Protivnetno, gastroprotektivna in anti-ulkusnih učinke rdečih alg Gracilaria changii (Gracilariales, Rhodophyta) izvleček

Protivnetno, gastroprotektivna in anti-ulkusnih učinke rdečih alg Gracilaria changii
(Gracilariales, Rhodophyta) izvleček
Abstract
Ozadje
Gracilaria changii
(Xia et Abbott) Abbott, Zhang et Xia , je rdeče alge pogosto najdemo v obalnih območjih Malezije tradicionalno uporabljajo za živila in za zdravljenje različnih bolezni, vključno z vnetjem in želodčnih bolezni. Namen raziskave je bil ugotoviti protivnetno, gastrozaščitnega in anti-ulkusnih dejavnosti, ki so masne spektrometrije standardiziran metanolen ekstrakt Gracilaria changii
.
Metode
metanolen izvleček Gracilaria changii
(izvleček MeOHGCM6 ) smo pripravili in standardizirana z uporabo masne spektrometrije (MS). Protivnetna dejavnosti MeOHGCM6 ekstrakta so bile pregledane z obdelavo U937 celice v svojem diferenciacije s 10 ug /ml MeOHGCM6 ekstrakta. smo spremljali in v primerjavi s obdelamo s 10 nM betametazona, protivnetnega zdravila tumorske nekroze faktorji-α (TNF-α) raven odziva in TNF-α in interlevkin-6 (IL-6) izražanje genov. Gastroprotektivna in anti-ulkusnih aktivnosti MeOHGCM6 ekstrakta so bile pregledane s krmljenjem podgan s MeOHGCM6 ekstrakta v območju od 2,5 do 500 mg /kg telesne teže (B. W.) po indukciji želodca lezij. Proizvodnja sluzi in želodčnega soka pH želodčnem soku in brez beljakovin sulfhydryls (NP-SH) so bile določene in v primerjavi s tem dovedenega s 20 mg /kg telesne teže, Omeprazol (OMP), znanega anti-razjeda drog.
Rezultati
MS /MS analizo ekstraktov MeOHGCM6 kažejo na prisotnost metil 10-hydroxyphaeophorbide
in 10-hydroxypheophytin
, znan klorofila proteinov in več neznanih molekul. Zdravljenje s 10 ug /ml MeOHGCM6 ekstrakt pri diferenciaciji U937 celic močno zaviral raven odziva TNF-α in TNF-α in IL-6 genske ekspresije. Zaviralni učinek je primerljiv s položajem betametazona. Ni citotoksična učinki so bili zabeleženi pri celicah, obdelanih z /ml ekstrakta MeOHGCM6 10 ug. Podgane hranjene z MeOHGCM6 citat na 500 mg /kg telesne teže, kazali zmanjšano absolutnih-etanola povzroča želodčne velikosti lezija s > 99% (p
< 0,05). Ta zaščitni učinek je bil primerljiv s tistim ki ga podeljuje OMP. PH želodčne sluzi zmanjšala na način, ki je odvisen od odmerka od 5,51 do 3,82 in se je znatno povečanje koncentracije NP-SH.
Sklepe
rezultatov iz študije, kažejo, da je masna spektrometrija standardiziran metanolu ekstrakt Gracillaria changii
ima protivnetne, gastroprotektivnih in anti-ulcerogeničnih lastnosti. Nadaljnja preiskava aktivne sestavine ekstrakta in mehanizem delovanja je potrebna tudi v prihodnje.
Ključne besede
Protivnetno Anti-ulkusnih gastroprotektivnih Gracilaria changii
Citokini Betametazon Omeprazol Morske alge razjeda Ozadje
Vnetje je glavna značilnost mnogih bolezni. Zanj je značilna kompleks orkestriranimi interakcij med mediatorji vnetja in vnetnih celic, usmerjenih proti odstranjevanju dražila in celjenje poškodb tkiva [1, 2]. Vnetje je pomemben gostitelj obrambni mehanizem. Vnetje, ki se pojavi na sluznico prebavil trakta, pa povzroča gastrointestinalne ulkus [3]. Razjeda je pogosta velika motnja prebavnega sistema, ki vplivajo na milijone Američanov in še veliko več po vsem svetu [4]. Najpogostejši vzrok za bolezni prebavil, razjede so okužba s Helicobacter pylori
(H. pylori
) [5] in dolgotrajna uporaba nesteroidnih protivnetnih zdravil (NSAID), kot so aspirin in ibuprofen [6]. Pojav antibiotikov nadzora proti H. pylori
se je bistveno zmanjšalo število prebavil primerih razjed v razvitih državah [7]. Bolezen pa je še vedno visoka v drugih državah in je bolezen z uporabo nesteroidnih protivnetnih zdravil povzroča še vedno velik zdravstveni problem v razvitih državah [6, 7].
