DNA polymeraseη proteinekspression forudsiger behandlingsrespons og overlevelse af metastatisk gastrisk adenocarcinom patienter behandlet med oxaliplatin-baserede chemotherapy

DNA polymeraseη proteinekspression forudsiger behandlingsrespons og overlevelse af metastatisk gastrisk adenocarcinom patienter behandlet med oxaliplatin kemoterapi
Abstract
Baggrund
DNA-polymerase η (pol η) er i stand til at omgå DNA addukter produceret af cisplatin eller oxaliplatin og er forbundet med cellulære tolerance over for platin. Tidligere undersøgelser har vist, at defekte pol η resulterede i forbedret cisplatin eller oxaliplatin følsomhed i nogle cellelinjer. Formålet med den foreliggende undersøgelse var at undersøge den rolle, pol η proteinekspression i metastatisk gastrisk adenocarcinom. Salg Metoder
Fire gastrisk adenocarcinom cellelinier blev valgt at undersøge forholdet mellem pol η proteinekspression og oxaliplatin følsomhed ved western blotting og MTT-assay. Firs metastatisk gastrisk adenocarcinom patienter behandlet med FOLFOX eller XELOX regime som førstevalg kemoterapi blev analyseret, svarende forbehandling formalin-faste paraffinindlejrede tumorvæv blev brugt til at detektere pol η proteinekspression ved immunhistokemi. Forholdet mellem pol η proteinekspression og kliniske funktioner og resultatet af disse patienter blev analyseret.
Resultater
En positiv lineær sammenhæng mellem pol η proteinekspression og 48 h IC50 værdier af oxaliplatin i fire gastrisk cancer cellelinjer blev observeret. Positivitet af pol η proteinekspression var stærkt forbundet med dårlig behandling respons, samt kortere overlevelse på både univariate (8 mod 14 måneder P < 0,001) og multivariat (hazard ratio, 4,555; 95% konfidensinterval, 2,461-8,429; P. < 0,001) analyse i firs metastatisk gastrisk adenocarcinom patienter
konklusioner
Vores undersøgelse viser, at polη er en prædiktiv faktor behandlingsrespons og overlevelse af metastatisk gastrisk adenocarcinom patienter behandlet med FOLFOX eller XELOX som første-line kemoterapi. Derfor bekræfter værdien af ​​polη i studier med prospektive design er obligatorisk.
Baggrund
Mavekræft er den fjerde mest almindelige kræftform i verden, med 603,003 nye tilfælde blandt mænd og 330,290 nye tilfælde blandt kvinder om året [1]. Det er den anden mest almindelige årsag til kræft dødsfald (700.000 dødsfald om året), med næsten to tredjedele af de tilfælde, der forekommer i udviklingslandene, og 42% i Kina alene [2]. Kirurgi er fortsat den vigtigste potentiel metode til at helbrede sygdommen; dog vil ca. 84% af mavecancerpatienter udvikle at være en fremskreden sygdom, med 30% af lokalt fremskredne tilfælde, 30% metastatiske sygdomme på diagnose, og 24% tilbagefald sygdomme [3]. De litteratur viste, at den mediane overlevelse var kun 3-4 måneder blandt avancerede gastric cancer patienter uden kemoterapi. Den nye generation af kemoterapeutiske midler, såsom Oxaliplatin, kan forlænge overlevelsen i fremskreden gastrisk cancer at være 10 til 12 måneder; desuden kan kemoterapi også forbedre livskvaliteten [4-12]. Terapeutisk effekt afhænger hovedsageligt af respons af lægemidler til tumor under den første linje kemoterapi, fordi indtil videre kun ét lille fase III studie med 120 sager viste en beskeden overlevelse gavn af irinotecan monoterapi i understøttende behandling alene [13]. Desværre, på grund lægemiddelresistens, kan kun opnås 30-50% responsrater selvom administrere nye generation af lægemidler, såsom docetaxel, oxaliplatin, capecitabin, irinotecan, S1, etc til avancerede mavecancerpatienter som førstevalgsbehandling [3]. Det betyder mindst 50% af patienterne skal gennemgå ineffektiv behandling, som ikke blot kan mindske patienternes livskvalitet, men også øge den økonomiske byrde. Så hvordan til at forudsige respons af kemoterapeutiske stoffer i gastrisk kræft er en meget vigtig videnskabelig problemstilling.
