Ploche ONE: mangiferín zmierňuje žalúdočný vred v ischémia /reperfúziou Rats: Zapojenie PPAR-y, NF-kB a Nrf2 /HO-1 signálnych dráh

abstraktné

mangiferín (MF), čo je xanthonoid z Mangifera indica, bolo preukázané majú antisekrečnej a antioxidačné účinky proti gastroprotektívnymi rôznych modelov žalúdočný vred; Avšak, jeho molekulárnej mechanizmus nebol doteraz objasnený. Preto je cieľom tejto štúdie bolo testovať ich modulačné účinok na niekoľkých signálnych dráh s použitím modelu ischémie /reperfusní prvýkrát. Zvieratá bola ošetrená MF, omeprazolom (OMP), a vozidlo. Mechanistické štúdie odhalili, že MF sprostredkovala gastroprotektívnymi účinky čiastočne cez indukciu expresie Nrf2, HO-1 a PPAR-y spolu s downregulating, že NF-kB. Prekvapivé je, že účinok MF, najmä vysoká dávka, ktorá prekročila sprostredkovaná OMP s výnimkou Nrf2. Molekulárna výsledky sa odrazili na biomarkery meranej, kde antioxidačný účinok MF sa prejavilo zvýšením celkovej antioxidačnej kapacity a glutatiónu, okrem normalizácie hladiny malondialdehydu. Navyše, MF znížila zvýšenie I /R vyvolané oxidu dusnatého, čo je účinok, ktorý je lepší ako u OMP. V sére, MF, v závislosti na dávke, zvýšenú endoteliálny syntázy oxidu dusnatého, a zároveň znižuje inducibilní izoformy. Pokiaľ ide o protizápalové účinky MF, sa znižuje sérové ​​hladiny IL-1 a sA-selektínu, účinky, ktoré boli zrkadlové na úrovni tkaniva myeloperoxidáze, neutrofilov infiltrácie markeru. Okrem toho, MF posadol antiapoptotických znak doložené zvyšovanie hladiny Bcl-2 a znižovanie, že kaspázy-3, aby sa v závislosti od dávky. Na záver sa naznačené gastroprotektívnymi mechanizmy MF sú sprostredkované, čiastočne tým, že modulácia oxidačného stresu, zápalu a apoptózy prípadne prostredníctvom Nrf2 /HO-1, PPAR-γ /NF-kB signálne dráhy.

Citácia : Mahmoud-Awny M, Attia AS, Abd-Ellah MF, El-Abhar HS (2015) mangiferín zmierňuje žalúdočný vred v ischémia /reperfúziou Rats: Zapojenie PPAR-y, NF-kB a Nrf2 /HO-1 signálnych dráh. PLoS ONE 10 (7): e0132497. doi: 10,1371 /journal.pone.0132497

Editor: Ashraf B. Abdel-Naim, Farmaceutická fakulta, Ain Shams University, Egypt

prijatá: 18. marca 2015; Prijaté: 15. júna 2015; Uverejnené: 21. júla 2015

Copyright: © 2015 Mahmoud-Awny et al. Toto je článok o otvorenej distribuovaný pod podmienkami Creative Commons Attribution licencie, ktorá umožňuje neobmedzené použitie, distribúciu a reprodukciu v nejakom médiu, za predpokladu, že pôvodný autor a zdroj sú pripísané

Data Dostupnosť: Všetky relevantné údaje sú v novinách

financovania: .. autori nemajú žiadnu podporu ani finančné prostriedky hlásiť

Konflikt záujmov :. autori vyhlásili, že žiadne konkurenčné záujmy neexistujú

Úvod

Počas žalúdočný vred choroba prosperita upshots zhromažďovali, aby núdzi rovnováhu medzi deštruktívne a ochranných akcií. Oxidačný stres je kľúčovým faktorom, ktorý vyvoláva žalúdočné vredy a má za následok nadprodukciu voľných radikálov (FRS) [1]. Žalúdočné ischémia /reperfúziou (I /R) archetypálny napodobňuje napätie vyvolané žalúdočný vred, a v tom prípade, zvýšené FR, oxid dusnatý (NO), leukocytárna adhézny molekula "E-selektínu" [2], neutrofilné infiltrácie [3], a redox nerovnováhy [4] môže zohrávať významnú úlohu v patogenéze. Rovnako tak, nukleárna faktor kappa-B (NF-kB), transkripčný faktor, redox-senzitívne, má kľúčovú úlohu v poranenia I /R [5]. Reguluje expresiu niekoľkých génov spojených so zápalom a poškodeniu buniek, ako je interleukín (IL) -1β, -6, bunkových adhéznych molekúl a inducibilní syntázy oxidu dusnatého (INOS). Na druhej strane, niekoľko faktorov, ktoré sprostredkujú ich žalúdočným proti oxidačnému úrazu zmiernenie zápalovej reakcie, medzi ne patrí Peroxisome receptora aktivovaného proliferátorom (PPAR), gamma [6, 7] a heamoxygenase-1 (HO-1) [8]. Tá je indukovatelná izoforma HO, ktorá reaguje na napätie, ako je oxidačný stres a zostáva všeobecne považovaný ako ochranný mechanizmus proti oxidačné poraneniu tkaniva [9].

