Antioxidant activiteit en ultrastructurele veranderingen bij maagkanker cellijnen geïnduceerd door Northeastern Thaise eetbare folk plantenextracten

Antioxidant activiteit en ultrastructurele veranderingen bij maagkanker cellijnen geïnduceerd door Northeastern Thaise eetbare folk plantenextracten
Abstracte achtergrond
Phytochemische producten hebben een cruciale rol in de drug discovery proces. Deze veelbelovende mogelijkheid echter, vereist de noodzaak om hun wetenschappelijke controle te bevestigen vóór gebruik. Vandaar dit onderzoek is gericht op (1) het antioxidant activiteit, (2) cytotoxiciteit potentieel, en (3) het effect op de ultrastructurele veranderingen in maagkanker cellijnen door middel van blootstelling aan fracties van drie lokale Northeastern Thaise eetbare planten te evalueren.
Methods
Planten, Syzygium Gratum, Justicia gangetica Kopen en Limnocharis flava hotels met ethylacetaat werden geëxtraheerd, en elke ruwe extract geanalyseerd op hun totale fenolen gehalte door Folin-Ciocalteu methode. Hun antioxidant activiteit werd beoordeeld aan de hand van de ABTS-systeem. De extracten werden daarna onderzocht op cytotoxiciteit twee maagkanker cellijnen Kato-III en NUGC-4, en vergeleken met Hs27 fibroblasten als controle onder toepassing van MTT assay. De cellevensvatbaarheid (%), IC 50 waarden, evenals de ultrastructurele veranderingen werden na behandeling met één variantieanalyse (ANOVA).
Resultaten
de totale fenolische waarden van de ethylacetaatextracten waren goed gecorreleerd met de antioxidant capaciteit, met gewonnen produkt van S. Gratum
weergave van het hoogste niveau van antioxidant-activiteit (een 10-voudig hogere respons) over J. gangetica Kopen en L. flava
respectievelijk. Blootstelling van S. Gratum Kopen en J. gangetica
uittreksels normale cellijnen (Hs27) resulteerde in marginale cytotoxiciteit effecten. Echter, door middel van een dosis-afhankelijke assay S. Gratum Kopen en J. gangetica
extracten geproduceerd cytotoxicological effecten in iets meer dan 75 procent van Kato-III en NUGC-4 cellijnen. Bovendien werd apoptotische origineel opgenomen onder TEM in beide kankercellijnen met deze twee extracten, terwijl kenmerken van autofagie werd gevonden in cellijnen na post blootstelling afschriften van L. flava
.
Conclusies
Hieruit drie fabrieken, S. Gratum
had de hoogste inhoud van fenolverbindingen en antioxidant capaciteit. Allemaal gevonden waarbij verbinding (en) met cytotoxiciteit in vitro
van kankercellen maar bevatten normale cellijnen als opgelost in weefselkweek en ultrastructurele analyse. Dit is het eerste verslag van het effect op de cellulaire veranderingen als apoptose van een ethylacetaat extract van S. Gratum Kopen en J. gangetica tonen.
Verdere studies zijn nu gericht op de individuele isolaten en hun functie, prioriteren op S. Gratum Kopen en J. gangetica
voor de ontwikkeling van nieuwe therapieën en strijders tegen kanker.
Sleutelwoorden
Maagkanker Ultrastructuur Cell cytotoxiciteit TEM Achtergrond
Maagkanker is de vierde meest gediagnosticeerde kanker en de tweede meest belangrijke oorzaak van kanker gerelateerde sterfgevallen in de wereld [1]. Er werd geschat dat er ongeveer 1 miljoen nieuwe maagkanker gevallen geregistreerd in 2008, maar van hen, de meerderheid (713.900) werden gemeld in ontwikkelingslanden, met de hoogste incidentie van maagkanker gevonden in Oost-Azië, over Midden- en Oost-Europa, en Zuid-Amerika [1]. Ondanks de schijnbare intensivering van de ziekte zijn er aanwijzingen dat de totale maagkanker tarieven is Tegen de trend, met een daling van de meldingen van maagkanker gevonden in de meeste delen van de westerse wereld [2].
