekély képződése nem szabad figyelmen kívül hagyni [3]. Különböző megközelítéseket használtak kezelésére gyomorfekély társított azok a nem-H. pylori
val kapcsolatos tényezők, mint a redukáló-szekréció és a növekvő nyálka termelést, de ezek a megközelítések volna tekinteni, mint a második vonalbeli kezelésre.
ellenére azok hatékonyságát a H. pylori megszüntetésében katalógusa, a kezelés komplex, és a a magas költségek, felhasználásával járó legalább két antibiotikummal kombinációban gyomorsav inhibitorok. Ez a kombináció gyakran okoz számos nemkívánatos mellékhatások (azaz antibiotikum-rezisztencia, kiújulás, hányinger) [2,3]. Annak ellenére, hogy a H. pylori
fertőzések fokozatosan csökkent a legtöbb iparosodott országok, fokozatos növekedése hiba a H. pylori katalógusa felszámolására kezelések figyelhető máshol [2]. Ez tovább ronthatja az egyesület ilyen szabvány fekélyellenes szerek különböző nem kívánt mellékhatásokat. Figyelembe véve a különböző káros hatások és a előfordulása antibiotikum-rezisztens H. pylori törzsek katalógusa, a keresés az új és biztonságos, nem antibiotikum gyomorvédő szerek természetes források, különösen a növények, tovább növekszik az egész világon [2, 4].
egyik növények, amelyek kezelésére használják gyomorfekély malajziai Melastoma malabathricum katalógusa L. (családi Melastomaceae). Helyi nevén a maláj a "Senduduk katalógusa", M. malabathricum katalógusa megtalálható bőségesen Indiai-óceáni sziget, egész Dél-és Délkelet-Ázsiában, Tajvan, Kína, Dél-Csendes-óceán és Ausztráliában. Különböző növényi részeken használják maláj hagyományos kezelésére szolgáló gyógyszerek a különböző betegségek a levelek, különösen, már kezelésére használják gyomorfekély többek között [5]. Tudományosan, az M. malabathricum katalógusa alkatrészek számoltak módon különféle farmakológiai aktivitást [5-7]. Más, mint a hagyományos felhasználásra fekélyellenes szerek, M. malabathricum katalógusa választották a jelen tanulmány azon a tényen alapul, hogy az egyik a híres gyógynövények maláj gyógyszer folklór, de a kapott figyelem hiánya között a közösség. Sőt, M. malabathricum
leírták, hogy tartalmaz nagy összes fenol tartalom és hogy gyakoroljon magas antioxidáns és gyulladáscsökkentő tevékenység [5-7], ami fontos a mechanizmusok fekélyellenes bármely vegyület /kivonatok. Köztudott, hogy a gyomorfekély, különösen azok, indukálnak etanollal, társított ROS-termelés. Etanol gyorsan áthatol a gyomor nyálkahártya, mivel képes arra, hogy oldja a védő nyálkahártya és az okozza a felszabadulását hidroperoxi-szabadgyökök és a szuperoxid anion. Ezek a szabad gyökök okoznak növekedését az oxidatív stressz a szövetekben, ami viszont növeli a szint malondialdehid, a marker a megnövekedett lipid peroxidáció. Összességében, az etanol-indukált káros hatás nyilvánul keresztül közvetlenül a reaktív metabolitok vagy közvetve aktiválás más mechanizmusok, amelyek végül kiváltó oxidatív károsodás [7]. Ezért kivonatok /vegyületek antioxidáns aktivitás játszanak nagyon fontos szerepet befogásával azok a szabad gyökök és gátolják a lipidperoxidáció. Helyett a jelen, M. malabathricum
