Relato de Caso: Familial Câncer Gástrico e Cordoma na mesma família

Relato de Caso: Familial Câncer Gástrico e Cordoma na mesma família da arte abstracta
cancros gástricos são a segunda neoplasia maligna mais comum no mundo e representam um grande encargo para todas as sociedades, embora a incidência da doença está diminuindo no mundo industrializado . A etiologia da doença é complexo e acredita-se ser principalmente devido a factores ambientais, mas uma pequena proporção de casos, são reconhecidos como estando associadas a factores genéticos. Duas formas hereditárias de cancro do estômago foram identificados, um que está associado com agrupamentos familiares de cancro do estômago e o outro ser um subgrupo de famílias que pertencem ao cancro colorrectal hereditário não polipose (ou síndroma de Lynch). Neste relatório nós apresentamos uma família nuclear pequeno, o que é incomum em que há um agrupamento de malignidade que inclui câncer de estômago, câncer colorretal e cordoma. A análise genética não revelaram qualquer mutação causador de genes associados com HNPCC ou em E-caderina. Juntos, o quadro clínico nesta família pode indicar que outros fatores genéticos estão por trás agrupamento desta família de malignidade.
Palavras-chave
câncer de estômago HNPCC E-caderina Introdução cordoma
cancros gástricos representam a segunda malignidade mais comum em todo o mundo, embora a incidência da doença parece estar a diminuir no mundo industrializado. cancros gástricos são morfologicamente heterogênea com três tipos; cancro gástrico difuso, um glandular (ou intestinal) tipo e uma mistura de difuso e doença intestinal.
As causas do cancro gástrico são ambos ambiental e genético ou uma mistura de ambos. Há relativamente pouco tempo uma causa genética definitiva do cancro gástrico (as mutações no gene da E-caderina) foi identificado, primeiro em um grande Nova Zelândia maori kindred [1] e subsequentemente em outras famílias gástricas [2]. Os pacientes com mutações no gene da E-caderina tendem a apresentar com doença difusa ao passo que não há factores genéticos foram implicados em agregações familiares de cancro gástrico intestinal.
Uma alternativa causa genética do cancro do estômago, em associação com uma variedade de outros cancros epiteliais é cancro colorectal hereditário não polipose (HNPCC). Esta entidade é caracterizada por câncer colorretal início precoce e uma variedade de outras doenças malignas epiteliais incluindo câncer endometrial e câncer de estômago. A base genética dessa condição é uma quebra de reparo incompatível ADN devido a mutações em genes que controlam este processo. Actualmente, existem quatro genes foram isolados e em associação com HNPCC, hMLH1, hMSH2, hMSH6 e hPMS2. Ambos hMSH2 e hMSH6 residem no cromossoma 2, hMLH1 está no cromossomo 3 e hPMS2 está no cromossomo 7 (para revisão ver Niessen et al 2004 [3]).
Chordomas são raros crescimento lento tumores ósseos que são acreditados para surgir de restos notocorda [3]. Eles tendem a ocorrer na base do crânio e têm uma aparência histológica relativamente benigno. Apesar de suas chordomas aparência benignos têm propriedades infiltrativas que são difíceis de controlar. Há uma ligeira preponderância para os homens a ser afectadas com um macho geral à relação fêmea de cerca de 1,7: 1. A preponderância dos machos torna-se mais evidente em pacientes com cordomas sacrais onde o macho para fêmea rácio aproxima-se 3: 1. Pouco se sabe sobre a base molecular da chordomas, como parece haver nenhuma anormalidade cromossômica grave ou qualquer outro distintivo distinto. Dois loci genéticos foram identificados. A primeira indicação de uma base genética para cordoma veio de estudos de ligação que revelaram um locus do gene no cromossoma 1 [4]. Um segundo locus foi identificada em uma pequena série de famílias ligadas ao cromossoma 7q33, que revelou uma série de genes potencialmente candidatos [5].
