Gastric intestinal metaplasia (IM) ass eng absolut verwandelt preneoplastic lesion; Ee, d'molekulare Mechanismen seng Entwécklung Regulatioun bleiwen onkloer. Mir hun virdrun, datt eng Populatioun vun Zellen gewisen der intestinal Stammzellenfuerschung (ISC) Bewaacher ausdrécken LGR5 VerfÜgung Erhéijunge bemierkenswäert zu IM. An dëser Etude, ze propagéieren mir weider de molekulare Charakteristiken vun dësen LGR5 VerfÜgung Fro:. Jang BG, Lee BL, Kim WH (2015) Intestinal Zell lues an der Intestinal Metaplasia vun Mo. an Barrett d'Esophagus Stammzellen. PLoS NËMMEN 10 (5): e0127300. Doi: 10.1371 /journal.pone.0127300 VerfÜgung Akademesch Redakter: Anthony W.I. Lo, Queen Mary Spidol, Hong Kong VerfÜgung Arnaque: Januar 8, 2015; Akzeptéiert: 13. Abrëll 2015; Publizéiert: Mee 21, 2015 VerfÜgung Copyright: © 2015 Jang et al. Dëst ass eng oppen Zougang Artikel ënnert de Bedingunge vun der Lizenz CC BY verdeelt, déi bereet benotzen Genehmegungen, Distributioun, an Reproduktioun vun all mëttelgrouss, gëtt si vum original Auteur an d'Quell Kaiser VerfÜgung Data Disponibilitéit: All Daten sinn bannent de Pabeier a seng Ennerstëtzung Informatiounen Fichieren VerfÜgung Funding: Dëst Recherche vun engem Zouschoss vun der Korea Gesondheet Technology R &ënnerstëtzt war; d Project duerch d'Korea Gesondheet Industrie Development Institut (KHIDI), finanzéiert duerch de Ministère. Gesondheet & Wuel, Republik Korea (heimat Nummer: HI14C1277). D'funders hu keng Roll am Etude Design, Daten Kollektioun an Analyse, Décisioun, oder Virbereedung vun der mëttelalterlech Handschrëft ze publizéieren VerfÜgung Wettsträit Interessen:.. D'Auteuren hunn deklaréiert, datt keng Competitioun Interessen existéieren VerfÜgung Preneoplastic intestinal metaplasia (IM) ass mat eng grouss Gefor vun gastric carcinoma verbonne a Kaddoen an ongeféier ee-véiert vun Individuen weltwäit. [1] IM Resultater oft aus chronescher atrophic gastritis folgenden Wonn mat Helicobacter pylori VerfÜgung, déi zu gastric epithelial dysplasia oder carcinoma dann Viraus kënnen. [2] eng Rei vu genetesch a epigenetic hire Restaurant hunn an der pathogenesis vum Mënsch IM agebonne ginn. [3] Weideren huet langfristeg IM entschlof vun CDX2 Ausdrock ginn dës ze gastric Kriibs zu transgenic Mais bis nodeems beweist dass IM selwer eng bedeitend Roll an der Genesis vum gastric carcinoma spillt. [4] VerfÜgung Well IM enger kritescher Virleefer vun gastric carcinogenesis ass, fir d'Potential dës lesions ëmgekéierte ass vu groussen Interessi. [5] virdrun Ënnersich datt Ausradéiere vun H VerfÜgung gemellt hunn. pylori VerfÜgung ass genuch IM zu Géigendeel, nach anerer fonnt hunn, datt e groussen Deel vun de Patienten nach dobäi mat IM och no effektiv Kampf. [5] IM ass gegleeft an der histological de "Punkt vun kee Retour" ze ginn CASCADE aus chronescher gastritis zu adenocarcinoma; [6] also, Efforten de molekulare Mechanismen Regulatioun d'Opstelle an Ënnerhalt vun IM si wichteg ze entwéckelen