Helaas zijn de meeste maagkanker patiënten zijn vaak gediagnosticeerd in een vergevorderd stadium, wanneer een genezing niet mogelijk is en de behandeling is palliatief met de bedoeling van het verbeteren van de kwaliteit en kwantiteit van het leven. Ook al zijn er richtlijnen voor de behandeling van maagkanker, de vijf-jaars overlevingskans is minder dan 50% [3, 4]; een tarief dat is natuurlijk niet bemoedigend om ofwel oncologen en kankerpatiënten. Bovendien, bijwerkingen van de huidige behandelingen d.w.z. chirurgie, chemotherapie en bestraling zijn niet bevredigend. Dus, gerichte therapieën nodig om bijwerkingen te verminderen en betere klinische resultaten van patiënten. Derhalve onderzoekers op dit nieuwe millennium betalen veel meer aandacht aan de ontwikkeling van niet alleen nieuwe therapeutische richtlijnen en vroegtijdige preventiemaatregelen maagkanker [5, 6], maar ook het vinden van nieuwe en richten op specifieke therapeutische middelen ook.
in de afgelopen twee decennia fytochemische producten een dominante rol in de ontdekking van nieuwe geneesmiddelen afgespeeld kanker doelwit [7], met meer dan 60% van de momenteel gebruikte anti-kankermiddelen zijn afgeleid uit natuurlijke bronnen [8]. Voorbeelden van wereldwijd klinisch bruikbare antitumormiddelen afkomstig van wilde planten zijn taxol, vinblastine, vincristine, camptothecine derivaten, topotecan (een tarwe gras), duindoorn, Lingzhi, irinotecan en etoposide, die is afgeleid van epipodofyllotoxine [9, 10]. Anderen zijn afgeleid van vruchten en groenten; niet beperkt tot curcumine (kurkuma), genisteïne (soja), catechines (groene thee) bevatten [7], maar ook kruiden zoals vinca-alkaloïden, podofyllotoxine, berberine, citroenen gras oliën, flavonoïde en camptothecine; andere groep veelbelovende antikanker middelen [11]. Hoewel deze antikankermiddelen zijn gebruikt voor gerichte mechanisme gebaseerde routes zijn de effectieve manipulatie van de extrinsieke en intrinsieke apoptose routes nog onderzocht [12-14]. Paclitaxel isoleren uit de bast van de Pacific taxus, Taxus brevifolia
is een plantaardige stof die belofte laat zien. Het is een geneesmiddel uit de FDA goedgekeurd worden voor de behandeling van AIDS-gerelateerd Kaposi sarcoom, borstkanker, niet-kleincellige longkanker en eierstokkanker. Zijn primaire cellulaire effect abnormale stabilisering van de microtubulus polymerisatie, wat leidt tot het falen van celdeling leidt tot apoptose [15-17]. Echter wordt paclitaxel ook bestudeerd als een alternatieve behandeling voor andere soorten kanker zoals maagkanker. Het is momenteel in klinische testfase III [18, 19]. Ongeacht of ze zijn goedgekeurd of niet, de brede bereiken van steun en de voortzetting van studies van plantenextracten met gevolgen in de maag de behandeling van kanker zijn een indicatie van de voortdurende rol die natuurlijke producten spelen in het drug discovery proces.
Bij het overwegen van een epidemiologie studie van de nieuw gediagnosticeerde gevallen maagkanker in Thailand, hebben veel lagere incidentie waargenomen in het noordoosten regio [20]. Hoewel, de prevalentie van Helicobacter pylori
infecties, zijn niet anders over de noordelijke regio van Thailand, zonder geografische factor (bijvoorbeeld plateau, bergachtig bereik of jungle terrein) was anders ofwel [21]. Daarom moet er iets anders centraal in de bevolking in het noordoosten dat de totale incidentie van maagkanker vermindert zijn. Het hebben van alles behalve uitgesloten genetica en omgevingsfactoren, is gesuggereerd dat eetbare planten folk diëten die meestal in deze regio worden verbruikt, het antwoord op deze discrepantie kan houden. Deze nieuwe gegevens, en deze veelbelovende lead sterk daagt ons uit om de mysterieuze fenomeen te verkennen, dat is de vraag of de fytochemische verbindingen binnen Northeastern Thaise eetbare folk planten hebben chemopreventive of cytotoxische potentieel om maagkanker, of andere eigenschappen te bestrijden. Daarom dus deze studie werd ondernomen om de cytotoxiciteit potentieel van deze lokale eetbare planten te evalueren. Van bijzonder belang, planten S. Gratum
, J. gangetica Kopen en L. flava
, werden geselecteerd op basis van epidemiologische gegevens die suggereert dat ze de meest regelmatig eetbare folk groenten in de noordoostelijke regio.