Zdravljenje vnetja na splošno, je namenjen bodisi zavirati aktivnost vnetnih celic ali inhibiranje proizvodnje vnetnih mediatorjev [8]. Kasneje lahko izvedemo z uporabo drog, kot so NSAID in kortikosteroidi [9]. Zdravljenje prebavil razjede na splošno, je namenjen bodisi odpravo H. pylori
okužbo ali zmanjšanje in oviranja ravni proizvodnje želodčne kisline, ki so odgovorni za erozijo prebavil zaščitnega sloja [10, 11]. Kasneje je mogoče doseči z uporabo drog, kot so histamin (H 2) blokatorji beta, zaviralci kisline črpalke in sluznice zaščitni zdravila [9]. Vendar so bile opisane različne neželeni učinki dolgotrajni uporabi teh zdravil [9]. Poleg tega so proti vnetjem in anti-ulkusnih zdravila uporablja predvsem za lajšanje simptomov bolezni, ne da bi se dejansko zdravljenje ali preprečevanje vnetne in ulcerogeničnih procese.
Razvoj protivnetno in anti-ulkusnih zdravil je nedavno osredotočila na odkrivanje ugodna uporaba zeliščnih, pridobljene iz rastlin izvlečkov, ki so močni in bolj varno za uporabo. Alge našel raste v izobilju off obalna območja mnogih delih sveta predstavljajo velik še neizkoriščen potencial za nov vir terapij [12, 13]. Rdeče alge, na primer, so poročali, da vsebuje aktivne sestavine, ki lahko pomagajo omiliti vnetja prebavil [14], preprečevanje ali zdravljenje želodčnih razjed in raka, ki jih oksidativnega stresa [15, 16] povzročajo, zavirajo vnetne aktivnosti tako, da zavira nastajanje vnetnih mediatorjev [17-19] in povzroči raka apoptozo celic v želodcu [20] in debelega črevesa [21]. Naravne spojine, ki izhajajo iz užitnih alg bi bilo varneje, ki se uporablja kot protivnetno in želodca anti-ulkusnih Therapeutics, kot so bili sprejeti kot hrano in se uporablja v tradicionalnih zdravilih od nekdaj [13].
Rdeče alge, Gracilaria changii
(Xia et Abbott) Abbott, Zhang et Xia našel raste off obalna območja Malezije predstavlja potencialno lokalni vir tega naravno pridobljenih zdravljenja. Trenutno so alge komercialno pobira le za njeno vsebino koloidni agar in lokalne hrane dobrot. Te alge se pogosto uporabljajo kot ljudsko zdravilo za zdravljenje različnih bolezni, vključno z vnetjem in želodčnih bolezni. Namen te študije je oceniti potencialne protivnetne, gastrozaščitnega in anti-ulcerogeničnih dejavnosti teh malezijski rdečih alg, Gracilaria changii
.
Metode
Alge ekstrakt pripravo
Gracilaria changii
(Xia et Abbott) Abbott, Zhang et Xia so bili zbrani iz obalnih voda v Morib, Selangor, Malezija (N2 ° 44 '908', E101 ° 26 '590 "), konec februarja 2003 [22-24]. Alge so bile označene z dr Phang Siew Moi, direktor Inštituta za oceanu in zemeljske znanosti, Inštitut za biološke vede, fakulteta, Univerza v Malaya, kjer so ohranjajo bonov osebki (herbarij ni. PSM 6320 in PSM 6321 ). Alge speremo v sterilni slani vodi s končno izpiranje v sterilni destilirani vodi, kot je prej opisano [22]. Alge so nato sonicirali v vodni kopeli ultrazvočne je in se hranijo pri -70 ° C. Metanolen ekstrakt Gracilaria changii
(MeOHGCM6 ekstrakta) je bila pripravljena na Univerzi v Maleziji Terengganu (UMT) v skladu z metodami, opisanimi [25]. Ekstrakt MeOHGCM6 smo vzdrževali pri -20 ° C pred uporabo.
