Maag-intestinale metaplasie (IM) is een veel voorkomende preneoplastische laesie; De moleculaire mechanismen reguleren zijn ontwikkeling onduidelijk. We hebben eerder aangetoond dat een populatie van cellen die de intestinale stamcellen (ISC) marker Lgr5 Visum:. Jang BG, Lee BL, Kim WH (2015) Intestinale Stem Cell Markers in de intestinale Metaplasie van maag en Barrett-slokdarm. PLoS ONE 10 (5): e0127300. doi: 10.1371 /journal.pone.0127300 Academic Editor: Anthony W.I. Lo, Queen Mary Hospital, HONG KONG Ontvangen: 8 januari 2015; Geaccepteerd: 13 april 2015; Gepubliceerd: 21 mei 2015 Copyright: © 2015 Jang et al. Dit is een open toegang Artikel gedistribueerd onder de voorwaarden van de Creative Commons Attribution License, die onbeperkt gebruik, distributie en reproductie maakt in elk medium, op voorwaarde dat de oorspronkelijke auteur en de bron worden gecrediteerd Data Beschikbaarheid: Alle relevante gegevens zijn binnen het papier en de Ondersteunende informatie bestanden Financiering: Dit onderzoek werd gesteund door een subsidie van de Korea Health Technology R & D Project door de Korea Health Industry Development Institute (KHIDI), gefinancierd door het ministerie van. Health & Welzijn, de Republiek Korea (subsidie nummer: HI14C1277). De financiers hadden geen rol in de studie design, het verzamelen van gegevens en analyse, besluit te publiceren, of de voorbereiding van het manuscript Competing belangen:.. De auteurs hebben verklaard dat er geen tegenstrijdige belangen bestaan Introductie preneoplastische intestinale metaplasie (IM) is geassocieerd met een verhoogd risico op maagcarcinoom en presenteert in ongeveer een kwart van individuen wereldwijd. [1] IM voornamelijk optreedt chronische atrofische gastritis na infectie met Helicobacter pylori Omdat IM is een kritische precursor in maagkanker, de mogelijkheid om deze laesies keren is van groot belang. [5] Eerdere onderzoeken hebben aangetoond dat de uitroeiing van de H de ontdekking van de normale maagslijmvlies stamcellen viel samen met de identificatie van de Wnt target-gen Lgr5 Barrett's slokdarm (BE) is een metaplastische omzetting in intestinale epitheel en is geassocieerd met een verhoogd risico op adenocarcinoom, vergelijkbaar met die met maag-IM. [12] met name de menselijke BE letsels vertonen een opregulatie van Lgr5 Verschillende moleculaire ISC merkers geïdentificeerd naast Lgr5 Materialen en methoden onderwerpen Formaline gefixeerde en in paraffine ingebedde (FFPE) maag monsters met of zonder intestinale metaplasie (IM) werden verzameld van vijf patiënten die een endoscopische submucosale dissectie van 2008 tot 2010. IM laesies onderging aan Seoul National University Hospital (SNUH) werden ingedeeld in de maag-en -intestinal gemengd (GI) en uitsluitend intestinale (I) subtypes (ook bekend als incompleet en volledige types, respectievelijk). [19] Monsters van Barrett-slokdarm werden geïsoleerd uit twee patiënten met adenocarcinoom van gastro-oesofageale overgang, en een normale dunne darm specimen was verkregen van een patiënt met darmkanker. Vriesverse non-tumor maag weefsels beschikbaar waren vanaf 28 maagkanker patiënten die een chirurgische gastrectomie 2001-2005 had ondergaan bij SNUH. Alle menselijke specimens werden verkregen door middel van curatieve chirurgische resectie . Dit retrospectieve onderzoek is uitgevoerd met monsters bewaard na pathologische diagnose. Monsters werden anoniem voorafgaand aan het onderzoek, werd dus geschreven toestemming niet vereist. De studie ontwerp werd goedgekeurd door de Institutional Review Board van Seoul National University Hospital onder de voorwaarde van anonimiseren (referentie: H-1209-037-424). In situ hybridisatie voor Lgr5 Totaal RNA werd geëxtraheerd uit in paraffine ingebedde weefselcoupes met een