perfil de expressão de proteína de larvas intestinalis Gasterophilus causando miíase gástrica cavalo e caracterização da reação imunológica do cavalo

perfil dos intestinalis Gasterophilus
larvas causando miíase gástrica cavalo e caracterização da reação imunológica do cavalo da arte abstracta
Fundo expressão da proteína
Há pouca informação disponível sobre o aspecto imunológico de intestinalis Gasterophilus parasitárias
(Diptera, Oestridae ) larvas causando miíase gástrica cavalo. Os objetivos desta pesquisa foram analisar o teor de proteína dos extratos de larvas de segundo e terceiro larvas migrando (L2 e L3) de G. intestinalis
, a fim de caracterizar a resposta imune de cavalos.
Resultados
O perfil proteômico de L2 e L3, investigado usando uma e duas abordagens dimensionais, revelou um padrão de migração específica para cada estágio larval. Além disso, foram realizadas transferências de Western com soro de cavalo e com soros de ratinhos BALB /c imunizados com os extractos em bruto larvais de L2 ou L3, revelando uma reacção imune diferente em cavalos infectados naturalmente vs
. artificialmente induzida reacção imunitária em ratos. As comparações dos perfis de imunotransferência demonstram que a fase L2 é mais imunogénico do que o L3 fase mais provavelmente como um efeito da maior produção enzimática de L2 ao migrar através dos tecidos do hospedeiro. Quinze proteínas foram identificadas por espectrometria de massa.
Conclusão
Este trabalho fornece mais informações para a compreensão da interação entre G. intestinalis
e seu hospedeiro e contribuindo um novo esquema do perfil proteômico do larval principal estágios.
Fundo
nove espécies de Gasterophilus
(Diptera, Oestridae) moscas têm sido descritas causando, na fase larval, miíase gastrointestinal em eqüídeos. Enquanto Gasterophilus intestinalis
(De Geer, 1776) e Gasterophilus nasalis
(Linnaeus, 1758) são distribuídos em todo o mundo e muitas vezes são as únicas espécies relatadas em muitas partes do Novo Mundo, as demais espécies só são notificados em muito limitada áreas da Europa, Países [1] África Oriental e [2]. moscas adultas bot depositar seus ovos no cabelo dos anfitriões em locais diferentes, dependendo da espécie de Gasterophilus
[3]. G. pecorum
é uma exceção como fêmeas colocam seus ovos na grama, folhas e caules das plantas [1]. A infecção ocorre quando os ovos são introduzidos na boca do cavalo lambendo animais e grooming. Os primeiros escotilhas fase larval (L1), começa a migrar e muda para a segunda fase larvar (L2) na cavidade oral [4]. As larvas de diferentes espécies de Gasterophilus Quais são especificamente presentes em uma ou mais regiões do tracto gastrointestinal em que a terceira fase larvar (L3) permanece ligado à mucosa durante cerca de 8-10 meses [5]. Os sinais clínicos associados com as fases de migração e maturação das larvas são difíceis de diagnosticar, mas demonstrou-se que diferentes espécies de Gasterophilus
pode causar danos graves durante o seu ciclo de vida [6-9].
No últimos estudos anos relativos à imunologia e imunopatologia de muitas larvas miíase causando oestrid têm aumentado por causa de suas implicações importantes no diagnóstico e nos programas de imunização [10]. Enquanto os estudos imunológicos foram focado principalmente em Hypoderma
infecção gado grub [11], e ovelhas oestrosis nasal por estro ovis
[12], a imunologia do Gasterophilus
spp. miíase causou recebido pouca atenção. Isto também é devido às dificuldades inerentes ao estudo das interacções hospedeiro-parasita imunológicos na interface mucosa gastrointestinal. Como consequência, até agora não há grandes imunogénios foram relatados [13]. Um único estudo discutido o desenvolvimento de anticorpos para o diagnóstico de miíase por Giardia intestinalis
larvas embora a especificidade da reacção imunitária, não foi testada na ocorrência de infecção parasitária cavalo concomitante [14]. Análises mais recentemente, à base de proteômica muitos, combinados com bidimensional gel-eletroforese, ofereceram uma abordagem abrangente para entender melhor os processos biológicos e imunológicos de patógenos e doenças [15-17]. O objetivo deste estudo foi caracterizar L2 e L3 proteínas de G. intestinalis
e analisar a resposta imune de cavalos e ratos imunizados contra antígenos de larvas.

Resultados da análise 1-D do extrato bruto larval (LCE) de L2 e L3
migração do LCE2 no gel corado com prata 1-D mostraram um padrão específico (Figura 1A) com 14 bandas que foram isolados a partir do gel, para posterior identificação por espectrometria de massa (MS) ( Tabela 1). A selecção das bandas foi baseado na intensidade da banda no gel corado com prata, bem como a imuno-reactividade observada após imunotransferência com soro de cavalo (Figura 1B) ou soro de ratos-L2 (Figura 1C). Três proteínas em quatro das 14 bandas seleccionadas deu uma pontuação significativa (p < 0,05) e foram identificados como actina (Figura 1A, banda 8), desidrogenase gliceraldeído 3-fosfato (GAPDH) (Figura 1A, banda 9) e a hemoglobina (Figura 1A, as bandas 13 e 14). Um padrão de migração diferente foi observado para o LCE3 no 1-D-gel corado com prata (Figura 1D). Analogamente, imunoblots foram realizados com soro de cavalo (Figura 1E) e os soros dos ratinhos-L3 (Figura 1F). A selecção de bandas 13, indicada pelas setas (Figura 1D), se baseado nos mesmos critérios acima. Eles foram isolados para posterior identificação por MS (Tabela 2). Dez proteínas das 13 bandas seleccionadas deu uma pontuação significativa (p < 0,05) e foram identificados como a cadeia alfa da proteína de soro de larvas (Figura 1D, faixas 1-4), arylphorin (Figura 1D, faixa 6), cadeia beta de proteína de soro larval (Figura 1D, faixa 7), hemoglobina (Figura 1D, bandas 10-12) e lipoproteína murein (Figura 1D, faixa 13) .table 1 Mass identificação espectrometria de proteínas identificadas a partir da LCE de L2.
Banda ID
nome Protein
Espécies
número Adesão

MW (Da)
pI
pontuação Protein
8
proteína similar à actina-87E isoforma 2
Drosophila melanogaster

AAM29410
37816
5,36
223
9
gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase
Drosophila hydei
S24630
35369
8.2
224
13
hemoglobina
intestinalis Gasterophilus
O96457
17912
8,44
440
14
hemoglobina
intestinalis Gasterophilus

O96457
17912
8,44
144
Spots atribuições consulte a Figura 1. Proteínas listados foram identificados com uma pontuação de probabilidade significativa a p < 0,05 em MSDB.
Tabela 2 Mass identificação espectrometria de proteínas identificadas a partir da LCE de L3.
Banda ID
nome
Protein
Espécies
número Adesão
MW (Da)
pI
pontuação Protein

1

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