Jednou z transkripčných regulátorov HO-1 je nukleárnej faktor-E2 v súvislosti s faktor-2 (Nrf2) [9], ktorý je lokalizovaný v cytoplazme za obvyklých podmienok a interaguje s Keap1 (molekulárnu čidlo cysteín bohaté na proteín Kelch podobný ECH združujúca proteín 1), ktoré sa rýchlo degradovaný podľa ubiquitin-proteasomu dráhy [10, 11]. Naopak, za oxidačných stresových podmienok, Keap1 sa oxiduje a Nrf2 ubikvitinace je znížená [11], sa uvoľní, a tým, Nrf2 z Keap1. Nrf2 je transportovaný do jadra, aby postroje s antioxidačnou odozvy prvok cieľového génu promótorom [12, 13], ktorá predstavuje okamžitý transaktivaci génov kódujúcich. Tieto gény zahŕňajú mnoho enzymatickou antioxidačné a detoxikačné génov, ako je napríklad glutatión (GSH) peroxidázy /reduktázy, HO-1, a GSH S-transferázu [14].

mangiferín (MF), prirodzene sa vyskytujúce glucosylxanthone, vlastné žalúdočným efekt pomocou
jeho antisekrečnými a antioxidačné účinky, ako bolo overené v rôznych zvieracích modeloch žalúdočných vredov [15], ale nie aj /R model, ktorý je cieľom súčasnej práce. MF bolo hlásené sprostredkovať jeho antioxidačnú aktivitu na rôznych úrovniach oxidačným sekvencie. To vytvára MF fenoxyradikály a viaže sa na ióny kovov (Fe ^{2 + /3 +) vo forme stabilnej MF-komplexu železa, ktorá neumožňuje vytváranie hydroxyl (OH) radikály a /alebo oxo-ferryl skupiny a upratuje lipidov peroxidových /alkoxyskupiny, čím sa pri zachovaní bunkovej oxidácie, antioxidant rovnováha [16]. Cez podrobných bunkových reakciách popísaných však cesty molekulárnej signálne nebola riešená skôr.}

Na molekulárnej úrovni, súčasný cieľom bolo posúdenie možného zapojenia Nrf2 /HO-1, PPAR a NF -κB signálnych dráh v žalúdočnom účinku MF, okrem iného biomarkery na vymedzenie prípadných gastroprotektívnymi mechanizmy, pomocou /modelu reoxygenace hypoxiou.

materiály a spôsob

Zvieratá

Male krysy Wistar s hmotnosťou 180-220 g (výskumný ústav oftalmológia, Giza, Egypt) boli uchovávané na 12h svetlo /tma cyklov, konštantných podmienok v oblasti životného prostredia a boli udržiavané na správnej diéty žraniu a vode ad libitum
. Pred experimentovať (24 hodín) všetky zvieratá bola držaná jednotlivo v klietkach širokých spodnej pletivo a postil. Zvieratá bola vybavená podľa pokynov schválených výborom Animal starostlivosť a používanie Farmaceutické fakulty, Káhirskej univerzite, Káhira, Egypt (povolenie číslo: PT 575). Všetky chirurgické postupy boli vykonávané pod tiopentalom, a bolo vyvinuté všetko úsilie, aby sa minimalizovalo utrpenie.

Lieky

mangiferín [MF] bol zakúpený od Sigma-Aldrich Chemical Company (St. Louis, MO, USA) a omeprazol [OMP] z Chemo SA (Lugano, Švajčiarsko). Všetky ostatné chemikálie a činidlá boli použité analytickej čistoty. MF a OMP boli rozpustené vo fyziologickom roztoku, ktoré majú byť injikované intraperitoneálne.