RNeasy FFPE Kit (Qiagen, Valencia, CA, USA) zoals eerder beschreven. [20] omgekeerde transcriptie werd cDNA bereid uit totaal RNA 1-2μg met willekeurige hexameer primers en GoScript omgekeerde transcriptiesysteem (Promega, Madison , WI, USA). Kwantitatieve real-time PCR (qRT-PCR) werden uitgevoerd met behulp Premix EX Taq (Takara Bio, Shiga, Japan) volgens de aanbevelingen van de fabrikant, en de gegevens geanalyseerd met gebruikmaking Sequence Detection System software (versie 1.4, Applied Biosystems). De volgende TaqMan genexpressie testen werden gebruikt: Hs00173664_m1 ( Lgr5 CDX2 cDNA (pCMV6-CDX2) werd gekocht bij Origene (Rockville, MD, USA). Maagkanker cellen werden uitgezaaid met 1 x 10 6 cellen /well in 6-well plaat en getransfecteerd met 2,5 ug van cDNA of lege controlevector gebruik van Lipofectamine 2000 transfectiereagens (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) volgens de fabrikant instructies. Cellen werden onderworpen aan qRT-PCR analyse ongeveer 24 uur na transfectie. Statistische analyses werden uitgevoerd in 5 Prism (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA, USA). Correlaties tussen de uitingen van intestinale stamcellen markers en CDX2 1. ISC markers correleren met CDX2 niveaus in het maagslijmvlies We hebben eerder gemeld op de relatieve toename van de Lgr5 Om de positieve associatie van bevestigen OLFM4 Kopen en EphB2 hotels met IM, hebben we gekozen voor vier histologisch-duidelijke maag soorten weefsels; normale antrale slijmvlies zonder IM (n = 4), chronische actieve gastritis zonder IM (n = 3), maag- en darm gemengde type (GI type) IM (n = 6), en alleen intestinale type (type I) IM (n = 5) (figuur 2A). Claudine-18 is het hoogst tot expressie tight junction eiwit in de maag. Zoals verwacht, onze analyses bleek dat claudine-18 expressie verminderd met de toenemende mate van IM ( p Restaurant < 0,0001) (Fig 2B), terwijl CDX2 3. Lgr5 Om te bepalen of een directe relatie bestaat tussen de Lgr5 Kopen en ISC markers in IM, we onderzocht of de co-expressie van RNA in situ hybridisatie. De expressie van Lgr5 4. ISC markers zijn uitgedrukt in barrettoesofagus laesies We naast wilden bepalen of ISC markers werden ook uitgedrukt in Barrett-slokdarm (BE). Hiervoor werden twee exemplaren van adenocarcinomen ontstaan in de achtergrond worden beoordeeld op de expressie van de CDX2 Discussie de isthmus /halsgebied van het maag-eenheid is eerder gedacht dat de stamcel niche waarin IM optreedt omvatten, en er is gesuggereerd dat metaplasic overgang van één maag klonale eenheid optreedt tot klonale expansie en crypte splijting. [8] omdat Lgr5 Diverse pogingen hebben geprobeerd om IM classificeren van de maag laesie types. Matuskura et al. suggereerde een indeling op basis van de aanwezigheid van dunne darm verteringsenzymen; verstaan complete en incomplete type IM, [26] dat jass en Filipe introduceerde drie graden van IM op basis van morfologie en histochemische kleuring mucine. [27] Meer recent is een nieuwe classificatie is door Tatematu et al voorgesteld., Waarbij IM kan worden onderverdeeld in gastrische en intestinale gemengd (GI) en uitsluitend intestinale (I) worden gebruikt. [19] In GI-type IM , maag- en fenotypische markers verschijnen op zowel glandulaire en cellulair niveau, dus het is gesuggereerd dat T kan worden veroorzaakt door de geleidelijke intestinalization van stamcellen uit de GI-I-type. [28] Hier hebben we waargenomen geleidelijke toename van de ISC markers OLFM4 Kopen en EphB2 hotels met verdere intestinalization van het maagslijmvlies. Samen met de toenemende CDX2 H Barrett-slokdarm (BE) is een precancereuze laesie dat verschillende morfologische en moleculaire kenmerken deelt maag IM, vooral omdat het een metaplastische omzetting in epitheel gevolg van chronische ontsteking intestinale. Wij geloven dat dit onderzoek kenmerkt een overeenkomst tussen deze twee laesies in de aanwezigheid van Lgr5 CDX2 is een meester transcriptiefactor voor de expressie van intestinale differentiatie merkers, en men denkt dat de ontwikkeling van BE grondslag liggen. Terwijl normale maagslijmvlies niet uitdrukken CDX2 In het kort, hebben we vastgesteld dat Lgr5