We stellen dat deze planten binnen verborgen eigenschappen die kunnen worden benut om deze vorm van kanker te bestrijden kon houden, en de huidige studie beoogt om hun potentieel te beoordelen. Wij evalueren de ruwe fenol gebaseerde extracten van deze planten en demonstreren hoge cellulaire apoptotische en cytotoxische effecten in twee gemeenschappelijke en vergelijkende maagkanker cellijnen, Kato-III en NUGC-4.
Werkwijzen
plantenmaterialen
Drie lokale eetbare planten folk; S. Gratum
, J. gangetica Kopen en L. flava
(tabel 1) werden gekocht van drie verschillende lokale markten in de provincie Khon Kaen in het noordoosten van Thailand van oktober tot december 2008. Deze planten waren geselecteerd op basis van informatie etnobotanische [22-26] en epidemiologische als hierboven beschreven. Correcte taxonomische identificatie van plantensoorten die voor deze studie werd geleid door botanici van het Department of Botany en Farmacologie, Faculty of Pharmacy, Khon Kaen University, Thailand.Table 1 De namen van drie plantenextracten en andere onderzoeksinstellingen referenties, therapeutisch gebruik in Thaise traditionele geneeskunde vertoond in deze studie
Species [Voucher nummer]
gezin (naam Engels /Thai)
Gemeld belangrijkste bestanddelen
therapeutisch gebruik in Thaise traditionele geneeskunde

eetbare gedeelte
Ref.
Syzygium Gratum
(Wight) SN Mitra var. Gratum
[Ch. Laongpol 6] a, c
Myrtaceae (Eugenia /Phak Mek, Samet chun)
nog niet duidelijk bepaald in de chemische structuur, maar bleek sterk in anti-oxidanten en het voorkomen van oxidatieve stress en nitrosatieve
Behandeling van dyspepsie te zijn en indigestie
Leaves
22,23
Justicia gangetica
L. [TK-PSKKU-0066] b
Acanthaceae (Chinese violet, tropische sleutelbloem /Accepted naam: Asystasia gangetica
)
5,11 epoxymegastigmane-glucoside (asysgangoside), salidroside, benzyl β-d-glucopyranoside (6S
, 9R
) -roseoside, ajugol, apigenine 7-O
-β-d- glucopyranoside, apigenine 7-O
-neohesperidoside en apigenine 7-O
-β-d-glucopyranosyl (1 → 6) -β-d-glucopyranoside
Behandeling van maagpijn, maag wormen, anti- astma
Leaves
24,25
Limnocharis flava
L. Buchenau [Patt. 173] c
limnocharitaceae (geel fluweelblad, geel braam hoofd /Talabhat reusi)
bepaald
Voorgerecht
Stem
26
aVoucher exemplaren gedeponeerd bij de Forest Herbarium (BKF), Ministerie van National Park, Wildlife and Plant Conservation, Ministerie van Natuurlijke hulpbronnen, bthe herbarium van de Faculteit Farmaceutische Wetenschappen, Khon Kaen University en CThe Prince of Songkla University herbarium (PSU), Departement Biologie, Faculteit der Natuurwetenschappen, Prince of Songkla University, Thailand .
Voorbereiding van plantenextracten
eetbare delen van elke individuele kwekersrecht (tabel 1) werden gespoeld met steriel gedestilleerd water om afval te verwijderen en in hete lucht oven gedurende 7 dagen gedroogd bij 50 ° C. Eenmaal gedroogd werden plantendelen vervolgens in kleine stukjes gesneden en tot een fijn poeder met een mortier en stamper. Elke poeder gemalen plantenmateriaal werd vervolgens ondergedompeld met het overschot van de ethylacetaat oplosmiddel (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapore) in een extractie fles. De ethylacetaat mengsels werden daarna geïncubeerd op een shaker incubator bij kamertemperatuur gedurende 72 uur. Na deze werkwijze werden de supernatanten overgebracht naar een nieuwe container en de extractie met ethylacetaat werd drie keer herhaald voordat de supernatanten van deze drievoud extracties werden gecombineerd. Deze werden vervolgens gefiltreerd door Whatman filterpapier nummer 1, en verdampt door een roterende verdamper. Deze steekproef extracten werden vervolgens gebruikt in verdere experimenten.
