PLOS ONE: Kitinas mRNA-nivåer genom kvantitativ PCR med användning av Single Standard DNA: Surt däggdjur Kitinas är ett stort avskrift i musen magen

Abstrakt

Kitinaser hydrolysera β-1-4 glykosidbindningar av kitin, en viktig strukturell komponent i svampar, kräftdjur och insekter. Även däggdjur inte producerar kitin eller dess syntas, de uttrycker två aktiva kitinaser, chitotriosidasaktivitet (Chit1) och sura däggdjurs kitinas (AMCase). Dessa däggdjurs kitinaser har rönt stor uppmärksamhet på grund av deras ökade uttryck i individer med ett antal patologiska tillstånd, inklusive Gauchers sjukdom, Alzheimers sjukdom och astma. Förblir emellertid bidraget från dessa enzymer till patofysiologin av dessa sjukdomar som skall fastställas. Den kvantifiering av Chit1 och AMCase mRNA-nivåer och jämförelse av dessa nivåer med nivåerna av välkända referens gener kan generera användbar och biomedicinskt relevant information. I början har vi etablerat en kvantitativ realtids-PCR-system som använder standard-DNA produceras genom att ligera cDNA-fragment av målgener. Detta system gjorde det möjligt att kvantifiera och jämföra uttrycksnivåerna av kitinaser och referens gener i samma skala. Vi fann att AMCase mRNA syntetiseras på utomordentligt höga nivåer i mus magen. Nivån på denna mRNA i mus magen var 7- till 10-faldigt högre än de nivåer av hushållning gener och var jämförbar med nivån av mRNA för pepsinogen C (progastricsin), en viktig del av magslemhinnan. Således är AMCase mRNA ett stort transkript i mus mage, vilket tyder på att AMCase fungerar som en mag enzym som bryter ner polymer kitin och som en del av värdförsvar mot kitin-innehållande patogener i maginnehållet. Vår metodik är tillämplig på kvantifieringen av mRNA för flera gener i flera prover med samma skala

Citation. Ohno M, Tsuda K, Sakaguchi M, Sugahara Y, Oyama F (2012) Kitinas mRNA-nivåer av kvantitativa PCR Använda Single Standard DNA: Surt däggdjur Kitinas är ett stort avskrift i musen magen. PLoS One 7 (11): e50381. doi: 10.1371 /journal.pone.0050381

Redaktör: Dominik Hartl, universitetet i Tübingen, Tyskland

emottagen: 6 augusti, 2012; Accepteras: 19 oktober 2012; Publicerad: 21 november 2012

• PLOS ONE: Analys av mage och tarm Microbiomes i östra Oyster (Crassostrea virginica) från Coastal Louisiana, USA
• PLOS ONE: Fibroblast Growth Factor 10-Fibroblast Growth Factor Receptor 2b medierad signalering krävs inte för vuxna glandulärmagen Homeostasis