Oxaliplatin er tredje generation platin, spille en afgørende rolle i kemoterapi for gastrointestinal cancer. Oxaliplatin-baserede kombinationsbehandling såsom oxaliplatin plus 5-FU eller 5-FU-lignende stof har vist sig at være aktiv i omkring 40-50% af avancerede mavecancerpatienter [14-16]. Oxaliplatin og cisplatin deler tilsvarende mekanisme, og forårsage mono-addukter og intra-streng eller inter-streng tværbindinger i den dobbelte DNA helix, som er stærkt blokere DNA-syntese [17-19]. Når dette sker, kan nogle veje for DNA-skader reparation tænde, herunder nukleotid excision reparation (NER), mismatch repair (MR), homolog rekombination (HR), translesion DNA-syntese (TLS) [20]. Disse addukt reparationer opstår primært gennem NER [21]. TLS er en anden alternativ måde at reparere disse læsioner, der hovedsageligt udført af DNA-polymeraser η [22]. Polymeraseη (Polη), en af ​​læsion-replikerende enzymer, inkorporerer den korrekte nukleotid løbet læsioner såsom en platin addukt af TLS og fortsætter kæde forlængelse, mens klassiske pols ikke kan [23]. Polη har den højeste effektivitet af omgå Pt-GG intra-streng diadducts forårsaget af platin blandt disse læsion-replikerende enzymer, med begrænset troskab [23, 24]. Nylige forsøg har vist, at den manglende polη resulterer i en statistisk signifikant forbedring i cisplatin følsomhed, når man sammenligner polη-null xeroderma pigmentosum-variant humane fibroblaster med polη udtrykker dem [25]. Denne forbedring ses også, når cellerne blev behandlet med carboplatin og oxaliplatin [25]. De seneste data viser, at polη mRNA-niveau negativt korreleret med cisplatin følsomhed af ikke-småcellet lungecancer (NSCLC) cellelinier [26].
I den foreliggende undersøgelse, rapporterer vi for første gang forholdet mellem polη proteinekspression og oxaliplatin følsomhed af gastrisk cancer cellelinjer og betydningen af ​​at forudsige behandlingsrespons og overlevelse af metastatisk gastrisk kræftpatienter behandlet med oxaliplatin kemoterapi.
Materialer og metoder
cellelinjer
den gastrisk cancer cellelinjer, herunder SGC7901 , AGS, MKN45, og MGC803, blev doneret af professor Libing Song fra State Key Laboratory of Oncology i det sydlige Kina (Cancer center of Sun endnu-sen University). Alle cellelinier blev opretholdt i RPMI 1640 (Gibco) suppleret med 10% føtalt bovint serum (Gibco), undtagen MKN 45 med 20% føtalt bovint serum. Salg Patienter og prøver
Patienter i vores kliniske database med kemoterapi-naive , histologisk påvist metastatisk fremskreden mavekræft blev rekrutteret til undersøgelsen. Alle patienter havde at modtage FOLFOX (fluoruracil, leucovorin og oxaliplatin) eller XELOX (capecitabin og oxaliplatin) regime som førstevalg kemoterapi på Cancer Center of Sun Yat-sen Universitet, og formalin-fikseret paraffinindlejrede prøver forbehandling under gastroscope biopsier eller palliativ operation blev opnået. Histopatologiske karakteristika blev bekræftet ved blindet gennemgang af de oprindelige patologi dias. Den TNM klassifikation blev brugt til patologisk iscenesættelse, og WHO klassifikation blev brugt til patologisk sortering. Andre inklusionskriterier inkluderet alder mellem 18-80, Eastern Cooperative Oncology Group (ECOG) performance status på 2 eller derunder, anden linje kemoterapi eller ej, ikke strålebehandling. Alle patienter forudsat skriftligt informeret samtykke; vi fået særskilt tilladelse til brug af eksemplarer. Undersøgelse godkendelse blev opnået fra uafhængige etiske udvalg på Cancer Center of Sun Yat-Sen University. Undersøgelsen blev gennemført i overensstemmelse med de etiske standarder af World Medical Association Helsinki Deklarationen.
Opfølgning og evaluering