Strategien ze verstoen gastric carcinogenesis ze stéieren. Zum Beispill, ass CDX2 autoregulation proposéiert e groussen Impakt op d'Stabilitéit vun IM lesions ze hunn. [7] Während IM crypts vun der mënschlecher Mo si clonal an multipotent Desaccord Zellen enthalen, [8] et schlecht bleift demno ob gebierteg gastric Stammzellen sinn déi initial Quell vun metaplasia oder wann si déngen nëmmen etabléierten lesions ze erhalen. VerfÜgung d'Entdeckung vun normal gastric mucosal Stammzellen coincided mat Identifikatioun vun der Wnt Zil- Gentherapie LGR5 VerfÜgung als Stammzellenfuerschung Bewaacher geflitzt an der intestinal epithelium. [9] E antike-nogezunn Etude réischt méi spéit datt LGR5 VerfÜgung Barrett d'esophagus (BE) ass eng metaplastic Konversioun columnar epithelium zu intestinal a mat enger méi Risiko vun adenocarcinoma, gläicht dat observéiert assoziéiert ass gëlt gastric IM. [12], Collectioun Mënsch BE lesions eng upregulation vun LGR5 VerfÜgung Ausdrock wéini normal squamous epithelium verglach, an ass suggestiv vun der Präsenz vun enger LGR5 VerfÜgung puer molekulare ISC lues hunn nieft LGR5 VerfÜgung, dorënner PROM1 VerfÜgung [14], BMI1 Themen VerfÜgung Formalin -fixed an paraffin-Ënnerbewosstsinn (FFPE) gastric Echantillon mat oder ouni intestinal metaplasia (IM) aus fënnef Patienten gesammelt goufen, déi vun 2008 bis 2010. IM lesions Bild submucosal dissection op Seoul National University Hospital (SNUH) mécht an kategoriséiert waren gastric-a -intestinal gemëscht (gi) an eleng intestinal (ech) bestemmt (och als onkompletter komplett Aarte bekannt, bzw.). [19] Echantillon vun esophagus d'Barrett sech aus zwee Patienten mat adenocarcinoma vun gastroesophageal menaarbecht isoléiert, an engem normale klenge Daarm specimen war vun engem Patient mat Colon Kriibs kritt huet. Fresh-gefruer Net-tumorous sech gastric Stoffer aus 28 gastric Kriibs Patienten sinn déi chirurgesch gastrectomy vun 2001 bis 2005 um SNUH weiderentwéckelt huet. VerfÜgung ethneschen Ausso VerfÜgung All Mënsch uplanzen duerch curative chirurgesch resection kritt huet . Dëst Retrospektiv Etude war mat gespäichert Echantillon der pathologic Diagnos gesuergt. Echantillon waren virun der Etude anonymized, also schrëftlech Erlaabnes net néideg war. D'Etude Design gouf duerch den institutionnelle Kritik Verwaltungsrot op Seoul National University Hospital ënnert der Bedingung vun anonymization guttgeheescht (Hiwäis: H-1209-037-424). VerfÜgung RNS zu situ hybridization VerfÜgung An situ hybridization fir LGR5 VerfÜgung, ASCL2 VerfÜgung, OLFM4 VerfÜgung, an EPHB2 VerfÜgung war mat der RNAscope FFPE assay Kit (Détailléiert Zell kinnt gemaach, Inc. , Hayward, CA, USA) wéi virdru beschriwwen. [11] positiv stain war wéi d'Präsenz vun brong punctate dots am helle an /oder Zytoplasma definéiert. D'ubiquitin C an bakteriell DapB VerfÜgung Genen als positiv an negativ Kontrollen, bzw.. VerfÜgung RNS erauszéien a grouss real-Zäit Hinnen alleguer VerfÜgung