leírták, hogy fejtsen ki egy figyelemre méltó antioxidáns aktivitás [7], és ezért úgy véljük, hogy rendelkeznek fekélyellenes potenciál. A mi korábbi szűrésére metanolos extraktum M. malabathricum katalógusa (MEMM) a fekélyellenes potenciális ellen etanol- és az indometacin által indukált gyomorfekély modellek számoltak máshol [8]. MEMM találtuk, hogy gyengítik az etanol-indukált, de súlyosbítja indometacin által indukált, a gyomorfekély kialakulását. Az a képesség, MEMM hogy gyakoroljon mind a gasztroprotektív és gyulladásgátló tevékenység [5] Ezzel szemben a indometacin, amely csak kifejtett gyulladásgátló hatást. Ez a megfigyelés arra utal, hogy a kivonat aktiválja a gyomor mechanizmus révén, amely nem jár az említett anti-gyulladás. Sőt, a gyulladásgátló aktivitását MEMM esetleg különbözött az egyik által kifejtett indometacin. Mivel egy inhibitora mind Coxs (azaz COX-1 és COX-2), indometacin szelektívebb a COX-1, amely a fenntartásához szükséges védő gyomornyálkahártya réteg [9]. Az a képesség, hogy fokozzák MEMM indometacin által indukált gyomorfekély kialakulását azt sugallja, hogy MEMM azt is gátolja a COX-1 hatását, és zavarja a kialakulását konstitutív PG, amelyek segítenek megvédeni a gyomornyálkahártya többek között. Másrészt, a képessége MEMM hogy gyakoroljon gyulladásgátló aktivitás oka lehet annak képessége, hogy gátolja a COX-2-függő válasz társított karragén indukált patkány láb ödéma teszt [5; 9]. Más mint amit, MEMM azt is működik Ezzel szemben aktiválásával a COX-2, ami növeli a PGE 2 szintézisét, amely nem számoltak be, hogy gyakoroljon gyulladásgátló aktivitását kötődés egy receptorához, a PGE receptor 4 (EP 4) [10]. Továbbá, a PGE 2 már ismert, hogy a prekurzor kialakulásának ciklopentenon prosztaglandinok (cyPG), amely fejt ki gyulladáscsökkentő [11]. Ezen túlmenően, a képesség, hogy aktiválja a PGE 2 szintézisét, ami viszont növeli a gyomor nyálka termelést, akkor fordulhat elő, aktiválásán keresztül az EP 3 receptorok [10]. Ez lehet ismét segíthet megmagyarázni a képessége MEMM bizonyítani gyulladásgátló aktivitást, míg, ugyanabban az időben, gyakoroljon fekélyellenes aktivitással szemben a etanol-, de nem az indometacin által indukált modellje. Annak ellenére, hogy ezeket a javaslatokat, kísérletet sem tettek, hogy meghatározza a lehetséges mechanizmusok gasztroprotekció a MEMM, amelyet fel lehetne használni, hogy ismertesse a megfigyelt fekélyellenes aktivitását. Katalógusa Figyelembe véve a fent említett jelentés [8] és a másik által készített jelentéseket Hussain et al. [6], akik értékelik a fekélyellenes potenciálját vizes kivonatának M. malabathricum katalógusa így egyetlen modell gyomorfekély (azaz etanollal kiváltott modell), a jelenlegi vizsgálat volt tervez. Bár M. malabathricum
még soha nem alkalmazták a kezelés a H. pylori katalógusa fertőzés, amely támogatja a gyenge antibakteriális aktivitását [12,13], a hagyományos használatát a növény kezelésére gyomorfekély igazolható jelenlétében kutatás reményt találni egy alternatív /természetes gyomorvédő szer helyettesíti a jelenleg rendelkezésre álló mellékhatás-baring használt gyógyszerek a második vonalbeli kezelésre. Ha ezt a tényt figyelembe véve, a jelen tanulmány célja, hogy vizsgálja meg a lehetséges mechanizmusok gasztroprotekció a MEMM különféle patkányok modellek. Katalógusa módszerek katalógusa Chemicals katalógusa A felhasznált vegyszerek tanulmány analitikai minőségű és készen állt közvetlenül a felhasználás előtt. A következő hatóanyagokat alkalmaztuk: ranitidin (Sigma Aldrich, USA), kvercitrin (Sigma Aldrich, USA), abszolút etanol (Fischer Scientific, USA), az N-etil-maleimidet (NEM) (Sigma-Aldrich, USA), N G -nitro-L-arginin-metil-észterek (L-NAME) (Sigma-Aldrich, USA), karbenoxolon (CBX) (Sigma-Aldrich, USA) és dietil-éterrel (Fischer Scientific, USA).