Patienterne blev fulgt op via telefon eller brev kommunikation gang årligt for i alt 4 år. Samlet overlevelse blev defineret som tiden fra datoen for bekræftet diagnose til død og censureret på datoen for sidste kontakt til en overlevende patient. Sygdom respons blev vurderet i henhold til respons evalueringskriterier i solide tumorer (RECIST kriterier) [27]
Cytotoksicitetsassays
Cell væksthæmning blev bestemt ved. 3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2 , 5-diphenyltetrazoliumbromid assay (MTT assay). Kort fortalt blev cellerne podet i plader med 96 brønde og lodes binde natten over. Efter 48 timer af lægemiddel inkubation ved forskellige koncentrationer (37 ° C), MTT-reagens (5 mg /ml, 20 pi /brønd) blev tilsat til hver brønd og inkuberet i yderligere 4 timer. Pladerne blev derefter centrifugeret (1.500 g, 5 minutter), og supernatanten blev fjernet. Cellepellets blev opløst i 200 uL DMSO. Absorbansen blev bestemt ved anvendelse af Model 550 Microplate Reader (BIO-RAD, Hercules, CA, USA) ved en bølgelængde på 570 nm, med baggrund subtraktion ved en bølgelængde på 630 nm. Alle eksperimenter blev udført tredobbelt. Den koncentration, der kræves for at inhibere cellevækst med 50% (IC50) blev beregnet ud fra overlevelseskurverne vha Bliss metoden [28].
Western blotting Salg Celler blev vasket med iskold phosphatpuffersaltopløsning og høstet i prøveudtagning buffer [ ,,,0],62,5 mmol /L Tris-HCI (pH 6,8), 2% SDS, 10% glycerol og 5% 2-h-mercaptoethanol]. Proteinkoncentrationen blev bestemt ved Bradford-assay (Bio-Rad Laboratories). Lige store mængder proteiner blev påført på 7,5% polyacrylamid SDS geler (SDS-PAGE), adskilt elektroforetisk, og overført til polyvinyliden fluorid membraner. Efter blokeret i 5% fedtfri mælk i TBST-buffer (10 mmol /L Tris-HCI, 150 mmol /l NaCl og 0,1% Tween 20, pH 8,0) i 1 time ved stuetemperatur, membranen blev inkuberet med anti-polη kaninantistof (1: 400; Abcam). Polη ekspression blev påvist med peberrodsperoxidase-konjugeret gede anti-kanin IgG og forøget kemiluminescens. Anti-α-tubulin antistof blev anvendt som indlæsning kontrol.
ImageJ software fra National Institutes of Health (NIH) blev anvendt til at kvantificere protein.
Immunhistokemi
Immunohistokemisk (IHC) analyse blev udført til påvisning polηprotein ekspression i 80 humane gastriske cancer væv. Kort fortalt blev vævssnittene afparaffineret i xylen ved 37 ° C i 20 minutter og rehydreret. Endogen peroxid blev blokeret ved inkubering af sektionerne med 3% hydrogenperoxid i methanol i 20 minutter ved 37 ° C. Derefter blev snittene nedsænket i 10 mM citratpuffer (pH 6,0) og microwaved for antigen hentning, efterfulgt af inkubering med kanin-anti polη (1: 100; Abcam) natten over ved 4 ° C. Efter vask blev vævssnit behandlet med peberrodsperoxidase-mærket sekundært antistof i 30 minutter. Snittene blev fremkaldt med diaminobenzidintetrahydrochlorid (DAB) og modfarvet med hematoxylin.
Analyse af immunohistokemi i vores undersøgelse blev udført af to uafhængige observatører baseret på andelen af ​​positivt farvede tumorceller. Hvis der er forskel mellem disse to observatører, blev disse slides undersøgt igen af ​​begge undersøgere bruger multiheaded mikroskop. Tumorer med mere end 5% af POLη-positive cancerceller blev betragtet som positive (kerne-farvning), ellers negativ.
Statistisk analyse
Receiver operating characteristic (ROC) kurve analyse og Fishers eksakte test blev udført for at vælge IHC Pol -positiv værdi med højeste nøjagtighed. 2 × 2 tabel blev konstrueret udbytte følsomhed, specificitet, positiv og negativ prædiktiv værdi, og nøjagtighed blev beregnet som andel af sande positive og sande negative patienter ud af hele patienter. Alle statistiske analyser blev udført af SPSS 15.0 statistisk programpakke (SPSS Inc., Chicago, IL, USA). P-værdi < 0,05 blev betragtet som statistisk signifikant. Kaplan-Meier-analyse med log-rank test blev anvendt til univariate analyser. Variabler, der viser en tendens til, sammen med overlevelse (P < 0,05) blev udvalgt til at indgå i den endelige multivariate Cox proportional hazard model. Forholdet mellem polη udtryk og clinicopathologic egenskaber blev undersøgt af en chi-square test og Fishers eksakte test.
