Abannung vun entholl necrosis Faktor-α an der upregulation vun CXCR4 Ausdrock vun gastric Kriibs vun Helicobacter pylori entschlof

Abannung vun entholl necrosis Faktor-α an der upregulation vun CXCR4 Ausdrock zu Kriibs gastric entschlof vun Helicobacter pylori VerfÜgung méiglech VerfÜgung Background VerfÜgung H. pylori, hir Wonn Erhéijunge entholl invasiveness an Metastasen, gëtt allgemeng als déi stäerkst Risiko Fortgeschratten Facteur fir d'Entwécklung vun gastric Kriibs. Et schengt keen Zoufall ze ginn, datt do och eng overexpression vun CXCR4 ass an eng kloer Abannung vun gastric Kriibs Metastasen. D'Zil vun dëser Etude Versich ze ermëttelen an e Lien tëscht hinnen ze etabléieren weider. Mat H. Wiesen engem mächtegst inducer vun TNF-α pylori, ob TNF-α, entholl Promoteur, an der Aféierungs- vun CXCR4 Ausdrock vun H. pylori Équipe ass och an dëser Etude ënner Fuerschung war. VerfÜgung Method VerfÜgung Expression vun CXCR4, TNF-α, IL-6 a IL-1β mRNA war vun real-Zäit Hinnen alleguer alles. CXCR4 FAQ Ausdrock war vun Western blotting fonnt. Konzentratioune vun TNF-α, IL-6 a IL-1β zu Zell Kultur supernatants sech mat der Quantikine Elisa Kit gemooss. Fir TNF-α Ausdrock vun HGC27 Zellen, TNF-α RNAi plasmid gouf benotzt, fir hinnen transfect. VerfÜgung Resultater VerfÜgung Niveauen vun CXCR4 an TNF-α mRNA sech vill méi héich an H. pylori-positiv gastric Cancers (n abrogate = 19) am Verglach zu H. pylori-negativ mannste (n = 15). A dono Spearman d'Geleeënheet Korrelatioun Test huet et e positiven Korrelatioun tëschent den Niveau vun CXCR4 mRNA war an dass vun TNF-α zu 34 Primärschoul gastric Cancers. Aner Resultater zum Schluss: Expression vun CXCR4 an TNF-α war zu gastric Kriibs Zell MKN45 an HGC27 der Wonn upregulated mat H. pylori 26695 (cag PAI +) oder Tx30a (cag PAI -); D'Aféierungs- vun CXCR4 Ausdrock vun H. pylori war vill vun engem neutralizing TNF-α antibody, infliximab inhibited; CXCR4 Ausdrock war zu MKN45 Zellen der Behandlung mat exogenous TNF-α oder Co-Kultur mat macrophage upregulated, a gouf zu HGC27 Zellen der transfection mat TNF-α RNAi plasmid downregulated. Et war mat H. behandelt engem groussen Zouhuele vun der Wanderung vun MKN45 Zellen pylori 26695, an engem staarken inhibition wann AMD 3100, eng CXCR4 neien, oder infliximab, dobäi war. VerfÜgung Konklusiounen VerfÜgung Eis Conclusiounen bewisen, dass H. pylori upregulates CXCR4 Ausdrock vun gastric Kriibs duerch TNF-α. VerfÜgung Background VerfÜgung Et gutt dass Helicobacter pylori (H. pylori) akzeptéiert ass eng staark Risiko Facteur fir d'Entwécklung vu verschiddene gastric Krankheeten ass, nämlech chronescher gastritis, peptic ulcers, gastric mucosa-verbonne lymphoid Otemschwieregkeeten lymphoma an gastric Kriibs, an et ass un dass der Interaktioun tëscht H. pylori an epithelial Zellen zu esou Entwécklung dréit. An Tatsaach, induces H. pylori Wonn inflammation zu microenvironment vun de Mo mat Aféierungs- vun proinflammatory cytokines assoziéiert, wéi entholl necrosis Faktor-α (TNF-α), interleukin-1β (IL-1β) an IL-6 [1-3 ], déi gastric carcinogenesis Parteien mécht. VerfÜgung H. pylori Wonn Erhéijunge och entholl invasiveness an Metastasen [4-6], obwuel ass de Mechanismus nach net gutt verstanen hunn. De Prozess vun Kriibs Metastasen ass net zoufälleg, a verschiddene Cancers hunn hir léifste homing Siten. Just wéi leukocyte intervenéiert, entholl Zell Migratioun ass kritesch vun chemokine /chemokine receptor System reegelen. Weideren Schwéierpunkt vun eiser Opmierksamkeet ass datts op CXCR4, déi gemeinsam chemokine receptor overexpressed an enger Serie vun Cancers (gastric Kriibs abegraff) vun wäit [7, 8]. Studien