Plos ONE: Electroacupuncture na ST36 ameliorates praznjenje želodca in reši omrežij intersticijske celice iz Cajal v želodcu diabetično Rats

Povzetek

izčrpavanje intersticijske celice Cajal (ICC) je certificiran v želodcu sladkornih bolnikih . Čeprav Electroacupuncture (EA) na ST36 je učinkovita terapija za uravnavanje želodčne gibljivost, mehanizmi EA na ST36 na praznjenje želodca in mrež ICC še vedno ni pojasnjen. Namen te raziskave je bil raziskati učinke EA na praznjenje želodca in o spremembah omrežij ICC. Podgane so bili randomizirani v nadzoru, diabetičnih podganah (DM), sladkorno boleznijo podgane s placebom EA (DM + SEA), diabetičnih podganah z nizke frekvence EA (DM + LEA) in diabetičnih podganah z EA skupin visokofrekvenčnih (DM + Hea). Ekspresijo c-kit v vsako plast želodčne stene je bila ocenjena z Western blotting-om. Širjenje ICC je opredeljena immunolabeling c-kit in Ki67 kot je apoptoza od ICC pregledal TUNEL barvanjem. Rezultati so bili kot sledi: (1) praznjenje želodca huje odložena v skupini DM, vendar pospešeno v skupini LEA in HEA, zlasti v skupini LEA. (2) Izraz c-kit v vsakem sloju je očitno zmanjša skupini DM, ampak tudi navzgor reguliranim v skupini LEA in HEA. (3) izdatno proliferated ICC (c-kit + /Ki67 +) tvori košatimi omrežja s c-kit + celice so bile v skupini LEA in HEA opazili, medtem ko apoptotske celice (c-kit + /TUNEL +) smo komaj ujeli v skupini LEA in HEA . Kolektivno, nizke in visoke frekvence EA na ST36 reševanje poškodovane mreže ICC z inhibicijo apoptoze in izboljšanje širjenja v želodcu diabetičnih podgan, kar v izboljšanem praznjenja želodca

Navedba. Chen Y, Xu JJ , Liu s, Hou XH (2013) Electroacupuncture na ST36 ameliorates praznjenje želodca in reši Networks intersticijske celice iz Cajal v želodcu diabetične podgane. PLoS ONE 8 (12): e83904. doi: 10,1371 /journal.pone.0083904

Urednik: Yvette Tache, University of California, Los Angeles, Združene države Amerike

Prejeto: 9. avgust 2013; Sprejeto: 8. november 2013; Objavljeno: 31. december 2013

Copyright: © 2013 Chen et al. To je odprtega dostopa članek razširja pod pogoji Creative Commons Attribution License, ki omogoča neomejeno uporabo, distribucijo in razmnoževanje v katerem koli mediju, pod pogojem, da prvotni avtor in vir knjižijo

Financiranje:. Delo je bila delno podprta s sredstvi iz državnega Natural Science Foundation Kitajske (št 30670775, št 81270458). Nobena dodatna zunanja sredstva, prejeta za te študije. Med financerji imel nobene vloge pri oblikovanju študije, zbiranje in analizo podatkov, sklep, da se objavi, ali pripravi rokopisa

nasprotujočimi si interesi.. Avtorji so izjavili, da ne obstajajo konkurenčni interesi

Uvod

Vrste prebavne motnje gibljivosti od funkcionalno dispepsijo gastropareze močno vplivajo na kakovost življenja bolnikov z desetletji sladkorne bolezni [1]. Gastroparezo, označen s zapoznelega praznjenja želodca, nastopi do 30% posameznikov diabetesa tipa 1 [2]. Čeprav so poskušali različne terapevtskih posegov, vključno s farmacevtsko zdravljenje in nekatera zdravljenja brez drog, so kurativni učinki za gastroparezo še vedno nezadovoljiva.

Akupunktura je empirično uporablja za zdravljenje prebavnih motenj v vzhodnih državah že tisoče let. Electroacupuncture (EA), ki je sprememba tradicionalnih akupunktura, je bolj primeren za klinične in temeljnih raziskovalnih nastavitve za njeno ponovljivost. Zusanli
(ST36) je pogosta Akupunkturna točka pogosto uporablja za zdravljenje bolezni prebavil. V zadnjih letih so bili učinki EA v ST36 na želodčni gibljivost ocenili v številnih študijah. Za živali, EA na ST36 znatno povečal želodca gibljivost v zavestnih podganah in izboljša zakasnelo praznjenje želodca pri diabetikih podganah-STZ povzroča [3], [4]. Poleg tega je pri ljudeh, EA na ST36 pospešeno praznjenje želodca in razrešuje dispepsije simptome pri funkcionalnih bolnikih dispepsije in sladkornih posameznikov gastroparezo [5], [6]. Čeprav je v teh študijah je sprejel samo nizke frekvence EA, so poročali tudi visokofrekvenčni EA za spodbujanje požiralniku in distalni debelega črevesa gibljivost pri živalih [7], [8]. Tako so učinki različnih frekvenc EA na želodcu gibljivost in temeljnih mehanizmov opozoriti ljudi.