Bepaling van de totale fenolverbinding
Totaal fenolverbindingen in de plantenextracten werden bepaald door Folin-Ciocalteu methode zoals beschreven door Sachindra [27]. In het kort, 0,2 ml elke plant extract opgelost in 50% DMSO (Santa Cruz Biotechnology Inc., Bangkok, Thailand) werd geoxideerd met 1,0 ml 10-voudig verdunde Folin-Ciocalteu reagens (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapore) en geneutraliseerd met 0,8 ml 6% natriumcarbonaatoplossing (Sigma-Aldrich-Pte Ltd, Singapore). Na 1 uur incubatie werd de absorptie van de oplossing gemeten bij 764 nm en de resultaten werden weergegeven als milligram galluszuur equivalent per gram droog gewicht (mg GAE /g). De test werd uitgevoerd in triplo voor elk monster concentratie van 3 gescheiden assays.
Bepaling antioxidant activiteit
Antioxidant activiteit van de plantenextracten spectrofotometrisch werd bepaald met de ABTS volgens de werkwijze van Re en collega's [28]. Kort ABTS radicaal kation (ABTS • +) werd gegenereerd door de oxidatie van 7 mM ABTS (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapore) met 140 mM kaliumpersulfaat (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapore), geïncubeerd gedurende 16 uur bij kamertemperatuur in het donker. Antioxidant activiteit werd bepaald door het toevoegen van 0,2 ml van plantenextracten met 1,8 ml ABTS • + radicaal kation mengsel. Na incubatie van het mengsel gedurende 6 minuten werd de absorptie bij 734 nm geregistreerd. ABTS • + radicalen vermogen (%) van plantaardige extracten werden berekend op basis van de volgende vergelijking: ABTS • + radicalen vermogen (%) = [(Abs.control-Abs.test sample) /Abs. control] x100. Wanneer Abs.control is de absorptie van controlereactie (geen plantenextract) en Abs.test monster de absorptie in de aanwezigheid van een plantenextract. De resultaten werden vervolgens vergeleken met de anti-wegvangende activiteit van Trolox (Sigma-Aldrich-Pte Ltd Singapore), weergegeven met Trolox antioxidant equivalente capaciteit per gram droog gewicht (TEAC /g). De test werd uitgevoerd in triplo voor elk monster concentratie van 3 gescheiden assays.
Celkweek
Twee humane cellijnen maagcarcinoom Kato III (ATCC No. HTB-103) van de American Type Culture Collection (ATCC, Rockville, MD, USA) en NUGC-4 (JCRB0834) van de Health Science Research Resources Bank (Japan Health Sciences Foundation) werden gebruikt voor in vitro
cytotoxische assays. De menselijke voorhuid fibroblast cellijn Hs27 (ATCC No.1634) werd gebruikt als controle. Ze werden gekweekt in steriele RPMI 1640 dat 10% (v /v) foetaal runderserum (Biochrom AG, Berlijn) bij 37 ° C toegevoerd met 5% CO 2 in een incubator. Cellen werden gekweekt in standaard weefselkweek kolven en bij het bereiken van 80% confluentie werden doorgekweekt met een oplossing van 0,25% trypsine-EDTA (Sigma-Aldrich-Pte Ltd Singapore) elke 3-4 dagen tot gebruik.