Indukcia žalúdočnej sliznice ischémie /reperfúziou (I /R) a ošetrenie

Model I /R bol vykonaný podľa metódy vopred opísal Kotan a kol. [17] s určitými úpravami. Stručne povedané, podľa tiopentalom (50 mg /kg, i.p.), potkan celiakálna tepna bola uzavretá po dobu 30 min., Po ktorom reperfúziou sa ponechá po dobu 72 hodín pomocou declamping tepnu. Krysy boli pridelené do 5 skupín (n = 7-9); Zvieratá v prvej skupine bol podaný fyziologický roztok a Celiac tepny bola manipulovať bez upnutia, aby slúžil ako kontrolnej skupine placebo ovládané. Krysy v nasledujúcich skupinách boli podrobené I /R; neošetrené (druhá) skupina, dostala fyziologický roztok a bol označený ako pozitívna kontrola (I /R), zatiaľ čo ostatné 3 skupiny boli ošetrené, s MF (10 mg /kg; MF _{10, tretia skupina), MF ( 20 mg /kg; MF 20, štvrtá skupina), a OMP (20 mg /kg; OMP 20, piata skupina). Všetky ošetrenia bola vykonaná 30 min. Pred uvedením do prevádzky a po dobu 3 dní po reperfúziou.}

Histopatologické vyšetrenie

žalúdka, z troch reprezentatívnych zvierat v každej skupine, bol okamžite ponorí do 10% formalínu-fyziologický roztok, vložené do parafínu a 5 um sekcií boli pripravené, zafarbené hematoxylínom a eosínu (H &E) a skúmané mikroskopicky

Biochemické vyšetrenia

na konci doby re-perfúznom a za hlboké éterové anestézii, bola odobratá krv od. krčnej žily na prípravu séra, potom boli zvieratá usmrtené a žalúdok sa vyreže, otvorený pozdĺž veľkého zakrivenia, a premyje sa ľadovo chladného fyziologického roztoku. Rozsah hrubej poškodenie slizničnej (vred Index) sa hodnotila a bola vyjadrená ako súčet dĺžok vredov na bruchu v mm [18]. Stručne povedané, bolo použité osvetlená lupa (3x) na meranie dĺžky dlhých lézií (mm) v žľazovej časti žalúdka, zatiaľ čo petechea lézie boli počítané a po piatich lézie boli zastúpené 1 mm vred.

O 50 mg žalúdočnej sliznice bola ponorená cez noc v RNA neskôr roztoku, skladované pri teplote -80 ° C až do kvantitatívnej PCR v reálnom čase (QRT-PCR) kvantifikácie. Zostávajúce sliznice bol vyhodený off a homogenizované v ľadovo chladnom roztoku (MPW-120, Poľsko) za použitia maximálnej rýchlosti po dobu 1 minúty. Homogenát bol centrifugován pri 5000 otáčkach za minútu po dobu 5 minút pri teplote 4 ° C a výsledné supernatanty boli uložené v aliquotes a skladované pri teplote -80 ° C až do stanovenia žalúdočných parametrov.

Odhad homogenátu /parametrov v sére pomocou ELISA technika

Homogenát /sérové ​​hladiny týchto parametrov boli hodnotené za použitia zodpovedajúcej súpravy ELISA, ako je uvedené v zátvorkách: .. IL-1β, sA-selektínu (abca Inc., Cambridge, UK, kat č ab100768 a ab171334, v uvedenom poradí), INOS, Enos (EIAab, Wuhan, Čína, Cat No. E0837r a E0868r, v uvedenom poradí), B lymfocytárnej leukémie /lymfóm-2 (Bcl-2;. USCN Life Science Inc., Wuhan, Čína, Cat č. E90778Bo) a kaspasy 3 (Cusabio Biotech Co., Wuhan, Čína, kat. č CSB-E08857r). Každý biomarkerov bola spracovaná v súlade s postupmi výrobcov poskytované. Sérum celková antioxidačná kapacita (TAC) sa merala pomocou metódy Benzie a uprene [19]. Stručne povedané, železitý tripyridyltriazine (Fe ^{3 + -TPTZ) komplex sa redukuje na železného forme antioxidantov prítomných vo vzorke v kyslom pH, čím sa získa intenzívnej modrej farby, ktorý môže byť monitorovaný meraním zmeny absorbancie pri 593 nm. Táto zmena je v priamom vzťahu ku kombinovanému alebo celkový redukčný schopnosť darcom elektrónov neenzymatickej antioxidanty prítomné v reakčnej zmesi. Hladina TAC sa vyjadrila ako uM /l.}