Total RNS war vun paraffin-Ënnerbewosstsinn ofgebaut Otemschwieregkeeten Sektiounen mat engem RNeasy FFPE Kit (QIAGEN, Valencia, CA, USA) wéi virdru beschriwwen. [20] Réckproduktioun-ausserdeem cDNA aus 1-2μg vun insgesamt RNS mat ënnerschiddleche hexamer primers an der GoScript ëmgedréint Transkriptiouns System (Promega, Madison bereet war , allem, USA). Chemeschen real-Zäit Hinnen alleguer (qRT-Hinnen alleguer) Reaktioune waren benotzt Premix EX Taq (Takara Bio, Shiga, Japan) standing no de Recommandatioune vum Fabrikant, an d'Donnéeë analyséiert benotzt liichtkraaftarm Detektioun System Software (Version 1.4, Obwuel Biosystems). Déi folgend TaqMan Gentherapie Ausdrock assays sech benotzt: Hs00173664_m1 ( LGR5 VerfÜgung), Hs00362096_m1 ( EPHB2 VerfÜgung), Hs00270888_s1 ( ASCL2 VerfÜgung), Hs00197437_m1 ( OLFM4 Transfection vun CDX2 VerfÜgung CDX2 cDNA (pCMV6-CDX2) war vun OriGene kaaft (Rockville, MD, USA). Gastric Kriibs Zellen sech zu 6-gutt Plack um 1 × 10 statistique Analyse VerfÜgung statistique analyséiert goufen zu Prism 5 (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA, USA) gesuergt. Kennenzeléieren tëscht der Ausstralung vun intestinal Stammzellenfuerschung lues a CDX2 VerfÜgung war vun linear Réckgang Analyse évaluéieren. Mengen Differenzen tëscht de Gruppen vun FFPE gastric uplanzen sech duerch eent-Manéier ANOVA évaluéieren. Tëscht-Grupp Vergläicher der transfection vun CDX2 VerfÜgung zu gastric Kriibs Zell goufe benotzt Student standing t VerfÜgung -tests. D'Resultater goufen däitlech wann p VerfÜgung &Si besteet considéréiert; 0,05. VerfÜgung 1. ISC lues mat CDX2 Niveauen an der gastric mucosa vergläichen VerfÜgung Mir virdrun op der famill Erhéijung vun gemellt LGR5 VerfÜgung 2. ISC Bewaacher Ausdrock deemolegt Weltbild mat IM Werdegang VerfÜgung Fir de positive Associatioun vun confirméieren OLFM4 VerfÜgung a EPHB2 VerfÜgung mat IM, mir ausgewielt véier histologically-z'ënnerscheedde Zorte gastric Otemschwieregkeeten; normal antral mucosa ouni IM (n = 4), chronescher aktiv gastritis ouni IM (n = 3), gastric an intestinal gemëscht Typ (gi Typ) IM (n = 6), a regelméissegen Ofstänn intestinal Typ (ech Typ) IM (n = 5) (Lalumi 2A). Claudin-18 ass déi héichste ausgedréckt knapper menaarbecht FAQ am Mo.. Wéi erwaart, datt eis Analysë datt claudin-18 Ausdrock mat der Erhéijung Grad vun IM manner ( p VerfÜgung &Si besteet; 0.0001) (Lalumi 2B), wobäi CDX2 VerfÜgung Ausdrock fräi ( p VerfÜgung &Si besteet; 0.0001) (Lalumi 2C). Mir hunn och déi OLFM4 VerfÜgung a EPHB2 VerfÜgung Niveauen mat all Kierzunge lesion konsequent fräi confirméiert, datt dës lues enk gi fir IM Werdegang dinn ( p VerfÜgung = 0,008 an 0,001, bzw.; Lalumi 2D an 2E). Am Géigesaz, BMI1 VerfÜgung a LRIG1 VerfÜgung zougedréckt Ausdrock Tendenz mat IM Werdegang geloss. ( p VerfÜgung = 0,002 an 0,0006, bzw.; Lalumi 2F an 2G) 3. LGR5 VerfÜgung Fir erauszefannen, ob enger direkter Relatioun tëschent LGR5 VerfÜgung an ISC lues zu IM