Højere antal Helicobacter pylori CagA EPIYA C phosphoryleringssites øger risikoen for mavekræft, men ikke duodenale ulcer

Højere antal Helicobacter pylori
CagA EPIYA C phosphoryleringssites øger risikoen for mavekræft, men ikke sår på tolvfingertarmen
Abstract
Baggrund
Helicobacter pylori
infektion er en af ​​de mest almindelige infektioner i hele verden og er forbundet med mavekræft og mavesår. Bakterielle virulensfaktorer såsom CagA har vist sig at øge risikoen for begge sygdomme. Undersøgelser har antydet en kausal rolle for CagA EPIYA polymorfier i gastrisk carcinogenese, og det har vist sig at være geografisk spredt. Vi studerede sammenhænge mellem H. pylori
CagA EPIYA mønstre og mavekræft og sår på tolvfingertarmen, i en etnisk blandet vestlige befolkning fra Brasilien. CagA EPIYA blev bestemt ved PCR og bekræftet ved sekventering. I alt 436 patienter blev inkluderet, var 188 med mavekræft, 112 med sår på tolvfingertarmen og 136 med gastritis.
Resultater
Antallet af EPIYA C segmenter var signifikant associeret med øget risiko for gastrisk karcinom (OR = 3,08 , 95% CI = 1,74-5,45, p < 10 -3), selv efter justering for alder og køn. Højere antal EPIYA C segmenter var også forbundet med gastrisk atrofi (p = 0,04) og intestinal metaplasi (p = 0,007). Desuden patienter smittet med cag
A stammer besidder mere end én EPIYA C-segmentet viste nedsat serumniveauer af pepsinogen I i sammenligning med de smittede af stammer, der indeholder et eller mindre EPIYA C gentagelse. Ellers har det antal EPIYA C segmenter ikke forbinder med sår på tolvfingertarmen.
Konklusioner
Vores resultater viser, at infektion med H. pylori
stammer huser mere end én CagA EPIYA C motiv klart var forbundet med mavekræft, men ikke med sår på tolvfingertarmen.
højere antal EPIYA C segmenter var også forbundet med gastriske præcancerøse læsioner som vist ved histologiske gastriske atrofiske og metaplastiske ændringer og nedsat serumniveauer af pepsinogen I.
Baggrund
Helicobacter pylori
koloniserer maven på mere end halvdelen af ​​verdens befolkning og er forbundet med udvikling af komplikationer såsom mavesår sygdom, gastrisk kræft, og maveslimhinden-associeret lymfevæv lymfom [1-4]. De faktorer, der fører få enkeltpersoner til at udvikle de associerede sygdomme, mens størstedelen af ​​inficerede mennesker forbliver asymptomatisk, er ukendte, men de har været genstand for intens forskning. Blandt værten faktorer, blev cytokin gen polymorfier vist sig at øge risikoen for mavekræft, specielt IL1B
-31, IL1RN
, og TNFa
-307 enkelt nukleotid polymorfier i europæiske befolkninger, og IL1RN
i en brasiliansk befolkning [5-9]. Patogen stamme-specifikke faktorer er blevet stærkt undersøgt. Blandt dem er CagA-proteinet accepteret som en risikofaktor for både mavesår sygdom og gastrisk cancer [5, 10-12]. I en undersøgelse af vores gruppe, infektion med H. havde pylori CAG
A-positive stammer et odds ratio (OR) på 11,9 for mavekræft, efter justering for værten polymorfier og andre variabler, mens den stærkeste vært faktor var IL1RN
2 allel, med en OR på 1,9 [5].