In vitro
cytotoxiciteit assay
Plant extracten werden beoordeeld zijn cytotoxische activiteit tegen Kato-III en NUGC-4 cellijnen via de MTT colorimetrische test zoals eerst beschreven door Mosmann [29] met modificaties door Denizot en Lang [30] voorgesteld. Gekweekte cellen (1 x 10 4 cellen) in compleet medium werden overgebracht in elk putje van een vlakke plaat met 96 putjes en geïncubeerd bij 37 ° C in een bevochtigde atmosfeer, verrijkt met 5% (v /v) CO 2 gedurende 24 uur om de cellen te laten hechten aan de bodem van elk putje. De gekweekte cellen werden vervolgens behandeld met de geteste ruwe extract (drie putjes per conditie) door toevoeging van 2 pi van seriële verdunningen van elk extract in een concentratie van 1,25, 2,5, 5, 10 en 20 ug /ml. De cellen werden vervolgens zoals hierboven beschreven voor andere 72 uur voor de toevoeging van 10 ui van een 5 mg /ml oplossing van 3- (4, 5-dimethylthiazol-2-yl) -2, 5-difenyltetrazoliumbromide (MTT) ( Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapore) in elk putje. De incubatie werd gedurende nog 4 uur voordat de media werden verwijderd. Een mengsel van DMSO (150 ui) en glycine (25 pl) werd aan elk putje toegevoegd en gemengd om cellysis en oplossen van de kristallen formasan waarborgen, voordat de absorptie bij 540 nm werd gemeten. Drie herhalingen van elk experiment werd uitgevoerd en het percentage MTT omzetting in de formazan derivaat elk putje (percentage celgroei) werd berekend door de OD te delen bij 540 nm van de putjes met de controle, gebaseerd op de volgende vergelijking: Percentage celgroei = [A540-test - A540 zero] × 100 /[A540 control - A540 nul]. Wanneer A540 zero = A540 oplossing nadat de cel werd gedurende 24 uur vóór de toevoeging van plantenextracten; A540 test = A540 van de oplossing na plantenextracten toevoeging; en A540 controle = A540 van de oplossing zonder plantenextracten toevoeging. Bovendien, voor niet-toxische verzekering van plantenextracten tegen normale cellen (fibroblast cellijn Hs27), dubbele dosis (2 maal IC 50 concentraties [10 ug /ml]) van de extracten werden toegepast en beoordeeld door MTT assay. De test werd uitgevoerd in triplo voor elk monster concentratie van 3 gescheiden assays.
Halve maximale remming (IC50) Ondernemingen De verkregen absorptie bij 540 nm werd gebruikt om het percentage celoverleving aangenomen dat 100% overleving werd verkregen vaststellen bij behandeling met oplosmiddel alleen als controles, en dat geen verschillen in metabole activiteit bestond tussen overlevende cellen onder verschillende omstandigheden. Onder deze veronderstellingen, werd het percentage overleving van de behandelde kanker cellijnen en normale gekweekte cellen berekend volgens de volgende formule: Percentage overleving = (A540 behandelde cellen /A540 controle) x 100. Het gemiddelde ± 1 standaardafwijking (SD) cell overleving (%) werd uitgezet tegen de overeenkomstige plantenextract concentratie en de best passende lijn werd gebruikt om de geschatte IC 50 waarde van de concentratie die 50% celoverleving kunnen bieden ontlenen. Ondernemingen de concentraties van plantenextracten geven 50% remmende concentratie (IC 50) werden bepaald uit drie afzonderlijke experimenten. De IC 50 elk plantenextracten werden vervolgens gebruikt als de concentratie behandeld 0 en 3 dagen tegen Kato-III en NUGC-4, die zijn beoordeeld op apoptose met behulp van een transmissie elektronen microscopie (TEM). De test werd uitgevoerd in drievoud voor elk monster concentratie van 3 gescheiden assays.
Monstervoorbereiding voor transmissie elektronenmicroscopie
Kato-III-cellen (1x10 6 cellen) en NUGC-4 cellen (1x10 6 cellen) behandeld met elke plantenextract en de negatieve controle (onbehandelde kweken) werden afzonderlijk uitgevoerd. Kort samengevat, werden ze gespoeld met oplossing D-Hank's (Life technologies, Bangkok, Thailand) tweemaal en afgeleverd in centrifugebuizen met een schraper, gevolgd door centrifugatie bij 2000 rpm gedurende 15 min, het supernatant werd verwijderd. Het neerslag werd gefixeerd in een oplossing die 4% glutaaraldehyde (Electron Microscopy Sciences, Bangkok, Thailand) en 2% paraformaldehyde (Electron Microscopy Sciences, Bangkok, Thailand) in 0,1 M fosfaatbuffer zoutoplossing (PBS), pH 7,4, bij 4 ° C gedurende 1 uur, daarna gewassen met 0,1 M PBS met het fixeermiddel verwijderd. Monsters werden gefixeerd in 1% osmiumtetroxide (Electron Microscopy Sciences, Bangkok, Thailand) in dezelfde buffer gedurende 30 min en gedehydrateerd in een gegradeerde ethanol serie voor 10 minuten elk. Vervolgens werden ze geklaard met twee veranderingen van propyleenoxide en ondergedompeld in achtereenvolgende mengsels van propyleenoxide en Araldite 502 hars (Sigma-Aldrich Pte-Ltd, Singapore), bij verhoudingen van 3: 1, 2: 1, 1: 2, en tenslotte ingebed in pure Araldite. Delen van 1 urn werden gesneden met behulp van een MT-2 Porter-Blum ultramicrotoom. De secties werden vervolgens gemonteerd op koperen roosters, de lucht gedroogd en na elkaar in contrast met 2% uranylacetaat (Electron Microscopy Sciences, Bangkok, Thailand) in 7% alcohol in het donker, en vervolgens behandeld met lood citraat (Electron Microscopy Sciences, Bangkok, Thailand ). Ze werden onder een Philips CM 100 transmissie-elektronenmicroscoop werkend bij 80 kV onderzocht.