Növényi anyagok gyűjtése és előkészítése a MEMM
a levelek M. malabathricum katalógusa gyűjtöttük augusztusa és szeptembere között, 2010-től Serdang, Selangor, Malajzia, és azonosítják a botanikus az Institute of Bioscience (IBS), Universiti Putra Malajzia (UPM), Serdang, Selangor, Malajzia. A voucher mintának, ACP-0017, már letétbe helyezték a Herbárium az IBS, UPM, Malajziában. Az őrölt szárított levelek (40 g) áztattuk háromszor szobahőmérsékleten 24 órán metanollal aránya 01:20 (tömeg /térfogat), és a metanolt felülúszót bepároljuk (40 ° C) csökkentett nyomáson szárazra pároljuk eredményező termelés: 12,8 g szárított és ragadós metanolos extraktum (százalékos engedett volt ≈ 32%).
fitokémiai szűrés és HPLC elemzése MEMM
a fitokémiai szűrés és a HPLC-elemzése MEMM szerint végeztük a korábban bejelentett módszer [ ,,,0],7]. Fitokémiai szűrése MEMM végeztük jelenlétének meghatározására a flavonoidok, triterpének, tanninok, alkaloidok és szaponinok a szokásos protokollok leírtak below.i) flavonoidok
Körülbelül 10,0 g MEMM külön-külön főtt 2-től 3 percig 100 ml vizet tartalmazó vízfürdőben. 3 ml szűrletet, 3 ml ecetsav-alkohol (etanol: víz: tömény sósav aránya 1: 1: 1), szilárd magnézium (1 cm) és 1 ml t-amil-alkohol adunk. Az elegyeket ezután megfigyeltük egy rózsa-narancs vagy sérti szín change.ii) triterpének
Körülbelül 1,0 g MEMM külön-külön extraháljuk 24 órán éterben. 1 ml a szűrletet szárazra pároljuk, és a maradékot újra feloldjuk néhány csepp ecetsavanhidridet és ezután néhány csepp tömény kénsavat adunk az oldathoz. Az elegyeket ezután megfigyeltük a zöld szín change.iii) Tanninok
Körülbelül 0,2 g MEMM külön-külön forraljuk 5 ml vízben. Az elegyeket lehűtjük és szűrjük. Néhány csepp (3 csepp) 5% -os vas-klorid-oldatot adunk a szűrlethez, és figyeltük a kék-fekete csapadék formation.iv) Alkaloidok
Körülbelül 0,5 g MEMM külön-külön forraltuk 10 ml hígított sósavat (alkoholmentes) egy kémcsőbe 5 percig. Az elegyeket lehűtjük, és a törmeléket hagytuk leülepedni. Mind a felülúszó folyadékot szűrjük egy másik kémcsőbe, és 1 ml-t mindkét szűrlet figyelembe, amely három csepp Dragendorff-reagens (kálium-bizmut-jodid-oldatot) adunk hozzá, összerázzuk, és megfigyelhető a megjelenését egy narancs-vörös folt és egy csapadékot formation.v) szaponinok
Körülbelül 0,2 g MEMM rázatjuk, vízzel, és az elegyet megfigyelt tartós hab.
a HPLC elemzése MEMM szerint végeztük a korábbi jelentés [4 ], de kisebb módosításokkal. Röviden, MEMM (10 mg) szuszpendálunk 1 ml metanolban. Az oldatot átengedjük egy szűrőbetét (pórusméret 0,45 um) az analízis előtt. A szűrt mintát analizáltuk HPLC rendszer, amely a Waters Delta 600 600 vezérlő, fotodiódasoros detektor (Waters 996). És egy Phenomenex Luna (5 um) (Torrance, CA, USA) oszlopon (4,6 mm belső átmérő x 250 mm). Két oldószer jelöli az A és B használtunk elúciós az összetevők. A 0,1% -os vizes hangyasav és B acetonitril. Kezdeti feltételek voltak a 95% A és 5% B lineáris gradienssel elérve 25% B T
= 12 perc, és ezt a feltételt tartjuk 8 percig. B csökkent vissza 15% T
= 22 perc, és tartjuk ebben az állapotban egy másik 8 perc (T
= 30 perc). A t
= 35 perc, a program visszatér a kezdeti oldószer-összetétel. Az áramlási sebesség alkalmazott volt 1,0 ml /perc és az injektált térfogat 10 ul. Az oszlopot kemence állítottuk be 27 ° C-on, majd az eluálószert monitoroztuk 210, 254, 280, 300, 330 és 366 nm-en. A retenciós időket, csúcs alatti területeket és UV spektrumok a főbb csúcsok elemezték. A HPLC elemzést végeztünk a Laboratórium Phytomedicine, Gyógynövény Division, Erdészeti Tudományos Intézet Malajzia (FRIM) Kepong, Malajzia. Katalógusa Kísérleti állatok katalógusa hím Sprague Dawley patkányokat (180-200 g; 10/08 hetes) nyert Veterinary Állategység, Állatorvos-tudományi Kar, Universiti Putra Malajzia (UPM), Malajzia és rendszeresen szobahőmérsékleten (27 ± 2 ° C, 70-80% páratartalom, 12 h fény /sötétség ciklus) az Animal Holding egység, Általános Orvostudományi Kar és Egészségtudományi Kar, UPM. Ők kaptak táplálékot és vizet ad libitum
elejétől a kísérletekben. A vizsgálati protokollt a jelen tanulmány által jóváhagyott Animal House and Use Committee, Általános Orvostudományi Kar és Egészségtudományi Kar, UPM (az etikai jóváhagyást nem: UPM /FPSK /PAD /BR-uuh /00449). A patkányokat összhangban kezelik jelenlegi UPM iránymutatások ellátás a laboratóriumi állatok és az etikai elvárások vizsgálata kísérleti fájdalom éber állatokon [14]. Valamennyi kísérletet között 09.30 és 18.30 h hatásainak minimalizálása érdekében a környezeti változások. Böjtölés alkalmazva 48 órán megelőzően minden vizsgálatban, ahol a patkányokat engedélyezett a hozzáférés csak a víz.