Resultater
Polη udtryk korrelerer med oxaliplatin følsomhed gastrisk cancer cellelinjer
Oxaliplatin følsomhed på fire gastrisk cellelinjer ( SGC7901, AGS, MKN45, og MGC803) blev detekteret ved MTT-assayet beskrevet ovenfor. Endogen polη protein ekspression af fire cellelinier blev sammenlignet med hinanden ved Western-blotting og halvmaksimal inhiberende koncentration (IC50) værdier af oxaliplatin til celler blev vist i figur 1. Signifikant og positiv korrelation blev observeret, som vist i figur 2 sammenlignet polη proteinekspression med IC50-værdier på oxaliplatin. Figur 1 Ekspression analyse af POL η protein i gastrisk cancer cellelinjer ved western blotting og 48 h IC50-værdier på oxaliplatin for gastriske cancerceller (pmol /L).
Figur 2 Sammenhæng mellem POL η ekspression og IC50 for oxaliplatin til gastriske celler blev efterfølgende analyseret.
Patient karakteristika
Firs patienter fra januar 2005 og juli 2009. Patienterne havde en gennemsnitsalder på 54 (interval, 26,0-79,0), med 49 mænd og 31 kvinder. Andre kliniske karakteristika blev opsummeret i tabel 1. responsrate (CR + PR) med første-line XELOX eller FOLFOX kemoterapi var 47,5%, klinisk fordel (CR + PR + SD) var 77,5%. En del af disse patienter (23/80) havde second-line chemotherapy.Table 1 patient karakteristika (N = 80)
karakteristisk
No. af patienterne
%
Alder (år)
Median
54,0
Range
26,0-79,0
Sex
Mand
49
61,3
Female
31
38,7
ECOG performance status
0
36
45,0
1
42
52,5
2
2
2,5
Primære steder i Cardia
21
26.3
Krop
18
22,5
antrum /pylorus
41
51,2
metastatisk steder i Liver
26
32,5
Lung
21
26,3
bughinde
19
23,8
Andre
14
17,4
Patologisk differentiering n0
G1
2
2,5
G2
26
32,5
G3
52
65,0
behandlingsrespons (1. linie)
CR
2
2.5
PR
36
45,0
SD
24
30,0
PD
18
22,5
2nd-line chemotherary regime
BSC
57
71,3
FOLFIRI
6
7.5
XELIRI
8
10,0
DX
6
7.5
TP
3
3,7
CR, fuldstændigt respons; PR, partielt respons; SD, stabil sygdom; PD, progression sygdom
BSC, bedste understøttende behandling; FOLFIRI, 5-fluracil plus leucovorin plus irinotecan; XELIRI, capecitabin plus irinotecan; DX, docitaxel plus capecitabin; TP, paclitaxel plus cisplatin.
De kriterier, som tumorvæv med mere end 5% af Polη-positive celler kræft blev defineret som IHC-positiv har højeste nøjagtighed forudsige klinisk gavn for første linje kemoterapi
Tumor væv af firs metastatisk gastrisk cancer patienter behandlet med FOLFOX eller XELOX regime blev anvendt til at detektere polη proteinekspression ved immunhistokemi (figur 3). Fordi den procentdel af nucleus-farvning tumorceller i alle tilfælde var ikke mere end 10%, forsøgte vi at vælge IHC Polη-positiv værdi med højeste nøjagtighed kan forudsige klinisk gavn af første linje kemoterapi. Vi definerede ni IHC-positiv værdi: ≥ 1%, ≥ 2%, ≥ 3%, ≥ 4%, ≥ 5%, ≥ 6%, ≥ 7%, ≥ 8%, ≥ 9%, og bygget ni 2 × 2 tabel. Tabel 2 er vist som et eksempel. Følsomhed, specificitet, positiv og negativ prædiktiv værdi, og nøjagtighed blev beregnet og bruges til at tegne ROC kurve. Som vist i tabel 3 og figur 4 afskæringsværdi ≥ 5%, har højeste nøjagtighed (88,8%). Så tumorer med mere end 5% af POLη-positive cancerceller blev betragtet som positive (kerne-farvning), ellers negativ. Figur 3 Udtrykket for POLη protein i fremskreden mavekræft som undersøges ved immunhistokemi. A. negativ ekspression billede i tumorvæv (× 400). B. POLη protein kunne påvises i kernen af ​​gastrisk cancercellelinie (× 400).
Tabel 2 DNA polymerase η proteinekspression og klinisk behandling respons