Stanovenie žalúdočnej aktivity /obsahu myeloperoxidáze (MPO), malondialdehydu (MDA), redukovaný glutatión (GSH) a celkové oxidu dusnatého (NOx).

aktivita MPO (U /g), čo je marker tkaniva neutrofilov infiltrácie, bola hodnotená podľa Bradley et al. [20]. Táto metóda je založená na meraní peroxidu vodíka v závislosti na oxidáciu na o-dianisidin, za katalytického účinku MPO, čo vedie k tvorbe zlúčeniny vykazujú zvýšenú absorbanciu pri 460 nm. Ako index peroxidácie lipidov kyseliny thiobarbiturové reaktívne látky (TBARS), v zastúpení MDA, bola použitá pre stanovenie oxidačné poškodenia, podľa spôsobu uvedeného v Mihara a Uchiyama [21]. MDA-TBA adukt vyvíja ružovú farbu, ktorá sa extrahuje n-butanolom a meranou pri dvoch vlnových dĺžkach, viď
., 520 a 535nm. Metóda opísaná Ahmed et al. [22] za účelom posúdenia neproteínová sulfhydrylové skupiny (najmä GSH), reakciou s činidlom Ellmanova po vyzrážaní proteínových SH-skupiny. Reakcia s činidlom Ellmanova tvorili stabilný žltú farbu 5 kyseliny merkapto-2-nitrobenzoová, ktorá bola meraná kolorimetricky pri 412 nm (mg /g).

žalúdočnej sliznice NO výroba bola odhadnutá nepriamo ako dusitan /koncentrácie dusičnanov v závislosti na spôsobe Miranda et al. [23], kde bol použitý chlorid vanádu k zníženiu dusičnanmi na dusitany. Ružové azo-farbivo pripravená reakciou dusitanu s kyselinou sulfanilovej nasleduje následné spojenie s N- (1-naftyl) etyléndiamín bola meraná kolorimetricky pri 540 nm a emisií NOx bola vyjadrená ako uM /g.

kvantitatívne real-time (RT) -PCR

Celková RNA bola extrahovaná z žalúdočnej sliznice za použitia jednoducho P Total RNA Extraction kit (BioFlux, Hangzhou, Čína). Čistota získanej RNA bola overená spektrofoto-metricky pri 260/280 nm. Rovnaká množstvo RNA (0,368 ug) boli retrotranscribed do prvého reťazca komplementárna DNA (cDNA) pri teplote 37 ° C počas 50 min. za použitia 200 U /ul M-Mulva s reverznej transkriptázy (SibEnzyme, Novosibirsk, Rusko), 1 pl náhodný hexamérov (Qiagen, LRS Laboratories, Inc. Kórea) a 0,1 M DTT v 50 ul reakčnej zmesi. Pre posúdenie expresie antioxidačných a zápaly spojené cieľových génov, RT-PCR bola vykonávaná s použitím SYBR green PCR Master Mix (Qiagen), ako je popísané výrobcom. Stručne povedané, v reakčnom objeme 25 ul, 5 ul cDNA bolo pridané 12,5 ul 2x master mixu SYBR zelený a 2,5 ul (2,5 um) každého primeru. Sekvencia primérov boli: PPAR-γ sense primer 5'-GCGGAGATCTCCAGTGATATC-3 '; antisencie primer 5'-TCA GCGACTGGGACTTTTCT-3 '; NF-kB P65 sense primer 5'-TGCAGAAAGAAGACATTGAGGTG-3 '; antisencie primer 5'-AGGCTAGGGTCAGCGTATGG-3 '; Nrf2 sense primer 5'-ATGGCC ACACTTTTCTGGAC-3 '; antisencie primer 5'-AGATGTCAAGCGGGTCACTT-3 '; HO-1 sense primer 5'-CGTGCAGAGAATTCTGAGTTC-3 '; antisencie primer 5'-AGACG CTTTACGTAGTGCTG-3 '; a glyceraldehyd-3 fosfátdehydrogenázy (GAPDH) sense primer 5'-GGGCAGCCCAGAACATCA-3 '; antisencie primer 5'-TGACCTTG CCCACAGCCT-3 '. PCR reakcia obsahovala 15 minút pri teplote 95 ° C počas aktivácie HotStarTaq DNA polymerázy, nasledovaný 45 cyklami pri 94 ° C počas 15 sekúnd (denaturačný), 55 ° C počas 30 sekúnd (žíhanie), a 72 ° C počas 30 sekúnd (predlžovací ). Relatívna expresia bola vypočítaná z 2 ^{-ΔΔCT vzorca [24].}

Štatistická analýza

Dáta bola vyjadrená ako priemer ± SEM z 7-9 zvierat. Štatistické porovnanie medzi prostriedkov bola vykonávaná za použitia jednocestnej analýzy rozptylu (ANOVA), nasledované Student-Newman-Keulsovým testom. Štatistická významnosť rozdielov bola považovaná za P Hotel < 0.05.