hunn uginn CXCL12 /CXCR4 Achs ass zu gastric Kriibs Metastasen Équipe [9]. Dofir arouses et grouss Interessen e Lien tëscht H. pylori Wonn an CXCR4 overexpression zu gastric Kriibs ze fannen. Ee vun de Schlëssel chemesche mediators zu inflammation-verbonne Cancers agebonne VerfÜgung TNF-α ass, an do ass elo substantiell Beweiser zu z'engagéieren zu Promotioun an Werdegang vun experminteller a mënschlech Cancers [10, 11]. Wouer fir säin Numm, héich Dosis vun regional TNF-α kënnt via selektiv Zerstéierung vun entholl Blutt Offshore zu hemorrhagic necrosis Féierung. Allerdéngs kann et onerwaarten als endogenous entholl Promoteur Akt wou an der entholl microenvironment produzéiert. Eis interesséiert ass doduercher ze z'engagéieren an der Aféierungs- vun CXCR4 Ausdrock vun H. pylori, engem mächtegst inducer vun TNF-α opgesat, déi eng Serie vu cytokines zu upregulate bekannt ass, chemokines, Haftung Molekülle an Wuestum Facteuren zu Cancers. VerfÜgung Methode VerfÜgung gastric Kriibs Zell Linnen an Otemschwieregkeeten uplanzen VerfÜgung De Mënsch gastric Kriibs Zell MKN45 an HGC27 aus Keygen Biotech kritt huet. Co. (Nanjing, China), a sech an RPMI 1640 cultured mat 10% An et Bovine serum ergänzt, bei 37 ° C an engem fiichten incubator mat 5% CO 2. 34 Primärschoul gastric Kriibs uplanzen sech vu Patienten ënner Operatioun mat all hir Awëllegung um Shengjing Spidol, Chinese Medical University, Qualifikatiounen a waren zu flëssegem Stéckstoff direkt no chirurgesch Entféierung gefruer. Haematoxylin- an eosin-staining Rubriken huet fir Beurteelung vun de Prozentsaz vun entholl Zellen virbereet, an uplanzen nëmme mat > 70% entholl Zellen sech fir Analyse ausgewielt. Dës Etude gouf mat der Zoustëmmung vun de ethesch Comité vun China Medical University duerchgefouert. All Experimenter waren op d'mannst dräi mol geschitt. VerfÜgung Macrophage Zell Linn RAW264.7 VerfÜgung D'macrophage Zell Matière 264,7 vun der American Type Kultur Collection gëtt war (Rockville, MD, USA), a gouf zu Dulbecco d'geännert Eagle d'mëttel- haten , mat 10% an et Bovine serum ergänzt, bei 37 ° C an engem fiichten incubator mat 5% CO 2. VerfÜgung H. pylori analyséieren VerfÜgung H. Deformatioun 26695 (ATCC 700392, cag PAI pylori +) an Tx30a (ATCC 51932, cag PAI -) waren déi ATCC (Rockville, MD, USA) ugebueden. Si waren op 37 ° C op Schof Blutt Agar Placke ugebaut ënner microaerophilic Konditiounen. Bakterien sech no 48 h an Brucella läschen mat 5% An et Bovine serum fir 24 h transferéiert. Eng Zuel vun Wonn vun 100 gouf zu all Studien gebraucht. VerfÜgung Real-Zäit ëmgedréint-Transkriptiouns Hinnen alleguer VerfÜgung Total RNS aus Stoffer an Zell Verse Trizol (Takara, Dalian, China) no de Protokoll vun der Pleséier isoléiert war Hiersteller. cDNA war mat Takara RNS Hinnen alleguer 3.0 Kit (Takara, Dalian, China) an engem total Volume vun 10 μl Wierderbuch, wouvun AMV transcriptase Géigendeel, 0,5 μl; zoufälleg 9 primer, 0,5 μl; 25 mm MgCL 2, 2 μl; 10 × RT Respektiv, 1 μl; dNTP Mëschung (all 10 mm), 1 μl; RNase inhibitor, 0,25 μl; RNS 1 μl; DH 2O, 3,75 μl. Konditiounen fir RT huet: 30 ° C fir 10 Minutten, 42 ° C fir 25 Minutten, 99 ° C fir 5 Minutten, a 5 ° C fir 5 Minutten. Real-Zäit Hinnen alleguer war mat der LightCycler System zesumme mat der LightCycler DNA Master SYBR Green ech Kit (Roche kinnt) gesuergt. D'total Volumen ass 20 μl, wouvun 25 mm MgCl 2, 3 μl; 10 × Respektiv, 5 μl; 10 μM vir Primer, 1 μl; 10 μM ëmgedréint Primer, 1 μl; LightCycler DNA Master SYBR Green ech, 2 μl; cDNA, 2 μl; DH 2O, 6 μl. Konditiounen fir Hinnen alleguer waren: 50 ° C fir 2 Minutten, 95 ° C fir 10 Minutten, an dunn 40 Zykle vun 5 