Meghatározása lehetséges mechanizmusai gasztroprotektív a MEMM katalógusa Pylorus ligálás-indukált fekélyesedést
Pylorus ligálást végzünk szerint az a módszer, Shay et al. [15], kisebb módosításokkal. Harminc patkányokat osztva véletlenszerűen 5 csoportba (n = 6). Csoport-I (kontroll) kezeltük hordozóval (10% DMSO), csoport-II (pozitív kontroll, ranitidin) adtunk 100 mg /kg (po), csoport-III -IV és-V, patkányokat kezeltünk MEMM (50, 250 és 500 mg /kg-kal). Pylorus ligálást végeztünk 1 óra beadása után a vizsgálandó vegyületek 48 órán át éheztetett patkányokban. Ketamin HCI-ot (100 mg /kg, intramuszkuláris) és xylazin HCI-t (16 mg /kg, intramuszkuláris) használtunk érzéstelenít a patkányok a ligálás előtt a pylorus. Egy 2 cm hosszú bemetszést végeztünk a has a szegycsont alatt a altatott patkányokban. A gyomor volt kitéve, és egy szál elhalad a pylorus záróizom és kötve egy szűk csomó. Figyelmet fordítottak, míg árukapcsolás a csomót, hogy elkerüljék a véredényeket érintő a csomót. A hasat összevarrjuk, és a bőrt tisztítani minden vér foltok vagy vérzés. Az állatokat leöltük 6 óra után ligációs nyaki diszlokáció.
Meghatározása térfogat, a pH, a szabad és össz-savasságát gyomortartalom katalógusa A gyomrukat eltávolítottuk, és a lombik tartalmát kiszívják, összegyűjtjük, és lecentrifugáltuk 2500 rpm- 10 percig. A kötet és pH a gyomornedv mértük, és vetjük alá a szabad és a teljes savasság becslés szerint által leírt módszer Srivastava és mtsai. [16]. Szabad savasság titrálással határoztuk meg 0,01 N nátrium-hidroxid (NaOH) metil-narancssárga reagenssel, amíg a színe a megoldás vált sárgás. A kötet a lúg hozzáadott volt megfigyelhető. Ezután 2-3 csepp fenolftalein adunk hozzá, és az oldatot titráljuk, amíg egy határozott rózsaszín szín jelenik meg. A teljes mennyiséget NaOH hozzáadott volt megfigyelhető, és ez megfelel a teljes savasság. Savasság számoltuk az alábbi képlet segítségével: $$ \\ mathrm {savasság} = \\ frac {\\ mathrm {kötet} \\ kern0.5em \\ mathrm {A} \\ kern0.5em \\ mathrm {NaOH} \\ times \\ mathrm {normalitás} \\ kern0.5em \\ mathrm {a} \\ kern0.5em \\ mathrm {NaOH} \\ alkalommal 100} {0,1} \\ mathrm {m} \\ mathrm {e} \\ mathrm {q} /1 $$ becslése gyomorfal nyálka tartalom
Gyomor fal nyálka tartalmat úgy határoztuk meg, által leírt módszer Corne és mtsai. [17], kisebb módosításokkal. A gyomrot megnyílt a nagyobb görbület mentén, lemértük, és elmerül 10 ml 0,1% Alcian Blue 0,16 M szacharóz /0,05 M nátrium-acetát, pH 5,8, 2 órán át. A túlzott festéket ezután eltávolítjuk a két egymást követő öblítés 0,25 M szacharóz-oldatban (15 perc). A maradék festék komplexet képez a gyomor nyálka extraháljuk 0,5 M MgCI 2-on 2 órán át rázatjuk szakaszosan 1 percig minden 30 perc intervallum. A kék extraktumot ezután erőteljesen összeráztuk azonos térfogatú dietil-éterrel, és a kapott emulziót centrifugáljuk, 3600 rpm-en, 10 percig. Az abszorbanciát (OD) Alcian Blue a vizes fázist leolvastuk 580 nm-en spektrofotométerrel. A mennyiség az Alcian Blue kivonat grammonként nedves gyomor ezután számítva egy standard görbe.
