Expression und klinische Bedeutung der langen nicht-kodierenden RNA HNF1A-AS1 in menschlichen Magen cancer

Expression und klinische Bedeutung der langen nicht-kodierenden RNA HNF1A-AS1
in menschlichen Magenkrebs
Zusammenfassung
Hintergrund
Zunehmende Beweise hat gezeigt, dass lange nicht-kodierenden RNAs (lncRNAs) eine entscheidende Rolle bei der Entstehung und Entwicklung von Krebs beim Menschen, einschließlich Magenkrebs (GC) spielen. Allerdings sind die funktionelle und klinische Bedeutung der lncRNAs noch kaum verstanden.
Methoden In dieser Studie
die Expression von LncRNA HNF1A Antisense-RNA 1 (HNF1A-AS1
) wurde zuerst von lncRNAs Microarray-Analyse untersucht, in 6 GC Gewebe und wurde dann überprüft weiter durch Echtzeit-quantitative reverse Transkription PCR (qRT-PCR), die beide in 3 GC-Zelllinien und 161 Fälle von GC Geweben. Wir untersuchten auch die Assoziation zwischen HNF1A-AS1
Expression und klinisch-pathologischen Eigenschaften von Patienten mit GC.
Ergebnisse | LncRNAs Microarray-Analyse-Ergebnisse zeigten, dass HNF1A-AS1
GCs Gewebe nach unten reguliert wurde (Mittelwert fache Änderung 2.06 , p
< 0,05), der durch qRT-PCR bestätigt wurde. Die Ergebnisse aus der qRT-PCR zeigte, dass die Expression von HNF1A-AS1
nicht nur in drei GC-Zelllinien (AGS, BGC-823 und MKN-45) relativ zu der in einer normalen Magenschleimhaut epithelialen Zellinie nach unten reguliert wurde ( GES-1), verringerte sich jedoch auch in GC Gewebe relativ zu der in gepaart benachbarten, nicht-neoplastischen Geweben (niedrige Expression, 94 von 161, niedrige Expressionsrate, 58,38%). Darüber hinaus wurde niedrige HNF1A-AS1
Ausdruck mit Tumorgröße /Durchmesser (p
= 0,005, multivariate Analyse) zugeordnet ist, Serumspiegel von carcinoembryonales Antigen (CEA), und Kohlenhydrat-Antigen 19-9 (CA 19-9), und RRM1 Expression in Gewebeproben (p
= 0,028, p = 0,009
und p
= 0,006, respectively).
Schlussfolgerungen
zusammen~~POS=TRUNC zeigen unsere Daten, dass lncRNA HNF1A-AS1
kann ein Regulator der GC sein, und damit es als neuartige Biomarker und Behandlungsziel für diese Art von Krebs Potenzial.
Schlüsselwörter Magenkrebs lncRNA HNF1A-AS1
Biomarkern Hintergrund
Magenkrebs (GC) ist eine der häufigsten Krebsarten und in jedem Abschnitt des menschlichen Magens auftreten kann. Diese Tumoren sind oft bösartig und haben die Fähigkeit, perineuralen Gewebe einzudringen [1]. Die Daten aus der aktuellen globalen jährlichen Umfrage haben gezeigt, dass es fast 1 Million neue Fälle und 740.000 Todesfälle von diesem Krebs pro Jahr weltweit. Die Inzidenz von GC in China ist höher als die in den meisten Ländern der Welt, mit mehr als 400.000 neue Fälle jedes Jahr etwa 300.000 Todesfälle. Studien haben gezeigt, dass, wenn diese Krankheit in einem frühen Stadium diagnostiziert werden, kann eine gute Prognose durch die vollständige chirurgische Resektion des Primärtumorgewebe erreicht werden [2]. Leider Patienten mit GC zeigen einige Symptome in den frühen Stadien der Erkrankung und der Diagnose ist in der Regel schwierig. Die 5-Jahres-Überlebensrate von GC im fortgeschrittenen Stadium bleibt arm und hartnäckig bei rund 30% [3]. Cancer Biomarker erlauben Krebs diagnostiziert werden und als therapeutische Targets dienen können, als auch verwendet werden können, die Pathogenese der Krankheit zu erforschen; daher, die Identifizierung von Krebs-Biomarker von großem Wert sein würde.