Sekonnen bei 95 ° C a 20 Sekonnen op 60 ° C. D'housekeeping Gentherapie glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH VerfÜgung) huet als eng intern Kontroll benotzt. Gene Ausdrock war vun der Komparativ CT Method laachen, CT Wäerter ze GAPDH VerfÜgung norméierend a relativ Ausdrock Wäerter Paien. Primer Message sech duerch Takala (Dalian, China) gëtt wéi follegt: CXCR4 VerfÜgung vir, 5'-GAGGAAATGGGCTCAGGG-3 ", ëmgedréint, 5'-AGTCAGCAGGAGGGCAGGGA-3"; TNF-α VerfÜgung vir, 5'-AGTGACAAGCCTGTAGCCC-3 ", ëmgedréint, 5'-GCAATGATCCCAAAGTAGACC-3"; IL-1β VerfÜgung vir, 5'-CCACCACTACAGCAAGGG-3 ", ëmgedréint, 5'-GAACTGGGCAGACTCAAA-3"; IL-6 VerfÜgung vir, 5'-CCTTCGGTCCAGTTGCCTTCT-3 ", ëmgedréint, 5'-GCATTTGTGGTTGGGTCA-3"; GAPDH VerfÜgung vir, 5'-GGGAAACTGTGGCGTGAT-3 ", ëmgedréint, 5'-AAAGGTGGAGGAGTGGGT-3". VerfÜgung Western blotting VerfÜgung Zell lysates sech mat Prouf gefiermt bereet [50 mmol /L Tris-HCl (pH 6,8 ), 100 mmol /L DTT, 2% SDS, 0,1% bromophenol blo, an 10% glycerol] an huet sech zu engem 12% Natrium dodecyl sulfate (SDS) /acrylamide gelies ënnerworf. D'Proteinen op acrylamide gelies goufen zu engem Nylon Membran iwwerginn, déi Iwwernuechtung (4 ° C an PBS mat 0,1% Tween an 10% Mëllech Pudder) gespaart gouf. Polyclonal antibodies fir CXCR4 (Santa Cruz, CA, Amerika), an den entspriechende Secondaire antibodies (Santa Cruz, CA, Amerika) huet virun immunoblotting applizéiert. De Mënsch Gentherapie β-actin VerfÜgung (Santa Cruz, CA, Amerika) huet als eng intern Kontroll benotzt. Blots sech mat private Liewen pro plus System (Bio-Rad) visualized a laachen Scion Image 4,03 Software benotzen. VerfÜgung RNS Amëschen VerfÜgung TNF-α RNAi plasmid an nonsilencing Kontroll RNAi plasmid aus Takala (Dalian, China) kaaft huet. Zellen an enger 24-gutt Plack op eng Dicht vun 2 × 10 5 géint goufen. Op den Dag, goufen Zellen transfected mat TNF-α siRNA oder Control siRNA benotzt Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Vereenegt Kinnekräich) no der Taktik vum Produzent. VerfÜgung Elisa fir cytokines zu Zell Kultur supernatants VerfÜgung Konzentratioune vun TNF-α, IL-1β an IL-6 zu Zell Kultur supernatants waren gemooss der Quantikine Elisa Kit benotzt (Boster, Wuhan, China) no der Taktik vum Produzent. Vun der Empfindlechkeet vun der assay war 2 PG /ml fir TNF-α, 4 PG /ml fir IL-1β a 4 PG /ml fir IL-6. VerfÜgung Migratioun assays VerfÜgung der Wanderung vun cultured Zellen war Matrigel assayed benotzt Invasioun ëmkomm (24-gutt Format, 8 μm pore; BD pharmingen). Zellen (5 × 10 5) huet zu der ieweschter ëmkomm a mëttelgrouss mat CXCL12 (100 Dummeldéng /ml, Fläch) war un der ënneschter Chamber dobäi nà notéiert. Migratioun assays sech op 37 ° C fir 18 Stonne incubated a 5% CO 2. mat 1% toluidine blo no zéien mat 100% methanol Migrated Zellen op den ënneschten Uewerfläch huet geschriwwen. Fir all transwell, d'Zuel vun migrated Zellen zu 10 mëttelfristeg Muecht Felder (× 20) gezielt gouf. VerfÜgung statistique Analyse VerfÜgung Mann-Whitney U VerfÜgung Azeton benotzt gouf mRNA Ausdrock tëscht H. pylori-positiven ze vergläichen an H. pylori-negativ erhéijen. Korrelatioun tëschent CXCR4 Ausdrock an TNF-α Ausdrock vun gastric Kriibs uplanzen war mat Spearman d'Geleeënheet Korrelatioun Test analyséiert. Ausdrock vun mRNA zu gastric Zell Linnen war am Verglach mat Student d't VerfÜgung Azeton oder eng Manéier ANOVA. Statistesch Analyse huet mat duerchgefouert SPSS Versioun 11.0 (SPSS, Chicago, IL, USA). Ënnerscheed ass wichteg dorunner wann P VerfÜgung -value war &Si besteet; 0,05. VerfÜgung Resultater VerfÜgung Expression vun CXCR4 an TNF-α mRNA am primäre gastric Cancers VerfÜgung CXCR4 