KAG
a tilhører en KAG
PAI (patogenicitet ø), som koder en type IV sekretion systemet (T4SS) i forbindelse med øget udskillelse af IL -8, en meget stærk proinflammatorisk kemokin, der deltager i gastritis induceret af H. pylori
infektion. Den T4SS er også ansvarlig for indgangen til CagA protein i mavens epitelceller hvor CagA phosphoryleres på tyrosinresten inden phosphoryleringsmotiver i carboxi-terminale variable område af proteinet. Disse motiver er defineret som EPIYA (Glu-Pro-Ile-Tyr-Ala) A, B, C og D i henhold til forskellige flankerende aminosyrer. CagA protein næsten altid besidder EPIYA A og B-segmenter, der er efterfulgt af ingen, en, to eller tre C segmenter i stammer cirkulerer i de vestlige lande, eller en D-segment, i østasiatiske lande. Den EPIYA C og D er de vigtigste steder for fosforylering af CagA. Phosphoryleret CagA danner et fysisk kompleks med SHP-2 phosphatase og udløser unormale cellulære signaler, der fører til deregulering af cellevækst, celle til celle-kontakt og cellemigration, forlængelse af epitelceller og forøgelse af epitelcelle omsætning, som forøger risikoen for beskadigede celler til erhverve præcancerøse genetiske ændringer. Regnskabsmæssig typen D EPIYA eller flere C gentager er forbundet med øget SHP-2 fosfatase aktivitet induceret af CagA [13, 14], hvilket rejser muligheden for, at infektion med CagA stammer besidder højere antal EPIYA C segmenter disponerer til forstadier til kræft og mavekræft.
faktisk har denne hypotese blevet testet i østlandene, men undersøgelsens resultater er uharmonisk. Azuma et al
. [15] fandt øget andel af EPIYA D-stammer blandt patienter med atrofisk gastritis og gastrisk cancer, men andre forfattere har været i stand til at reproducere disse resultater [16, 17]. Tilsvarende i den vestlige befolkning, signifikant sammenhæng mellem mavekræft og øget antal EPIYA C motiver kunne påvises i to undersøgelser [18, 19], måske enten ved det lille antal inkluderede patienter i de andre undersøgelser [20-22], eller af regionale /ethnics forskelle som allerede påvist for andre H. pylori
virulens markører [23, 24]. Endvidere er uoverensstemmelser også blevet påvist i studier, der evaluerer antallet af EPIYA C motiver og sår på tolvfingertarmen [19, 25], som fortjener i dybe undersøgelser fordi tolvfingertarmen og mavekræft er gensidigt udelukkende H. pylori
associeret sygdomme.
Derfor har vi vurderet, om øget antal CagA EPIYA C fosforylering motiver er forbundet med gastrisk cancer og /eller sår på tolvfingertarmen, herunder en stor serie af patienter for at undgå bias og tillade justering for alder og køn i en vestlig befolkning fra Brasilien. Da duodenalsår og gastrisk karcinom er gensidigt udelukkende sygdomme, og CAG
A er en risikofaktor for begge betingelser, vi også vurderet, om antallet af EPIYA C segmenter af stammer isoleret fra patienter med ulcus duodeni afveg fra den for stammerne isoleret fra mavecancerpatienter. Fordi gastrisk atrofiske og metaplastiske ændringer - forstadier til kræft - føre til svækkelse af produktionen af ​​pepsinogen I (BGB) ved chef og slimhinder hals celler i corpus og fundiske kirtler, vi vurderet, om det højere antal EPIYA C motiver var forbundet med serummet pepsinogen niveauer.
