A atividade antimicrobiana, toxicidade aguda e efeito citoprotetor de crassocephalum vitellinum (. Benth) S. Moore extrair em um modelo de úlcera gástrica de ratos etanol-HCl

A atividade antimicrobiana, toxicidade aguda e efeito citoprotetor de crassocephalum vitellinum (Benth.) S. Moore extrair em um modelo de úlcera gástrica de ratos etanol-HCl da arte abstracta
Fundo
uma decocção de Crassocephallum vitellinum
(Benth. ) S. Moore (Asteraceae) é usado em Kagera Região para o tratamento de úlceras pépticas. Este estudo procura avaliar um extracto de etanol aquosa de partes aéreas da planta para a segurança e eficácia.
Métodos
Um 80% extrato etanólico de C. vitellinum
em doses de 100, 200, 400 e 800 mg /kg de peso corporal foi avaliado quanto à capacidade para proteger ratos Sprague Dawley de ulceração gástrica etanol acidificado, em comparação com 40 mg /kg de peso corporal pantoprazol. O extracto e a sua diclorometano, acetato de etilo, e as fracções aquosas foram também avaliadas para a toxicidade aguda em ratinhos, a toxicidade salmoura camarão, e a actividade antibacteriana contra quatro espécies de bactérias Gram-negativas; coli
Escherichia (ATCC 25922), Salmonella typhi
(NCTC 8385), Vibrio cholera
(isolado clínico) e Streptococcus faecalis
(isolado clínico). Foram também determinados os grupos de fitoquímicos presentes no extrato.
Resultados
O extrato etanólico de C. vitellinum
dose-dependente protegida mucosa gástrica de ratos contra etanol /HCl insulto a um máximo de 88,3% a 800 mg /kg de peso corporal, proporcionando o mesmo nível de protecção que em 40 mg /kg de peso corporal pantoprazol. O extrato também exibiu actividade anti-bacteriana fraco contra S. typhi Comprar e E. coli
, enquanto suas frações acetato de etilo, diclorometano e aquosos apresentaram atividade fraca contra K. pneumonia, S. typhi, E. coli Comprar e V. cólera
. O extracto foi não-tóxico para ratinhos até 5000 mg /kg de peso corporal, e o extracto total (LC 50 = 37,49 ug /ml) e a fase aquosa (LC 50 = 87,92 ug /ml), acetato de etilo (LC 50 = 119,45 ng /mL) e as fracções de diclorometano (88,79 ug /ml) mostrou baixa toxicidade contra camarões salmoura. triagem fitoquímica mostraram que o extrato contém taninos, saponinas, flavonóides e terpenóides.
Conclusão
Os resultados apoiar as reivindicações por curandeiros tradicionais que uma decocção de C.vitellinum
tem actividade anti-úlcera. O mecanismo de citoprotecção é ainda a ser determinado, mas os compostos fenólicos presentes no extracto pode contribuir para a sua acção de protecção. No entanto, a dose que confere a protecção gástrica no rato é grande demais para ser traduzido para aplicação clínica; assim bioensaio de fracionamento direcionado para identificar composto ativo /s ou frações é necessário, e uso de mais modelos de úlcera péptica para determinar o mecanismo de ação protetora.
Palavras-chave
crassocephalum vitellinum
Medicina tradicional gástrica citoproteção Antimicrobial aguda, toxicidade fundo
a região de Kagera tem uma cultura rica em prática da medicina tradicional, mas a maioria das plantas utilizadas na região são mal documentados e ainda não foram avaliados quanto à segurança e eficácia. Crassocephallum vitellinum
(Benth.) S. Moore (Asteraceae); Sinónimo: Gynura vitellina
Benth está entre plantas utilizadas em Bukoba para o tratamento da doença de úlcera péptica [1]. As partes aéreas de C. vitellinum
são cozidos com água e a decocção resultante é tomado regularmente para a gestão de úlceras pépticas [1]. Relatos de outras áreas mostram que em Quénia a planta é usada para o tratamento de complicações do estômago, a malária e infecções da boca em crianças [2], enquanto no Zaire as folhas são queimados com aqueles do inhame cultivado e as cinzas é aplicado a escarificações para o tratamento dos pés inchados [3]. No sul Ruanda C.vitellinum
é usado como um remédio hepatoprotectora que foi eventualmente, ligados às suas propriedades antioxidantes [4, 5]. Um extracto de planta os ratos protegidos contra a toxicidade induzida por acetaminofeno fígado, e, além disso, inverteu barbitúrico sono induzido em cobaias [4]. As folhas são usadas para o tratamento da esterilidade feminina, febre forte, dismenorreia, constipação, doenças da infância e facilitar a libertação da placenta [4]. O filtrado de folhas esmagadas e flores da planta combinadas com as de Plantago palmata
Hoof.f., Vernonia auriculifera
Hiern e Physalis peruviana
L. é usado para tratamento da tosse convulsa [6], enquanto as folhas são usadas para a gestão da anorexia [7] e para o atendimento pré-natal [8]. As folhas são utilizados em medicina veterinária para tratamento da mastite, febre, e para facilitar a lactação e a actividade tem sido associada ao teor de flavonóides das folhas [9]. A atividade antioxidante e antibacteriana dos óleos essenciais das partes aéreas da planta foi relatado recentemente [10]. Em campos de refugiados na Tanzânia, curandeiros tradicionais usam as folhas de C. vitellinum Compra de constipação e aborto [11] .As folhas também são usadas pelas pessoas Haya para tratar a gonorreia [1].