Výsledky

Vplyv MF a OMP na I /index vred R-indukovanej

MF, v závislosti na dávke, zakázalo I /R indukovanej žalúdočnej ujmu, ako prezentované hodnotami indexu vredu (Tabuľka 1) a účinok MF _{20 bola porovnateľná s tým, čo ponúka OMP 20.}

vplyv MF a OMP na expresiu mRNA antioxidačných génov

Ako je znázornené na obr 1A a 1B, adaptívne reakcie proti úrazu I /R bol preukázaný v up-reguláciu Nrf2 a HO-1 mRNA, čo vysvetľuje, prečo za zvýšenou hladinou GSH v neošetrené I /R skupiny. Tieto mRNA upregulations boli ešte živšie u liečených skupinách, bodovanie, tak, aby antioxidačné kapacity MF.

Vplyv MF a OMP o parametroch redoxných

Ako je uvedené v tabuľkách 2 a 3 I /R urážky spôsobila nerovnováhu v oxidačnom /nitrosative stave. Prudký vzostup hladiny MDA (182%) a produkcia NOx (187,6%), paralelne s 5,1 záhyby zvýšenie INOS, bol vnímaný v I /R neošetrené skupiny. Naopak, zranenie I /R polovicu skutočného Enos a znížil TAC (69,7%), v porovnaní s placebo skupinou. Všetky tieto zmeny boli vrátené podľa OMP, rovnako ako MF, v závislosti na dávke. Takmer vo všetkých parametroch MF _{20 mal prominentné účinok. Pokiaľ ide o GSH, model I /R, neočakávane zvýšená to o 32%, čo je účinok, ktorý bol ďalej obohatený o rôznych liekových režimov.}

Vplyv MF a OMP na expresiu mRNA PPAR-y a NF -κB gény

Ako je zobrazené na obr 1C, zvieratá s I /R zranenia odhalila významné zníženie žalúdočnej vyjadrenie protizápalového PPAR-y (25% úrovne predstieranou), s výrazným zvýšením v tom, že z prezápalového faktora NF-kB (11,9 krát) (obrázok 1D). Je zaujímavé, že MF ošetrené skupiny boli schopné pôsobiť proti účinkom /R súvisiace s I podľa úrovne dávky testované. OMP, na druhej strane, vykazovali menší účinok ako MF robil na NF-kB, ale nemenil zmenšenou PPAR-y.

Vplyv MF a OMP na žalúdočné zápalových cytokínov a neutrofilov infiltrácie

Tabuľka 4 znázorňuje I /R sprostredkované žalúdočné pohoršenie, ktoré zhoršujú zápalové biomarkery. Sa zvýšila sérové ​​hladiny IL-1, sA-selektínu, a žalúdočné MPO aktivity o 5,2, 5,6, 2,2 a záhyby, v danom poradí, v porovnaní k podvod ovládaný kontrolnú skupinu. Všetky tieto zmeny boli výrazne zastavený ošetrenie MF v závislosti na dávke. Avšak, MF _{20 účinky nahradená, že sprostredkované referenčný štandard OMP. Tieto pozorovania ukazujú, že MF môžu modulovať zápalové cytokíny a neutrofily nábor na zmiernenie I /R poranenie vyvolané.}

Vplyv MF a OMP na apoptotické biomarkery

Ako je uvedené v tabuľke 4, I /R urážky spúšťa apoptózu žalúdočnej sliznice, o čom svedčí nárast 6,85 záhyby kaspázy-3 úrovni. V rovnakej súvislosti, I /R sa znížil hladinu anti-apoptotické markeru Bcl-2 (59%). Avšak podávanie MF, v závislosti na dávke, zastavil tieto zmeny významne, efekty, ktoré už nebol ty, sprostredkované OMP.