Lange nicht-kodierenden RNAs (lncRNAs) sind nicht-kodierenden RNAs größer als 200 Nukleotide [4]. Diese RNAs codieren Proteine ​​nicht und sind die Hauptbestandteile der menschlichen Transkriptom [5]. Beweise Schwellen zeigt an, dass lncRNAs wichtige regulatorische Moleküle, deren Hauptfunktionen beziehen sich auf die Modulation der Genexpression Netze [6] sind. Viele dieser Netzwerke sind eng mit der Entwicklung von Krebs und Progression [6-9] zugeordnet ist. Daten aus verschiedenen Gruppen haben festgestellt, dass Änderungen in der Expression von lncRNAs zur Pathogenese von verschiedenen menschlichen Krebsarten in Zusammenhang stehen. Neueste Erkenntnisse aus Wang et al., Song et al., Und Shao et al. haben gezeigt, dass an Magenkrebs Karzinogenese und Progression Veränderungen der Expressionsprofile von lncRNAs verbunden sind und dass lncRNAs bereits Biomarker oder als Behandlungsziele für GC [10-12].
Um verwendet werden, um die abnormale Expression zu identifizieren tumorbedingten lncRNAs und jene lncRNAs mit Potentialwerte als Biomarker, die in dieser Studie, die lncRNAs Expressionsprofil Microarray-Analyse wurde in sechs GC Gewebe und ihre gepaarte benachbarte nicht-neoplastische Magengewebe durchgeführt. LncRNA HNF1A Antisense-RNA-1 (HNF1A-AS1
) war einer der LncRNAs, die in GC Geweben durch die Mikroarray-Analyse herunterreguliert identifiziert werden. HNF1A-AS1
, ein Single-Exon-Gen an Band 12q24.31 von Chromosom 12, ist ein bidirektionaler lncRNA von 2455 Nukleotiden [13]. Die Transkriptionsstartstelle dieser lncRNA ist sehr nahe an der Leber nuclear factor 1 alpha-Gen (HNF1A
; HNF1A-AS1
's Startstelle ist etwa 5 kb stromabwärts von HNF1A
) [13]. Unseres Wissens bleibt der Ausdruck HNF1A-AS1
in GC Gewebe nicht gemeldet. Daher wird in dieser Arbeit haben wir festgestellt, die die Expressionsniveaus HNF1A-AS1
in 3 GC-Zelllinien und in 161 Fällen von GC Gewebe und deren gepaarte benachbarte nicht-neoplastische Magengewebe. Wir untersuchten auch die möglichen Zusammenhang zwischen der Expression von HNF1A-AS1
und klinisch-pathologischen Eigenschaften von Patienten mit GC. Unsere Daten das Potenzial dieses lncRNA als neuartige Biomarker und ein Behandlungsziel für GC.
Methoden
Gewebeproben und klinische Datenerfassung
Hundert und einundsechzig frisch gepaart Gewebeproben (GC Gewebe und nicht illustrieren -neoplastic Gewebe gesammelt 5 cm vom Rand des Krebs) wurden im Jahr 2014 von Fuzhou General Hospital, Fujian, China, erhalten und 2015. Alle Proben wurden unmittelbar nach der Operation erhalten und in RNAlater (Qiagen, Deutschland) bei -80 ° aufbewahrt C bis zur Verwendung. Serum-Proben zum Nachweis der Serumtumor verwendet Biomarkern und in Paraffin eingebetteten Gewebeproben zum Nachweis der immunhistochemischen Marker verwendet wurden ebenfalls aus den gleichen Patienten gesammelt. Jede Gewebeprobe wurde histologisch durch mindestens zwei Pathologen diagnostiziert und bestätigt. Die Standards für die Tumor-Knoten-Metastase (TNM) Bühne und histologischen Grad waren in Übereinstimmung mit den Richtlinien der International Union Against Cancer (UICC; 5. Ed) und das National Comprehensive Cancer Network (NCCN) Clinical Practice Guidelines in Oncology (V. 1.2011), respectively. Keiner der Patienten erhielten eine Behandlung vor der Resektion.