MeOHGCM6 ekstrakt
analizo profila ekstrakta MeOHGCM6 je bila izvedena na SHIMADZU ultra hitrim tekočinsko kromatografijo (UFLC) Sistem je opremljen z fotodioda diod ultravijolične (PDA UV ) detektor in čas ionska past za letenje (TOF) masni spektrometer (Shimadzu, Japonska). Ločitev smo dosegli na Waters Xbridge C18 kolone (50 mm x 2,1 mm, premer delcev 2,5 um) (voda, ZDA) pri 40 ° C. Mobilna faza obsegali vode [0,1% mravljinčno kislino (BDH Laboratorijske potrebščine, Anglija)]: acetonitrila (BDH Laboratorijske potrebščine, Anglija) (0,1% mravljinčno kislino) pri pretoku 0,50 ml /min z volumnom injekcijsko 10 ul . Elektrosprejnl ionizacijo (ESI) Način s pozitivno /negativno preklapljanje in zunanjo referenco smo uporabili za masne spektrometrije (MS). Slovar Natural Products (CRC Press) z visoko ločljivostjo MS spektrov in strukturne informacije je bila uporabljena za analizo pozitivnih in negativnih ionov spektre skupaj z MS /MS informacij za identifikacijo podobnih komponent.
Human celične linije promonocitno (U937 celice)
U937 celice smo nabavili pri American Type Culture Collection (ATTC, ZDA) in gojimo v Roswell Park Memorial Institute-1640 (RPMI-1640 medij) (Flowlab, Avstralija) [dopolnjen z 1% 10 mM nebistvene aminokislinskih (NEAA) (Flowlab, Avstralija) in 1% od 10 mM L-glutamin (L-Glu) (Flowlab, Avstralija)], ki vsebuje 10% toplotno deaktiviranega fetalnega govejega seruma (FBS) (Flowlab, Avstralija). Celice inkubiramo pri 37 ° C v vlažnem inkubatorju s 5% CO 2.
Diferenciacije U937 celic
smo U937 celice cepimo v 96 vdolbinami celične kulture plošč (Falcon, ZDA) pri gostoti 2 x 10 4 celic /tudi z RPMI-1640 medij, ki vsebuje 2% FBS in vzdržujemo pri 37 ° C v vlažnem inkubatorju s 5% CO 2. Naslednji dan medij vsebuje forbol 12-miristat 13-acetata (PMA) (Sigma-Aldrich, ZDA) v koncentracijah, ki segajo od 0-50 nM dodamo k monocitnih celic U937 inducira diferenciacijo 24 in 48 ur. Medij, ki vsebujejo samo PMA razredčil [dimetilsulfoksidu (DMSO) rešitev (Sigma-Aldrich, ZDA)] smo dodali vzporedno in se uporablja kot nadzor nad vozilom. Na koncu navedeni časovni točki, smo ovrednotili celice za diferenciacijo specifičnih makrofagne celične površine marker izražanja in preživetja celic.
Izražanje CD11b, diferenciacije specifično makrofagne celične površine marker smo določili z obarvanjem celic kot je opisano predhodno [26 27]. Viabilnost celic smo določili s pomočjo trypan modre barve (Sigma, ZDA) izključitev test, kot je prej opisano [28].
citotoksičnosti vsebnosti
U937 celice smo zasejali v 96 vdolbinami celične kulture ploščah z gostoto 2 x 10 4 celic /tudi z RPMI-1640 medij, ki vsebuje 2% FBS in vzdržujemo pri 37 ° C v vlažnem inkubatorju s 5% CO 2. Naslednji dan medij vsebuje MeOHGCM6 ekstrakt (v koncentracijah, ki segajo od 0-100 g /ml) in betametazonom (Sigma, ZDA) (v koncentracijah, ki segajo od 0-100 nM) smo dodali. Medij, ki vsebuje samo MeOHGCM6 ekstrakt in betametazon razredčil [etanola (EtOH) (BDH Laboratorijske potrebščine, Anglija) in DMSO oz] dodamo vzporedno in uporabimo kot kontrolo vozila. Dan po zdravljenju, je bila stopnja širjenje U937 celice določi z CellTiter 96® Non-Radioaktivna Cell orožja kit (Promega, ZDA) strogo naslednje priporoča protokolu proizvajalca.