Klinisk fiasko
Klinisk fordel
Total sager
Pol η (+)
16
7
23
Pol η ( -)
2
55
57
Total sager
18
62
80
≥ 5% Polη udtryk i tumorceller defineret som positiv
tabel. 3 Pålidelighed og usikkerhed, følsomhed, specificitet, positiv prædiktiv værdi, og negativ prædiktiv værdi ifølge Polη IHC tælle procent forudsige kemoterapi reaktion på FOLFOX eller XELOX regime
Tumorcelle positive procent, sender off

Specificity

Sensitivity

PPV

NPV

Accuracy

1%
0.419
0.889
0.308
0.929
0.525
2%
0.500
0.889
0.340
0.940
0.588
3%
0.645
0.889
0.421
0.952
0.700
4%
0.823
0.889
0.593
0.962
0.838
5%
0.887
0.889
0.696
0.965
0.888
6%
0.887
0.778
0.667
0.932
0.863
7%
0.978
0.667
0.705
0.904
0.863
8%
0
0.389
1.000
0.849
0.863
9%
0
0.111
1.000
0.795
0.800
PPV, positive prædiktive værdi; NPV, negativ prædiktiv værdi.
Figur 4 Receiver opererer karakteristisk kurve for Polη IHC tælle forudsige kemoterapi reaktion på FOLFOX eller XELOX regime.
Forholdet mellem polη udtryk med de kliniske træk ved metastatisk mavekræft
Som det fremgår af tabel 4 kun 23 af 80 tilfælde (28,75%) havde polη protein positivt udtryk (≥ 5% Polη-positive kræftceller), 16 af de 23 positive tilfælde (69,56%) undlod at behandlingen, derimod, kun 2 af de 57 negative tilfælde (3,51%) havde udviklet sygdommen efter FOLFOX eller XELOX kemoterapi. Polη udtryk stærkt korreleret med behandling respons på oxaliplatin kemoterapi af metastatisk gastrisk kræft (P < 0,001), mens det ikke er forbundet med alder, køn, primære steder, metastatiske steder eller patologisk differentiering levels.Table 4 Sammenhæng mellem POL η udtryk og clinicopathologic karakteristika mavecancerpatienter
karakteristisk
POLη
χ2 test
P værdi