Resultater
karakteristika patienterne er vist i tabel 1. tilstedeværelsen af ​​H. pylori
-specifik ure
A og 16S rRNA
lykkedes bekræftet ved PCR i alle undersøgte stammer og KAG
en PCR var positive, af mindst en af ​​den anvendte metode, i alle strains.Table 1 patient karakteristika og fordeling af CagA EPIYA genotyper efter H. pylori
associeret sygdomme

Gastritis 136 (%)
mavekræft 188 (%)
Duodenalsår 112 (%)

gennemsnitsalder (SD)
52,5 (16,9)
62,3 (13,9)
43,5 (15,1)
Mand sex
48 (35,3)
114 (60,6)
53 (47,3)
EPIYA-AB
3 (2.2)
3 (1.6)
4 (3.6)
EPIYA-ABC
108 (79,4)
107 (56,9)
93 (83,0)
EPIYA-ABCC
21 (15,4)
65 (34,6)
15 (13,4)
EPIYA-ABCCC
4 (3,0)
13 (6.9)
0 (0,0)
SD, standardafvigelse
Bestemmelse af CagA EPIYA mønster
PCR amplificerede produkter fra alle CAG
A-positive stammer udviste tydelige mønstre i 3'variable region af cag
A. En elektroforesegel repræsenterer de forskellige CagA EPIYA typer er vist i figur 1. de PCR-resultater blev bekræftet ved sekventering i halvfjerds fem tilfældigt udvalgte PCR-produkter fra patienter i hver gruppe. Figur 1 Elektroforese af repræsentative prøver med hver af de CagA EPIYA typer ses hos patienter med H. pylori-associeret sygdomme. Kolonne 1: 100 bp standard; Kolonne 2: EPIYA-AB; Kolonne 3, 8, 11, og 12: EPIYA-ABC; Kolonne 4: EPIYA-ABC + -ABCCC; Kolonner 5 og 13: EPIYA-ABCC; Kolonne 6: EPIYA ABCCC; Kolonne 7: EPIYA-ABCC + -ABCCC; Kolonne 9: EPIYA-ABC + -ABCC + -ABCCC; Kolonne 10:. EPIYA-ABC + -ABCC
Ingen EPIYA D blev fundet i H. pylori
stammer undersøgt. Fordelingen af ​​EPIYA genotyper vises i tabel 1.
associering mellem antallet af EPIYA C segmenter og mavekræft og sår på tolvfingertarmen
kolonisering af H. pylori
CagA-positive stammer besidder to eller tre EPIYA C motiver blev observeret hyppigere (p < 10 -3) i gastrisk cancer (78/188, 41,5%) end i gastritis (25/136, 18,4%) patienter. Foreningen forblev stærkt signifikant selv efter justering for alder og køn ved hjælp af logistisk regression (Tabel 2). Den Hosmer-Lemeshow test viste god kondition af modellen (Chi-square = 3,98, 8 frihedsgrader, p = 0,86, med 10 trin). Ellers har det antal EPIYA C segmenter ikke forbinder med sår på tolvfingertarmen (tabel 2) .table 2 associering mellem antallet af CagA EPIYA C motiver og H. pylori
associeret sygdomme

univariat analyse
Multivariate analyse

p
OR

95% CI
p
mavekræft
- Stigende alder
< 10-3
1,04
1,03-1,06
< 10-3
- Female sex
< 10-3
0,29
0,18-0,48
< 10-3
- Høj risiko EPIYA (ABCC eller ABCCC)
< 10-3
3.08
1,74-5,45
< 10-3
Duodenalsår
- Stigende alder
< 10-3
1,03
1,02-1,05
< 10-3
- Female sex
0,04
1,26
0,73-2,18
0,41
- Høj risiko EPIYA (ABCC eller ABCCC)
0,29
-
- -
Hosmer-Lemeshow test viste god kondition af modellen af ​​gastrisk kræft (8 frihedsgrader, p = 0,86, med 10 trin) og sår på tolvfingertarmen (8 frihedsgrader, p = 0,25, med 10 trin).
fordi det kan være spekuleret på, at antallet af EPIYA C motifs stiger med stigende alder, konstruerede vi også en model med antallet af EPIYA C er den afhængige variabel og alder, køn og H. pylori
associeret sygdomme som uafhængige covariables. Øget EPIYA C segmenter ikke forbinder med alder (p = 0,13), køn (p = 0,66) og sår på tolvfingertarmen (p = 0,29), men forblev forbundet med mavekræft (p < 10 -3, OR = 2,81; 95% CI = 1,64 -. 4.82)
associering mellem blandet stammen kolonisering og sygdomme
blandet stamme infektion blev observeret i 57 (13.08%) patienter, og det var betydeligt hyppigere hos patienter med mavekræft (38/188, 20,2%) end hos dem med gastritis (14/136, 10,3%) med en OR for gastrisk karcinom af 2,21 (95% CI = 1,10-4,50). Ellers blev blandet infektion mindre hyppigt observeret i sår på tolvfingertarmen patienter (5/112, 4,5%) med en tendens til en negativ sammenhæng (p = 0,09).