MeOHGCM6 ekstrakt zdravljenje U937 celic
U937 celice posejali v celične kulture ploščah 24 vdolbinami (Falcon, ZDA) z gostoto 2 x 10 5 celic /tudi z RPMI-1640 medij, ki vsebuje 2% FBS in inkubirali pri 37 ° C v vlažnem inkubatorju s 5% CO 2. Naslednji dan je bila U937 celice inducirane za diferenciacijo z 10 nM PMA 24 ur. Med diferenciacije, so U937 celice obdelamo z izvlečkom MeOHGCM6 ali betametazona v fiziološki koncentraciji. Na 0, je bilo 8, 16 in 24 ur po zdravljenju, supernatant in celice poberemo in testirali-alfa TNF stopnjo odzivnosti in TNF-a in IL-6 genske ekspresije.
TNF-α raven odziva
TNF a stopnja je bila izmerjena z BD OptEIA ™ Human TNF (TNF-alfa) ELISA komplet II (BD Biosciences, ZDA) po protokolu proizvajalca.
TNF-α in IL-6 izražanje genov
Total RNA iz celične kulture smo izolirali s pomočjo TRI Reagent® (Molekularna raziskovalni center, Inc., ZDA) in obdelan z DNazo (Promega, ZDA). RNA smo obrnjene prepisal (cDNA) z nadpisano ™ II reverzne transkriptaze (Invitrogen, ZDA). CDNA smo nato uporabili za izvedbo kvantitativne PCR v realnem času z uporabo SYBR® Green PCR glavno mešanico (Qiagen, Nemčija) na DNA motorja Opticon II® (MJ Research, Bio-Rad, ZDA), kot je opisano predhodno [29]. Oligonukleotidov primerji, uporabljeni so bili naprej 5'AAGAGTTCCCCAGGGACCTC in nazaj 5'GCTTGAGGGTTTGCTACAAC za TNF-a; naj 5'GAAAGGAGACATGTAACAAG in nazaj 5'CCAGGCAAGTCTCCTCATTG za IL-6; in pošljejo 5'GCGAGAAGATGACCCAGATC in povratne 5'GGATAGCACAGCCTGGATAG za beta-aktin (β-aktina) (notranji sklic).
Animals
ženska Adult Sprague-Dawley, starih od 7 do 8 tednov in tehta 160-200 g bilo uporabljena za študijo. Protokol za poskuse na živalih je odobril Institucionalni odbor za etiko v poskusih na živalih, Univerze v Malaya [odobritve številka: MP /08/06/2010 /SMH (R)]. Živali so bili pridobljeni iz University Putra Malezije (UPM). Živali so bile nastanjene individualno v kletkah s široko mesh žice dna za preprečevanje coprophagy. So bili shranjeni v nadzorovano temperaturo prostora, ki je dobro prezračen, s hrano in vodo, na 12-urni cikla svetloba /tema v celotni raziskavi. Vse podgane so bile brez hrane 48 ur, vendar pa so imeli prost dostop do pitne vode do 2 uri, preden jih podvržemo na ulcerogens.
Želodčne poškodbe, povzročene EtOH
Podgane smo naključno razdelili v 7 skupinah z vsako skupino ki obsega 6 podgan. Skupina 1 so dajali z 10% Tween 20 (izvleček razredčil) (DOLB Laboratorijske potrebščine, Anglija) in je služil kot negativno kontrolno skupino. Skupina 2 je dobil 500 mg /kg telesne teže, ekstrakta nepovezanih rastlinski ekstrakt enakovredne MeOHGCM6 pripravimo podobno vzporedno kot MeOHGCM6 izvleček služi kot kontrolni skupini nespecifična rastlinski izvleček (NSPE). Skupina 3 je bil obdelan z OMP (Chemical Company Malezije, Malezija) pri 20 mg /kg telesne teže, in je služil kot pozitivni kontrolni zdravljenje skupini. Preostali skupina 4, 5, 6 in 7 prejeli 4 različnih koncentracij ekstrakta MeOHGCM6 variira od 2,5 - 500 mg /kg telesne teže, oz. Po 30 minutah predobdelave so vse živali dajemo z absolutnim EtOH po oralni poti. Eno uro po dajanju smo živali žrtvovali tako da jih prekomerno doziranje z dietiletrom (BDH Chemicals Ltd., Anglija). trebuh pri podganah je bil seciramo in požiralnik, ki je najbližja Kardije in napihnjen trebuh na pilorično mišice zapiralke je bil takoj vezani na vozel z uporabo niza, da se prepreči uhajanje vsebine želodca. Želodec smo hitro odstranili in potopljena v vodi.