vierdrun, mir iwwerpréift ob hir coexpression vun RNS zu situ hybridization. Den Ausdrock vun LGR5 VerfÜgung, ASCL2 VerfÜgung, EPHB2 VerfÜgung, an OLFM4 VerfÜgung goufen éischt an engem normale Mënsch kleng Daarm Rubrik iwwerpréift dëser Technik ze confirméieren, an huet fonnt speziell un Zellen am Desaccord gratis Sproochenunterricht vun intestinal crypts zu localize wéi erwaart (S2 Lalumi). Zanter LGR5 VerfÜgung 4. ISC lues sinn an Barrett d'esophagus lesions ausgedréckt VerfÜgung Mir machen nieft festzestellen, ob ISC lues goufen och zu Barrett d'esophagus ausgedréckt (BE). Fir dat, zwee Beem uplanzen vun adenocarcinomas am Hannergrond vun BE entstane waren, fir d'Expressioun vun CDX2 VerfÜgung évaluéieren, OLFM4 VerfÜgung, EPHB2 VerfÜgung, an PROM1 de Moien /Hals Regioun vun der gastric Eenheet virdru war geduecht fir d'Stammzellenfuerschung gratis Sproochenunterricht falen an déi IM existeiert, an et gëtt ugeholl gouf, datt metaplasic Werdegang vun engem eenheetlechen gastric clonal Eenheet existeiert duerch clonal Expansioun an Krypta Kärspaltung. [8] well LGR5 VerfÜgung Verschidde Efforten gesicht hunn IM vun Mo. lesion Zorte ze klassifizéieren. Matuskura et al. enger Systematik ugeholl op der Präsenz vun kleng Daarm digestive Enzymen baséiert; definéiert als komplett an onkomplett Typ IM, [26] hierkommen Jass an Filipe agefouert dräi hierer vun IM op der Basis vun Wirklechkeet an histochemical mucin staining. [27] Méi kuerzem, eng nei Chronologie vun Tatematu et al proposéiert gouf., An deem IM kann an gastric-a-intestinal gemëscht (gi) an eleng intestinal (ech) Typen ënnerdeelt ginn. [19] Am gi-Typ IM , gastric an intestinal phenotypic lues schéngen souwuel d'glandular a bewosst Niveauen, also huet se proposéiert ginn, datt IM kéint duerch de moderate intestinalization vun Stammzellen aus der GI- ze sin-Typ. [28] Hei verursaacht ginn, mir moderate Erhéijung observéiert vun der ISC lues OLFM4 VerfÜgung a EPHB2 VerfÜgung mat weider intestinalization vun gastric mucosa. Zesumme mat der Erhéijung CDX2 VerfÜgung Niveauen datt intestinal dat an phenotype induce, proposéiere dësen Ausdrock Musteren eng Konversioun vun de globale Stammzellenfuerschung Populatioun géintiwwer engem méi intestinal-wëll Stammzellenfuerschung phenotype. Desweideren, déi onerwaart ëmgedréit, et gesäit Korrelatioun vun BMI1 VerfÜgung a LRIG1 VerfÜgung mat IM brauch weider Studien dëst Resultat ze confirméieren a seng Krankheete Donnéeën ze klären. VerfÜgung H Barrett d'esophagus (BE) ass eng precancerous lesion datt mat e puer morphologic a molekulare Charakteristiken deelt gastric IM, meeschtens well et ass eng metaplastic Konversioun columnar epithelium zu intestinal aus chronescher inflammation doraus. Mir gleewen, datt den haitegen Etude aner Ähnlechkeet tëschent dësen zwou lesions an der Präsenz vun karakteriséiert LGR5 VerfÜgung CDX2 ass e Meeschter Transkriptiouns Faktor fir den Ausdrock vun intestinal dat lues, a gemengt ass