Vmesne celice Cajal (ICC), uveljavljeno kot so srčni spodbujevalniki, ki ustvarjajo in razmnoževalnega počasne valove, ki so pridobili pomen pri urejanju prebavil gibljivost več desetletij [9]. Tri podvrste ICC vključno intramuskularno Mednarodnem kazenskem sodišču (ICC-IM), myenteric ICC (ICC-MY) in Submukozno ICC (ICC-SM) obliki nepoškodovane omrežjih v želodčni steni [10]. Mreže ICC niso statične tudi v fizioloških pogojih; apoptoza in transdifferentiation vodijo do izgube ICC, medtem ko se ICC mogoče obnoviti tudi orožja, dopolnitev iz matičnih celic in povečanje preživetja [11], [12]. Obsežne raziskave so dokumentirane, da izgube in poškodbe ICC povzročila neprilagojeno prebavno premičnost v živalskih modelih in pri bolnikih s sladkorno boleznijo [13] - [15]. V zadnjem času, nadaljnje študije poročajo, da je EA omogočila povečanje debelega ICC v počasnih tranzit zaprtje podganah in podganah po enteroenterostomy [16], [17]. Naša nedavna študija je tudi pokazala, da bi EA na ST36 obnoviti in slabovidne MKS v debelem črevesu diabetičnih podgan [18]. Medtem pa je zaskrbljen, da EA spodbuja proliferacijo in inhibira apoptozo možganske celice v hipokampusu [19], [20]. Vendar pa je prazna o učinkih EA na ST36 na ICC v diabetično gastroparezo in mehanizem, ali gre za širjenje in apoptoza od ICC

Zato so bili cilji te študije:. 1) oceni učinki različnih frekvenc EA na praznjenje želodca; 2) raziskavo učinkov EA na ST36 na ICC omrežij v diabetičnih podganah; 3) potrditi, ali so bili vključeni apoptozo in širjenje ICC.

Materiali in metode

Etika izjava

Podgane prejel človeško skrb in ta študija je bila izvedena dosledno v skladu s priporočili v navodilih za nego in uporabo laboratorijskih živali iz National Institutes of Health, z vsemi dejavnostmi, ki jih etičnih smernic iz odbora za živali oskrbe in uporabe Tongji medicinski fakulteti, Huazhong Univerze za znanost in tehnologijo odobrenih.

Živali

Sprague-Dawley tehtal 250-300 g so bili izbrani v tej študiji. Podgane so bili pridobljeni iz eksperimenta Center Živalski Tongji Medical College (Huazhong University of znanost in tehnologijo, Wuhan, Kitajska) in se hrani v normalnih laboratorijskih pogojih (22 ° C, 12/12 h svetlo-temno cikla) ​​s prostim dostopom do hrane in sterilna voda. Po enem tednu prilagodljivih hranjenja, so bile živali uradno sprejeta v naših poskusih.

diabetične modela

Po noči posta pa prost dostop do vode, so bili modeli ustanovljena z enim samim intraperitonealno injekcijo streptomicinsko v podgane (STZ, 60 mg /kg, to je 1 ml /100 g telesne teže, Alexis Biochemicals, San Diego, CA, ZDA), sveže raztopljene v 20 mM citrat raztopino pufra (pH 4.5, Sigma, St Louis, MO, ZDA) . Kontrolna skupina je vbrizgali enak volumen citratnega pufra. Vse podgane so bile nastanjene v enakem stanju, pomanjkanja vode za 4 ure, vendar ad libitum
hranjenja. En teden po injekciji, smo diabetesa potrjena v različnem času z merjenjem glukoze kapljico celotne krvi, dobljenega s preluknjanjem konico repa plovila. Raven glukoze v krvi ≥16.7 mmol /L je bila sprejeta kot standard za uspešen model. glukoze v krvi je bil pregledan pravočasno pred injiciranjem in 1., 4. in 8. tednu po injekciji. Poleg tega je bilo hujšanje, polidipsija in poliurija dodatne kazalnike za dokaze uspešno spodbudo diabetične podganah.