Merjenje želodčne sekrecije
bila vsebina želodca vsake podganjega želodca sesalnih in nežno postrgano uporabo lopatico. Želodec sok, ki vsebuje delce hrane zavržemo. Pospravljen želodca sluz je stehta elektronske ravnotežje (Mettler Toledo, Švica). Količina želodčnega soka smo merili z merilno valj. PH vsebine želodca je bila izmerjena z merilnikom digitalni pH (Crison Instruments, SA, Španija).
Vrednotenje bruto želodca lezij
Po žetvi je bil želodec takoj sprati s fiziološko raztopino in pregledajo pod mikroskopom seciranje (1,8 x) s kvadratnim omrežja okular. Glandularni del želodca smo ocenili za nastanek razjede. Skupna ulcerating površina (UA) od krvavitev poškodb za vsak želodec je bila merjena z plannimetry (mm 2) in odstotek inhibicije smo izračunali po naslednji formuli: Zaviranje %
=
UA
nadzor -
UA
obdelan /
UA
nadzor ×
100
Določanje proizvodnje neproteinskih sulfhydryls (NP-SH)
želodca sluznice ravni NP-SH smo izmerili kot je opisano predhodno [30], z manjšo modifikacijo. Na kratko smo žlez želodec stehtali in homogenizirali v epruvete, ki vsebujejo ledeno-hladni 0,02 M etilendiamintetraocetno kislino (EDTA) (GibcoBRL Life Technologies, ZDA) (pH 8,9). Alikvote iz homogenatov zmešamo z destilirano vodo in 50% trikloroocetno kislino (Sigma Chemical Co., ZDA). Zmes inkubiramo pri konstantnem mešanju 10 minut pri 4 ° C in nato centrifugirali pri 3000 x g 15 minut. Zmes smo nato testirali na ravni NP-SH uporabo glutation analiznega kompleta (Sigma Chemical Co., ZDA) v skladu s protokolom proizvajalca.
Statistična analiza
so vsi podatki, izraženo kot povprečje ± standardni odklon (SD) ali središčnica (25% in 75% kvartilni) iz dveh ali treh neodvisnih poskusov za protivnetnimi študij in sedem neodvisnih poskusov za gastroprotektivnih in anti-ulkusnih študijah. ANOVA (enosmerna analiza variance in dvosmerno analizo variance) smo uporabili za primerjavo med skupinami in za poročanje statistično značilnost "p
" glede na kontrolno skupino. Vrednost p
< 0.05 smo imeli za statistično značilne. Vse statistične analize smo opravili s pomočjo GraphPad Prizma 4.0 Programska oprema (ZDA) in SPSS verzija 16,0 programske opreme (SPSS Inc, Chicago), oz.