Ethik Aussage
Einwilligung nach Aufklärung von allen einzelnen Teilnehmer erhalten wurde in die Studie aufgenommen, und diese Studie wurde von der Ethikkommission der Fuzhou General Hospital genehmigt.
LncRNAs Microarray Assay
die lncRNAs Microarrays in dieser Studie verwendet wurden, waren die Menschen lncRNAs Microarray V3.0 (Arraystar Inc., MD, USA), die von lncRNAs und mRNAs, die aus dem menschlichen Genom zusammengesetzt war. lncRNAs Microarray-Assays und die Datenanalyse wurden von KANGCHEN Bio-Tech (Shanghai, China) durchgeführt auf der Grundlage der Anweisungen des Herstellers.
Zellkultur
AGS, BGC-823 und MKN-45 GC-Zelllinien und normalen menschlichen Magen-epithelialen Zelllinie (GES-1) wurden von der American Type Culture Collection, Manassas, VA, Shanghai Institut für Biochemie und Zellbiologie, der chinesischen Akademie der Wissenschaften in Shanghai, China, japanische Krebsforschungsbank und Peking Cancer Institute erhalten ( beijing, China) sind. Die Zellen wurden in F12, RP1640 oder DMEM-Medium (Invitrogen, Grand Island, NY, USA), von denen alle enthielten 10% fötales Rinderserum, in einem Inkubator bei 37 ° C mit 5% CO 2 gezüchtet.
Gesamt-RNA-Extraktion und qRT-PCR
Gesamt-RNAs wurden aus beiden Geweben und kultivierten Zellen isoliert unter Verwendung von Trizolreagenz (Invitrogen). Die reverse Transkription wurde dann unter Verwendung eines Reverse Transkription-Kit (Promega) gemäß den Anweisungen des Herstellers durchgeführt. Real-time quantitative reverse Transkription PCR (qRT-PCR) wurde unter Verwendung des SYBR Green Mix Kit (Promega, Madison, WI, USA) in einem Schritt einer Real-time PCR-System (ABI, Grand Island, NY, USA) durchgeführt . Die Primer für 18s und HNF1A-AS1
qPCR waren wie folgt: (vorwärts) 5'-TCAAGAAATGGTGGCTAT-3 'und (rückwärts) 5'-GCTCTGAGACTGGCTGAA-3' für HNF1A-AS1
; (Vorwärts) 5'-AGAAACGGCTACCACATCCA-3 'und (rückwärts) 5'-CACCAGACTTGCCCTCCA-3' für 18s. Die Bedingungen für die PCR waren wie folgt: Stufe 1, 95 ° C für 10 min; Stufe 2, 40 Zyklen bei 95 ° C für 15 s, 57 ° C für 1 min; Stufe 3 (Dissoziationsstufe), 95 ° C für 15 s, 60 ° C für 15 s, 95 ° C für 15 Sekunden. Die aufgezeichneten Zyklus Schwellenwert (Ct) Werte enthalten sowohl HNF1A-AS1
und 18 s; diese dienten als Kontrolle. Das Expressionsniveau von HNF1A-AS1
wurde unter Verwendung der ACt Verfahren erhalten. Höhere ACt angegebenen Werte niedriger HNF1A-AS1
Ausdruck. Die Ergebnisse wurden von drei unabhängigen Experimenten erhalten und als Mittelwert ± Standardabweichung (SD).
Messung von AFP, CA-125, CEA und CA 19-9 Konzentrationen im Serum von Patienten mit GC
Die Konzentrationen von alpha-Fetoprotein (AFP), carcinoembryonales Antigen (CEA), Krebs-Antigen 125 (CA-125) und Kohlenhydrat-Antigen 19-9 (CA 19-9) wurden unter Verwendung von im Serum von allen 161 Fälle dieser Gruppe Patienten nachgewiesen das Quantitative Kit für die Tumormarker (Protein-Chip-Chemilumineszenz) (Health, Huzhou, China) mit dem HD-2001A Chipleser-System (Health). In dieser Studie wurden die normalen Referenzwerten für gesunde Individuen < 20,0 ng /ml, < 5,0 ng /ml, < 35,0 U /ml und < 35,0 U /ml für AFP, CEA, CA-125 und CA19 -9, respectively.