Fishers test
P-værdi

Positiv
(n = 23)
Negativ
(n = 57)



Age (y)
< 60
16
37
0.690
0,797
≥ 60
7
20
Køn
Mand
14
35
0,695 Salg 1,000
Kvindelige
9
22
Primære steder i Cardia
10
11
0,084
0,102
Krop
4
14
antrum /pylorus
9
32
Metastatisk steder i Liver
11
15
0,247
0,269
Lung
5
16
bughinde
3
16
Andre
4
10
Patologisk differentiering
G1
2
0
0,068
0,107
G2
6
20
G3
15
37
behandlingsrespons
CR + PR + SD
7
55
< 0.001
< 0.001
PD
16
2
CR, fuldstændigt respons; PR, partielt respons; SD, stabil sygdom; PD, progression sygdom.
Spearman korrelationsanalyse blev yderligere gjort for at bekræfte sammenhængen mellem polη udtryk og clinicopathologic funktioner. Pearson uforudsete koefficient vist, at polηexpression niveauer var signifikant relateret til behandling respons (P < 0,001)., Ligeledes blev opnået, ingen signifikante korrelationer med andre faktorer (data ikke vist)
Forholdet mellem polη udtryk og overlevelse af metastatisk gastrisk kræft
Kaplan-Meier univariat overlevelse analyse afslørede, at den positive ekspression af polη i tumorceller og dårlig behandlingsrespons signifikant var forbundet med kortere overlevelse. Den mediane overlevelsestid for polη positive og negative tilfælde var 8 og 14 måneder henholdsvis som vist i figur 5 (log rank, P < 0,001). Multivariat overlevelsesanalyse (Cox regression model) afslørede, at ekspressionen af ​​polη var uafhængige prognostiske faktorer. Konfidensintervallet 95,0% (CI) for relative risiko var 2,461-8,429 (tabel 5). Disse resultater viste, at ekspressionen af ​​polη i tumorvæv forudsagt kortere overlevelse. Ingen forhold blev observeret mellem overlevelse og resten klinisk-patologiske parametre som alder, køn, primær tumor sites, patologisk differentiering og metastatisk sites.Table 5 Multivariate analyse af den samlede overlevelse i gastrisk karcinom
Faktorer