Neste relatório nós identificamos uma pequena família que se caracteriza por câncer de estômago e presença . de cordoma em um dos três irmãos os quais sucumbiram à doença maligna
pacientes e métodos
a história familiar de doença é a seguinte: o proband apresentou na idade de 56 anos com um adenocarcinoma pouco diferenciado do ceco sem a presença de pólipos adenomatosos. Na altura da excisão do tumor tinha metastizado para três nodos linfáticos. O paciente foi encontrado para ter a doença metastática difundida com a idade de 60 anos e morreu um ano depois. A única outra descoberta notável no que diz respeito a esse paciente foi a aplasia congênita da coxa esquerda. A história familiar da proband revelou uma história de câncer gastrointestinal (ver Fig. 1). Figura 1 Árvore genealógica da família. St câncer = estômago; Ch = cordoma; CRC = cancro colo-rectal. Os quadrados representam os machos, círculos fêmeas
O pai do proband foi diagnosticado com câncer de estômago com a idade de 67 anos. O tumor foi diagnosticado como um carcinoma mucinoso indiferenciado com células em anel de sinete que tinha no momento da cirurgia já se espalhou para o fígado.
O irmão mais velho do paciente foi diagnosticado com a idade de 7 anos de 1/2 com um cordoma maligno na base de seu crânio e morreu logo depois. O tumor foi situado entre o clivus e ponte que deu origem a sinais neurológicos típicos. O tumor tinha incidido sobre o nervo óptico, resultando em atrofia grave, especialmente no lado direito. Além disso, houve várias metástases hepáticas.
O segundo irmão foi diagnosticado com adenocarcinoma do estômago originários da cárdia. O tumor era um tipo indiferenciado mucinoso intercaladas com células em anel de sinete, semelhante à do pai. No momento do diagnóstico da doença foi encontrada para ter-se generalizado com metástases à vértebra, fígado, glândulas supra-renais e pulmões.
Análise DHPLC
inteiras As sequências de codificação de hMSH2, hMLH1 e E-caderina, incluindo o intrão /exão limites foram rastreados para mutações por análise DHPLC. Quaisquer confórmeros invulgares foram novamente avaliadas por sequenciação directa de ADN.
Reacção em cadeia da polimerase (PCR) amplificação para análise DHPLC foi realizada usando iniciadores específicos para hMSH2 e hMLH1 como descrito anteriormente (Holinski-Feder et al 2001). A reacção consistiu em 1,0 uM de cada iniciador, 1 U de Taq Platinum (Gibco-BRL), MgCl 2-5 mm 2 e 200 μ M de cada dNTP
.
Amplificação por PCR foi realizada por uma desnaturação inicial a 94 ° C durante 5 min seguido por 14 ciclos de 94 ° C durante 1 min, 7 ° C gama de aterragem durante 1,5 min e 72 ° C durante 2 min, depois 20 ciclos utilizando uma temperatura de hibridação de 0,5 ° C mais baixa do que a parte inferior do gama touchdown. O passo de emparelhamento foi realizada como um protocolo de touchdown com um intervalo de 7 ° C, diminuindo 0,5 ° C /ciclo durante 14 ciclos. Isto foi seguido por um passo de extensão final a 72 ° C durante 10 minutos, um último passo de desnaturação a 95 ° C durante 5 minutos e um passo de emparelhamento lento de 95 ° C a 65 ° C ao longo de 30 min para promover a formação de heteroduplexes. A PCR foi realizada num instrumento expressa PCR (Hybaid) equipada com uma tampa aquecida para evitar a utilização de óleo mineral.
DHPLC análise foi realizada utilizando um sistema Varian hélice (Varian Inc., Walnut Creek, CA). Os produtos de PCR (2-5 μ l) foram
injectado directamente num Eclipse ADN (Hewlett Packard) ou coluna da hélice (Varian) e eluído a partir da coluna utilizando um gradiente de acetonitrilo e aumentando a uma temperatura de forno de coluna adequado para cada exão do hMSH2 , hMLH1 e e-caderina (temperaturas reais disponíveis a pedido). Heteroduplexes formados durante a PCR de uma amostra heterozigoto foram detectados como um pico de eluição adicional antes do pico homoduplex. A detecção de heteroduplexes foi feita mais simples com o uso de software de avaliação DHPLC fornecido da Varian. As temperaturas de fusão previsto dos produtos de ADN de cadeia dupla foram obtidas usando o programa DHPLC-MELT disponível a partir de http:... //Www inserção Stanford edu /derreter html (para mais detalhes veja quadros 1a e 1b. ).