Statistische analyse
De resultaten werden uitgedrukt als gemiddelden ± SD van duplo's van 3 gescheiden assays. Vergelijking tussen gegevenssets werd uitgevoerd via een variantieanalyse (ANOVA), gevolgd door t-test van Student. Alle statistische analyses werden uitgevoerd met SPSS19. Verschillen werden aanvaard als statistisch significant bij p <. 0.05
Resultaten
Totaal fenol inhoud van planten extracten
Drie eetbare folk planten uit noordoostelijke regio van Thailand (S. Gratum
, J. gangetica
en L. flava
) werden geëxtraheerd en de totale fenolische bepaald met de in tabel 2. Onder deze plantenextracten, het hoogste niveau van totale fenolische gedetecteerd in S. Gratum
resultaten op 149,789 ± 0,381 mg GAE /g. Het was 10 plooien significant groter in de inhoud dan die werd geïdentificeerd in J. gangetica Kopen en L. flava
(16,513 ± 0,130 en 14,334 ± 0,463 mg GAE /g, respectievelijk p Restaurant < 0,05). tabel 2 Gemiddelde totale fenolische inhoud van plantenextracten, uitgedrukt als GAE en anti-wegvangende activiteit van de plantenextracten voorgesteld als TEAC
plantenextracten
Totaal plenolics (mg GAE /g droog gewicht)

Anti-wegvangende activiteit (mM TEAC /g droog gewicht)
S. Gratum
(Wight)
149,789 ± 0,381
2,823.521 ± 27,521
J. gangetica L
.
16,513 ± 0.130a
313,141 ± 39.713a
L. flava (L.)
14,334 ± 0.463a
900,845 ± 20.346a, b
Waarden werden uitgedrukt als gemiddelden ± SD van duplo's van 3 gescheiden assays. ap Restaurant < 0,05 VS S. Gratum
, bp
. < 0,05 VS J. gangetica
Antioxidant capaciteit van plantenextracten
Antioxidant activiteiten van ethylacetaat gewonnen van S. Gratum
, J. gangetica Kopen en L. flava
zijn weergegeven in tabel 2. TEAC equivalente waarden voor deze planten waren significant verschillend in afnemende volgorde van S. Gratum
> L. flava Restaurant > J. gangetica
(2,823.521 ± 27,521, 900,845 ± 20,346, 313,141 ± 39,713, respectievelijk p Restaurant < 0,05). Opvallend, rond 3-9 plooien hogere antioxidant activiteit van S. Gratum
werd gevonden in vergelijking met de andere twee soorten uittreksels. Deze waren goed gecorreleerd met een totale inhoud van fenol. (Correlatiecoëfficiënt R 2 = 0,935, Y = 16.64x + 324,5).