Vplyv MF a OMP na žalúdočné histopatologických zmien

Zlepšujúce účinky rôznych liekových režimov na testovaných biomarkerov boli ďalej potvrdené histologické nálezy uvedené na obrázku 2. na obrázku sú znázornené mikrofotografie žalúdočnej sliznice, ktoré ukazujú, [a] normálne žalúdočnej sliznice (MU), submukóznu (SM) a muscularis ( ml) architektúra v úseku potkana placebo-prevádzkoval. [B] I /R úseky ostenia premietaný sliznicu (M), juxtraposed s podkladovým krvácaním (čierna šípka), [C] závažné cievne preťaženia (V), fokálna zápalové bunky infiltrácie (m), a to predovšetkým neutrofilov, a edém (O) v submukóze. [D] MF _{10 oddiel prezradí len preťaženie v submukóznu cievach (V) s miernou zápalovou infiltráciou buniek (žlté šípky) a /alebo edému. Na druhej strane, [E] MF 20 sekcii, podobne ako podvod ovládaný, ukazuje normálne intaktné histologickú štruktúru, s výnimkou veľmi jemné vaskulárnej preťaženia (v) v submukóze; MF 20 účinkom nahradená tomu [F] OMP, kde sú stále detekovaný preťažené ciev (V) a opuch v podslizničním vrstve v sekciách OMP.}

Diskusia

Hoci predchádzajúce štúdie dokumentovali antioxidant [15] a protizápalové [25] kapacít MF, ale žiadna z nich objasnila potenciálny molekulárnych dráh zapojených do sceľovanie narušeného redox /zápalových systémy. Tak, v tejto práci sme overili žalúdočnej sliznice expresiu Nrf2 /HO-1 zistiť, či tento signálne dráhy sa podieľa na antioxidačné mechanizmu MF. Navyše štúdie cielené expresie NF-kB a PPAR-y preskúmať aj niektoré z možných MF protizápalové molekulárnej techniky.

Naša štúdia signálne transdukcia bolo zistené, že I /R významne up-regulovaná mRNA Nrf2 a HO-1 s odkazom na možný účinok adaptívne tela proti aj /R poškodzujúcim urážky; tieto zistenia napodobňovať Pan a spol [26] v sietnice I /R modelu. Zvýšenú HO-1 expresie proteínu, regulovaná Nrf2 [27], môže dôjsť v reakcii na oxidačný stres [28] a zápalových ochorení a je široko prijímaný ako ochranný mechanizmus proti oxidačné poraneniu tkaniva [9], skutočností, ktoré podporujú naše zistenia. MF, na druhej strane, potvrdila jeho antioxidačné účinky ďalším zvýšením expresie Nrf2 a HO-1, výsledky, ktoré boli v minulosti v hepatotoxickými modeli [29]. Podľa našich najlepších vedomostí, toto zistenie je prvý priamy dôkaz pre úlohu žalúdočným MF cez Nrf2 /HO-1 antioxidačné dráhy v I /modeli vredov R indukovanej.

Antioxidačné charakter MF ďalej je tu prejavil jeho schopnosť bojovať proti zvýšeniu /i R indukované peroxidov lipidov [30] a pokles TAC [31]. Avšak, účinok na I /R a MF na GSH vykazovala rovnaký vzor pozorovaný v Nrf2 a HO-1 expresie, kde I /R spôsobil jemný, avšak výrazné zvýšenie GSH, čo je účinok, ktorý bol ďalej umocnený MF [32] , Táto akcia, poukazuje na možné kompenzačné odpovede proti úrazu I /R a odkazy GSH s Nrf2 /HO-1 signálne dráhy ako podporované doteraz Das et al. [29]. Korelácia medzi GSH a Nrf2 môže súvisieť s molekulárnou presluchy medzi up-regulované Nrf2 a γ-glutamylcysteinových ligázu [10, 33], čo je enzým, ktorý katalyzuje krok limitujúci rýchlosť pri syntéze GSH [34]. Navyše, HO-1 antioxidant role pramení z jeho schopnosti katalyzovať odbúravanie pre-okysličovadla hemu do železa, biliverdínu a oxidu uhoľnatého [35]; biliverdínu sa potom prevedie na bilirubín, ktorý pôsobí ako antioxidant proti peroxidácii lipidov [36].