mRNA war vun real-Zäit ëmgedréint-Transkriptiouns Hinnen alleguer zu 34 gastric Cancers sech, a sengem Ausdrock vun all specimen war standardiséierte ze GAPDH VerfÜgung Ausdrock. D'Resultater réischt seng Niveau bedeitend méi héich an H. pylori-positiv gastric Cancers (n = 19) am Verglach zu H. pylori-negativ mannste (n = 15) (7,2 fantastesch, P VerfÜgung &Si besteet; 0,01, Dorënner 1A). An der selwechter Kohort vun erhéijen, TNF-α mRNA Ausdrock war och déi real-Zäit ëmgedréint-Transkriptiouns Hinnen alleguer, fonnt ginn an et war méi staark zu H. pylori-positiv gastric Cancers Verglach zu H. pylori-negativ mannste (4,3 fantastesch fonnt, P VerfÜgung &Si besteet; 0,01, Dorënner 1B). Spearman d'Geleeënheet Korrelatioun Test ubelaangt weider engem positive Korrelatioun vun CXCR4 Ausdrock mat TNF-α an dësen 34 gastric Cancers (P VerfÜgung &Si besteet; 0,01, Dorënner 1c). Figur 1 Expression vun CXCR4 an TNF-α mRNA am primäre gastric Cancers vun real-Zäit Hinnen alleguer. (A) an (B) H. pylori-positiv gastric Cancers (gro Sailen, n = 19) ausgedréckt héichen Niveau vun CXCR4 (A) an TNF-α (B) mRNA Verglach zu H. pylori-negativ gastric Cancers (schwaarz Saile , n = 15), * P VerfÜgung &Si besteet; 0,01. Horizontal Linnen: heescht vun mRNA Niveau. (C) Level vun CXCR4 mRNA soll war positiv mat deem vun TNF-α mRNA zu 34 gastric Cancers, P VerfÜgung &Si besteet; 0,01. Black rhombus: H. pylori-negativ gastric Cancers; groen rhombus:. H. pylori-positiv gastric Cancers VerfÜgung Schulung vun CXCR4 an TNF-α Ausdrock vun H. pylori zu gastric Kriibs Zellen VerfÜgung Echtzäit-Hinnen alleguer a Western blotting benotzt goufen CXCR4 Ausdrock vun MKN45 an HGC27 z'entdecken Zellen (Dorënner 2A, B); a léist et upregulated bedeitend an hinnen no Wonn mat H. 26695 fir 24 Stonnen pylori (P VerfÜgung &Si besteet; 0,01, respektiv, Dorënner 2A, B). Duerno huet si mat engem cag PAI-negativ H. pylori, Tx30a behandelt ze z'engagéieren an der upregulation festzestellen, an et ass och ze induce CXCR4 Ausdrock vun MKN45 an HGC27 Zellen (P VerfÜgung &dra fonnt; 0,01, respektiv, Dorënner 2A , B). Figur 2 Expression vun CXCR4 an TNF-α an MKN45 an HGC27 Zellen der Wonn mat H. pylori. (A) an (B) CXCR4 Ausdrock war upregulated zu MKN45 an HGC27 Zellen der Wonn mat H. pylori 26695 (* P VerfÜgung &Si besteet; 0,01, respektiv, vs VerfÜgung H. pylori-) oder Tx30a (* P
&Si besteet; 0,01, respektiv, vs VerfÜgung H. pylori-). (C) an (D) TNF-α Ausdrock war zu MKN45 fräi an HGC27 Zellen der Wonn mat H. pylori 26695 (* P VerfÜgung &Si besteet; 0,01, respektiv, vs VerfÜgung H. pylori-) oder Tx30a (* P VerfÜgung &Si besteet; 0,01, respektiv, vs VerfÜgung H. pylori-). Date sinn ausdrécke well heeschen ± Fils, n = 3. VerfÜgung Den Effet vum H. pylori Harnweeër op TNF-α Ausdrock war weider real-Zäit Hinnen alleguer an Elisa propagéieren benotzt, an d'Detectioun Teamchef Wonn mat 26695 oder Tx30a fir 12 Stonnen mussen esouwuel méi Ausdrock vun TNF-α mRNA Nerve kann (P VerfÜgung &si besteet; 0.01 bzw.) a méi secretion vun TNF-α FAQ an der Kultur supernatant (P VerfÜgung &si besteet; 0.01 bzw.) zu MKN45 an HGC27 Zellen (Dorënner 2C, d). VerfÜgung Effekt vun Infliximab, engem neutralizing antibody zu TNF-α, op der Aféierungs- vun CXCR4 Ausdrock vun H. pylori VerfÜgung d'Opklärung vun upregulation vun TNF-α Ausdrock an dësem Fall bruecht eis Fuerschung op hiren Engagement an der Aféierungs- vun CXCR4 Ausdrock vun H. pylori fir weider. A neutralizing TNF-α antibody, infliximab (4 μg /ml, Fläch), gouf duerno benotzt MKN45 an HGC27 Zellen der eng Wonn vun 26695, an der Aféierungs- vun CXCR4 war inhibited vill (P VerfÜgung &Si besteet unzegesin; 