Cell groeiremming
Maagkanker cellijnen Kato-III en NUGC-4 en het menselijk fibroblast cellijn (controle) waren blootgesteld aan plantenextract (seriële verdunning concentratie [1,25, 2,5, 5, 10 en 20 ug /ml]), de groeiremmende activiteit geïnduceerd effect van elke plant bepaald. Na 72 uur werden levensvatbare cellen gemeten door MTT assay. Kato-III en NUGC-4 cellen blootgesteld aan S. Gratum Kopen en J. gangetica
fragmenten resulteerde in een significante afname in levensvatbare cellen op een dosis-afhankelijke wijze (Figuur 1). At 20 ug /mL deze allemaal induceerde dan 50% celdood zowel maagkanker cellijnen. Echter, bij 10 ug /ml de uittreksels van alleen S. Gratum Kopen en J. gangetica
vertoonden een significante krachtige cytotoxiciteit (p
< 0,05) tot meer dan 70% celdood in Kato-III induceren en NUGC-4 bij het vergelijken met L. flava
(figuur 2). Bovendien zijn deze twee plantenextracten toonde geen effect op normale menselijke voorhuid fibroblast cellijn (Figuur 2). Daarentegen L. flava
is effecten verminderd. Wat resulteert in ongeveer 25% van celdood, zonder significant verschil tussen maagkanker cellen en normale fibroblasten (Figuur 2). Figuur 1 Dosis respons studies van de plantenextracten twee maagkanker cellijnen: (A) Kato-III en (B) NUGC-4. De cellen werden behandeld met verschillende concentraties (0, 1,25, 2,5, 5, 10 en 20 ug /ml) van S. Gratum
, J. gangetica Kopen en L. flava
gedurende 72 uur. Het antiproliferatieve effect werd gemeten door MTT assay. Resultaten werden uitgedrukt als gemiddelden ± SD van drie onafhankelijke experimenten.
Figuur 2 Cytotoxiciteit test tegen Kato-III, NUGC-4 en Hs-27 na geïncubeerd met 10 ug geëxtraheerd S. Gratum /ml ethylacetaat, J. gangetica en L. flava. Het antiproliferatieve effect werd gemeten door MTT assay. Resultaten werden uitgedrukt als gemiddelden ± SD van drie onafhankelijke experimenten. De resultaten toonden zowel S. Gratum Kopen en J. gangetica
sterk geremd tot 70% maagkanker celgroei maar niet Hs 27 vernietigen normale fibroblastcellen (significant verschil [* p
< 0,05]). Dit in contrast met het effect van L. flava
, die een verminderde hoeveelheid celgroei, niet alleen bij maagkanker cellen maar ook op normale fibroblastcellen ook aangetoond. Ondernemingen De IC 50 (ug /mL ) waarden zijn samengevat in figuur 3. de J. gangetica
extract had de laagste IC 50-waarden van 5,45 ug /ml en 5,86 ug /ml voor Kato-III en NUGC-4 respectievelijk. Ook de S. Gratum
extract werden hogere cytotoxiciteit om de kanker cellijnen met IC 50 waarden in de 7.24 ug /ml - 11.96 ug /ml bereik, terwijl de hoogste IC 50 was van L . flava
extraheren 17.20 ug /ml en 14.64 ug /ml voor Kato-III en NUGC-4 respectievelijk. Dit was significant verschillend (p
< 0,05) in vergelijking met de andere twee plantenextracten (figuur 3). Figuur 3 vergelijkende cytotoxiciteit van IC 50 van S. Gratum, J. gangetica en L. flava on Kato-III, NUGC-4 en Hs27 door MTT assay. Resultaten werden uitgedrukt als gemiddelden ± SD van drie onafhankelijke experimenten (* p
<0,05) en vergeleken met Hs27-behandelde cellen. J. gangetica
toonde de laagste IC50, terwijl de hoogste was van L. flava
significante verschillen (p < 0,05). Tussen S. Gratum Kopen en L. flava
werden waargenomen tussen beide kankercel lijnen.