toename opmerkelijk in IM. In deze studie hebben we verder onderzocht de moleculaire kenmerken van deze Lgr5
+ cellen in IM door onderzoek van het expressieprofiel van verschillende ISC markers. Met name, vonden we dat ISC markers, inclusief OLFM4 Kopen en EphB2
-Zijn positief geassocieerd met de CDX2
expressie in niet-tumor maag weefsels. Deze bevinding werd bevestigd maag laesies met of zonder metaplasie konden aantonen dat OLFM4 en EphB2 expressie geleidelijk verhoogd metaplastische progressie. Bovendien RNA in situ hybridisatie bleek dat Lgr5
+ cellen coexpress verschillende ISC markers en bleef beperkt tot de basis van metaplastisch klieren, die doet denken aan die van de normale intestinale crypten, terwijl die van normale antrale klieren uitgedrukt none van deze merkers. Bovendien werden een groot aantal ISC-merker tot expressie brengende cellen diffuus verdeeld in maag adenomen, wat suggereert dat deze markers maag tumorigenese kan vergemakkelijken. Bovendien barrettoesofagus (BE) -die histologisch lijkt op intestinale metaplasie-vertoonde een vergelijkbare verdeling van ISC markers, waaruit de aanwezigheid van een stamcelpopulatie met intestinale differentiatiepotentiaal. Tot slot, we geïdentificeerd die Lgr5
+ cellen in de maag IM en BE coexpress ISC markers, en vertonen dezelfde uitdrukking profiel als die gevonden in de normale intestinale crypten. Tezamen bieden deze resultaten impliceren een intestinale-achtige stamcellen bevolking in de pathogenese van IM, en vormen een belangrijke basis voor het begrijpen van de ontwikkeling en het onderhoud van deze ziekte
, die vervolgens kunnen gaan naar de maag epitheliale dysplasie of carcinoom. [2] Een verscheidenheid van genetische en epigenetische veranderingen zijn betrokken bij de pathogenese van menselijke IM. [3] Verder langdurige IM geïnduceerd door CDX2 expressie is getoond leiden tot maagkanker in transgene muizen, wat aangeeft dat t zelf speelt een belangrijke rol bij het ontstaan van maagcarcinoom. [4]
gemeld. pylori
is voldoende om IM te keren, maar anderen hebben geconstateerd dat een aanzienlijk deel van de patiënten nog steeds aanwezig met een IM, zelfs na effectieve uitroeiing. [5] IM wordt verondersteld om de 'point of no return' in de histologische zijn cascade van chronische gastritis naar adenocarcinoom; [6] dus, de inspanningen om de moleculaire mechanismen tot regeling van het opzetten en onderhouden van IM begrijpen zijn van cruciaal belang om strategieën te ontwikkelen om de maag carcinogenese onderbreken. Zo wordt CDX2 autoregulatie voorgesteld om een grote invloed op de stabiliteit van IM letsels hebben. [7] Terwijl IM crypten in de menselijke maag zijn klonen en bevatten multipotente stamcellen, [8] Het blijft slecht begrepen of inheemse maag stamcellen de oorspronkelijke bron van metaplasie of als ze dienen enkel om gevestigde laesies te handhaven.
als een stamcel marker in het darmepitheel. [9] A-lineage tracing studie later bleek dat Lgr5
+ cellen zijn multipotente stamcellen die verantwoordelijk zijn voor de vernieuwing van de maag epitheel bij de muizen. [10] Onze fractie eerder aangetoond dat een klein aantal van de Lgr5
+ cellen ook wonen op de bodem van de menselijke antral klieren en dramatisch toenemen in IM laesies. [11] Deze bevindingen leidde ons om te speculeren dat Lgr5
kan is een marker voor intestinale stamcellen (ISC) belast met het onderhoud van IM.