IHC
Wir verwendeten die Immunhistochemie (IHC) in Paraffin eingebetteten Schnitten, die Expression des vaskulären endothelialen Wachstumsfaktors (VEGF), den humanen epidermalen Wachstumsfaktor-Rezeptor 2 (C-erbB-2 oder HER2 zu bestimmen, ), Thymidylat-Synthase (TS), Brustkrebs 1 (BRCA1), Exzisionsreparatur Quer Komplementationsgruppe 1 (ERCC1), Ki67 Antigen (Ki67) und Ribonukleotidreduktase-Untereinheit M1 (RRM1), Synaptophysin (Syn), neuronale Zelladhäsionsmoleküle (CD56) und Chromogranin A (CgA); 150 Fälle der in Paraffin eingebetteten Gewebeproben dieser Gruppe Patienten waren für den IHC-Test zur Verfügung. IHC wurde von Pathologen in Übereinstimmung mit den Anweisungen des Herstellers durchgeführt. Die Antikörper und andere Reagenzien für die in dieser Arbeit verwendeten IHC wurden aus Maixin (Fujian, China) und ZSGB-BIO (Beijing, China) erworben. Mit Ausnahme von Ki67 wurde die Intensität der Färbung 0-4 benotet, wobei 0 keine Färbung; 1, weniger als 25% der Zellen positiv; 2, 25 bis 50% der Zellen positiv; 3, 51 bis 75% der Zellen positiv; und 4 > 76% der Zellen positiv. Für Ki67 wurden die Qualitäten als Prozent positiv für Ki67 Ausdruck direkt beurteilt. Die Objektträger wurden von mindestens zwei Pathologen benotet.
Statistische Analyse
Statistische Programm für Sozialwissenschaften (SPSS) 16.0 Software (SPSS, Chicago, IL, USA) und GraphPad Prism 5.0 (GraphPad Software, LaJolla, CA, USA ) wurden für alle statistischen Analysen verwendet. Einweg-Varianzanalyse (ANOVA), der Rangsummentest, und die T
Tests von Student waren wichtigsten statistischen Methoden in dieser Arbeit, die p
< 0,05 wurde als statistisch signifikant angesehen.
Ergebnisse | LncRNAs Microarray-Analyse zeigt, dass HNF1A-AS1
Ausdruck in GCs Gewebe nach unten reguliert wird, wie in Abb
. 1, Analyse die Ergebnisse von lncRNAs Expressionsprofil Microarray von sechs GC Gewebe und deren gepaart benachbarten nichtneoplastische Magengewebe bekommen zeigten, dass HNF1A-AS1
Ausdruck in allen sechs GC Gewebe (mittlere fache Änderung 2.06, p nach unten reguliert wurde
< 0,05), was anzeigte, dass diese lncRNA das Potential haben, kann eine der tumorbedingten LncRNAs sein. So wählten wir es für die weitere Analyse. Feige. 1 HNF1A-AS1
wurde in sechs GC Geweben identifiziert durch lncRNAs Microarray-Analyse downexpressed. 84C, 83C, 87C, 78C, 97C und 90C angegeben sechs GC Gewebe (84, 83, 87, 78, 97 und 90 waren die sechs Fälle von Gewebenummer, C
Krebs); 83N, 87N, 90N, 78N, 97N und 84N bezeichnet die sechs benachbarten nichtneoplastische Magengewebe (N
nichtneoplastische Magengewebe) gepaart entspricht. Die Clusteranalyse auf der Basis der Microarray-Ergebnisse zeigten, dass HNF1A-AS1
Ausdruck in GC Gewebe nach unten reguliert wurde, verglichen mit der gekoppelten nichtneoplastische Magengewebe (mittlere fache Änderung 2.06, p
< 0,05)
qRT- PCR-Überprüfung bestätigte ferner, dass HNF1A-AS1
Ausdruck in GC-Zelllinien und Geweben nach unten reguliert wird kaufen Wir zunächst die Expression von lncRNA HNF1A-AS1
in drei GC-Zelllinien untersucht: AGS, BGC-823 und MKN -45. qRT-PCR durch Verwendung bestätigten wir, dass die Expression von HNF1A-AS1
signifikant war in allen drei Zellinien GC verringert relativ zu derjenigen in normalen Magenepithelzellen (GES-1-Zellen; AGS, p
< 0,0001; BGC-823, S.