Associering mellem antallet af EPIYA C segmenter og serum BGB niveauer
Den pepsinogen i serum niveauer signifikant højere (p = 0,01) i tolvfingertarmen (middelværdi 161,67 ± 102,36 pg /L) end i gastritis (100,37 ± 70,85 ug /L).
Den patienter smittet af CagA stammer med to eller tre EPIYA C segmenter viste nedsatte niveauer af BGB sammenlignet med dem med infektion med CagA stammer besidder ≤ 1 EPIYA C-segment (sår på tolvfingertarmen: 179,67 ± 83,30 vs. 67,01 ± 34,30 henholdsvis p = 0,02 og gastritis: 109,26 ± 85,61 vs. 57,55 ± 34,61 henholdsvis p = 0,01).
associering mellem antallet af EPIYA C gentagelserne og gastrisk histologiske ændringer og tumor klassifikation
Øget antal EPIYA C segmenter var forbundet med tilstedeværelsen af ​​forstadier til kræft, enten atrofi ( p = 0,04) eller intestinal metaplasi (p = 0,007), men ikke med de andre histologiske parametre. Også, infektion med stammer, der bærer øgede EPIYA C-motiver ikke forbinder med intestinal eller diffus tumortype (p = 0,34).
Diskussion
I denne undersøgelse, ved at vurdere en stor serie af patienten, vi påvist, at de smittede af CagA-positive H. pylori
stammer med mere end én EPIYA C motiv er ved tre gange gange højere risiko for at udvikle gastrisk cancer. Styrkerne i vores undersøgelse omfatter passende stikprøve, identifikation af stammer ved hjælp af PCR med bekræftelse ved sekventering og justering for forstyrrende faktorer ved logistisk regressionsanalyse.
CagA anses for at være en vigtig bakteriel virulens faktor i forbindelse med både gastrisk adenocarcinom og duodenalsår sygdom [2, 5, 11, 12, 26]. Antallet og mønster af phosphoryleringsmotiver synes yderligere at stratificere risikoen forbundet med de enkelte stammer [18, 27].
Det er blevet påvist, at H. pylori
CagA EPIYA mønstre har en betydelig geografisk variation og nøje følge mønstre af historiske menneskelige vandringer. EPIYA D er en karakteristisk asiatisk EPIYA mønster, der stort set ikke forekommer i det vestlige H. pylori
stammer [28]. Brasilianerne danner en unik vestlige befolkning, fordi, trods de mange oprindelser og den deraf følgende store forskelle i fænotypisk udseende, har der været en betydelig grad af inter-etniske avl og dermed de fleste individer ikke kan tilskrives nogen af ​​de stiftende grupper på grundlag af genetiske baggrund, snarere de bærer ca. 33% af gener fra hver af de store racer, der historisk set sammensat landet (europæisk, afrikanere og indianere) [29]. Med denne baggrund, ville det forventes at finde nogle CagA EPIYA D i vores H. pylori
stammer, som det er blevet opdaget blandt indianere (i tråd med den teori, at oprindeligt folk fra Asien befolkede Amerika migrerer fra Østasien ), men vi havde ikke afsløre eventuelle EPIYA D i vores befolkning.
desværre er der få undersøgelser i forhold til sammenhængen mellem EPIYA C nummer og H. pylori
associerede sygdomme i de vestlige befolkninger med uoverensstemmende resultater blandt dem. Basso et al
. [19] viste, at højere antal EPIYA C segmenter var forbundet med gastrisk karcinom i en kaukasisk population fra Italien lighed med resultaterne af Yamaoka et al
. [18] evaluere amerikanske patienter fra Texas. Ellers blev ingen sammenhæng observeret, når colombianske patienter blev evalueret i Yamaoka undersøgelse [18] i overensstemmelse med resultaterne opnået ved Acosta et al
. [22], mens Sicinschi et al
. [21] observerede associationer mellem den øgede EPIYA C segmenter og forstadier til kræft. Også ikke-entydige resultater publiceret af Argent et al
. [20] evaluere 44 stammer fra afrikanske patienter forfatterne viste tendens til sammenhæng mellem CagA med to eller flere EPIYA C segmenter og mavekræft.