expressie in vergelijking met normale plaveiselepitheel en is suggestief van de aanwezigheid van een Lgr5
+ stamcellen in BE. [13]
, inclusief PROM1
[14], BMI1
[15], LRIG1
[16], en ASCL2
, die werd geïdentificeerd als een transcriptiefactor intestinale stamcellen lot te controleren. [17] Bovendien, OLFM4
[17] en EphB2
[18] ook hoog tot expressie in ISC. In deze studie hebben we gericht op extra ISC merkers betrokken bij de ontwikkeling en het onderhoud van maag IM ontdekken en BE en onderzoeken hun colokalisatie met Lgr5
+ cellen door RNA in situ hybridisatie met verdere onthullen de moleculaire kenmerken van Lgr5
+ cellen in IM met betrekking tot de intestinale-achtige stamcel fenotype.
ethische verklaring
RNA in situ hybridisatie
, ASCL2
, OLFM4
en EphB2
werd uitgevoerd met de RNAscope FFPE testkit uitgevoerd (Advanced Cell Diagnostics, Inc. , Hayward, CA, USA) zoals eerder beschreven. [11] Positieve kleuring werd gedefinieerd als de aanwezigheid van bruine gestippelde stippen in de kern en /of cytoplasma. De ubiquitine C en bacteriële dapB
genen dienden als positieve en negatieve controles, respectievelijk.
RNA-extractie en kwantitatieve real-time PCR
), Hs00362096_m1 ( EphB2
), Hs00270888_s1 ( ASCL2
), Hs00197437_m1 ( OLFM4
), Hs01009250_m1 ( PROM1
), Hs00394267_m1 ( LRIG1
), Hs00995536_m1 ( BMI1
), Hs00178027_m1 ( DCLK1
), Hs010780810_m1 ( CDX2
), Hs00212584_m1 ( CLDN18
), en Hs0275899_g1 ( GAPDH
). GAPDH
diende als endogene controle.
Transfectie van CDX2
Statistische analyse
werd bepaald door lineaire regressieanalyse. Gemiddelde verschillen tussen de groepen van FFPE maag monsters werden beoordeeld door one-way ANOVA. Tussen de groepen vergelijkingen na transfectie van CDX2
bij maagkanker cellijnen werden uitgevoerd met behulp van de Student t
-testen. De resultaten werden significant beschouwd wanneer p
< 0.05.
Resultaten
+ cellen in IM laesies van menselijke maag. [11] Dit bracht ons naar veronderstellen dat deze Lgr5
+ cellen kan als zelfvernieuwende stamcellen te helpen bij de handhaving en voortplanting van metaplastisch epitheel in het maagslijmvlies. Dus, gericht we extra ISC markers die gecorreleerd met de CDX2
expressie in IM identificeren. Hiervoor gemeten we de expressie niveaus van de CDX2 Kopen en acht ISC markers- Lgr5
, ASCL2
, OLFM4
, EphB2
, PROM1
, DCLK1
, LRIG1
en BMI1
-in normale maag weefsel. De onderzochte weefsel toonde een breed scala van CDX2
niveaus, die de verschillende graden van IM, omdat CDX2
uitdrukking is positief gecorreleerd met IM progressie (figuur 1A). Drie ISC markers bleken te correleren met CDX2
uitdrukking: OLFM4
, EphB2
en BMI1
. In het bijzonder, OLFM4
( p Restaurant < 0,0001, r 2 = 0,56) (Fig 1B) en EphB2
( p
< 0,0001, r 2 = 0,52) (figuur 1C) vertoonde een sterke positieve correlatie met CDX2
, terwijl BMI1
werd omgekeerd gecorreleerd ( p
= 0,0002, r 2 = 0,42) (figuur 1D). Geen significante associatie met CDX2
expressie werd geïdentificeerd met de andere vijf ISC markers (S1 figuur).