< 0,05; MKN-45, S.
< 0,05; Abb. 2). Wir untersuchten auch HNF1A-AS1
Ausdruck in GC Gewebeproben und benachbarten nicht-neoplastischen Gewebeproben gepaart. Unsere Ergebnisse zeigten, dass HNF1A-AS1
wurde in 58,38% (94/161) von GC Geweben relativ zu der in den nicht neoplastischen Geweben abreguliert (p
< 0,01, Fig. 3). Zusammengenommen zeigen diese Daten, dass HNF1A-AS1
in menschlichen GC downregulated ist. Feige. 2 Verminderte Expression von HNF1A-AS1
in GC-Zellen gegenüber derjenigen in normalen Magen-Epithelzellen. qRT-PCR wurde verwendet, um die Expression von HNF1A-AS1
in BGC-823, MKN-45 und AGS GC-Zellen, die der nicht-neoplastischen GES-1-Zellen zu vergleichen. Die gezeigten Daten sind aus drei unabhängigen Experimenten und ausgedrückt als Mittelwert ± SD. Sternchen
Werte mit einem statistisch signifikanten Unterschied im Vergleich zu dem Wert in GES-1-Zellen zeigen. * P
< 0,05, p ****
< 0,0001. GC
Magenkrebs, qRT-PCR
quantitative Echtzeit-PCR, SD
Standardabweichung
Abb. 3 Expression von HNF1A-AS1
in neoplastischen und nicht-neoplastischen Magengewebe. Die Expression von HNF1A-AS1
in GC Gewebe wurde in benachbarten, nicht-neoplastischen Geweben zu, dass im Vergleich (n
= 161, ** p
< 0,01). T
GC Gewebe, N
nichtneoplastische Gewebe. Die gezeigten Daten sind aus drei unabhängigen Experimenten und als Mittelwert ± SD (ACt Wert). GC
Magenkrebs, SD
Standardabweichung
Verband der HNF1A-AS1
Ausdruck mit klinisch-pathologischen Eigenschaften von Patienten mit GC
die klinische Bedeutung der HNF1A-AS1
Um beurteilen zu können, wir analysiert die Beziehung zwischen seiner Expression und klinisch-pathologischen Eigenschaften von Patienten mit GC. Wie in den Tabellen 1 und 2 gezeigt, wies die univariaten Analyse, dass die Expression von HNF1A-AS1
mit Tumorgröße /Durchmesser (p
= 0,002), Invasionstiefe (T Stufen, p
assoziiert = 0,032 ), lymphatische Metastasierung (N Stufen, p
= 0,006), venöse Invasion (p
= 0,001) und perineuralen Invasion (PNI, S.
= 0,014). Doch nach Faktoren wie Alter, Geschlecht, Tumorlokalisation, Tumorgröße /Durchmesser, Differenzierung, Invasion (T-Stufen), des lymphatischen Metastasierung (N-Stufen), venöse Invasion und PNI, die multivariate Analyse bestätigte ferner, dass die Tumorgröße beibehalten zu beeinflussen Kontrolle deutlich zu HNF1A-AS1 Ausdruck (p
= 0,005) korreliert werden, was bedeutet, dass Patienten mit Tumorgröße ≥5 cm geringere HNF1A-AS1 hatte. Diese Daten legen nahe, dass HNF1A-AS1
Rollen während der Krebs Auftreten spielen kann und Progression und kann ein neuer Biomarker von Magen cancer.Table 1 Verband der HNF1A-AS1 Ausdruck (ACt) mit klinisch-pathologischen Eigenschaften von Patienten
Merkmale sein

Nr von Fall (%)
Mittelwert ± SD
p
Wert
Alter (Jahre)
0.119
≥60
82 (50,9 )
16,17 ± 2,90