Disse forskelle kan forklares ved forskellige studiedesign, stikprøvestørrelse, befolkninger og geografiske spredning af H . pylori
markører for patogenicitet, i forhold til CagA EPIYA mønster, der fremhæver behovet for at studere forskellige geografiske regioner.
resultaterne af denne undersøgelse viste, at højere antal EPIYA C segmenter er forbundet med mavekræft og med præ -malignant læsioner, atrofi og intestinal metaplasi af corpus mucosa i gruppen af ​​patienter med gastritis. Efter aftale med disse resultater, har vi også vist, at serumkoncentrationen af ​​PGI var to gange nedsat hos patienter inficeret med cag
A-positive stammer med to eller tre EPIYA C motiver. Fordi BGB udskilles af ledende celler og slimhinder hals celler i corpus og fundiske kirtler, serum BGB niveauer afspejler den funktionelle og morfologiske status oxyntic maveslimhinden; således, gastriske atrofiske /metaplastiske ændringer fører til nedsat BGB serumniveauer [30, 31]. Selv corpus slimhinde af patienter med H. pylori
associeret duodenalulcus enten mildt eller ej betændt, det BGB i serum blev også faldt i tolvfingertarmen patienter smittet af stammer, der indeholder højere antal EPIYA C segmenter.
Resultaterne af den foreliggende undersøgelse styrker potentielle rolle CagA polymorfi i udviklingen af ​​mavekræft i overensstemmelse med resultaterne af de tidligere undersøgelser [18, 19]. Men vi kan ikke udelukke, at den genetiske konstitution værten, mere end bakterien stammen, kan prædisponere til atrofisk gastritis og H. pylori
stammer, der bærer et stigende antal EPIYA C gentagelserne ville have en fordel frem for andre stammer i kolonisere nye gastriske miljø eller alternativt en mere komplekst samspil af begge mekanismer.
med hensyn til sår på tolvfingertarmen, også resultaterne af undersøgelserne er uharmonisk [19, 25]. Vores resultater er i overensstemmelse med dem, der rapporteres af Basso et al
. [19], som også ikke fandt association mellem sygdommen og antallet af EPIYA C segmenter i en italiensk befolkning. Især blev ingen patient med sår på tolvfingertarmen i vores kohorte koloniseret af CagA besidder tre EPIYA C segmenter. Som foreslået af Yamaoka et al
. [18], er det muligt, at stammer med højere antal EPIYA C segmenter kan være mindre modstandsdygtige over for syren [18].
Vi evaluerede også, om kolonisering af forskellige stammer (blandet infektion) kan være forbundet med sygdomstilstande resultater. Vi fandt, at gastrisk kræftpatienter signifikant oftere blev koloniseret af blandede stammer, mens patienter med sår på tolvfingertarmen havde en tendens til mindre blandet belastning kolonisering. En mulighed er, at patienter med gastrisk cancer ville have områder af maveslimhinden viser kræft transformation, vekslende med områder af atrofi, intestinal metaplasi, dysplasi, og normal slimhinde, som hver især repræsenterer mikromiljøer, som ville være selektivt fordelagtigt at blandede infektioner [32, 33, ].
konklusioner
Afslutningsvis fandt vi, at infektion med H. pylori
CagA-positive stammer huser flere EPIYA C gentager er forbundet med gastriske forstadier til kræft og mavekræft, men ikke med sår på tolvfingertarmen i en etnisk forskelligartet, iblandet, Western befolkning.
Selvom infektion med H. pylori CAG
a-positive stammer er en risikofaktor for de gensidigt udelukkende sygdomme, mavekræft og sår på tolvfingertarmen, CagA stammer besidder højere antal EPIYA C segmenter forbundet med gastrisk cancer, men ikke med sår på tolvfingertarmen.
højere antal EPIYA C segmenter var også forbundet med gastriske præcancerøse læsioner som vist ved histologiske gastriske atrofiske og metaplastiske ændringer og nedsat serumniveauer af pepsinogen I.