2. ISC marker expressie correleert met IM progressie
expressie verhoogd ( p Restaurant < 0,0001) (Fig 2C). We vonden ook dat OLFM4 Kopen en EphB2
niveaus voortdurend gestegen, bij elk volgend letsel te bevestigen dat deze markers nauw verwant zijn aan IM progressie ( p
= 0,008 en 0,001, respectievelijk figuur 2D en 2E). In tegenstelling, BMI1 Kopen en LRIG1
expressie toonde een tendens af te nemen met IM progressie. ( p
= 0,002 en 0,0006, respectievelijk Fig 2F en 2G)
+ cellen in intestinale metaplasie colocalize met andere ISC markers
, ASCL2
, EphB2
en OLFM4
werden eerst onderzocht in een normale menselijke dunne darm sectie om deze techniek te valideren, en bleken specifiek lokaliseren op cellen in de stamcelniche van intestinale crypten zoals verwacht (Fig S2). Aangezien Lgr5
+ cellen in de normale intestinale crypten ook ISC markers te uiten, we theorie dat Lgr5
+ cellen in IM kan ook een soortgelijke uitdrukking patroon vertonen. Zo hebben we de procedure herhaald op opeenvolgende delen van endoscopische submucosale dissectie monsters (n = 5), waarvan elk meerdere brandpunten van GI-I of type IM onder niet-tumorweefsel. Een klein aantal van de Lgr5
+ cellen aan de basis van de normale antrale klieren waren verstoken van ISC marker expressie (figuur 3A), terwijl die in I-type IM vertoonden uitgedrukt alle drie de markers (Fig 3B) . Bovendien weergegeven GI-type IM lesies dezelfde expressieprofiel algemene behalve dat ISC marker expressie boven het resterende maagklieren, dan beperkt tot de grondvlakken (Fig S3). Dit expressiepatroon werd consistent waargenomen in alle monsters. Deze bevindingen geven aan dat Lgr5
+ cellen in IM verschillen van die van normale antrum in de expressie van markers die ISC meestal beperkt tot cellen in de intestinale crypten. Interessant, IM afgeleid van het fundic klieren, waarbij Lgr5
+ cellen zijn normaal gesproken niet aanwezig is, geproduceerd dezelfde resultaten (S4 Fig). Zo lijkt het waarschijnlijk dat de bevolking van Lgr5
+ cellen in IM niet voortvloeit uit de verspreiding van reeds bestaande Lgr5
+ cellen, maar is eerder een opkomst van Lgr5
+ cellen met verworven differentiatie potentieel, wat suggereert dat een darm-achtige stamcel populatie is gevestigd in IM. Bovendien, maag adenomen (n = 5) ook brachten hoge niveaus van ISC markers gehele laesies, dan beperkt tot de glandulaire crypten (figuur 3C). Zoals getoond in figuur 3, deze opeenstapeling van ISC-merker tot expressie brengen via metaplasie om dysplasie sequentie implicatieve de deelname van intestinale soort stamcellen in de maag tumorigenese en aanvullende studies naar het verband tussen intestinale stamcellen markers en maagtumor ontwikkeling onderzocht zeker gerechtvaardigd.
, OLFM4
, EphB2
en PROM1
door qRT-PCR analyse (figuur 4A). Significant, zowel BE en adenocarcinomen uitgedrukt hogere niveaus van alle vier ISC markers in vergelijking met normaal plaveiselepitheel (figuur 4B, 4C, 4D en 4E). Terwijl de Lgr5 Kopen en ASCL2
toonde geen significante wijzigingen ten opzichte van RT-PCR-analyse, waarschijnlijk te wijten aan lage aantal kopieën van transcripten, RNA in situ hybridisatie toonde een clear cell bevolking Lgr5
, ASCL2
en OLFM4
uitdrukking op de kruising van de maag- en metaplastische klieren, die doet denken aan GI-type IM (Fig 4F, 4G, 4H, 4I en 4J).