< 60
79 (49,1)
15,47 ± 2,71
Geschlecht
0.688
männlich
123 (76,4)
15.78 ± 2,88
Weiblich
38 (23,6)
15.99 ± 2.66
Tumor Lage
0.560
Fisteln ventriculi
57 (35,4)
16,06 ± 3,13
Cardia
33 (20.5)
15,87 ± 3,04
Corpora ventriculi
45 (28,0)
15,92 ± 2,50
Andere
26 (16.1)
15,11 ± 2,36
Durchmesser (cm)
0.002
≥5
73 (45,3)
16,59 ± 2,8
< 5
88 (54,7)
15,2 ± 2,70
Differenzierung
0.396
Well of 2 (1.2)
16,15 ± 0,71
Moderate
34 (21,1)
15,24 ± 2,66
Schlechte
125 (77,7 )
15,98 ± 2,87
Invasion
0,032
T1
13 (8.1)
16,13 ± 1,95
T2
14 (8.7)
14.09 ± 2,24
T3
16 (9,9)
14.85 ± 3.71
T4
118 (73,3)
16,13 ± 2,76
Lymphatische Metastasierung
0,006

N0
38 (23,6)
14,74 ± 2,77
N1-3
123 (76,4)
16,16 ± 2,76
Venöse Invasion
0.001
Absent
86 (53,4)
15,14 ± 2,58
Präsentieren
75 (46,6)
16.61 ± 2.90
perineurale Invasion (PNI)
0,014
Abwesend
89 (55,3)
15,34 ± 2,77
72 (44,7) auf
16,43 ± 2,79
CEA präsentieren 0.028
Normale
130 (80,7 )
15,59 ± 2,74
hoch
31 (19,3)
16,83 ± 2,97
CA19-9 0,009
Normale
140 (87,0)
15.60 ± 2.70
hoch
21 (13,0)
17,32 ± 3,22
AFP
0.936
Normale
150 (93,2)
15,82 ± 2,80
hoch
11 (6.8)
15.89 ± 3.25
CA-125
0.494
Normale
154 (95,7)
15,79 ± 2,84
hoch
7 (4,3 )
16,55 ± 2,33
Kursiv Werte bei p <
von Bedeutung sind; 0.05
Tabelle 2 Vergleich der p
Werte von uni- und multivariate Analysen erhalten von der Vereinigung der HNF1A-AS1 Ausdruck (ACt) mit klinisch-pathologischen Eigenschaften von Patienten
Eigenschaften
Univariate

Multivariate
p
Wert
p
Wert
Alter (Jahre)
0.119
0.197
Gender
0.688
0.174
Durchmesser (cm)
0,002
0,005
Differenzierung
0.396
0,603
Invasion
0,032
0.580
Lymphatische Metastasierung
0,006
0.235
Venöse Invasion
0.001
0.057
perineurale Invasion (PNI)
0,014
0.192
Tumor Lage
0,560
0.342
Kursiv Werte sind signifikant bei p
< 0,05
Verband der HNF1A-AS1
Ausdruck mit Serum oder immunhistochemischen Marker von GC
HNF1A-AS1
Ausdruck in GC Gewebe mit zwei Serummarker des Verdauungstraktes Tumoren, CEA (p
verbunden war = 0,028) und CA19-9 (p = 0,009
), aber es gab keine signifikante Assoziation mit anderen Magen-Darm-Trakt Krebs Serummarker AFP oder mit dem epithelialen Tumormarker CA125 (Tabelle 1). Die Expression von HNF1A-AS1
in Tumorproben wurde auch mit einem immunhistochemischen Marker für Krebs, RRM1 (p
= 0,006) signifikant korreliert, aber nicht mit VEGF, C-erbB-2, TS, BRCA1, ERCC1, Ki67, CD56, Syn oder CGA (Tabelle 3) .Tabelle-3-Vereinigung von HNF1A-AS1 Ausdruck (ACt) mit immunohisochemical Merkmale von GC Gewebe
Merkmale
No. von Fall (%)
Mittelwert ± SD
p
Wert
VEGF
0.809
0
15 (10,0)
15,27 ± 3,69
1 22 (14,7)
15,57 ± 2,92
2 33 (22,0)
15,83 ± 2,72
3
59 (39,3)
15.94 ± 2.54
4 21 (14,0)
16,39 ± 3,32
C-erbB-2
0.312
0
129 (86,0)
15,70 ± 2,84 seite 1 von 5 (3,3)
16,37 ± 2,96
2 4 (2.7)
15,77 ± 1,01
3
12 (8,0)
17,30 ± 3.21
TS
0.543
0
22 (14,7)
16,41 ± 2,45