Ultrastructuur veranderingen van Kato-III en NUGC-4 cellijnen geïnduceerd door S. Gratum, J. gangetica Kopen en L. flava
om vast te stellen of de groeiremming van plantenextracten werden geassocieerd met apoptose, we verder onderzocht de morfologische veranderingen van Kato-III en NUGC-4 maagkanker cellijnen onder transmissie-elektronenmicroscoop. De controlecellen nucleaire structuren bleken intact (Figuur 4A: Kato-III, E: NUGC-4), terwijl de behandelde cellen met die van de plantenextracten aangetoond ultrastructurele veranderingen op verschillende manieren (Figuren 4B-4D: Kato-III en 4 F-4H: NUGC-4, respectievelijk). In detail, de Kato-III cellen behandeld met S. Gratum
weergegeven gecondenseerde kern met chromatine condensatie, apoptotische body vorming (Figuur 4B), en splitsen van granulaire puin. Terwijl Kato III cellen behandeld J. gangetica
deze weergegeven chromatine condensatie, membraangebonden apoptotische lichamen en talrijke vesicles (figuur 4C). Overwegende dat de morfologische veranderingen in L. flava
behandeld Kato-III cellen, weergegeven gekrompen kern met chromatine condensatie en tal van heterogene blaasjes, inclusief uitgebreide functies van intracellulaire vacuolisatie (figuur 4D). Figuur 4 Elektron microfoto waarin de effecten van S. Gratum, J. gangetica en L. flava on Kato-III (A-D) en NUGC-4 (E-H) 3 dagen na behandeling. Schaal bar 2 micrometer. A) Onbehandelde Kato-III cel geeft zeer weinig blaasjes (v), een vrij uniforme ronde vorm en chromatine verspreid nucleus (N). B) S. Gratum
behandeld Kato-III cel geeft gecondenseerde chromatine in nucleus (N), apoptotische body vorming (pijlpunt) en vele blaasjes. De cel wordt dispergeermiddelen als granulaire puin (*). C) Kato-III cel behandeld met J. gangetica
. Deze cel geeft chromatinecondensatie rond de omtrek van de kern, membraan gebonden organellen (pijl) en talrijke vacuolen (v). D) Kato III-cellen na blootstelling aan L. flava
toont een groot aantal autofagocytische vacuolen (v), en een krimpende kern (N) met gecondenseerde chromatine. E) Onbehandelde NUGC-4 cel geeft geen condensatie van chromatine in de nucleus (N) en een nogal uniforme ronde vorm. F) NUGC-4 cellen behandeld met S. Gratum
toont chromatine condensatie kern, veel blaasjes (v) en vele membraan gebonden organellen (pijl). G) NUGC-4 cellen na blootstelling aan J. gangetica
toont een kern gecondenseerd chromatine, membraancompartiment (pijl) en blaasjes (v). H) Morfologische veranderingen die in L. flava
behandeld NUGC-4 cellen bestonden uit met chromatine condensatie in de kern (N) en vele heterogene vesicles van verschillende grootte (v).
S. Gratum
behandeld NUGC-4 cellijnen vertoonden apoptose met verdichten kern en de productie van membraan gebonden apoptotische lichamen en tal van blaasjes (Figuur 4F). Echter in vergelijking NUGC-4 cellen behandeld met J. gangetica
, produceerde vroege stadia van apoptose met chromatine condensatie en talrijke vesicles (Figuur 4G). Terwijl de cellen behandeld met L. flava
toonde perifere chromatine condensatie kern met tal van heterogene blaasjes en blebbing (figuur 4H).
Discussie
Serendipitous observaties hebben aangetoond dat planten, traditionele kruiden en thee kan worden aangewend om potentieel te winnen het gevecht in de strijd van kanker; wereldwijd gezondheidsprobleem. Het is echter niet tot deze fytochemicaliën zijn getest in vitro en in vivo

dat we kunnen zeker weten hoe ver ze kunnen gaan in het houden van deze ziekte onder controle [31-34]. In Thailand maagkanker is een plaag, maar de ongewoon lagere maagkanker gevallen in het noordoostelijke deel van Thailand is van groot belang. Het feit dat S. Gratum
, J. gangetica Kopen en L. flava Wat zijn inheems in het gebied en vormen een belangrijk onderdeel van de routine voedingssupplement in de lokale bevolking, hebben we daarom besloten om te onderzoeken of deze folk planten zijn potentiële kandidaten voor de veilige en betrouwbare besturing van maagkanker. Hoewel er veel rapporten hun anti-oxidant activiteiten verduidelijken deze studie het eerste bewijs van hun potente cytotoxische effecten en apoptotische inductie gebaseerd op ultrastrutural eigenschap op maagkanker.
Deze planten werden eerst geëxtraheerd met ethylacetaat en vervolgens geanalyseerd hun fenol inhoud met behulp van Folin-Ciocalteu methode.

• Xpert MTB /RIF assay kan worden gebruikt gearchiveerde maagaspiraat en sputum monsters voor gevoelige diagnose van tuberculose pediatrische
• Emergency presentatie van de maagkanker; prognose en de implicaties voor de dienst planning