Timidina fosforilasi /β-tubulina III espressioni predire la risposta nei pazienti avanzati cinesi gastrici oncologici trattati con capecitabina di prima linea più paclitaxel

Timidina fosforilasi /β-tubulina III espressioni predire la risposta nei pazienti con cancro gastrico avanzato cinesi che riceve di prima linea capecitabina più paclitaxel
Abstract
sfondo
Per valutare il ruolo della timidina fosforilasi e β-tubulina III in esito clinico dei pazienti avanzati cinesi gastrici oncologici trattati con capecitabina di prima linea più paclitaxel.
Metodi
I dati clinici e biopsie tumorali precedente trattamento di 33 pazienti affetti da cancro gastrico avanzato trattati con capecitabina più paclitaxel (coorte 1, gruppo sperimentale) e 18 pazienti trattati con capecitabina più cisplatino (coorte 2, gruppo di controllo) a Pechino Cancer Hospital dal luglio 2003 al dicembre 2008 sono stati raccolti e analizzati retrospettivamente per timidina fosforilasi e β-tubulina III espressioni di immunoistochimica. Le relazioni tra le espressioni di biomarcatori e la risposta o di sopravvivenza sono stati determinati mediante analisi statistiche.
Risultati
L'età media dei 51 pazienti era di 57 anni (range 27-75) con 34 maschi e femmina 17, e il tasso di risposta , la sopravvivenza mediana libera da progressione e la sopravvivenza globale sono stati 43,1%, 120D e 265d. Tra coorte 1, il tasso di risposta, la sopravvivenza mediana libera da progressione e la sopravvivenza globale in β-tubulina III positivi (n = 22) e pazienti negativi (n = 11) sono stati 36,4% /72,7% (vs positivo negativo, P
= 0.049), 86D /237d (P = 0,046
) e 201d /388d (P = 0,029
), rispettivamente; il tasso di risposta (87,5% vs 14,3%, p = 0,01
) e la sopravvivenza mediana libera da progressione (251 quinquies vs 84d, P
= 0,003) in timidina fosforilasi positivo & β-tubulina III pazienti negativi (n = 8) erano significativamente più alti di quelli in timidina fosforilasi negativo & beta-tubulina III pazienti positivi (n = 7). Non c'era alcuna correlazione tra β-tubulina III espressione e di risposta o di sopravvivenza tra coorte 2 (n = 18)
Conclusioni
Nel carcinoma gastrico avanzato cinese, timidina fosforilasi positivo &.; β-tubulina III negativo potrebbe predire la risposta e la prognosi di capecitabina più paclitaxel alla chemioterapia. Ulteriore valutazione prospettica in grandi campioni deve essere eseguita per confermare questi risultati preliminari.
Sfondo
cancro gastrico rimane una delle più comuni cause di morte per cancro in tutto il mondo [1], in particolare in Cina [2]. Anche se il miglioramento dei metodi diagnostici permette alcuni pazienti di ricevere cura radicale alla malattia precoce, circa il 40% dei pazienti ancora perdere l'occasione di cura radicale al momento della diagnosi, inoltre, circa il 50% dei pazienti si verificano recidive e le metastasi dopo l'operazione. Per questi pazienti, la chemioterapia è ancora il principale metodo accettato nel mondo generale. Diversi agenti sono ora disponibili per la chemioterapia sistemica dei pazienti con cancro gastrico, compresi fluoropirimidine, platino, taxani e così via. Ma fluoropirimidine sono fondamentali nel cancro gastrico. Per i pazienti affetti da cancro gastrico avanzato (AGC), chemioterapia di combinazione con due o tre farmaci è più comune con la superiorità rispetto al migliore terapia di supporto in prima linea o terapia di seconda linea [3-6].
Capecitabina è un somministrato per via orale agente chemioterapico che è stato progettato per generare 5-fluorouracile (5-fU) preferenzialmente nei tumori. Si tratta di un profarmaco che viene convertito in 5-FU nei tumori attraverso un percorso con tre passaggi enzimatici e due metaboliti intermedi coinvolti nel Nell'ultima fase enzimatica, il metabolita 5'-desossi-5-fluorouridina (5'-DFUR). viene convertito in 5-FU per timidina fosforilasi (TP) che è più attivo nei tessuti tumorali che nei tessuti normali [7]. Così, la sovraespressione di TP nei tessuti tumorali può aumentare la concentrazione di 5-FU e quindi aumentare l'effetto antitumorale. evidenze attuali indicano che il livello di espressione di TP può influenzare l'esito clinico di capecitabina nel carcinoma polmonare non a piccole cellule, l'adenocarcinoma gastrointestinale, cancro al seno, testa e del collo, e così via [8-11]. Due grandi studi clinici di fase III hanno dimostrato che la capecitabina potrebbe sostituire il 5-FU in amministrazione clinica [12, 13]. Anche capecitabina in combinazione con cisplatino o paclitaxel è stato dimostrato di essere un regime efficace combinazione utilizzata in pazienti con carcinoma gastrico avanzato come prima linea o trattamento di seconda linea [13-15].