eksperimentalne protokole

Podgane so naključno razporedili v pet skupin (10 podgane vsaka skupina), vključno z nadzorom diabetična skupina (DM), sladkorno boleznijo podgane s placebom EA skupine (SEA, samo akupunkture brez električnega toka, 30 min /dan), diabetičnih podganah z nizko frekvenčni EA skupine (LEA, 10 Hz, 1-3 mA, 30 min /dan ) in sladkorno boleznijo podgane z visokofrekvenčnim EA skupine (HEA, 100 Hz, 1-3 mA, 30 min /dan). EA je bila izvedena na Akupunkturna točka ST36 z električnim stimulatorjem (G6805-2A; Shanghai Huayi Medical Instrument Factory, Šanghaj, Kitajska) vsak dan za 8 tednov. Električni tok je bila določena v skladu z rahlo tresenje spodnjih okončin. Da bi dosegli namen izločitvi vpliva stres, so bile živali lahko prosto giblje v svojem ohišju med postopkom EA.

Po zaporednih intervencije za 8 tednov, smo testirali podgane v vsaki skupini za praznjenje želodca. Nato so se žrtvovali, in primerki antruma so skrbno pridobljeni. Vsak vzorec je bil razdeljen na več delov, je bil razmeroma majhen, shranjeno pri -80 ° C za zahodni blot analizo po plasti sveže ločen in kos je bila dana v 2,5% glutaraldehid za elektronsko mikroskopijo, preostanek pa so bile določene v fiksiranje, Zamboni je (2 % paraformaldehid in 1,5% nasičeno raztopino pikrinska kislina v 0,1 M raztopini fosfatnega pufra (PBS, pH 7,4) za imunofluorescenco.

Merjenje praznjenje želodca

praznjenje želodca je izvedla spremembo, kot je opisano prej [21]. Test obrok vsebuje fenol rdečega (0,5 mg /ml) kot indikator in karboksimetilcelulozo (15 mg /ml) smo stalno mešali, nato pa je potekala pri 37 ° C. po so prejeli hrane odvzeta noči podgane 2 ml fenol Rdeč obrok dajemo preko gavaža igle. Trideset minut kasneje smo živali hitro žrtvovali s cervikalno dislokacijo. Celoten želodca odstranimo previdno po ligaciji na Kardije in pilorusa in nato želodec je bil odprt, njegova vsebina pa smo prelili v epruveto in speremo z 40 ml destilirane vode. Na koncu poskusa smo raztopino NaOH (20 ml, 1 M) dodanega k vsaki cevki, da razvije največjo intenziteto barve. Absorbanco vzorca odčitamo pri 560 nm s spektrofotometrom (Hitachi, U-2900) je bil odvisen od količine fenola rdečega ostane v želodcu. Stopnja praznjenja želodca je bila izračunana po naslednji formuli: praznjenje želodca (%) = 100 x (1 - X /Y), X predstavlja absorbanco fenol rdečega zbrane iz želodca živali žrtvovali 30 minut po testnem obroku. Y predstavlja absorbanca fenol rdečega izterjati iz želodca kontrolne živali, ubitih takoj po dajanju preskusne obroku.

Western blot

Sveže vzorce želodčnega antruma bila zabodena v Sylgard posodo in vsak plast smo previdno ločen z ostrim seciranje po odstranitvi sluznice. S pomočjo fino koničasto pinceto in mikrokirurške škarje pod Dissecting mikroskopom, smo pridobili plasti ICC-SM, ICC-IM in ICC-MY. Vse manipulacije smo izvedli na ledu, da se prepreči izgubo beljakovin. In potem so bili vzorci ICC-SM, ICC-IM in ICC-MY shranjena pri -80 ° C.