+ cellen worden geïdentificeerd als multipotente darm-achtige stamcellen in muizen [10] en bestaan in de menselijke maag antrum [11], is aannemelijk om te denken dat IM zou kunnen ontwikkelen van deze cel populatie. Er blijft echter een mogelijkheid dat een stamcelpopulatie dit proces kan ten grondslag liggen. Bijvoorbeeld, SOX2
+ cellen zijn ook geïdentificeerd als afzonderlijke maag stamcellen, en label celpopulatie exclusief voor mensen met Lgr5
expressie. [21] Transdifferentiatie kan ook aanleiding geven te metaplastische cellen. Spasmolyitc polypeptide tot expressie metaplasie-waarin pyloric soort klieren verschijnen in oxyntic slijmvlies-ontstaan uit volgroeide chief cellen, [22] in plaats van Lgr5
tot expressie brengen cellen. [23] Inderdaad, transgene CDX1
of CDX2
expressie resulteert in de pariëtale cellen afgeleide IM ontwikkeling van transgene muizen. [24] Daarom blijft ongrijpbaar of IM is een gevolg van intestinale stamcellen herprogrammering of transdifferentiatie van cellen met verworven ISC-achtige eigenschappen. [12, 25]
niveaus die intestinale differentiatie en fenotype te induceren, deze expressie patronen wijzen op een omzetting van de totale stamcel populatie in de richting van een darm-achtige stamcel fenotype. Bovendien is de onverwachte inverse correlatie van BMI1 Kopen en LRIG1 hotels met IM moet verder onderzoeken om dit resultaat te bevestigen en om de klinische implicaties te verduidelijken.
. pylori uitroeiing
heeft het potentieel om maagkanker te voorkomen [29] en kunnen de progressie van precancerous maaglesies, zoals IM verminderen. [30, 31] Echter, eenmaal vastgesteld, blijkt dat H
.
pylori uitroeiing niet volledig te voorkomen maagkanker. [6] In feite, ongeveer 80% van de personen IM toonde geen verandering of progressie van IM na behandeling met antibiotica. [31] Bovendien kan een meta-analyse is opgemaakt dat H
. pylori
uitroeiing heeft geen effect op de maag IM. [32] Dit onomkeerbaarheid van IM kan deels worden verklaard door de handhaving van de CDX2
uitdrukking door middel van een autoregulatie lus die onafhankelijk is van de eerste trigger, het behoud de intestinale fenotype. [33] verder hebben we aangetoond dat Lgr5
+ cellen aan de basis van metaplastisch klieren consistent expressie ISC andere markers, indicatief voor een intestinale-achtige stamcel fenotype. Wij geloven dat deze stabiele stamcelpopulatie aanvullende verklaring voor de langdurige aard van IM kunnen bepalen. Bovendien, therapeutische strategieën voldoende om specifiek te richten op de Lgr5
+ celpopulatie gecombineerd met H
. pylori
uitroeiing zou kunnen ondermijnen van de stabiliteit van IM, waardoor versnellen het herstel van de normale maagslijmvlies.
+ cellen met ISC markerexpressie. Deze bevinding komt overeen met een eerdere rapport waaruit blijkt dat Lgr5
expressie was significant verhoogd in BE, en dat de bevolking is waarschijnlijk de cel van oorsprong voor deze metaplasie. [13] Meer recent, Lgr5
+ cellen werden geïdentificeerd in het midden van klieren Barrett door in situ hybridisatie en worden voorgesteld om als stamcellen mocht zowel maag- en differentiatie vertonen. [34] ook gevonden Lgr5
+ cellen in de gebieden tussen de maag en metaplasie klieren in BE, die overeenkomen met het midden van klieren Barrett's. Bovendien is de aanwezigheid van ISC markers in de Lgr5
+ celpopulatie staaft hun potentieel voor intestinale differentiatie. Dus op basis van deze resultaten, lijkt het redelijk om te suggereren dat Lgr5
+ cellen in BE waarschijnlijk fungeren als stamcellen die de intestinale fenotype van BE, vergelijkbaar met dat in de IM te ondersteunen.
, sterke expressie wordt gedetecteerd in IM. [35, 36] Bovendien, transgene muizen hebben aangetoond dat CDX2
uitdrukking alleen al is voldoende om IM [37 induceren , 38], wat suggereert dat CDX2
mag de ontwikkeling van stamcelpopulatie met een intestinale fenotype vergemakkelijken. Zo hebben we onderzocht of CDX2
is direct betrokken bij de expressie van de ISC markers: Lgr5
, ASCL2
, OLFM4
en EphB2
(S5 Fig). Echter, transfectie-experimenten bleek dat alleen EphB2
werd marginaal beïnvloed door CDX2
expressie. Zeker, moeten deze gegevens met voorzichtigheid worden geïnterpreteerd omdat werden verkregen in GC cellijnen met verschillende biologische eigenschappen van die van niet-tumor maag- en darmklachten epitheliale stamcellen. Toch lijkt het waarschijnlijk dat er extra signalering factoren samen met de CDX2
essentieel zijn voor ISC marker expressie te induceren.