Rezultati
Enotna MeOHGCM6 citat profil
LC /MS analize različnih serij od MeOHGCM6 ekstrakta smo izvedli, da je zagotovljena ponovljivost in doslednost pridobivanja. Serija 1 in 2 MeOHGCM6 ekstrakta, ki se uporablja v študiji, so pokazali zelo podobne množične spektralnih profile in količino večjih množic (slika 1A-C). Analiza spektrov in primerjava z Dictionary of Natural Products, CRC Press opredelila posebnosti mase kot 457.405, 645.280 in 887.579. Ugotovljena masa v pozitivni ion spekter m /z 457.405, je bilo drobce 398.327 (osnovnega vrha), 380.316 in 158.082. Nevtralna izguba 59.077 mase je morda kaže na izgubo trimetilamin. To kaže, da se lahko spojina vsebuje trimetilamonij del. MS in MS /MS podatki o visoki ločljivosti ni mogla dokončno ugotoviti nobenih znanih spojin iz Slovarja Naravni izdelki. Mase m /z 645 in 887, vendar pa je pokazal izrazito združenje dvema znanima klorofilov, metil 10-hydroxyphaeophorbide
in 10-Hydroxypheophytin
z ustreznim UV absorbanc opazili pri analizi PDA (tabela 1 ). Slika 1 profiliranje različnih serij MeOHGCM6 ekstrakta. ESI način s pozitivno /negativno preklapljanje in zunanjo referenco smo uporabili za MS z uporabo sistema Shimadzu UFLC. Skupni pozitivni ionski spektri analiziramo za identifikacijo podobnih komponent iz dveh različnih serij ekstrakta MeOHGCM6 uporabljena v študiji. (A) MeOHGCM6 ekstrakt (Serija 1; M6-1). (B) MeOHGCM6 ekstrakt (Serija 2, M6-2). (C) Primerjava intenzivnosti najbolj bogatih mas obeh MeOHGCM6 ekstrakt serije uporabljena v študiji.
Tabela 1 Struktura oznake za najpomembnejšo množično prisotni v MeOHGCM6 ekstrakta z uporabo LC /MS
Mass (ion)
Najdeno v seriji
Možni ID
417.298
1, 2
najverjetneje onesnaževalec
457.405 *
1, 2
neznani
461,326
1, 2
najverjetneje onesnaževalcev
505,353
1, 2
najverjetneje onesnaževalcev
573.256
1, 2
neprepoznanih
645,280
1, 2
metil 10-hydroxyphaeophorbide
743,636
1, 2
Neznani
887.579
1, 2
10-Hydroxypheophytin a

Dictionary of Natural Products, CRC Press z visoko ločljivostjo MS spektrov smo uporabili za analizo celotnega pozitivni ion spektre za identifikacijo možnih kemičnih sestavin.
* MS /MS (relativne intenzitete%) 457,405 → 398.327 ( 100%), 380,316 (50%), 158,082 (40%).
diferenciacija specifične makrofagne celične površinski označevalec hranilne U937 celicah
se diferencirana U937 celice odlikuje z izraženimi monocitov /makrofagov rod specifične CD11b površinski markerski protein [26]. V naši raziskavi smo izraz CD11b označena z intenzivnim rjavkasto modro označevanje na površini celice [27]. Izraz CD11b se je močno povečala, ko so bili U937 celice povzroča razlikovati z večjo koncentracijo PMA (1, 10 in 50 nm) (slika 2, slika 3A). Ugotovitev, kažejo, da je zdravljenje z 10 ali 50 nM PMA za 24 ur ali 1 nM PMA za 48. uro diferencirana U937 celice precej nad 50% celične kulture. Slika 2 Izražanje diferenciacije specifične makrofagne celične površine marker na različno U937 monocitnih celic. U937 monocitne celice smo inducirane za diferenciacijo z (A) 0 nM PMA 24 ur; (B) 0 nM PMA 48 ur; (C) 1 nM PMA 24 ur; (D) 1 nM PMA 48 ur; (E) 10 nM PMA 24 ur; (F) 10 nM PMA 48 ur; (G) 50 nM PMA 24 ur in (H) 50 nM PMA 48 ur. Celice smo obarvali z uporabo Imunohistokemijsko za ugotavljanje prisotnosti CD11b, makrofagne celične površine marker. Diferencirano U937 monocitne celice so označene z intenzivnim rjavkasto modre madeže na površini celic diferenciranih celic. Celice so vidna pri 20 x povečavi pod svetlem uporabo obrnjeno mikroskopom in fotografirali s pomočjo Nikon D70 fotoaparat (Nikon, Japonska). Eden arhetipski set fotografij iz treh ločenih poskusih prikazani.