Fresh zamrznjeni vzorci so bili zdrobljeni v celični suspenziji in homogenizirali v RIPA pufrom (podeželju, Temecula, CA , ZDA) z zaviralcem proteaze (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO, ZDA). Zmes centrifugiramo pri 12000 g 10 minut pri 4 ° C in supernatante zberemo kot celokupnega proteina. Koncentracijo proteina smo določili z metodo Bradfordu. Pozneje smo ekvivalenta 50 mg izločenih proteinov postopoma ločimo s 10% natrijevim dodecilsulfat poliakrilamidnem gelu z elektroforezo (SDS-PAGE) in prenese na PVDF membrano (Millipore, Bedford, MA, USA). Čemur blokiranje nespecifična vezavna madežev s 5% nemastno mleko v prahu v Tris-pufrom, ki vsebujejo 0,1% Tween 20 (TBST) pri sobni temperaturi 1 uro, so bile te membrane inkubirali s primarno protitelo za anti-c-kit (1:200, Santa Cruz Biotechnology, Inc), čez noč pri 4 ° C, skupaj z kunčjega anti-mouse aktin (1:400, santa Cruz Biotechnology, Inc) je služila kot notranje kontrole. Po treh izpiranjih s TBST, membrane inkubirali s HRP-vezan sekundarni protiteles (HRP-vezan kunčjega anti-kozjega in HRP-vezan kozjega anti-miš, 1:5000) za 1 h pri sobni temperaturi. Sledila treh pranjih v TBST, so trakovi vidne tudi s kemijsko reakcijo z izboljšano kemiluminiscentnim sredstvom (Amersham Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ) in madež je bil izpostavljen avtoradiografijo. Analiza denzitometrija je opravil Količina One (Bio-Rad Tehnična služba Department, različica 4.6.2).

študije Imunofluorescentne

Za celih-mount priprav obarvanje, želodec je bil odprt in sprali več krat s PBS. Želodca antruma je bil pripet na Sylgard posodo in raztegne do 150% svoje prvotne velikosti, in se nato pritrdi fiksativa Zamboni za 24 ur pri sobni temperaturi. Osnovna tkiva speremo s PBS in potem smo sluznica odstranili z ostrimi seciranje. ICC-SM lociranje na Submukozno površini krožnega mišične plasti, ICC-IM prepletanja med gladkih mišičnih celic in ICC-MY skupaj z myenteric živčnih pleksusa so bili skrbno pripravljeni s pomočjo fino koničastih klešč in mikrokirurški škarje pod seciranje mikroskopom.

postopki imunskim barvanjem za odkrivanje ICC omrežja in širjenju bilo prej opisano [22]. Ki67, jedrska beljakovin, izražena v vseh aktivnih fazah v celici in izginil v počiva celici, je bil uporabljen za odkrivanje proliferativni ICC [23]. Po spiranju šestkrat s PBS 1 uro, je bilo tkiva inkubirali s 5% normalno govejega seruma v PBS, ki vsebuje 0,3% Triton X-100 (PBST) 1 uro pri sobni temperaturi in nato inkubirali s primarno protiteles c-kit (1:100 , santa Cruz, CA, ZDA) in Ki67 (1:100, Abcam, Cambridge, Velika Britanija), čez noč pri 4 ° C. Po izpiranju v PBST 30 minut, je bil radioinkorporacijo odkrivati ​​s Alexa Fluor 594 konjugiranih sekundarno protitelo (osel anti-kozjega IgG, 1:100) in Alexa Fluor 488 konjugiranih sekundarno protitelo (osel anti-RABIT IgG, 1:100) pri 37 ° C za 1 uro, čemur sledi izpiranje v PBS trikrat 30 minut, in inkubiramo z DAPI (0,1 mg /ml; Sigma, St. Louis, MO, ZDA) 30 minut kot nasprotnega madež jedrski. Sprati v PBS dvakrat, so tkiva razgrnjeni na diapozitiv. Konfokalna lasersko skeniranje mikroskop (Nikon, Japonska), je bila uporabljena preučiti immunolabeled tkiva. Da se vključijo vse ravni pozitivno obarvanih celic in procesov, je optimalna Z zlaganje konfokalnim slike nastavljen na 5 mikrometrov intervalih.

apoptozo ICC so bile odkrite pri TUNEL označevanje, Kit za zaznavanje apoptoza (Roche, Nemčija). Celoten-Mount pripravke smo inkubirali s primarno protitelo c-kit (1:100, Santa Cruz, CA, ZDA) preko noči pri 4 ° C in sekundarnega protitelesa (Alexa Fluor 594 osel anti-kozjega IgG, 1:100) pri 37 ° C 30 min. Pod navlaženi in temnem okoliščino, so tkiva inkubirali s TUNEL reakcijskega pufra (rešitev za označevanje: encimske raztopine = 9:1) pri 37 ° C 1 uro. Po speremo trikrat po 30 minut, da se odstranijo nepovezano fluoresceinsko-dUTP in inkubirali z DAPI kot nasprotno madež jedrske so pod konfokalnim laserskega skeniranja mikroskopom opazili osebki.