Este estudo foi feito para avaliar a eficácia de um extrato das partes aéreas de protecção contra etanol acidificado induzida úlceras gástricas em ratos Spague Dawley. O extracto foi também testada quanto à actividade antibacteriana. triagem fitoquímica foi feito para determinar os grupos de compostos presentes no extrato, enquanto que a toxicidade aguda em ratos e teste de letalidade de Artemia salina foram realizados para determinar a segurança do extrato.
Métodos
Materiais
caldo de triptona de soja foi comprado de HIMEDIA® (Himedia Laboratories Pvt Ltd, Mumbai, na Índia; p
iodonitrotetrazólio cloreto (INT) do SIGMA® (Sigma-Aldrich, St Louis, EUA); pantoprazol (pó liofilizado para injecção iv; Lote No. JKJ 3534D e fabricado pela Sun Pharmaceutical Industries Ltd, Halol-Baroda Highway, Halol-389.350, Gujarat, na Índia.), foi proveniente de uma farmácia local. O etanol (absoluto) foi adquirida da Fluka Chemie GmbH (Sigma-Aldrich, Zwijndrecht, Holanda ), enquanto dimetilsulfóxido (DMSO) foi comprado de Sigma® (Poole, Dorset, Reino Unido). ciclofosfamida, NEOPHOS 500® (CIPLA Ltd, MIDC Boisar, INDIA) foi comprado de uma farmácia local em Dar es Salaam, na Tanzânia. Escherichia coli
(ATCC 25922), Salmonella typhi
(NCTC 8385), Vibrio cholerae
(isolado clínico), e Klebsiella pneumoniae
(isolado clínico) foram obtidos do Departamento de Microbiologia e Imunologia da Universidade Muhimbili da Saúde e Ciências Afins (MUHAS). Os ovos camarão de água salgada foram comprados de Inovações Aquicultura (Grahamstown 6140, África do Sul) e sal do mar foi preparado localmente por água coletada do Oceano Índico evaporação, ao longo da Dar es Salaam Coast.
Recolha de material vegetal
A antena partes de Crassocephallum vitellinum
(Benth.) S. Moore (Asteraceae) foram recolhidos por um botânico experiente, o Sr. Haji O. Selemani do Departamento de Botânica da Universidade de Dar es Salaam e exsicata não. MH 164.569 é mantido no Herbário do Instituto de Medicamentos Tradicionais, Universidade Muhimbili da Saúde e Ciências Afins.
Preparação de extratos vegetais
O material vegetal seco ao ar foi moído em pó usando uma máquina de fábrica de moagem. O material vegetal foi macerado em 80% de etanol à temperatura ambiente durante 24 h e filtrada através de papel de filtro Whatman Nº1. Este procedimento foi repetido 3 vezes para assegurar uma evacuação completa do material de planta. O extracto reunido foi concentrado por evaporação sob pressão reduzida num evaporador rotativo a 40 ºC. O rendimento extrato foi de 31 g de 292 g de material vegetal seco (10,62%).