Kendetegn
Hazard ratio
95% CI
P-værdi

ugunstige
Gunstige



Age
≥ 60
< 60
0,956
0,570-1,602
0,863
Histologisk klasse
Dårligt
Well /moderat
1,428
0,861-2,369
0,168
POL η
positiv
negativ
4,555
2,461-8,429
< 0,001
CI, konfidensinterval.
Figur 5 Kaplan-Meier kurver med univariat analyse (log-rank test) for patienter med negativ POLη udtryk versus positiv POLη udtryk tumorer.
Diskussion
foreliggende undersøgelse delvist afslørede rolle DNA polymeraseη som DNA-reparation protein i gastrisk cancer ved detektering af dets ekspression i fire gastriske cancercellelinier og 80 patienter med metastatisk gastrisk adenocarcinom, som havde modtaget FOLFOX eller XELOX som den første linje kemoterapi. Resultaterne viste, at ekspressionsniveauet af polη i tumorcellelinier var korreleret med følsomheden af ​​oxaliplatin (figur 2). For tumorvævet, den positive ekspression forekom kun i 28,75% tilfælde (23 ud af 80), og udtrykket var beskedne. Imidlertid blev stærk sammenhæng fundet mellem polη udtryk og behandlingsrespons samt overlevelse. Alle resultaterne viste, at polη positivitet var en indikator for dårlig behandling respons og kortere overlevelse hos patienter med ovenstående indstillinger.
DNA polymeraseη kodes ved polh gen, som er en af ​​de 150 humane DNA reparation gener, hvis afhopning resulterer i xeroderma pigmentosum variant (XP-V) syndrom, manifesterer stærkt følsomhed over for UV-stråling og en tendens til at udvikle hudkræft [29-31]. Polη er en vigtig læsion-replikerende enzym, der replikerer tværs pyrimidin dimerer indført ved UV-stråling, undgå høje genmutation [32]. Foruden pyrimidin dimerer, er polη blevet vist at replikere tværs cisplatin tværbundne intrastrand GG sites [33]. Nogle Undersøgelser viste, at polη udtryk var korreleret med følsomhed over for cisplatin eller oxaliplatin i XP-V humane fibroblaster celle og lunge-cellelinjer, og polη syntes at være en behandling-respons prædiktiv markør i NSCLC patienter med cisplatin kemoterapi [26, 27] .
Mindre vides om den rolle, polη i mavekræft. Det er den første undersøgelse til påvisning af følsomheden af ​​oxaliplatin i disse fire gastriske carcinoma cellelinier (SGC7901, AGS, MKN45, og MGC803) ved MTT-assay og proteinekspression ved Western blotting. Vi fandt en signifikant lineær sammenhæng mellem dem. Vores undersøgelse var til en vis grad i overensstemmelse med den observation i lungekræft cellelinier ved Paolo Ceppi et al, selvom det, de opdaget var polη mRNA-niveau og cisplatin følsomhed [27].
Så vi analyseret restrospectively udtryk for polη protein i firs metastatisk avancerede gastrisk cancer patienter, der fik FOLFOX eller XELOX kemoterapi. Vi først observeret, at procentdelen af ​​polη-farvende tumorceller i alle 80 tilfælde var ikke mere end 10%, så vi defineret ≥5% som IHC positive ifølge nøjagtigheden forudsige klinisk fordel med XELOX eller FOLFOX kemoterapi. Med denne standard, kun 23 patienter havde positiv udtryk med 7 ud af 62 kliniske tilfælde benefit (CR + PR + SD) fra kemoterapi og 16 ud af 18 PD sager. Udtrykket sats mellem klinisk fordel gruppe (7/62, 11,3%) og PD-gruppe (16/18, 88,9%) var signifikant forskellig (P < 0,001). Dette indikerede, at Polη positivitet kunne forudsige ineffektive kemoterapi med XELOX eller FOLFOX regime. Resultatet var i overensstemmelse med vores undersøgelse i celler, der Polη udtryk negativt korrelerer med oxaliplatin følsomhed gastrisk cancer cellelinjer.
Vi fandt en signifikant overlevelse fordel i polη negative patienter. Denne fordel sandsynligvis kom fra effektiv behandling af oxaliplatin, da polη var stærkt korreleret med behandlingsrespons. Det er velkendt, at en effektiv kemoterapi ville forbedre livskvaliteten for mavecancerpatienter og forbedre overlevelsen; vores undersøgelse kan bidrage til at forudsige behandlingsrespons af oxaliplatin kemoterapi og overlevelse, og derfor undgå unødvendig behandling i begyndelsen.
Der er adskillige begrænsninger for vores undersøgelse. Første, Dette er en retrospektiv undersøgelse med et lille antal patienter. I den forudindstillede undersøgelse blev der ikke signifikant sammenhæng mellem polη udtryk og alder, køn, primær tumor sites, metastatiske steder eller patologisk differentiering opnået på grundlag af en sådan sager nummer. Det er muligt at få betydelige resultater i nogle clinicopathologic egenskaber, såsom primære steder eller patologisk differentiering (P værdi tæt på 0,05), hvis med nok patienter. Derfor enlargeing sagsnummeret og udføre prospektive forsøg er obligatorisk. For det andet, fordi testen nøjagtighed blev beregnet ved hjælp af de kriterier, ROC kurve analyse, vores resultater nødvendige validering i en uafhængig kohorte. Tredje, ekspressionen af ​​polη er relativt lav i gastrisk cancer, grundet subjektivitet, kunne den fejl IHC tælling være større, hvilket kan påvirke følsomheden og specificiteten ved forudsigelse behandlingsrespons, er nødvendig, således mere præcis metode. Forth, er det velkendt, at platin modstand er meget kompliceret, så polη, som en enkelt parameter, er svært at forudsige terapi respons på en nøjagtig måde.
Trods begrænsninger, vores undersøgelse er en af ​​de få forsøg på at definere kriterier for in vivo kemosensitivitet af oxaliplatin-regime anvender klinisk respons som reference standard. Det kan være en effektiv og omkostningsbesparende metode til at forudsige behandlingseffekt.
Konklusion
Afslutningsvis nærværende undersøgelse viste, at polη er en væsentlig indikator for behandling hos patienter med metastatisk gastrisk kræft kemoterapi af FOLFOX eller XELOX . En sådan markering kan hjælpe klinikere til at vælge den optimale kliniske strategi for patienter med fremskreden gastrisk cancer. Desuden den multivariate overlevelse analyse viste, at ekspressionen af ​​polη var uafhængige prognostiske faktorer. Resultaterne skal bekræftes i en større prospektiv undersøgelse før anvendelse i klinisk praksis.
Noter
Kai-renminbi Teng, Miao-Zhen Qiu bidraget ligeligt til dette arbejde.
Forkortelser
GG :
guanin-guanin
CR:
komplet respons
DNA:
deoxyribonukleinsyre