Elektronska mikroskopija

Po sluznica odstranili so primerki antruma potopljen v raztopini fiksiranje 2,5% glutaraldehidom pri 4 ° C 2 uri. Nato so jih splaknili z 0,1 M PBS dvakrat 20 minut, po fiksni pri 1% OSO _{4 (pH 7,4), 1 h, dehidrirani z prilagojenem alkoholom, je pojasnjeno v propilenoksida in vgrajeni v EPON pomočjo ploske plesni. Ultratankih odseki so bili pridobljeni s ultramicrotome (Leica ULTRACUTU, Nemčija) in obarvali s svincem citratom 10 minut, preden si s presevnim elektronskim mikroskopom (Tecnai G ^{212, FEI, Nizozemska).}}

Statistična analiza

Za analizo imunofluorescenco, želodčnega antruma vsake poskusne živali smo vzorčili na isti lokaciji v želodcu. ICC je priznala c-kit radioinkorporacijo in prisotnosti obilne celične procese. Bolj razširjeni in apoptotske ICC so označene z c-kit radioinkorporacijo in Ki67 /TUNEL obarvajo jedro, ki obdaja s c-kit pozitiven membranskih struktur. Deset naključna polja (x 200 povečavi 0,2607 mm ^{2) na celih nastavkom priprave bili sprejeti za fotografije c-kit pozitivnih celic, c-kit + /+ Ki67 in c-kit + /+ TUNEL označenih celic. Ti posnetki so bili tudi uporabimo za oceno debeline plasti v vsaki skladovnici s pomočjo DAPI označenih jedra kot marker zgornje in spodnje meje plasti. Številke c-kit pozitivnih celic so c-kit /Ki67 in c-kit /Tunel celice dvojna označeni šteje s slike-ProPlus 5,0 (Media kibernetiko). Vsi podatki so bili izraženi kot povprečje ± SEM. Vsaj deset vizije so bili sprejeti v vsako žival. Analiza variance (ANOVA) in t-test smo uporabili za primerjavo razlik med različnimi skupinami. P vrednost manjša od 0,05 je bila sprejeta kot statistično pomembne razlike.}

Rezultati

Telesna teža in koncentracija sladkorja v krvi

Po 8 tednih, nezgodne smrti prišlo v skupini DM (dva podgane) ter v skupini SEA (ena podgana). Podgane smo presejali na isti osnovne telesne mase med skupinami (tabela 1). Na koncu 1, 4 in 8 tednov, telesna masa skupine DM je bistveno zmanjšala v primerjavi s kontrolo ( P
= 0.009, 0.000 in 0.000). Ni bilo bistvene razlike med morjem in DM skupine ( P
> 0,05). Vendar pa v nasprotju s skupino DM je telesna teža povišano skupini LEA na 8 tednov ( P
< 0,001) in skupina ZVis po 4 in 8 tednih ( P
= 0.003, P
. < 0,001 ločeno)

Kot je prikazano v tabeli 2, niso opazili nobenih razlik v ravni glukoze v osnovni krvi med skupinami. Diabetike modeli so bili uspešno vzpostavljena z visoko stopnjo glukoze v krvi, v skupini DM v primerjavi s kontrolo na koncu 1, 4 in 8 tednov (vse P
< 0,001). Medtem, ravni glukoze v krvi v morju, LEA in HEA skupine niso bistveno spremenila v primerjavi s skupino DM (vse P
> 0,05).

Učinki EA na praznjenje želodca

Slika 1 so pokazali učinke EA na ST36 na praznjenje želodca v različnih skupinah. Želodca praznjenje skupine DM je dramatično zamudo v primerjavi s kontrolo ( P
= 0,012). V primerjavi s skupino DM, imela SEA ni pomembno vpliva na praznjenje želodca ( P
= 0,338), vendar LEA in HEA izrazito pospešil zakasnelo praznjenje želodca od 43.96 ± 5.02% do 69.72 ± 3.02% in na 59.06 ± 3,70% ( P
< 0,001 in P
= 0,013, v tem zaporedju). Primerjava med skupino LEA in HEA, so dosegli statistično značilnost ( P
= 0,04), kar pomeni, da je učinek LEA očitno več kot v HEA.