Taxano tra cui paclitaxel (PTX) e docetaxel, è un altro agente antitumorale attivo per cancro gastrico. Taxano lega alla beta-tubulina, che è uno dei principali componenti di microtubuli, ed esercita i suoi effetti inibitori della crescita attraverso la stabilizzazione dei microtubuli, causando l'arresto della crescita di cellule tumorali nella fase G2 /M [16]. Diversi meccanismi sono stati proposti come responsabile della resistenza taxani: ① la sovraespressione di MDR1
gene che codifica per P-glicoproteina in grado di efflusso taxani e altri farmaci cationici, ostacolando in tal modo il mantenimento di droga [17]; ② mutazione puntiforme nel tubulina è stato identificato per essere responsabile della resistenza taxani [18, 19]. ③ L'iperespressione selettiva di isotipi beta-tubulina è un altro meccanismo di resistenza [20]. Fino ad oggi, almeno sette isotipi beta-tubulina distinti (classi I, II, III, IV, IVb, V e VI) sono stati segnalati in umana, con un modello di distribuzione complessa in vari tessuti [20]. Alcune ricerche hanno trovato la presenza di classe III β-tubulina (β-tubulina III, TUBB3) ha inibito l'assemblaggio di subunità beta-tubulina promossi da paclitaxel [21] e TUBB3 espressa in alcune cellule paclitaxel-resistente [22]. Molti studi preclinici hanno mostrato alti livelli di espressione di TUBB3 sono associati con la resistenza paclitaxel nel carcinoma polmonare umano [23], il cancro ovarico [22], il cancro alla prostata [24] e il cancro al seno [25] linee cellulari. Negli studi di cancro al polmone, cancro al seno e il cancro ovarico, ci sono rapporti inversa tra l'espressione e l'efficacia TUBB3 paclitaxel o la prognosi dei pazienti [26-28].
Ora che l'obiettivo di paclitaxel è beta-tubulina, e lo studio avevano riferito che vi erano rare mutazioni in β-tubulina per cancro gastrico (no mutazioni sono state trovate in 50 campioni di tumore) [29], abbiamo ritenuto che la sovraespressione di TUBB3 è stato il più probabile meccanismo di resistenza paclitaxel nel carcinoma gastrico. Questo studio è stato progettato per dimostrare le implicazioni cliniche di TP ed espressioni TUBB3 a capecitabina più chemioterapia con paclitaxel per pazienti affetti da cancro gastrico avanzato, e di identificare potenziali predittori per i pazienti con cancro gastrico trattati con capecitabina più paclitaxel.
Metodi
pazienti Ammissibilità
Tutti i pazienti di questo studio sono stati retrospettivamente raccolti come seguenti criteri: i pazienti avevano istologicamente confermato adenocarcinoma gastrico metastatico e almeno una lesione misurabile secondo i criteri di valutazione di risposta a linee guida tumori solidi [30]; i pazienti sono stati trattati con capecitabina più paclitaxel o cisplatino nel reparto gastrointestinale di Pechino Cancer Hospital dal luglio 2003 al dicembre 2008, e avevano completato almeno due cicli di chemioterapia; senza alcuna chemioterapia ad eccezione di neoadiuvante o chemioterapia adiuvante (chemioterapia adiuvante completata nell'arco di 12 mesi) è stato fatto; tutti i pazienti sottoposti a biopsia endoscopica dallo stomaco primario prima della chemioterapia
Regimi di trattamento
I regimi chemioterapici di prima linea con capecitabina più paclitaxel o cisplatino sono state somministrate a pazienti come segue:. capecitabina (Roche Laboratories Inc., Nutley, New Jersey) è stato somministrato per via orale alla dose di 1250 mg /m 2 due volte al giorno da giorno1 (d1) a day14 (D14) del ciclo di 3 settimane; paclitaxel (Hainanhaiyao Co., Ltd., Cina) è stato somministrato alla dose di 80 mg /m 2 da un i.v. 180 min infusione d1 e d8 di ogni ciclo; cisplatino (Qilu Pharmaceutical CO., LTD., Cina) è stato somministrato alla dose di 80 mg /m 2 da un i.v. 240 min infusione d1 di ogni ciclo. Il trattamento è stato continuato fino a progressione della malattia o tossicità inaccettabile, o la decisione pazienti /medici
. Response Evaluation