+ cellen gastrische IM en BE coexpress ISC markers, wat wijst op een darm-achtige stamcelpopulatie dat de reeds bestaande maag stamcellen vervangt. Deze bevinding lijkt een belangrijke aanwijzing voor het begrijpen van het mechanisme achter het voortbestaan van IM na H
. pylori
uitroeiing. Bovendien zijn onze bevindingen suggereren Lgr5
+ cellen zijn een veelbelovend doelwit om IM te keren, en mogelijk hun voortgang in de maag kankers te voorkomen.
Ondersteunende informatie
S1 Fig. Correlatie van intestinale stamcellen (ISC) markers met CDX2
niveaus in niet-tumor maag weefsels.
Geen correlatie gevonden tussen de CDX2
meningsuiting en sommige ISC markers zoals Lgr5
(r 2 = 0,01, p
= 0,59), ASCL2
(r 2 = 0,01, p
= 0,59) PROM1
(r 2 = 0,11, p
= 0,08), LRIG1
(r 2 = 0,06, p
= 0,21) en DCLK1
(r 2 = 0,09, p
= 0,11)
doi:. 10.1371 /journal.pone.0127300.s001
( PPTX)
S2 Afb. Visualisatie van intestinale stamcellen markers van RNA in situ hybridisatie (ISH).
RNA ISH uitgevoerd op met formaline gefixeerd en in paraffine ingebedde specimen van de dunne darm. (A, B) Een groep Lgr5
+ stamcellen worden geïdentificeerd aan de onderkant van crypten, vermengd met Paneth cellen. Andere intestinale stamcellen markers zoals ASCL2
(C, D), EphB2
(E, F) en OLFM4
(G, H) zijn ook gevonden op beperkt tot de crypte basen. Vergroting: A, C, E, G × 100; B, D, F, H × 400
doi:. 10.1371 /journal.pone.0127300.s002
(PPTX)
S3 Fig. Uitingen van intestinale stamcellen markers in type GI IM.
Resterende maag klieren worden vaak gevonden in de basale gebieden van het type GI IM (A en B). RNA ISH blijkt dat Lgr5
(C) en EphB2
(D) uitdrukkingen worden boven de maag klieren gelokaliseerd. Interessant OLFM4
(E) expressie waargenomen in de maagklieren en hoewel de intensiteit is veel zwakker dan die in de metaplastische klieren. Wanneer die maag klieren verdwijnen als IM ontwikkelt (A en F), de distributie van alle Lgr5
(G), EphB2
(H) en OLFM4
(I) is strikt beperkt tot de basale ruimtes. Pijlen geven de resterende maagklieren. Vergroting: A × 40; B, C, D, E, F, G, H, I × 200
doi:. 10.1371 /journal.pone.0127300.s003
(PPTX)
S4 Fig. Intestinale stamcellen markers in intestinale metaplasie (IM) van de maag corpus.
(A en B) een kleine focus van IM in het midden van fundic klieren, aangegeven met pijlen, wordt dezelfde expressiepatronen van Lgr5
(C), ASCL2
(D), en OLFM4
(E) als de IM van antrum. Vergrotingen: A × 100; B, C, D, E × 200
doi:. 10.1371 /journal.pone.0127300.s004
(PPTX)
S5 Fig. Effect van CDX2
van de expressie van intestinale stamcellen (ISC) markers bij maagkanker (GC) cellijnen.
Transfectie van CDX2
in vier GC cellijnen, MKN74 (A ), MKN28 (B), SNU484 (C) en SNU668 (D) aanzienlijk verhoogt de hoeveelheid mRNA van de CDX2
(**, p Restaurant < 0,01; *** p Restaurant < 0,005). De EphB2
expressie wordt slechts marginaal verbeterd door de expressie van CDX2
in drie van de vier GC cellijnen (***, p Restaurant < 0,005). Geen verschil is gevonden in de niveaus van de Lgr5
, ASCL2
en OLFM4
op CDX2
overexpressie (ns, niet significant).
doi: 10.1371 /journal.pone.0127300.s005
(PPTX)