Testes para actividade anti-úlcera
foram utilizados ratos Sprague Dawley macho e fêmea pesando 100-188 g. Os ratos foram mantidos em jejum durante 36 horas, mas com livre acesso à água potável. Trinta ratos foram distribuídos aleatoriamente em 5 grupos de 6 animais cada. Os ratos no grupo um (controlo de solvente) foram pré-doseados por via oral com 5 ml /kg de peso corporal de Tween 80 em solução salina normal a 1%; ratos do grupo dois foram pré-doseados por via oral com 40 mg /kg de pantoprazol peso corporal (controlo positivo), e os ratos em grupos de 3, 4 e 5 foram pré-doseados por via oral com uma solução de 200, 400 e 800 mg /kg de peso corporal de C . vitellinum
extrair uma hora antes da administração oral de 5 ml /kg de peso corporal da mistura ulcerogénico. A mistura ulcerogénico continha 80% de etanol, ácido clorídrico a 5% e 15% de água destilada. Os animais foram sacrificados por anestesia de éter 4 h após a administração de etanol acidificado. Os estômagos foram removidos, cortado e aberto ao longo da curvatura maior, lavados com solução salina normal e observado para a gravidade das úlceras. O grau de ulceração (índice de ulceração) foi graduada de acordo com um método previamente descrito por Shay e colaboradores [12], como segue: 0 = sem lesões (estômago normal); 0,5 = hiperemia (coloração vermelha); 1 = manchas hemorrágicas, 2 = 1-5 pequenas úlceras; 3 = muitas pequenas úlceras, 4 = muitas pequenas e grandes úlceras; 6 = estômago cheio de úlceras juntamente com perfurações. protecção percentual foi calculado por comparação com a proteção não tratada grupo controle percentual [12] =
100
-
média
úlcera
índice
de
tratada
grupo
média
úlcera
índice
de
controle
grupo
×
100
estatística análise
Os resultados são expressos como média ± desvio padrão (SD). Os resultados do índice de úlcera média foram comparadas pelo teste de Kruskal-Wallis não paramétrica.
Testar a actividade antibacteriana
organismos de teste
Quatro Gram-negativas (enterobactericeae) a saber Escherichia coli, Salmonella typhi, a cólera Vibro , Comprar e Klebsiella pneumonea
foram usados, que foram obtidos do Departamento de Microbiologia e Imunologia da Universidade Muhimbili da Saúde e Ciências Afins.
determinação da concentração inibitória mínima (CIM)
concentrações inibitórias mínimas ( MICs) foram determinadas usando o método de microdiluição em [13]. Uma solução de estoque de o extracto foi preparada por dissolução de 100 mg do extracto de etanol de 80% em 1 ml de DMSO (100 mg /ml). Cada uma das placas de 96 poços de microtitulação foram primeiro pré-carregado com 100 mL de caldo de soja tríptica, seguido pela adição de 100 jil do extracto para os primeiros poços das filas para perfazer um volume total de 200 uL nos primeiros poços. Após mistura cuidadosa, 100 ul foram transferidos dos primeiros poços linha na próxima fila de poços. O processo foi repetido sequencialmente até a última bem na parte inferior, onde 100 jil foi descartado. Em seguida, 100 ul da suspensão bacteriana (0.5Mac Farland turbidez padrão) foi então adicionada a cada poço para fazer um volume final de 200 uL em cada poço. Gentamicina Sulfato (100 ug /ml) foi utilizado como uma droga padrão. Linhas contendo caldo, DMSO e bactérias foram incluídos como controlos negativos (solvente de controlo) e linhas contendo caldo e bactérias só foram incluídos, a fim de verificar se houve crescimento bacteriano ou não (controle de crescimento). As placas foram então incubadas a 37 ° C durante 24 h. Após incubação durante 24 h, a 37 ° C, 40 ul de 0,02% de p-iodonitrotetrazólio (INT) solução de cloreto de foi adicionado a cada poço seguido por incubação durante 1 h a 37 ° C. O crescimento bacteriano foi indicada por uma mudança de cor para cor de rosa nos poços. A ausência de crescimento bacteriano foi indicado por nenhuma mudança de cor do corante. A primeira concentração à qual não ocorreu crescimento bacteriano foi considerada como MIC.