0,01, bzw. , Dorënner 3A, B). Ähnlech Resultater observéiert goufen, wann dësen Zellen mat infliximab der eng Wonn vun Tx30a behandelt goufen (P VerfÜgung &Si besteet; 0,01, respektiv, Figure3C, D). Figur 3 Effekt vun infliximab op der Aféierungs- vun CXCR4 Ausdrock vun H. pylori. (A) an (B) CXCR4 upregulation vum H. entschlof pylori 26695 zu MKN45 an HGC27 Zellen der Behandlung mat infliximab inhibited war, * P VerfÜgung &Si besteet; 0,01, respektiv, vs VerfÜgung 26695 + inf. (C) an (D) CXCR4 upregulation entschlof vum H. pylori Tx30a och mat infliximab zu MKN45 an HGC27 Zellen der Behandlung inhibited war, * P VerfÜgung &Si besteet; 0,01, respektiv, vs VerfÜgung Tx30a + inf. Date sinn ausdrécke well heeschen ± Fils, n = 3. inf:. Infliximab VerfÜgung Upregulation vun CXCR4 Ausdrock vun gastric Kriibs Zellen vun TNF-α VerfÜgung MKN45 Zellen, déi geheim ënneschten Niveau vun TNF-α FAQ, goufen behandelt mat 1, 10, oder 50 Dummeldéng /ml TNF-α (Fläch) fir 6 Stonnen am Versuch fir weider d'Roll vun TNF-α an der upregulation vun CXCR4 Ausdrock, an Echtzäit-Hinnen alleguer a Western blotting erkennen beschen verroden et upregulated war vill an enger Portioun-ofhängeg Manéier (P VerfÜgung &Si besteet; 0,01, Dorënner 4A, B), an och vun 15,8 klappt mat 50 Dummeldéng /ml TNF-α Behandlung. Figur 4 Upregulation vun CXCR4 Ausdrock vun gastric Kriibs Zellen vun TNF-α. (A) an (B) CXCR4 Ausdrock war zu MKN45 Zellen vun exogenous TNF-α an enger Portioun-ofhängeg Manéier upregulated, * P VerfÜgung &Si besteet; 0,01. (C) an (D) De coculture System vun MKN45 an RAW264.7 Zellen ausgedréckt méi CXCR4, * P VerfÜgung &Si besteet; 0,001, vs VerfÜgung M; ** P VerfÜgung &Si besteet; 0,001, vs VerfÜgung R. D'upregulation vun CXCR4 Ausdrock der Behandlung mat infliximab inhibited war, *** P VerfÜgung &Si besteet; 0,001, vs VerfÜgung M + R + inf. M: MKN45; R: RAW264.7; inf: infliximab. (E) Expression vun TNF-α war zu HGC27 Zellen der transfection mat TNF-α RNAi plasmid feelen. (F) Ausdrock CXCR4 mRNA war zu HGC27 Zellen der transfection mat TNF-α RNAi plamid downregulated, * P VerfÜgung &Si besteet; 0,001, vs VerfÜgung Nee RNAi; ** P VerfÜgung &Si besteet; 0,001, vs VerfÜgung Control RNAi. Date sinn ausdrécke well heeschen ± Fils, n = 3. VerfÜgung Next, déi CXCR4 Ausdrock bannent engem Co-Kultur System gouf iwwerpréift, well entholl-verbonne macrophages och als Quell vun TNF-α an der gastric Kriibs microenvironment déngen. E Co-Kultur vun MKN45 Zellen mat RAW264.7 Zellen fir 24 Stonnen uginn et ausgedréckt vill méi CXCR4 mRNA an FAQ (P VerfÜgung &Si besteet; 0,001, Dorënner 4C, D); Ee, dës Erhéijung, war vill vun infliximab inhibited (P VerfÜgung &Si besteet; 0,001, Dorënner 4C, D) VerfÜgung Endlech, endogenous TNF-α geziilte huet seng Regelung op CXCR4 Ausdrock vun HGC27 Zellen ze diskutéieren, déi Geheimnisser héich. Niveau vun TNF-α FAQ. TNF-α RNAi plasmid war benotzt HGC27 Zellen ze transfect, a weltwäit nonsilencing RNAi plasmid war an der Kolleg als Kontroll agestallt. Et war observéiert datt Ausdrock vun TNF-α an HGC27 Zellen der transfection mat TNF-α RNAi plasmid (Dorënner 4E) veréiert gouf. Dunn Ausdrock vun CXCR4 war vun real-Zäit Hinnen alleguer festgestallt, an et war an der erkennen datt, no transfection mat TNF-α RNAi plasmid, CXCR4 mRNA Ausdrock war wiesentlech zu HGC27 Zellen, am Verglach mat Zellen mat Kontroll RNAi oder Zellen ouni RNAi downregulated bemierken (P VerfÜgung &si besteet; 0,001, respektiv, Dorënner 4F). VerfÜgung Schulung vun cytokines zu macrophages vum H. pylori VerfÜgung Real-Zäit Hinnen alleguer an Elisa agestallt goufen d'Wierkung vun H. ze diskutéieren pylori 26695 op cytokine