Etanollal indukált gyomornyálkahártya-elváltozás, L-NAME előkezelt patkányok
bevonása az endogén NO modulálására etanollal kiváltott gasztroprotektív aktivitás meghatározása szerint a módszer Andreo et al. [18], de kisebb módosításokkal. Hím patkányokat véletlenszerűen osztottuk tizenkét csoportban (n = 6) és éheztetett 24 órán de megengedte a szabad hozzáféréssel a vízhez. Ezeket azután előkezeljük sóoldattal vagy L-NAME (70 mg /kg; inhibitora NO-szintáz) intraperitoneálisan (IP) és 30 perccel később az állatoknak vivőanyagot (10% DMSO), 100 mg /kg CBX (pozitív kontroll csoport) vagy 500 mg /kg MEMM (PO). Egy órával a beadás után a vizsgálati oldatok, gyomorfekély váltottuk segítségével 5 ml /kg abszolút etanolt minden csoportban. Másrészt, az L-arginin (200 mg /kg) adtunk be, 30 perc után sóoldattal vagy L-NAME-kezelés és a, majd 30 perccel később az etanol beadása. Az összes patkányt leöltük 1 óra múlva való kitettség által dietil-éterrel. A gyomrot megnyílt a nagyobb görbület mentén, hogy meghatározzák a fekély terület (UA) által leírt Balan et al. [19]. A százalékos védelem számoltuk az alábbi képlet segítségével: $$ \\ mathrm {Védelem} \\ left (\\% \\ right) = \\ frac {\\ left (\\ mathrm {U} \\ mathrm {A} \\ \\ mathrm {ellenőrzés} \\ hbox {-} \\ mathrm {U} \\ mathrm {A} \\ \\ mathrm {p} \\ mathrm {r} \\ mathrm {e} \\ hbox {-} \\ mathrm {kezelt} \\ \\ mathrm {csoport} \\ right)} {\\ left (\\ mathrm {U} \\ mathrm {a} \\ \\ mathrm {ellenőrzés} \\ right)} \\ alkalommal 100 \\% $$ etanol által kiváltott gyomor nyálkahártya elváltozás NEM előkezelt patkányok katalógusa Vizsgálni bevonása a szulfhidril (SH) csoport a moduláció az etanol-indukált gasztroprotektív aktivitást az ismertetett eljárások által Andreo et al. [18] fogadtak el, kisebb módosításokkal. A patkányokat véletlenszerűen osztottuk 12 csoport (n = 6), és éheztettük 24 órán de megengedte a szabad hozzáféréssel a vízhez. A kísérlet kezdődött a kezelés előtti (i.p.) sóoldat vagy NEM (10 mg /kg), egy szulfhidril (SH) blokkoló. Harminc perc után a kezelés előtti ezred, a patkányoknak (PO) a jármű (10% DMSO), 100 mg /kg CBX (pozitív kontroll csoport) vagy 500 mg /kg MEMM majd a beadása 5 ml /kg etanol egy órával később, hogy rábírja gyomorfekélyt. Valamennyi állatot leöltük 1H, miután megkapta az etanol által kitettség dietil-éterrel. A gyomrot eltávolítjuk és a gyomor károsodás fentiek szerint határoztuk meg.