d'Entwécklung vun BE zu underlie. Iwwerdeems normal gastric mucosa ausdrécklech net CDX2 VerfÜgung, ass staark Ausdrock vun IM fonnt. [35, 36] Desweideren, hun transgenic Mais bewisen, dass CDX2 VerfÜgung dësen Ausdrock ass genuch IM zu induce [37 , 38], suggeréiert datt CDX2 VerfÜgung och d'Entwécklung vun Stammzellenfuerschung Bevëlkerung mat enger intestinal phenotype verstännegen kënnen. Sou, iwwerpréift mir wann CDX2 VerfÜgung direkt an d'Expressioun vun der ISC lues Équipe gëtt: LGR5 VerfÜgung, ASCL2 VerfÜgung, OLFM4 VerfÜgung, an EPHB2 VerfÜgung (S5 Lalumi). Allerdéngs, Teamchef transfection Experimenter nëmmen EPHB2 VerfÜgung liicht duerch betraff war CDX2 VerfÜgung Ausdrock. Sécher, soll dës Donnéeën mat him interpretéiert ginn, well sech am GC Zell Linnen kritt mat verschiddene biologescher Eegeschafte vu dass vun Net-tumorous gastric epithelial oder intestinal Stammzellen. Trotzdem, et wahrscheinlech schéngt datt zousätzlech sécher Facteuren zesumme mat CDX2 VerfÜgung Grondlinne sinn ze ISC Bewaacher Ausdrock induce. VerfÜgung Am Resumé, alles mir dass LGR5 VerfÜgung Aféierung VerfÜgung
[15], LRIG1 VerfÜgung [16], a ASCL2 VerfÜgung, déi als Transkriptiouns Faktor identifizéiert war intestinal Stammzellenfuerschung Schicksal ze kontrolléieren. [17] en plus, OLFM4
[17] an EPHB2 VerfÜgung [18] sinn och héichgradeg zu ISCs ausgedréckt. An dëser Etude, fir mir zousätzlech ISC lues an de Moses an Ënnerhalt vun gastric IM an BE, an iwwerpréifen hir colocalization mat Équipe ze entdecken LGR5 VerfÜgung spontan a Methode VerfÜgung
), Hs01009250_m1 ( PROM1 VerfÜgung), Hs00394267_m1 ( LRIG1 VerfÜgung), Hs00995536_m1 ( BMI1 VerfÜgung), Hs00178027_m1 ( DCLK1 VerfÜgung), Hs010780810_m1 ( CDX2 VerfÜgung), Hs00212584_m1 ( CLDN18 VerfÜgung), an Hs0275899_g1 ( GAPDH VerfÜgung). GAPDH VerfÜgung wéi d'endogenous Kontroll zerwéiert. VerfÜgung Resultater VerfÜgung
, PROM1 VerfÜgung, DCLK1 VerfÜgung, LRIG1 VerfÜgung, an BMI1 VerfÜgung -an normal gastric Otemschwieregkeeten. D'iwwerpréift Stoffer weisen eng breet Palette vun CDX2 VerfÜgung Niveauen, déi verschidde Grad vun IM vertrëtt, well CDX2 VerfÜgung Ausdrock positiv mat IM Werdegang (Lalumi 1A) soll ass. Dräi ISC lues sech fonnt ze vergläichen mat CDX2 VerfÜgung Ausdrock: OLFM4 VerfÜgung, EPHB2 VerfÜgung, an BMI1 VerfÜgung. Besonnesch, OLFM4 VerfÜgung ( p VerfÜgung &Si besteet; 0,0001, r
vun qRT-Hinnen alleguer Analyse (Lalumi 4A). souwuel signifikativ, BE an adenocarcinomas héichen Niveau vun all véier ISC lues ausgedréckt wéini datt vun normal squamous epithelium (Lalumi 4B, 4C, 4D an 4E) am Verglach. Iwwerdeems LGR5 VerfÜgung a ASCL2 VerfÜgung kee groussen Ännerungen aus RT-Hinnen alleguer Analyse huet, wahrscheinlech wéinst ze héich Kopie Zuel vun gët, RNS zu situ hybridization eng kloer Zell Bevëlkerung gewisen, mat LGR5
, ASCL2 VerfÜgung, an OLFM4 VerfÜgung Ausdrock op d'Kräizung vun der gastric an metaplastic Glands, erënner vun gi-Typ IM (Lalumi 4F, 4G, 4H, 4I an 4J).