Ausdrock zu RAW264.7 Zellen, well et meeschtens gefält dat cytokines chronescher demagogesch Prozesser vum H. pylori ëmmer Équipe ginn. D'real-Zäit Hinnen alleguer erkennen zougedréckt a dem Ausdrock vun TNF-α, IL-1β an IL-6 mRNA zu 26695-behandelt Zellen am Verglach zu 26695-onbehandelt Zellen (TNF-α, P VerfÜgung &Si besteet upregulated war; 0,001; IL-1β , P VerfÜgung &Si besteet; 0,001 an IL-6, P VerfÜgung &Si besteet; 0,001, Dorënner 5A). An Elisa Resultater uginn méi Proteinen vun TNF-α, IL-1β an IL-6 sech an der Kultur supernatant secreted zu 26695-behandelt Zellen am Verglach zu 26695-onbehandelt Zellen (TNF-α, P VerfÜgung &Si besteet; 0,001; IL-1β , P VerfÜgung &Si besteet; 0,001 an IL-6, P VerfÜgung &Si besteet; 0,001, Dorënner 5B). Figur 5 Schulung vun cytokines zu macrophages vum H. pylori. (A) an (B) Expression vun TNF-α, IL-1β an IL-6 zu 26695-behandelt RAW264.7 Zellen upregulated war, * P VerfÜgung &Si besteet; 0,001, vs VerfÜgung onbehandelt Zellen. (C) an (D) Weder IL-1β nach IL-6 kann CXCR4 Ausdrock vun MKN45 Zellen upregulate. Date sinn ausdrécke well heeschen ± Fils, n = 3. VerfÜgung Endlech MKN45 Zellen sech mat exogenous IL-1β behandelt (50 Dummeldéng /ml) an IL-6 (50 Dummeldéng /ml) bzw., d'Méiglechkeet ze ausschléissen, datt IL -1β an IL-6 kann CXCR4 Ausdrock wéi TNF-α upregulate. Weder IL-1β nach IL-6 ass fonnt CXCR4 Ausdrock vill (Dorënner 5C, D). VerfÜgung Migratioun Analyse VerfÜgung Migratioun Analyse Leeschtung war mat der Matrigel Invasioun Chambre opgeraf fir upregulate ze ermëttelen, ob d'upregulated CXCR4 funktionell war . An der éischter Phase vun der Experimenter mat 100 /ml vun CXCL12 am ënneschten Chambre NG, war et e wesentlechen Erhéijung (bis 4.5 klappt) an der Migratioun vun MKN45 Zellen mat 26695 Behandlung an der ieweschter ëmkomm, am Verglach mat Kontroll Zellen ouni 26695 Behandlung (P VerfÜgung &Si besteet; 0,001, Dorënner 6A). Méi spéit op, awer, war d'Erhéijung inhibited bemierkenswäert wann AMD 3100 (1 μg /ml, Fläch), engem CXCR4 neien, oder infliximab, dobäi war (P VerfÜgung &Si besteet; 0,01, respektiv, Dorënner 6A). Figur 6 Migratioun studéieren. (A) MKN45 Zellen zougedréckt e wesentleche Erhéijung vun hirer Wanderung an der Behandlung mat 26695, * P VerfÜgung &Si besteet; 0,001, vs VerfÜgung Kontroll. D'Vergréisserung vun der Wanderung vun MKN45 Zellen vun 26695 entschlof war inhibited wann AMD 3100 (** P VerfÜgung &Si besteet; 0,01, vs VerfÜgung 26695 + AMD), oder infliximab (*** P VerfÜgung &Si besteet; 0,01, vs VerfÜgung 26695 + inf) ugebaut. AMD: AMD3100; inf: infliximab. (B) TNF-α fräi MKN45 Zell Migratioun, * P VerfÜgung &Si besteet; 0,001, vs VerfÜgung Kontroll. Weder IL-1β nach IL-6 ka wesentlech MKN45 Zell Migratioun Erhéijung. Date sinn ausdrécke well heeschen ± Fils, n = 3. VerfÜgung Zousätzlech, den Effet vun cytokines op MKN45 Zell Wanderung war och iwwerpréift, an TNF-α (50 Dummeldéng /ml) gouf fonnt vill MKN45 Zell Migratioun gestiermt (P VerfÜgung &Si besteet; 0,001, Dorënner 6B). Allerdéngs weder IL-1β (50 Dummeldéng /ml) nach IL-6 (50 Dummeldéng /ml) gouf bewisen MKN45 Zell Migratioun gefierwt (Dorënner 6B). VerfÜgung Diskussioun VerfÜgung H. ze förderen pylori ass hung fir Mënschen [12] ongeféier 50% vun der Welt d'Populatioun wéi enger Frist gastric carcinogen zu globalen. Pathogenesis vun hirer Krankheet ëmfaasst oft inflammation, mucosal Schued, oder gastric atrophy, a verlaangt no Interaktiounen tëschent de Bakterien an der gastric epithelial Zellen, activating Weeër wéi sécher, Provider bewosst Funktiounen verbidden, an all Kéiers zu chronescher epithelial Äntwerte [13,14]. Et sinn elo bedeitend dofir chronescher