Učinki EA za izražanje c -kit

v sliki 2, je bila ocenjena izraz c-kit za vsako plast želodčne stene. V ICC-IM, c-kit v skupini DM je bil očitno se je v primerjavi s kontrolo (0,47 ± 0,04 proti 0,69 ± 0,05, P
= 0,001). Nasprotno, LEA in HEA dramatično izboljša izražanje c-kit v primerjavi s skupino, DM (0,65 ± 0,04 proti 0,47 ± 0,04, P
= 0,004; 0,66 ± 0,03 proti 0,47 ± 0,04, P
= 0.002, v tem zaporedju). V ICC-MY, je izraz c-kit močno zmanjšala v skupini DM v nasprotju z nadzorom (0,57 ± 0,04 proti 0,83 ± 0,05, P
< 0,001). Toda velika razlika je bila tako dosežena v skupini LEA in HEA primerjavi s skupino, DM (0,78 ± 0,05 proti 0,57 ± 0,04, P
= 0,002; 0,76 ± 0,04 & 0,57 ± 0,04, P
= 0,004 oz). V ICC-SM, je c-kit skupine DM očitno zmanjšala na podlagi normalne ravni (0,56 ± 0,03 proti 0,77 ± 0,04, P
= 0,001). Dosledno, LEA in HEA očitno povečala izražanje c-kit v primerjavi s skupino, DM ( P
= 0,003 in P
= 0,007). Vendar pa je bilo ugotovljeno, ni bistvene razlike med morjem in DM skupine v ICC-IM, ICC-MY in ICC-SM ( P
= 0,597, P
= 0,853 in P
= 0,172).

Učinki EA na omrežjih ICC
so

Premene ICC omrežij, zlasti oblikoslovja ICC in gostote prikazani na sliki 3. Ni bilo bistvene razlike debeline plasti med skupinami. Povezana z gladkih mišičnih celic, c-kit radioinkorporacijo za je ICC-IM, ugotovljenih v plasteh mišic, kar kaže, da je ICC-IM dva polarna procese oblikovanja mobilnega omrežja v kontrolni skupini. V skupini DM, smo dolge procesi ICC-IM oslabljena očitno in gostota c-kit pozitivne celice se je zmanjšal na približno 50% običajne kontrole ( P
< 0,001). V primerjavi s skupino DM, ni bila bistvena sprememba je navedeno v skupini SEA. Vendar pa je bila skoraj nedotaknjena mobilnega omrežja vizualizira v skupini LEA in HEA in gostota c-kit pozitivno ICC-UI skoraj povrne v normalno raven (oboje P
< 0,001, v primerjavi s skupino DM ).

ICC-MY navijanje okoli myenteric pleksusa so se nahajajo med vzdolžne in krožne gladke plasti mišic. Multipolarnem ICC-MY s številnimi podružnicami tvorijo nepoškodovano mobilnega omrežja je bilo jasno pokazala v kontrolni skupini. V skupini DM, c-kit + celice pojavil z vitkimi telesi celic in zlomljenih procesov in gostota ICC-MY je očitno zmanjšala ( P
< 0,001). V skupini SEA, gostota ICC-MY niso bistveno nespremenjena v primerjavi s skupino, DM ( P
= 0.762). Vendar pa je skoraj nedotaknjena mobilnega omrežja obstajala okoli myenteric pleteža in ICC-MY gostoto delno predelanega v skupini LEA in HEA (oboje P
< 0,001, v primerjavi s skupino DM)
<. h3> Učinki EA na apoptozo ICC

apoptozo ICC je bila odkrita s TUNEL označevanju da ugotovi, ali je bila apoptoza vključena v pomanjkanje ICC pri sladkorni bolezni (Slika 4). Iz celih-mount priprav nadzor, so nekaj jedra iz ICC obarvajo z metodo TUNEL mišične plasti, myenteric plasti in submucosa plasti. Veliko c-kit + /TUNEL + ICC-IM, ICC-MY in ICC-SM so bile v skupini DM opazili (18,48 ± 1,88 mm ^{-2, 26.51 ± 1.87 mm -2 in 12.03 ± 1.27 mm -2, v tem zaporedju). C-kit + mobilna omrežja so bili nepopolni in apoptotske ICC predstavljen kot skrajšanih postopkih z manj vej. Veliko število c-kit + /Tunel + celice so bile tudi poplavne v vseh plasti skupine SEA. V okviru izvajanja LEA in HEA, so apoptotske komplet + celic težko najti v ICC-IM (1,79 ± 0,33 mm -2 in 2.05 ± 0,30 mm -2), ICC-MY (2,24 ± 0,40 mm -2 in 2,48 ± 0,40 mm -2) in ICC-SM (1,09 ± 0,25 mm -2 in 1,39 ± 0,20 mm -2). Mobilnih omrežij, ki jih c-kit imunskim barvanjem pokazala pokazala visoko gostoto in debelino celične procese v skupini LEA in HEA.}