Biokémiai elemzése gyomor szövetek
követően makroszkopikus elemzések, szuperoxid-dizmutáz (SOD) [20], kataláz (CAT) [21], mieloperoxidáz (MPO) [22], a glutation-peroxidáz (GTP) [23], a glutation-reduktáz (GTR) [24] és a tiobarbitursav reaktív anyagok (TBARS) [25] enzimaktivitás a patkány gyomrában szöveteket megmértük. A gyomor nyálkahártya lekapartuk a antrális részét a gyomor segítségével scrapper és 4 ° C-on biokémiai becslés. A kiselejtezett gyomornyálkahártya vetjük alá, hogy előkészítse a nyálkahártya homogenizátumot (pH = 7,2). A homogenizátumot ezután centrifugáltuk 3000 rpm-en 10 percig, és a kapott felülúszót elemzésére használtuk antioxidáns típusú etanollal kiváltott gyomor nyálkahártya-károsodás. Minden antioxidáns védelmi vizsgálatokban, ranitidin (100 mg /kg) -pretreated csoport tartották, mint a pozitív kontroll csoportban.
Meghatározása SOD aktivitás
A aktivitását SOD alapján határoztuk meg az képződésének gátlását a nikotinamid-adenin dinukleotid, fenazin és aminocsoport kék tetrazólium formazán [20]. Körülbelül 0,5 ml szövet-homogenizátumot összekevertük 0,4 ml etanol és kloroform elegyet és centrifugáljuk. A felülúszóhoz, vizsgálati eljárásra szolgáló keverékben (nátrium-pirofoszfát-puffer (0,025 M, pH = 8,3), nitrokék tetrazólium, fenazin-metoszulfát és redukált nikotinamid-adenin-dinukleotid (NADH)) adunk hozzá, és inkubáljuk 30 ° C hőmérsékleten 90 s. A reakciót hozzáadásával fojtott jégecet és keverve N
butanol. A szín intenzitása kifejlesztett butanol mértük 560 nm-en. A SOD-aktivitást mértük gátlása mértékének e reakció és fejezzük mmól /perc /mg fehérje.
Meghatározása CAT aktivitás
A aktivitását CAT vizsgáltuk kolorimetriásan 620 nm-en által leírt módszerrel Sinha [21]. A reakcióelegyet 1,5 ml, amely 1,0 ml foszfát puffer (0,01 M, pH = 7,0), 0,4 ml 2,0 M H 2 O 2 és 1,0 ml szövet-homogenizátumot. A reakciót leállítottuk hozzáadásával 2,0 ml-dikromát-ecetsav reagenst (5% -os kálium-dikromát és jégecet elegyet a arány 1: 3). Az eredményeket mmól /perc /mg fehérje.
Meghatározása MPO aktivitás
A aktivitását MPO szerint mértük által leírt módszer Bradley et al. [22], de kisebb módosításokkal. A homogenizált mintákat lefagyasztottuk, és felolvasztottuk, három alkalommal, és centrifugáltuk 1500 g-n 10 percig 40 ° C-on. Körülbelül 100 ul homogenizált felülúszót adunk 1,9 ml 10 mmol /l foszfát-pufferben (pH = 6,0) és 1,0 ml 1,5 mmol /LO-dianizidin hidrokloridot tartalmazó 0,0005% (w /v) H 2 O 2. Az abszorbanciát értékeltük 450 nm-en UV-spektrofotométer és az MPO aktivitást gyomor szövetekben fejeztük mikromól /perc /mg fehérje.
Meghatározása GTP aktivitás katalógusa A tevékenység a GTP mértük által leírt módszer Rotruck et al. [23], kisebb módosításokkal. A reakcióelegyet, amely 0,2 ml 0,4 M, Tris - HCI pufferben, pH = 7,0, 0,1 ml 10 mM nátrium-azid, 0,2 ml szövet-homogenizátumot (homogenizáljuk a szövetet 0,4 M Tris-HCl-puffer, pH = 7,0), 0,2 ml glutation és 0,1 ml 0,2 mM hidrogén-peroxidot adunk, majd szobahőmérsékleten inkubáljuk 10 percig. A reakciót hozzáadásával fojtott 0,4 ml 10% -os TCA-val és alávetés a centrifugálás folyamata. A felülúszót megvizsgáljuk glutation tartalom használatával Ellmans reagens (19,8 mg 5, 5'-dithiobisnitro benzoesav (DTNB) 100 ml 0,1% -os nátrium-nitrát). A moláris extinkciós koefficiens 6,22 × 103

• Egy új módszer, digitális genom felismeri a KRAS gén amplifikáció gyomorrák: bevonását túlzott mértékben a vad típusú KRAS a jelátviteli és a ráksejtek growth
• Genomikai profiljának elemzése diffúz típusú gyomor cancers