Diskussioun VerfÜgung
oder CDX2 VerfÜgung Ausdrock Resultater am parietal Zell-ofgeleet IM Entwécklung vun transgenic Mais. [24] Dofir, et bleift Synch ob IM eng Konsequenz vun intestinal Stammzellenfuerschung reprogramming oder der transdifferentiation vun Zellen mat Qualifikatiounen ISC-Element ass [12, 25] Eegeschaften. VerfÜgung
. pylori VerfÜgung Kampf huet den Potential gastric Cancers ze verhënneren, [29] a kéint de Werdegang vun precancerous gastric lesions, wéi IM. [30, 31] Mä, eemol gegrënnt, et schéngt dass H attenuate VerfÜgung. pylori VerfÜgung Kampf kann net komplett gastric Kriibs verhënneren. [6] An Tatsaach, awer ronn 80% vun de Sujeten mat IM keng Verännerung oder Werdegang vun IM der Behandlung mat Antibiotiken. [31] En plus, eng meta-Analyse ofgeschloss dass H VerfÜgung. pylori VerfÜgung Kampf huet keen Effet op gastric IM. [32] Dëst Mënscherechter vun IM Deel vun der Maintenance erkläert ginn hätt vun CDX2 VerfÜgung Ausdrock duerch een autoregulation Glück datt onofhängeg vun initial Iwwerleeung ass, verletzt der intestinal phenotype. [33] Mir verroden weider dass LGR5 VerfÜgung
Informatiounen Ennerstëtzung VerfÜgung S1 Figebam. Korrelatioun vun intestinal Stammzellenfuerschung (ISC) lues mat CDX2 VerfÜgung Niveauen an Net-tumorous gastric Stoffer. VerfÜgung Nee Korrelatioun tëschent CDX2 VerfÜgung Ausdrock an e puer ISC lues wéi fonnt gëtt LGR5 VerfÜgung (r
= 0.21) an DCLK1 VerfÜgung (r
(C), ASCL2 VerfÜgung (d), a OLFM4 VerfÜgung (E) wéi der IM vun antrum. Vergréissert: Eng × 100; B, C, D, E × 200 VerfÜgung Doi:. 10,1371 /journal.pone.0127300.s004 VerfÜgung (PPTX) VerfÜgung S5 Figebam. Effet vun CDX2 VerfÜgung op den Ausdrock vun intestinal Stammzellenfuerschung (ISC) lues an gastric Kriibs (GC) Zell Linnen. VerfÜgung Transfection vun CDX2 VerfÜgung an véier GC Zell Linnen, MKN74 (A ), MKN28 (B), SNU484 (C) an SNU668 (d) geet vill zevill mRNA vun CDX2 VerfÜgung (**, p VerfÜgung &Si besteet; 0,01; ***, p VerfÜgung &Si besteet; 0.005). D' EPHB2 VerfÜgung Ausdrock ass nëmme liicht verstäerkte vum Ausdrock vun CDX2 VerfÜgung zu dräi vun véier GC Zell Linnen (***, p VerfÜgung &Si besteet; 0.005). Keen Ënnerscheed ass an de Niveau vun LGR5 VerfÜgung, ASCL2 VerfÜgung, an OLFM4 VerfÜgung op CDX2 VerfÜgung overexpression (NS, net relevant) fonnt.
Doi: 10,1371 /journal.pone.0127300.s005 VerfÜgung (PPTX) VerfÜgung