Učinki EA na širjenju ICC

Glede na povečano število ICC v LEA in skupina HEA, je bila odkrita Ki67 pozitivnih ICC razkriti širjenja ICC v treh plasti (sliki 5). V kontrolni skupini je število c-kit /Ki67 celice dvojno označeni so v opazili ICC-IM (8.82 ± 1,02 mm ^{-2), ICC-MY (10,64 ± 0,92 mm -2) in ICC -SM (4,67 ± 0,96 mm -2). Število ICC z zlomljenih vej je bila izredno zmanjšana in omrežja, so bili zelo skopi z malo razraščajo celice tako v DM in SEA skupine. Vendar pa so bili v skupini LEA in HEA, c-kit /Ki67 dvojno označene celice v ICC-UI značilna tesno sosednjih organov, celic in relativno bipolarne procesov in gostota povprečno doseženih na 18,37 ± 1,60 mm -2 in 15.27 ± 1.81 mm -2 (oboje P
< 0,001). Podobno bogat c-kit + /Ki67 + ICC-MY v skupini LEA in HEA (oboje P
< 0,001), ki tvori nedotaknjene mreže s c-kit + celice izvedli okroglo celico telesa in dolge postopke vitke. V ICC-SM, skupaj z nedotaknjeno mrežo ICC, so gostota množiti celic v skupini LEA in HEA relativno višji v primerjavi s skupino DM ( P
= 0,016 in P
= 0,003).}

Učinki EA na ultrastrukturni spremembami na ICC

Tipične ultrastrukturni značilnosti ICC so pokazale s transmisijsko elektronsko mikroskopijo (sliki 6). V kontrolni skupini, ICC-IM in ICC-Moj bogati dobro razvite celične organele razširiti dolge postopke, ki vsebujejo mitohondrije in grobo in gladko Endoplazemski Retikulum. Polimorfna ICC-SM nahaja na Submukozno površini krožnega mišične plasti pokazala višjo elektronsko-gosto citoplazmo, številne mitohondrije in Endoplazemski Retikulum. V skupini DM je bila dramatical zmanjšanje števila ICC s poškodovanih ultrastrukturni značilnostmi preučil z elektronsko mikroskopijo. Te celice z otekle mitohondrije, moten cristaed in kondenziranega kromatina pokazala nepopolno membrano in skrajšati postopke. Te spremembe so ugotovili tudi v skupini SEA. V skupini LEA in HEA, je bilo število ICC znatno povečana in so tesno povezana z živčnih vlaken in gladkih mišičnih celic, ki so sinaptične strukturo in vmesnih križiščih. Jasno mitohondriji greben, urejeno razdeli grobo endoplazemski retikulum in ribosomskih delci so se šteli za klasične značilnosti ICC-UI, UI-MY in ICC-SM.

Pogovor

V tej študiji smo ugotovila, da tako nizke in visoke frekvence EA na ST36 zatrl apoptozo ICC in aktivira širjenja ICC v želodcu diabetičnih podgan-STZ povzroča. Kot rezultat je reševanje mrež ICC povezan s preprečuje vpliv na zapoznelega praznjenja želodca.

kot učinkovit postopek z manj stranskimi učinki, EA v kombinaciji z akupunkture in električno stimulacijo tekočem namesto ročnih manipulacij postopoma s sprejeto zahodne države. ST36 je ena od najbolj pogosto uporabljenih točk za zdravljenje prebavnih motenj, z navedbami, vključno z: nadželodčnem bolečine, slabost, bruhanje, slabo apetita in trebušne distention. Hkrati pa je naša predhodna študija je pokazala, EA na ST36 lahko poveča debelega pogonskega gibanje, vendar niso opazili v skupini z EA na ne-acupoints. Zapoznela želodca je pogost lik sladkornih bolnikih z gastroparezo in tudi eden od pomembnejših dejavnikov, ki prispevajo k simptome gastroparezo. V zadnjih desetletjih, poskusi pri zavesti podganah so pokazale, da nizke frekvence EA (10 Hz) bistveno pospešiti praznjenje želodca [3], [24] [25]. Poleg tega je bilo 100 Hz EA učinkovita, da povzročijo sproščanje dinorphin in serotonina za induciranje analgezije [26]. Čeprav so poročali tudi visokofrekvenčni EA (100 Hz) za spodbujanje požiralniku in distalni debelega črevesa gibljivost pri živalih [7], [8], se učinki 100 Hz EA na želodcu gibljivost so komaj raziskana. Tako parametre (10 in 100 Hz) EA so bili izbrani po predhodnih poskusih, ki so navedene stimulativen učinek prebavil gibljivost. Naši rezultati pokazali, da tako nizke frekvence EA (10 Hz) in visoka frekvenca EA (100 Hz) na ST36 bistveno izboljšala zakasnelo praznjenje želodca pri diabetikih podganah, in rezultat je prav tako pokazala, da je bil učinek nizke frekvence EA bolj dramatično, kot je visoka pogostost EA.