Okrem zašívania porušených molekúl stave redox, MF rozšírila účinok mať za následok nitrosative stres, rovnako. MF proti I /R vplyv na hladiny Enos /INOS, kde obnovenej aktivitu konštitutívneho enzýmu Enos [37], a na zníženie škodlivých inducibilní izoformy [38]. Z tohto dôvodu sa predpokladá, že zvýšená hladina INOS v neošetrenej skupine je zodpovedný za prebytku úrovne NOx, ktorý porušuje žalúdočnej sliznice integrity pomocou
interakcie s aniónom superoxid a tvorbu peroxydusitanu [39]. Ten je silný voľný radikál, ktorý narúša bunkovej makromolekuly cez peroxidácie lipidov, priamy mitochondriálnej poruchou, inhibícia membránové Na ^{+ /K + - ATPázy, a oxidačné modifikácie proteínov [40]. Naopak, MF sprostredkovaná produkcia NOx môžu byť riadené z obnovených Enos a INOS nie, podporné, tak antioxidačné /likvidujúce voľné radikály vlastnosti MF [16]. Ochranný NO uhasí voľné radikály s následným zachovanie GSH v žalúdočnej sliznici; GSH pôsobí jednak ako nukleofilní lapač superoxidy a ako kofaktor v peroxidázovom sprostredkované zníženie GSH vodíkových peroxidy [41].}

Škodlivé účinky, ktoré nasledujú po I /R urážku zahŕňajú zvýšené uvoľňovanie mediátorov a nábor leukocytov, okrem narušenia oxidačný /nitrosative strojov [42]. V tejto štúdii, MF overená jeho protizápalové /imunitný-modulačné účinok, ktorý bol zdokumentovaný už skôr [25, 43], inhibíciu IL-1 [43], E-selektínu [25], a infiltráciu neutrofilov [44] v inej rôzne modely. Tieto účinky môžu byť spojené čiastočne, aby sa MF-modulačné zmeny na molekulárnej úrovni. MF indukovanej génovej expresie PPAR-y, spolu s down-reguláciu materskej zápalové transkripčný faktor /mediátor NF-kB, ktoré bránia, To znamená, že I /R účinok. Skoršie štúdie uvádzajú, že I /R poškodzujúci účinok je sprostredkovaný čiastočne pomocou
potlačenie PPAR-y mRNA [7, 45], čo je transkripčný faktor, ktorý pôsobí ako vplyvný pleiotropické regulátorom proti zápalu, antioxidant, a fagocytov sprostredkované vyčistenie procesy. Na rozdiel od jeho priameho účinku genómovej, PPAR bolo zistené, že ovplyvňujú negatívne s inými zápisu a faktormi, ako je NF-kB, ktorý je základom mnohých aspektov protizápalového /imunomodulačný účinok PPAR [25, 46] skutočnostiach, ktoré tón s našimi zisteniami. Okrem toho bola zaznamenaná zvýšená expresia PPAR inhibovať produkciu NOx /INOS [47], ktoré poskytujú, tak, vysvetlenie pre MF-sprostredkované inhibícia INOS. PPAR tiež bráni makrofágy-riadený cytokíny a molekuly adhézie leukocytov, ako je vidieť v tomto texte, čiastočne pomocou
potlačenie génovej expresie NF-kB [25, 48]. Okrem toho, MF bolo preukázané zníženie adhézie PMN k endotelu a zaistiť proti ich prenikanie do žalúdočnej tkaniva [49], spolu s moduláciou PPAR-y a expresie NF-kB. Tieto zistenia podporujú naše na E-selektínu, INOS, a MPO, ako bolo spomenuté predtým. Navyše MF indukované HO-1 up-regulácia môže racionalizovať protizápalový charakter MF pomocou
jeho vedľajší produkt oxid uhoľnatý, ktorý prepožičiava protizápalové vlastnosti [50]. Za týmto účelom sa experimentálne výsledky našej štúdie identifikovať ďalšie gastroprotektívnymi mechanizmy ako na molekulárnej a bunkovej úrovni, ktorú MF chránených žalúdočnú sliznicu proti poraneniu I /R-indukovanej. Tieto výsledky potvrdzujú s výsledkami predchádzajúcich štúdií v experimentálnom modeli kolitídy [51, 52], a vysvetliť protizápalový účinok MF.