Metoder
patienter
Vi inkluderet 436 patienter smittet med cag
A-positive stammer af H. pylori Hotel (188 med mavekræft, 112 med sår på tolvfingertarmen og 136 med gastritis), blandt dem, der blev forelagt endoskopi til klarlægge oprindelsen af ​​symptomer relateret til den øvre mavetarmkanal eller som gennemgik gastrisk operation for at fjerne gastrisk karcinom på University Hospital /UFMG, Luxemburgo, og Mario Penna Hospitaler, i Belo Horizonte, Brasilien. De fleste af de inkluderede individer (> 80%) var af lav socioøkonomisk niveau med lignende kulturelle vaner, og alle var oprindeligt fra Minas Gerais stat med samme etniske baggrund, ca. 33% af portugisisk, 33% af indfødt og 33% af afrikansk herkomst, homogent til stede i hvert emne [29].
undersøgelsen blev godkendt af de institutionelle etiske komitéer og informeret samtykke blev opnået fra alle patienter. Transport, kultur og mikrobiologisk identifikation af de bakterielle isolater blev udført som beskrevet tidligere [34, 35].
Histologi
I gruppen af ​​gastritis og sår på tolvfingertarmen patienter, endoskopiske biopsiprøver af antrale og oxyntic gastrisk mucosa blev opnået for histologisk og mikrobiologisk undersøgelse. Antrale og oxyntic biopsiprøver blev fikseret i 10% formalin og indlejret i paraffinvoks, og 4-um-tykke histologiske snit blev farvet med carbolfuchsin for H. pylori
undersøgelse [35], og hematoxycilin og eosin til histologisk evaluering i henhold til den opdateret Sydney System [36]. I gruppen af ​​mavecancerpatienter blev fragmenterne opnået fra maven fjernet ved gastrektomi efter åbning det langs den største krumning inden for en time resektion. Tumoren blev klassificeret ifølge Lauren [37].
Ekstraktion af bakterielt DNA
Bakterie-DNA opnået fra 60 mm petriskål vækst blev ekstraheret under anvendelse af Qiamp (QIAGEN, Hilden, Tyskland) kit ifølge producentens anbefalinger med mindre modifikationer . Destilleret vand blev anvendt som en reaktion kontrol. DNA-koncentrationen blev bestemt ved spektrofotometri ved anvendelse NanoDrop 2000 (Thermo Scientific, Wilmington, NC) og opbevaret ved -20 ° C indtil anvendelse.
Amplifikation af H. pylori
-specifik ure
A og 16S rRNA
generne
tilstedeværelsen af ​​specifikke ure
A og 16S rRNA
gener blev evalueret i henhold til Clayton et al.
[38] og Fox et al
. [39] hhv. Standarden Tx30a H. pylori
stamme blev anvendt som en positiv kontrol, og en Escherichia coli
stamme og destilleret vand blev begge anvendt som negative kontroller.
Thermocycler GeneAmp PCR System 9700 (Applied Biosystems, Foster City , CA) blev anvendt til alle reaktioner. De amplificerede produkter blev elektroforeret i 2% agarosegel, farvet med ethidiumbromid og analyseret i et ultraviolet lys transilluminator.
Amplifikation af cag
En gen
cag
A genet blev amplificeret ved hjælp af to tidligere beskrevne primerpar [40, 41]. En H. pylori
stamme fra vores samling (1010-1095), kendt for at være KAG
A-positiv, blev anvendt som en positiv kontrol, og Tx30a H. pylori
stamme, der mangler KAG
A og destilleret vand blev begge anvendt som negative kontroller. H. pylori Salg stammer blev anset for at være CAG
A-positiv, når mindst en af ​​de to reaktioner var positiv.
Amplifikation af 3'variable region af cag
En Hus Til PCR-amplifikation af 3'variable region af det cag
En genet (der indeholder EPIYA sekvenser), 20 til 100 ng DNA blev tilsat til 1% Taq DNA polymerase pufferopløsning (KCl 50 mM og Tris-HCI 10 mM), 1,5 mM MgC 2, 100 uM af hvert deoxynukleotid, 1,0 U Platinum Taq DNA-polymerase (Invitrogen Sao Paulo, Brasilien), og 10 pmol af hver primer, for en samlet opløsning på 20 pi. De anvendte primere blev tidligere beskrevet af Yamaoka et al
. [27]. Reaktionsbetingelserne var: 95 ° C i 5 minutter, efterfulgt af 35 cykler ved 95 ° C i 1 minut, 50 ° C i 1 minut og 72 ° C i 1 minut, sluttende med 72 ° C i 7 minutter. De amplificerede produkter blev elektroforeret i 1,5% agarosegel, der blev farvet med ethidiumbromid og analyseret i et ultraviolet lys transilluminator. Reaktionen gav produkter på 500 til 850 bp i forhold til antallet af EPIYA C. Denne metode tillader også påvisning af blandede infektion.