Slika 3 Diferenciacija specifičnih U937 monocitne celice makrofagne celične površine dvojno podajo izražanja in sposobnost preživetja celic določanje. U937 monocitne celice smo inducirane za diferenciacijo z različnimi koncentracijami PMA za 24 in 48 ur. (A) Odstotki diferenciranih celic je bilo doseženih s prisotnostjo CD11b na celični površini. (B) Odstotek živih celic je bilo doseženih z uporabo trypan modro izključitev testom. Odstotek diferenciranih ali živih celic na celotnih celic je enaka pred poskusom z uporabo različnih koncentracij PMA in inkubacijske dobe. Podatki so predstavljeni kot povprečje ± SD od treh neodvisnih poskusov z "*", str
< 0.05 predstavljajo pomembnosti razlik v primerjavi s skupino, ki niso bile sprožene razlikovati.
Cell sposobnost preživetja na diferenciranih U937 celic
izvedljive diferenciranih U937 celice dosegel z trypan modro barvilo izključitev testom. U937 celice preživetja so pokazali znatno znižanje doze odvisno odstotek živih celic, ko inducirane za diferenciacijo z 1, 10 in 50 nM PMA (slika 3B). Ugotovitev je predlagal, da je bilo 90% diferenciranih U937 celic še vedno izvedljiv po zdravljenju z 1 ali 10 nM PMA za 24 ur ali 1 nM PMA za 48. uro.
Citotoksičnosti MeOHGCM6 pridobivanje na U937 celic
citotoksične učinke ekstrakt MeOHGCM6 in betametazon na U937 celice smo določili z računanjem hitrost proliferacije celica. Obdelane U937 celic s MeOHGCM6 ekstrakt pri 0,05, 0,5, 1 in 5 ug /ml razstavljene proliferativnih paketih 117.39% (108.48% 122,10%), 152,04% (149,36%, 154,72%) (p
< 0,05) , 145,60% (137,48% 149,11%) (p
< 0,05) in 118,49% (112,01% 133,28%), v tem zaporedju (slika 4A). Zdravljenje z MeOHGCM6 citat na 10 mikrogramov /ml zmanjša stopnjo celične proliferacije na 87.00% (82,43%, 89,62%). Obdelane U937 celice z betametazonom razstavljene znatnega zmanjšanja doze odvisno v svoji stopnji proliferacije (slika 4B). Pri nižjih koncentracijah betametazona (0,1, 1, 5 in 10 nm), stopnja proliferacije celic je bila 110,35% (92,20% 115,83%) 113,75% (89,56% 122,98%), 94,59% (85,56% 101,93%) in 80,48% (77,78% 110,48%), oz. Slika 4 citotoksičnosti učinke različnih koncentracij MeOHGCM6 ekstrakta in betametazonom na monocitnih celic U937. Stopnja proliferacije monocitnih celic U937 zdravljenih z naraščajočimi koncentracijami (A) MeOHGCM6 ekstrakta in (B) betametazona bila določena v obdobju 24 ur, ki ga opravlja MTT testom. Odstotek proliferacije celic je glede na število celic cepimo pred administriranje različne odmerke MeOHGCM6 ekstrakta in betametazonom. Koncentracije MeOHGCM6 ekstrakta, ki povzročajo 30% (G130), 50% (G150) in 70% (G170) inhibicije celične proliferacije so ekstrapolirajo iz parcele (s puščico). Rezultati so izraženi kot srednje vrednosti (25% in 75% kvartil) iz dveh neodvisnih poskusov.
Učinki MeOHGCM6 citat obravnavo na ravni odzivnosti TNF-alfa med diferenciacijo U937 celic
Učinki MeOHGCM6 citat obravnavo na ureditev stopnjo odzivnosti TNF-alfa med diferenciacijo v U937 celice so raziskovali uporabo ELISA. Stopnja odziva TNF-α je dosegel najvišjo stopnjo 43,28 ± 5,15 pg /ml na 8 ur, ko so bili U937 celice povzroča razlikovanje (slika 5A). V prisotnosti 10 mg /ml MeOHGCM6 ekstrakta med diferenciacije U937 celic, stopnja odziva TNF-α občutno zmanjšala do 8 ur [0,14 ± 0,28 pg /ml (p
< 0,001)] in je bila primerljiva s tisto opazili v prisotnosti betametazona [0,28 ± 0,56 pg /ml (p
< 0,001)]. Slika 5 MeOHGCM6 ekstrakt obravnavo na ravni odzivnosti TNF-alfa in TNF-a in IL-6 genske ekspresije v diferenciacijo monocitnih celic U937. V monocitne celice U937 je bilo povzročene za razlikovanje pri 10 nM PMA. Med diferenciacije smo U937 celice monocitnega obdelamo z MeOHGCM6 ekstrakta. (A) Raven Odziv TNF-α so količinsko ELISA. (B) na TNF-α in stopnje izraženosti (C) IL-6 gena smo kvantificirali z uporabo QRT-PCR. Rezultate smo izrazili kot povprečje ± SD od četverk testov.