Skôr Wu et al. [53] uvádzajú, že PPAR-γ nadmerná expresia tiež chráni potenciálu mitochondriálnej membrány a zabraňuje apoptózu upregulating expresiu antiapoptotických rodiny Bcl-2 proteínov. Podobne, oxid uhoľnatý, vedľajším produktom HO-1 aktivitu, priznáva anti proapoptotický aktivitu zo strany up-reguláciu anti-apoptotické molekuly Bcl-2, a down-reguláciu proapoptotický signálu Bax [54]. Dáta z tejto štúdie preukázali, že I /R vyvolanej gastrickej poškodenie je spojená aj s apoptózou, o čom svedčí výraznému zníženiu Bcl-2 [55] a výškou kaspázy-3 [56], pričom MF sa vrátil do I /R indukovanej apoptózy na dávky závislé výškou hladiny Bcl-2, a redukcia kaspasy-3 úrovni. MF anti proapoptotický efekt sa zhoduje s výsledkami Ghosh et al. [38] a môže byť pripísané MF-sprostredkovanej up-reguláciu PPAR-y a /alebo hladiny HO-1 mRNA

Všetky tieto nálezy sa ďalej odráža na histologickými zmenami .; I /R urážky spôsobené vylučovanie epitelové ochrannou vrstvou a viedla k podkladovej krvácanie s výrazným preťažením krvných ciev spolu s infiltráciou zápalových buniek do lamina propria, čo je účinok, ktorý označuje zastavenie prietoku krvi, ktorý bol sprevádzaný edému. Preťaženie ciev môže viesť z nadmorskej výške vazokonstrikčný endothelinu-1 v žalúdočnej tkanive [57], zvýšenej infiltrácie leukocytov [58], a /alebo znížením aktivity Enos ako je uvedené v tejto štúdii. V súlade s tým, I /R sa nielen sprevádzaná tvorbou voľných radikálov, ale aj s jasným znížením hladiny endogénnych antioxidantov a zvýšenej infiltrácie zápalových buniek, zmeny, ktoré boli bránenej MF, a to najmä na úrovni s vysokou dávkou, kde normálne histologické bola pozorovaná štruktúra.

Pokiaľ ide o referenčné liečivá OMP, ktorý uplatňuje svoj účinok gastroprotektívnymi jeho antioxidanty, antiapoptotický [59], a protizápalové [60] akcie, okrem kyseliny potláčanie [61], sa tu používa, vymedzenej sme molekulárnej udalosti, ktoré prispievajú k týmto účinkom. V tejto štúdii sme preukázané, že OMP antioxidačné účinky, čo dokladá inhibícia peroxidácie lipidov a zvyšuje obranyschopnosť biomarkerov, sú sprostredkované pomocou
Nrf2 /HO-1 signalizačné dráhe. OMP tiež inhibuje prozápalový cytokín IL-1, rovnako ako neutrofilné adhéziu a infiltráciu, ako je znázornené znížením hladiny sA-selektínu a MPO aktivitu, v danom poradí. Aj keď OMP downregulated expresie NF-kB, ale nemôže bojovať s I /R vplyv na PPAR-y, čo naznačuje, že anti-zápalové /imunitný-modulačné účinok OMP vychádza z potlačenie génovej expresie NF-kB, a prípadne ďalšie mechanizmy, ale nie je to PPAR-gama.

Hoci vplyv OMP na Nrf2 vyjadrenie prevýšil MF _{20, ale opak bol zrejmý na HO-1 a GSH, rozpor, ktorý môže byť spojené s ich účinkami na NF-kB. Ten sa ukázalo, pôsobí ako negatívny regulátor Nrf2 dráhy kompetíciou s ním na väzbu k transkripčný ko-aktivátor CREB-viažuci proteín (CBP), a tiež podporovať väzbu ko-represorový histondeacetylázy 3 (HDAC3) k prvku antioxidant odozvy (ARE) [62]; Tieto účinky môžu spomaliť Nrf2 sprostredkovanú transkripciu neskorších cieľov.}

Okrem toho antiapoptotický vlastnosť OMP spoliehali nielen na jeho schopnosti zvýšiť úroveň antiapoptotickým proteínu Bcl-2, alebo pre zníženie hladiny apoptotické markeru, kaspázy-3, ako je detekovaný v tejto štúdii, ale aj o zníženie oxidačného poškodenia DNA [59].

na záver možno konštatovať, že pred žalúdočným účinok MF, a to najmä v dávke 20 mg /kg, môže byť pripočítaná k aktivácii Nrf2 /HO-1 antioxidačné dráha, PPAR-γ protizápalové dráhy cez
downregulating NF-kB, a k zvýšeniu antiapoptotických proteín Bcl- 2 a klesajúci kaspázy-3. Všetky tieto mechanizmy nakoniec udržať normálne žalúdočnej sliznice bariérovú integritu.

• Ploche ONE: Obojsmerná Presluch medzi stresom žalúdočných vredov a depresie pod chronické Stress
• Ploche ONE: High-Mobility Group Box 1 inhibuje žalúdočný vred Liečenie cez Toll-like receptor 4 a receptora pre pokročilých glykácia End Products