Teste de letalidade camarões Brine
O teste de letalidade de Artemia salina (BST) foi utilizado para prever a presença, no extracto, de actividade citotóxica [14] . As soluções do extracto foram feitas em DMSO, em concentrações variando 8-240 ug /ml e incubou-se em frascos em duplicado com larvas de Artemia salina. Dez larvas de camarão salmoura foram colocados em cada um dos frascos duplicados. Controle de larvas de camarão de água salgada foram colocados em uma mistura de água artificial do mar (3,8 g /l sal marinho) e DMSO somente. Após 24 h os náuplios foram examinados de encontro a um fundo iluminado, e determinou-se o número médio de larvas vivas em cada frasco duplicado. A percentagem média de mortalidade foi representada graficamente contra o logaritmo das concentrações e a concentração matando cinquenta por cento das larvas (LC 50) foi determinada a partir do gráfico [15]. A análise dos dados

Os resultados médios de artémia mortalidade contra os logaritmos das concentrações foram representadas graficamente utilizando o programa de computador Fig P (Biosoft Inc, EUA), que também dá as equações de regressão. As equações de regressão foram utilizados para calcular LC 16, LC 50 e LC 84 valores. intervalos de confiança (IC 95%) foram calculadas usando três resultados [14, 15]. Um LC 50 valor superior a 100 mg /ml foi considerado para representar um composto inactivo ou do extracto. Teste de toxicidade aguda

toxicidade aguda foi feito de acordo com as orientações da OCDE 425 [16]. foram usados ​​tanto ratos albinos originais feminina de Theiller masculino e feminino. Os ratos foram aclimatizados num quarto com ar condicionado a 20 ° C durante 7 dias antes da experimentação. Antes de administração de extratos, os ratos foram famintos durante 18-24 horas com acesso a água potável adequada, em gaiolas com fundo de malha de arame para evitar a coprofagia. Inicialmente a dose de 1000 mg p /kg de corpo foi administrado a um grupo de 6 ratos (3 homens e 3 mulheres), e os ratinhos observados para sinais de toxicidade imediata e /ou morte durante 72 h. Se não foi observada nenhuma toxicidade outro grupo de 3 machos e três ratinhos fêmea foi dada uma dose de 2000 mg /kg de peso corporal e as mesmas observações feitas. Se não há sinais de toxicidade ou de morte ocorreu doses foram sequencialmente aumentada até 3000, 4000, e 5000 mg /kg de peso corporal, respectivamente. Os extractos foram solubilizadas em 1% de Tween 80 em solução salina normal e administrados num volume de dose única de 5 ml /kg de peso corporal ou duas doses de 5 ml /kg de peso corporal, dependendo da solubilidade, dentro de um intervalo de uma hora. Um grupo de controle foi administrado uma única 5 ml ou 5 ml /kg de corpo peso de 1% tween 80 duas vezes para coincidir com a dose de extrato de planta administrada.
Triagem fitoquímica
O extrato etanólico 80% foi testado para a presença de esteróides, saponinas, flavonóides, terpenóides, glicosídeos cardíacos, alcalóides e taninos usando métodos padrão [17, 18].
apuramento Ethical
Este estudo foi dada a permissão ética pela Universidade Muhimbili de Saúde e ciências aliadas Institutional Review Board .
resultados
Antiulcer atividade
O extrato etanólico 80% da C. vitellinum
mostrou uma protecção dependente da dose contra etanol /HCl ulceração gástrica induzida. A Tabela 1 mostra que o extracto protegida no estômago de rato a partir de ulceração por 55% a uma dose de 200 mg /kg de peso corporal (P ≤ 0,001) e este aumentou para 71,7 (P ≤ 0.001), e 88,3% (P ≤ 0,001) a 400 e 800 mg /kg em peso corporal, em comparação com ratos tratados com solvente, respectivamente. Esta foi a mesma protecção percentual de 40 mg /kg peso corporal do inibidor de bomba de protões, pantoprazol. A Figura 1 mostra que, no corpo 800 mg /kg de peso do estômago foi semelhante à dos ratos pré-tratados com 40 mg /kg de peso corporal pantoprazol. A Figura 2 mostra a relação dose-resposta para o controlo, 400 e 800 mg /kg de peso do corpo da planta actividade extractTable 1 Antiulcer de um extracto de etanol de 80% de partes aéreas de C. vitellinum
Grupo No.

Dose de extracto (mg /kg de peso corporal)
índice de úlcera média (n = 6)
% de proteção idade
1

• Diversidade nas interações bactéria-hospedeiro dentro da espécie Helicobacter heilmannii diversidade sensu stricto
• Estado de lavagem gástrica em recém-nascidos com mecônio líquido amniótico: um Estado trial