Učinki MeOHGCM6 ekstrakt obravnavo na TNF-a in IL-6 genske ekspresije v diferenciacijo U937 celic
regulacijo TNF-a in IL-6, ki ga MeOHGCM6 izločijo zdravljenja med U937 celic diferenciacija je nadalje raziskovali na ravni izražanja genov z uporabo QRT-PCR. stopnja izražanje genov TNF-α dosegla vrh po 6 urah (3.16 ± 0,48 kopij /aktinskih) v diferenciacije U937 celic (slika 5B). TNF-α raven izražanje genov v prvih 6 urah [0,52 ± 0,28 kopij /aktin (p
< 0,001)] zmanjšala U937 celic diferenciacije v prisotnosti 10 ug /ml MeOHGCM6 ekstrakta. Zmanjšana v TNF-alfa ravni genske ekspresije U937 celic med diferenciacijo med zdravljenjem z 10 g /ml je MeOHGCM6 primerljiva ali boljša od ugotovitev iz zdravljenja z 10 nM betametazona [0,55 ± 0,42 kopij /aktina (p
< 0,001)]. IL-6 nivo izražanja genov so pokazale znatno povečanje in dosegla 0,68 ± 0,09 kopij /aktin po 12 urah diferenciacije U937 celic (slika 5C). Znižanje IL-6, genski ravni izražanja so opazili, da je 0,10 ± 0,01 kopij /aktin, 0,23 ± 0,02 kopij /aktin (p
< 0,01), 0,37 ± 0,04 kopij /aktin (p
< 0,001 ) in 0,45 ± 0,05 kopij /aktin (p
< 0,001) pri 3, 6, 9 in 12 ur, vsakokrat ko je bilo U937 celice med diferenciacijo obdelamo s 10 ug /ml MeOHGCM6 ekstrakta. Zaviranje IL-6 stopenj genske ekspresije v prisotnosti ekstrakta MeOHGCM6 bila primerljiva s tisto iz betametazona.
Profilaktičnih učinki obdelave MeOHGCM6 ekstrakt na podganah želodčne vsebine naslednje EtOH inducirane akutne želodčne sluznice poškodbe
želodca sluz izločanje, želodčna obseg sok in želodčni sluz pH smo določili iz vsebine želodca v podgan želodca predhodno zdravljeni z MeOHGCM6 ekstrakta po EtOH hranjenja. 2,45 ± 0,25 g želodca sluzi in 1,75 ± 0,20 ml želodčnega soka je bilo vrniti iz želodca podgan, krmljenih z le ekstrakta redčila (tabela 2). 1,54 ± 0,31 g želodčnih sluzi in 0,96 ± 0,25 ml želodčnega soka in 1,68 ± 0,19 g želodčnih sluzi in 0,96 ± 0,16 ml želodčnega soka je bilo vrniti podganah predhodno zdravljenih s 250 in 500 mg /kg telesne teže, od MeOHGCM6 izvleček oz. V primerjavi je 2,31 ± 0,42 g želodca sluzi in 1,15 ± 0,36 ml želodčni sok vrniti podgane predhodno obdelamo z 20 mg /kg b.w OMP. 2,75 ± 0,49 g želodca sluzi in 1,75 ± 0,28 ml želodčnega soka smo pobrali iz podgan, krmljenih s podobno pripravljeno nepovezano rastlinski ekstrakt, ki je služil kot kontrolo NSPE. Vsi avtorji prebrali in potrdil končni rokopis.

• Antioksidant in želodca zaščito celice prostaglandini lastnosti lovorike sieberiana korenine lubja ekstrakta kot anti-ulcerogeni agent
• Genetska variabilnost CYP3A4 in CYP3A5in primarni jeter, želodca in debelega črevesa patients