inflammation zu Mënsch Cancers Joreswiessel [15-17], a speziell, H. pylori-entschlof chronescher inflammation an cytokines zu lokal Mo. microenvironment déngen als déi gemeinsam Beiträg [18-20]. Dës Etude Héichpunkter d'Resultat dass mucosal Niveau vun TNF-α mRNA zu H. vill méi héich war pylori positive Patiente wéi dat an negativ Patienten andems grouss real-Zäit Hinnen alleguer, an zwee gastric Kriibs Zellen och kënschtlech TNF-α FAQ secreted. Et weider Punkten op der Hoffnung datt TNF-α kann zu H. positive pylori [21] tëschent inflammation a Kriibs als onverzichtbar a staark linker gastric carcinogenesis Équipe ginn. VerfÜgung wann de Mechanismus vun Aféierungs- vun TNF-α vum H. pylori relativ kloer bleift, muss e FAQ Famill an der leschter Dekad bekanntginn goufen, dorënner Helicobacter pylori-Membran FAQ-1 (HP-MP1) an TNF-α Pinguin FAQ (Tipα) [22-24]. Tipα Gentherapie, identifizéiert vum H. pylori Deformatioun 26695, ass homologous zu HP-MP1 Gentherapie mat 94,3% homology, an souwuel vun hinnen weisen staarken Géigner TNF-α Gentherapie Ausdrock ze induce. An der Etude, pylori H. 26695 gouf fonnt et TNF-α Ausdrock vill an MKN45 an HGC27 Zellen, an cag PAI negativ Deformatioun Tx30a war och iewer zu upregulate selbstverständlech ze induce, déi zu engem Deel un der Tatsaach wéinst kann dat HP-MP1 /Tipα Famill ass am cag PAI Regioun net. Mä et war och, dass den Effet vun Tx30a op TNF-α Aféierungs- war schwaach ass wéi déi vun 26695 (2,3 klappt vs VerfÜgung 3,1 klappt an MKN45 Zellen), déi H. pylori Produkter proposéiert an cag PAI Équipe gin och vläicht an der kopéiert. An Tatsaach, gouf et confirméiert, datt cagA vun H. pylori induce TNF-α an gastric Kriibs Fro uplanzen [25] konnt. urease war och MKN45 Zellen ze induce fonnt TNF-α auszedrécken [26]. VerfÜgung TNF-α, e Schlëssel cytokine zu vill chronescher demagogesch Krankheeten, war ursprénglech als serum Faktor fir d'Aféierungs- Fortgeschratten Zousätzlech, sidd H. pylori vun hemorrhagic necrosis vun transplantéiert staark erhéijen an Mais. Mä, lo ass et allgemeng als entholl Promoteur am lokal entholl microenvironment identifizéiert, an dofir d'Läschen oder inhibition vun et ass supposéiert d'Heefegkeet vun experminteller Cancers ze reduzéieren. TNF-α /TNF-R1 hummeren verwandelt Mais sinn resistent chemesch-entschlof carcinogenesis [27, 28]. Et ass dacks zu biopsies aus enger Rei vu mënschlechen Cancers erwëscht, produzéiert entweder duerch epithelial entholl Zellen oder stromal Zellen. Ausserdeem, ass et och, wann an niddreg Betrag, an der secretion vu ville Kriibs Linnen kënschtlech ouni demagogesch stimuli fonnt, obwuel de Mechanismus nach net ganz kloer ass. VerfÜgung TNF-α war net nëmmen zu Zell Transformatioun an Prolifératioun Équipe fonnt , mä och zu entholl Metastasen. Esou eng Opklärung war ufanks baséiert op en Déier Modell mat Colon Kriibs, an déi Sprëtz vun LPe der Entwécklung vun haett Metastasen verstäerkte ofhängeg op TNF-α Produktioun vun Provider Zellen [29]. D'Kierzunge Resultater zougedréckt a dem Metastasen fräi entholl inhibited vun TNF-α antibody neutralizing [30]. Dës Nerve eis Spekulatioun, datt ee vun de Basisdaten Mechanisme vun TNF-α an entholl Metastasen vläicht zu der upregulation vun chemokines /chemokine kenne Zesummenhang ginn. Éischt, war et e wesentlechen upregulation vun CXCR4 zu gastric Kriibs Zellen der se mat exogenous TNF-α behandelt goufen. Et war eng aner Astellung upregulation vun CXCR4 Ausdrock zu Kriibs Zellen der se mat macrophage Co-cultured goufen, eng alternativ Quell vun TNF-α an gastric Kriibs microenvironment. Wéi erwaart gouf, konnt dëse upregulation vun TNF-α neutralizing