Številne študije so pokazale, da ima ICC pomembno vlogo pri uravnavanju želodčne peristaltika, ki je pomemben dejavnik praznjenje želodca [27], [28]. Kot obstaja ICC v različnih plasteh želodčnega antruma v obliki omrežij in vivo
so valuably štejejo spremembe mrež ICC. Zmanjšanje števila in morfoloških sprememb ICC-MY in ICC-UI v želodcu diabetičnih miših so pokazali v prejšnji študiji [14]. Podobno so opazili izrazito izguba ICC-IM in ICC-SM v antruma z STZ-induciranih s sladkorno boleznijo podganah, vendar ICC-MY ni bistveno vplivalo, razen za izgubo povezave z živčnih struktur [15]. Te razlike v ugotovitvah v teh dveh študijah so verjetno povezan z živalskimi vrstami. Iz študije je 28 bolnikov z gastroparezo, je bilo zmanjšano število ICC v myenteric pleksusu s polno debelina antralnih biopsije [29]. Naši rezultati so pokazali, da so bili ICC-IM, ICC-MY in ICC-SM v antruma diabetičnih podgan-STZ povzroča drastično zmanjšala temelji na tehniki zahodni s sušenjem in imunofluorescenco, in nadalje poškodovano strukturo ICC se je pokazala s transmisijsko elektronsko mikroskopijo . Na srečo, je poročalo, da nizke frekvence EA izboljšuje izražanje ICC v debelem črevesu počasnih tranzit zaprtje podganah [17]. Poleg tega je naša predhodna študija je nakazala, da tako nizke in visoke frekvence EA obnovi izražanje ICC v debelem črevesu diabetičnih podgan [18]. Vendar pa je v teh študijah, so raziskali spremembo MKS kot celote in učinkov različnih frekvenc EA na ICC v želodcu še niso pojasnjeni. Tako so bili učinki različnih frekvenc EA na treh podtipov ICC v želodcu, vključno z ICC-IM, ICC-MY in ICC-SM v središču te študije. Naši rezultati so pokazali, da so bile izraz ICC v treh plasti vidno rešili z nizko in visoko frekvenco EA, kar kaže, da nizke in visoke frekvence EA obnovljena omrežij ICC-IM, ICC-MY in ICC-SM in nadalje bi lahko prispevale k izterjati želodca.

Treba je omeniti, da se je stanje omrežij ICC glavnem določajo apoptozo in proliferacijo ICC [11], [12]. Zato so bili možni mehanizem na želodcu gibljivost in vplivi na ICC mrež EA na ST36 raziskati skozi odkrivanje sprememb širjenja orožja in apoptozo ICC. V zadnjem času se apoptotske celične smrti poročali, da je v teku postopek ICC omrežij in stopnjo apoptoze pri zdravih debelega črevesa kažejo, da je treba te celice nenehno regenerira ohraniti nedotaknjene omrežij [12]. Poleg tega rezultati odraslih morskih prašičkih so pokazali, da črevesne omenjenih poškodb je privedlo do zmanjšanja števila ICC preko apoptoze, ki bi lahko prispevali k prebavne motnje gibljivosti [30]. Poleg tega je nedavno poročilo pokazalo, da je terapija EA zmanjšala apoptotske odstotek substantia nigra celic v Parkinsonovi podganah [31]. Sedanja študija je jasno izraženo, da so apoptotske ICC, ki metodo TUNEL zaznal poplavo v ICC omrežjih diabetične podganje želodcu in razmišljal, da bi izčrpavanje omrežij ICC privede tudi do motenj želodčne gibljivosti. Toda s posredovanjem nizko in visoko stimulacijo frekvence EA, so Tunel + jedro težko najti, kar kaže na apoptozo ICC se je zmanjšalo na nizki ravni, kot je normalno.

orožja je še en glavni regulator za vzdrževanje omrežij ICC. Prejšnji rezultati so pokazali, da širjenje bila pri izterjavi ICC, ko je bil izgubljen pri odraslih živali [32], [33].

• Plos ONE: Self-Poročali želodec v potujočih na Cruise-Based in kopnem paket Holidays
• Plos ONE: Nikotin zaduši Aktivacija tkiva Resident makrofagov v želodec Mouse preko P2 nikotinski receptor