risposta chemioterapici è stata valutata ogni due mesi per la tomografia computerizzata (CT), secondo i criteri di valutazione della risposta nei tumori solidi (RECIST) criteri. I pazienti sono stati classificati in base risposta completa (CR), risposta parziale (PR), malattia stabile (SD), e la malattia progressiva (PD). pazienti CR e PR sono stati definiti come responder, SD e pazienti PD come non-responder. La sopravvivenza libera da progressione (PFS) e la sopravvivenza globale (OS) sono stati calcolati a partire dal primo giorno di terapia alla progressione della malattia e la morte per qualsiasi causa, rispettivamente.
Analisi immunoistochimica per TP e TUBB3
Tutti i campioni tumorali sono stati retrospettivamente raccolti da pazienti, e due passo metodo di immunoistochimica (IHC) è stato utilizzato per rilevare TP e TUBB3 in sezioni tumorali. Fissate in formalina sezioni di tessuto in paraffina con 4 micron di spessore sono stati deparaffinate in xilene e idratata in alcoli graduati. Dopo l'antigene recupero in 0.01M tampone citrato (pH 6,0), le sezioni sono state trattate con perossidasi endogena confinando liquido (Pechino Cowin Biotech Co., Ltd., Lot. CW0117) per 10 minuti. Le sezioni sono state lavate e incubate con TUBB3 e TP (Pechino Cowin Biotech Co., Ltd.) anticorpi monoclonali per 60 minuti, rispettivamente. Dopo il risciacquo in tampone fosfato (PBS), le sezioni sono state incubate con tipo generale IgG-HRP Polymer (Pechino Cowin Biotech Co., Ltd., Lot. CW0117) per 10 minuti, seguita da cromogenica 3,3 'Diaminobenzidina tetraidrocloride diidrato (DAB) per circa 2-7min. Infine, le sezioni sono state conterstained con ematossilina per 1 min seguita da disidratati in alcoli graduati, eliminato in xilene, e coperto con lamelle. Ogni esperimento incluso controllo negativo. Le sezioni sono state esaminate e ha ottenuto da due patologi professionisti indipendenti del reparto di patologia, senza alcuna conoscenza di questo studio. proteina TP è stato distribuito nel citoplasma e nucleare, TUBB3 nel citoplasma. La colorazione è stata classificata per l'intensità di colorazione in base alla descrizione precedente [31]. In breve, l'intensità di colorazione (1, debole, 2, moderata, 3, forte) e la percentuale di cellule colorate (1, 0% ~ 10%; 2, 11% ~ 50%; 3, 51% ~ 100%) sono stati calcolati . Infine, i livelli di espressione sono stati considerati essere positivo o negativo sulla base del punteggio colorazione mediana (intensità punteggio più punteggio percentuale) come segue: negativo per il punteggio ≤ 3, positivo per il punteggio > 3.
Analisi statistica
Secondo TP e livelli di espressione della proteina TUBB3, i pazienti sono stati divisi in due gruppi (positivi e negativi). Le relazioni tra TP, espressioni TUBB3 e la risposta a capecitabina più paclitaxel o cisplatino sono stati analizzati utilizzando il test esatto di Fisher. curve di Kaplan-Meier e log-rank test sono stati utilizzati per analizzare l'associazione tra i livelli di espressione di biomarcatori e la sopravvivenza. L'analisi statistica è stata effettuata utilizzando SPSS 13.0 (SPSS Inc., Chicago, Illinois, USA)
. Risultati
Dati demografici paziente
Cinquantuno pazienti sono stati inclusi in questo studio tra luglio 2003 al dicembre 2008, il nostro ospedale con il maschio 34, femminile 17, età media 57 anni (range: 27-75 anni). Trentatré pazienti (maschi 20, femminile 13, età media 57 anni [range 27-74 anni]) hanno ricevuto capecitabina più paclitaxel con una mediana di 6 cicli di chemioterapia (coorte 1) e diciotto pazienti (maschi 14, femminile 4, età mediana 57 anni [range 42-75 anni]) hanno ricevuto capecitabina più cisplatino con una mediana di 6 cicli di chemioterapia (coorte 2). Le caratteristiche dei 51 pazienti sono riportati in Tabella 1 1.Table dati demografici dei pazienti e caratteristiche cliniche
Caratteristica
coorte 1 (n = 33)
coorte 2 (n = 18)
totale (n = 51)

No. di pazienti
%
No. di pazienti
%
No. di pazienti
%
sesso maschile

20
60,6
14
77,8
34
66,7
femminile
13
39,4 4
22,2
17
33,3
Età, anni
mediana
57
57
57
Gamma
27-74
42-75
27-75
KPS
90-100
23
69,7
14
77,8
37
72.5
70-80 10
30,3 4
22,2
14
27,5
Siti di malattia metastatica epatica

12
36,4
6
33,3
18
35,3
polmonari
1 3.0 4
22,2
5
9.8
I linfonodi
33
100

• Classe III β-tubulina è un marker predittivo per la chemioterapia a base di taxani nel carcinoma gastrico metastatico e recidivante
• Associazione di espressione diminuita RASSF1A con metilazione del promotore di cancro gastrico primarie da pazienti del centro di China