Para cada segmento de um fragmento de controlo negativo (amplificado a partir de ADN isolado de um dador normal e saudável que não tinha história familiar de doença) foi executado através da coluna de desnaturação à temperatura não-desnaturante de 50 ° C. A 50 ° C do perfil de pico foi então comparado com o perfil de temperatura de fusão de Stanford do respectivo fragmento, bem como três incrementos de 1 ° C em ambos os lados da temperatura de fusão previsto. Parcialmente foram estabelecidas condições desnaturadas quando uma mudança no tempo de retenção de pelo menos ou igual a 30 segundos através de uma gama incremento de 1 ° C foi feito. A temperatura de fusão óptima foi sempre considerado como a temperatura mais elevada, sob condições desnaturantes parcialmente que não exibem degradação perfil. A sequenciação do ADN
Todos os heteroduplexes foram sujeitas a sequenciação do ADN para determinar a alteração genética precisa de uma unidade de sequenciamento semi-automático ( modelo 310, Perkin-Elmer Applied Biosystems Division Aplicada, Foster City, CA) utilizando didesoxi. A sequenciação dos produtos de PCR foi realizada utilizando a versão 1 BigDye kit de sequenciação didesoxi Pronto Rxn (Perkin-Elmer, Foster City, CA). Resultados

A família representada na Fig. 1 está em conformidade com os critérios de Amsterdam II, onde outras doenças malignas epiteliais podem substituir câncer colorretal. A presença de dois tipos de câncer gástrico é incomum e pode ser sugestivo de câncer gástrico familial devido a mutações no E-caderina.
Não havia material disponível para testes de imuno-histoquímica ou microsatélites instabilidade. Uma amostra de ADN estava disponível a partir da pró-banda que foi submetido a análise de mutação. Uma vez que a família aderiu aos critérios Amesterdão II foi realizada inicialmente e hMSH2 hMLH1 a análise de mutações. Não foram identificados mutações na sequência de codificação de qualquer uma das hMSH2 ou hMLH1 incluindo o intrão /exão limites.
Uma vez que havia dois indivíduos diagnosticados com cancro gástrico uma tela adicional mutação foi empreendidas no gene da E-caderina, mas não foram identificadas alterações deletérias .
Discussão
a incapacidade de identificar mutações em hMLH1, hMSH2 ou e-caderina sugere que há uma probabilidade de haver outros fatores genéticos subjacentes da doença na família. Não é, no entanto, a possibilidade de que uma mutação foi dispensada em um destes três genes uma vez que a análise de deleção não foi realizado nem era possível fazer de modo a que havia material genético suficiente para permitir que isso aconteça. Além disso, uma vez que os pacientes sucumbido aos seus doenças várias décadas atrás, é improvável que os testes imuno-histoquímica ou instabilidade microssatélite poderia ser realizado para avaliar a probabilidade de esta família pertencente à referida entidade de HNPCC. E-caderina foi um candidato provável em virtude da presença de células em anel de sinete, dentro dos dois cancros do estômago.
Restam várias possibilidades no que diz respeito ao que pode ter ocorrido dentro desta família pequena. Em primeiro lugar, continua a ser possível que esta é realmente uma família HNPCC não só porque pode haver mutações em qualquer hMLH1 ou hMSH2 mas também nós não examinamos hMSH6 ou hPMS2. O gene hPMS2 continua a ser um candidato provável, uma vez que tem sido associada com casos recessivamente herdado da síndrome de Turcot [9]. Além disso, hPMS2 reside no cromossoma 7 e está rodeado por pseudogenes, alguns dos quais são expressos se bem que a níveis muito mais baixos do que os do tipo selvagem hPMS2. Uma vez que um novo locus para cordoma também foi identificada no cromossoma 7 continua a haver a possibilidade de que nesta família estes dois resultados não são independentes. Infelizmente, nós podemos nunca saber a resposta a esta uma vez que não é insuficiente restante material para estudar a partir do proband e as amostras de tumores retirados de outros membros da família não estão mais disponíveis. Com relação ao pai do proband não sabemos se o aplasia congênita da coxa esquerda foi relacionada à doença na família.
Em resumo, esta família não só representa um desafio no que diz respeito à identificação de uma predisposição genética mas também, se os membros da família estivesse vivo hoje, para o aconselhamento genético.

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