Sekventering af 3'variable region af CAG
A
En væsentlig undergruppe af prøver (ca. 75 patienter i hver gruppe) blev tilfældigt udvalgt til sekventering, for at bekræfte PCR-resultater. PCR-produkterne blev renset med guiden SV Gel og PCR Clean-Up System (Promega, Madison, MI) i henhold til producentens anbefalinger. Oprensede produkter blev sekventeret under anvendelse af en BigDye ® Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kit i en ABI 3130 Genetic Analyzer (Applied Biosystems, Foster City, CA). De opnåede sekvenser blev justeret ved hjælp af CAP3 Sequence Assembly Program (tilgængelig fra: http:... //Pbil univ-lyon1 fr /CAP3 php). Efter justering blev nukleotidsekvenser omdannet til aminosyre sekvenser ved hjælp af BLASTX programmet (tilgængelig fra: http:..... //Blast NCBI NLM NIH gov /Blast cgi) og sammenlignet med sekvenser indsat på GenBank. (http:.... //www NCBI NLM NIH gov /Genbank /)
Bestemmelse af serum BGB niveauer
den serumkoncentrationer af PGI blev bestemt i patienterne med gastritis og sår på tolvfingertarmen ved en specifik ELISA (Biohit, Helsinki, Finland) i henhold til producentens anbefalinger.
Statistisk analyse
en prøve størrelse på mindst 112 forsøgspersoner i hver gruppe, for at vise en 15% forskel mellem grupper med en effekt på 80%, alfa på 5%, og konfidensinterval på 95% blev beregnet med Epi Info programversion 3.5.1 (Centres for Disease Control og Forebyggelse, Atlanta, GA).
associering mellem antallet af EPIYA C motiver og mavekræft blev oprindeligt evalueret i univariat analyse, og variable med en p-værdi mindre end 0,2 indgik i den endelige model af logistisk regression, kontrol for påvirkninger af alder og køn. Vi evaluerede også effekten af ​​køn og alder i antallet af EPIYA C segmenter i en model med antallet af EPIYA C er den afhængige variabel og alder, køn og H. pylori
associeret sygdomme som selvstændige covariables. Den logistiske model fitness blev evalueret med Hosmer-Lemeshow test. Fordi BGB niveauerne ikke var normalt fordelt dataloggen transformeret og blev normal. Foreninger blev således evalueret af Students t-test (gennemsnit ± standardafvigelse). Association mellem antallet af EPIYA C segmenter og graden af ​​gastrisk inflammation, atrofi og intestinal metaplasi blev gjort ved den tosidede Mann-Whitney test. Niveauet af signifikans blev sat til ap-værdi ≤ 0,05.
Erklæringer
Tak
Dette arbejde blev støttet af tilskud fra CNPq, FAPEMIG og INCT, Brasilien.
DMM er Queiroz finansieret under det sjette rammeprogram for den Europæiske Union, Projekt INDHOLD (INCO-CT-2006 til 032.136).
forfatternes oprindelige indsendt filer til Images of Nedenfor er links til forfatternes oprindelige indsendte filer til billeder. 12866_2010_1347_MOESM1_ESM.pdf Forfatternes oprindelige fil til figur 1 12866_2010_1347_MOESM2_ESM.pdf Forfatternes oprindelige fil til figur 2 12866_2010_1347_MOESM3_ESM.pdf Forfatternes oprindelige fil til figur 3

• Manglende aftale mellem tonometrisk og mavesaft delvis kuldioxid spænding
• Nedregulering af bindevæv vækstfaktor hæmmer væksten og invasion af gastriske cancerceller og dæmper peritoneal formidling