antibody infliximab inhibited ginn. Et war doduercher eng bemierkenswäert Reduktioun vun den Ausdrock vun CXCR4 zu HGC27 Zellen der RNAi agestallt gouf de TNF-α Ausdrock vun deenen Zellen ze abrogate, déi och CXCR4 Ausdrock upregulate kann endogenous TNF-α uginn. Déi gesamt Conclusiounen Nerve eis Conclusioun, datt TNF-α, mat sech selwer an der Metastasen vun gastric Kriibs Équipe, CXCR4 Ausdrock upregulates. VerfÜgung Overexpression vun CXCR4, deenen hir Bedeelegung am verschidde Mënsch erhéijen ass bekannt, war zu gastric Kriibs Stoffer dacks observéiert gastric Kriibs Metastasen ze erhéijen. Verschidde Mënsch gastric carcinoma Zellen och CXCR4 mRNA an FAQ bei héijen Niveauen [7, 8] auszedrécken. Eis Etude zougedréckt H. pylori Wonn MKN45 Zell Wanderung duerch d'upregulation vun CXCR4 Ausdrock fräi. D'Behandlung mat engem AMD3100 CXCR4 neien e wesentleche Ennerdréckung vun MKN45 Zell Migratioun kënschtlech. Aner Etude zougedréckt AMD3100 bedeitend d'Entwécklung vun peritoneal carcinomatosis zu enger Maus Modell vun gastric Kriibs opgeléist, déi duerch d'Reduktioun vun entholl Wuesstem an ascitic Flesseggassystem Équipe [9] Siicht war. Déi viregt Fuerschunge Nerve eis Conclusioun, datt CXCR4 overexpression zu Fro specimen vun der Primärschoul gastric Kriibs vläicht fir d'Optriede vun peritoneal carcinomatosis als preoperative Evaluatioun vun Risiken déngen. VerfÜgung Macrophages 'Bedeelegung vun der carcinogenesis an entholl Invasioun an Metastasen [31, 32 ] allgemeng ass hung TAMs (entholl verbonne macrophages), eng grouss Quell vun TNF-α an entholl microenvironment ze motivéieren, enger Rei vu Wuesstem Faktoren, cytokines fräiginn, an demagogesch mediators. D'Etude réischt do e wesentlechen Ausdrock vun TNF-α war vun H. pylori entschlof, a gläichzäiteg upregulation vun IL-1beta an IL-6 zu RAW264.7 Zellen, awer dunn dee Variant CXCR4 Ausdrock vun MKN45 Zellen ze induce.
Ënnersich zougeschriwwen schlussendlech den Manque Aktivatioun vun NF-κB zu Kriibs Zellen zu der Verhënnerung secretion vun TNF-α, hir Roll an CXCR4 upregulation Folleg vun NF-κB mediated zu Weeër Zesummenhang gin ass ugeholl. Anerer bruet hunn TNF-α réischt antagonists der upregulation vun CXCR4 Ausdrock vun H. pylori inhibit kann, a béid et an CXCR4 antagonists kënnt der fräi Migratioun vun gastric Kriibs Zellen kënschtlech oofgesinn. Dës Resultater hindeit, datt dës antagonists eleng, oder a Kombinatioun mat anere Therapien, kann als efficace Therapien fir gastric Kriibs Patienten déngen. VerfÜgung Konklusiounen VerfÜgung TNF-α ass an der upregulation vun CXCR4 Ausdrock vun gastric Kriibs Équipe entschlof vum H. pylori. VerfÜgung Deklaratioune VerfÜgung Merci VerfÜgung Dës Aarbecht vun Subventiounen aus Division vun Educatioun ënnerstëtzt gouf, Liaoning Province, China (2009A751). VerfÜgung Auteuren 'original deposéiert Fichieren fir Biller VerfÜgung sinn ennen de Linken fir d'original deposéiert Fichieren fir Biller "Auteuren. 12885_2009_2218_MOESM1_ESM.tiff Auteuren 'original Datei fir Figur 1 12885_2009_2218_MOESM2_ESM.tiff Auteuren' original Datei fir Figur 2 12885_2009_2218_MOESM3_ESM.tiff Auteuren 'original Datei fir Figur 3 12885_2009_2218_MOESM4_ESM.tiff Auteuren' original Datei fir Figur 4 12885_2009_2218_MOESM5_ESM.tiff original Datei 'Auteuren fir Figur 5 12885_2009_2218_MOESM6_ESM.tiff Auteuren 'original Datei fir Figur 6 Wettsträit Interessen VerfÜgung D'Auteuren erklären, datt se keng Competitioun Interessen hunn. VerfÜgung

• Interleukin-23A mat entholl Wuesstem zu Helicobacter-pylori-Zesummenhang Mënsch gastric cancer
• Heefegen Roboter bariatric Prozeduren iwwerpréiwung an technesch aspects