FOLFOX:
fluoruracil, leucovorin og oxaliplatin
HR:
homolog rekombination
mRNA:
messenger ribonukleinsyre
IC50:
halv hæmmende koncentration
IHC:
immunhistokemi


MMR:
misforhold Reparation
WB:
western blotting
MTT-analysen:
3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyltetrazoliumbromid assay
NEF:
nukleotid Excision Reparation

OS:
samlede overlevelse
PD:
progression sygdom
Pol η:
polymerase eta
PR:
delvis respons
SD:
stabil sygdom
Pt:
platin
ROC:
modtager opererer karakteristisk
TLS:
translesion syntese


XELOX:
capecitabin og oxaliplatin |
XPV:.
xeroderma pigmentosum variant |
erklæringer
Anerkendelser
Vi takker medarbejderne i Institut for Medicinsk Onkologi på Sun Yat-sen University Cancer center for deres forslag og hjælp
Grant support:. National Natural Science Foundation of China tilskud 30672408, Guangzhou Bureau for Videnskab og Teknologi tilskud 2006Z3-E0041 og Sun Yat-sen University 985 Program Indledning Fund (Kina).
Forfattere 'oprindelige indsendt filer til Images of Nedenfor er links til forfatternes oprindelige indsendte filer til billeder. Ingen fordele i enhver form er blevet modtaget eller vil blive modtaget fra en kommerciel part relateret direkte eller indirekte til emnet for vores artikel.

• Evaluering af en computer hjælp til vurdering af mave symptomer (ECASS): studie protokol for et randomiseret kontrolleret forsøg
• Påvisning af carcinoembryonisk antigen messenger RNA i blod ved brug af kvantitativ real-time revers transkriptase-polymerasekædereaktion at forudsige gentagelse af gastrisk adenocarcinom