1 53 (35,3)
15.99 ± 2.97
2 52 (34,7)
15,33 ± 2,73
3
21 (14,0)
16,25 ± 3,34
4 2 (1.3)
15,92 ± 1,82
BRCA1
0.893
0
10 (6.7)
16,59 ± 1,83
1 31 (20,7)
16,07 ± 2,91
2 73 (48,6)
15,78 ± 2,57
3
34 (22,7)
15,61 ± 3,57
4 2 (1.3)
15.77 ± 5.01
ERCC1
0.585
0
19 (12,7)
15,81 ± 2,39
1 22 (14,7)
16,51 ± 3,61
2 44 (29,3)
15.96 ± 2.85
3
41 (27,3)
15.85 ± 3.05
4 24 (16,0)
15,11 ± 2,02
RRM1
0,006
0
81 ( 54.0)
15.79 ± 2.41
1 10 (6.7)
13.27 ± 4.11
2 17 (11.3)
15,51 ± 3,08
3
35 (23.3)
16,98 ± 2,93
4 7 (4.7)
15.48 ± 2.67
Ki67
0.328
1 14 (9.3)
16.54 ± 1,67
2 35 (23,3)
16,44 ± 2,79
3
57 (38,0)
15.48 ± 2.97
4 44 (29,4)
15.66 ± 3,02
Syn
0.463
0
128 (85,3)
15.99 ± 2.95
1 16 (10.7)
15,15 ± 2,17
2
3 (2.0)
13,98 ± 0,87
3
3 (2.0)
15,59 ± 3,06
CD56
0.364
0
137 (91,4)
15,94 ± 2,86
1 9 (6,0)
15,66 ± 3,09
2 2 (1.3)
12,72 ± 0,84
3
2 (1.3)
14,22 ± 0,97
CgA
0.980
0
141 (94,0)
15,87 ± 2,91
1 7 (4.7)
15,69 ± 1,83
2
2 (1.3)
15,63 ± 3,26
Kursiv Werte bei p <
von Bedeutung sind; 0.05
Diskussion
Mehrere Beweis haben gezeigt, dass Veränderungen in der Expression von lncRNAs eine wichtige Rolle bei der Krebsentstehung und Krebsentwicklung [14, 15] und dass eine veränderte Expression von lncRNA bekannt ist, werden deutlich im Zusammenhang mit mehreren klinisch-pathologischen Eigenschaften von spielen humanen Tumoren, wie Lymphknotenmetastasen, TNM-Stadium, Fernmetastasen und dem Grad der Gewebedifferenzierung. Zum Beispiel verringerte Expression von Magenkrebs-assoziierten Transkript 1 (GACAT1
) signifikant mit Metastasierung, Invasion und Gewebedifferenzierung bei Patienten mit GC [16] verbunden. Darüber hinaus erhöhte Expression von homeobox (HOX) Transkript Antisense-RNA (HOTAIR
), einer langen intergenischen nicht-kodierenden RNA wird mit dem Grad der Endometriumkarzinom (EG), Metastasierung, die Tiefe des Myometriums Invasion assoziiert und schlechteren Gesamt Überleben [17]. Schließlich wird geringe Expression von HMlincRNA717
in GC im Zusammenhang mit distalen Metastasierung und Invasion des venösen und Nervensystem [12]. All diese Erkenntnisse Beweis für die wichtige Rolle von lncRNAs in der Karzinogenese und der Potentialwert in ihrer klinischen Anwendung sind. In dieser Studie
stellten wir fest, dass das Expressionsniveau von HNF1A-AS1
in drei Magenkrebszelllinien wurde signifikant verringert im normalen Magen-Epithelzellen, dass relativ. Noch wichtiger ist, wurde in 58,38% der Magenkrebs-Gewebeproben relativ zu derjenigen in den benachbarten nicht-neoplastischen Gewebe herunter reguliert. Die Erkenntnisse aus Yang et al. zeigen, dass diese lncRNA in Adenokarzinom des Ösophagus (EAC) nach oben reguliert wurde [13]. Karzinogenese und Tumorprogression ist eine komplexe pathologische Prozess, der durch die Genexpression Netzwerke vermittelt wird. Cancer Auftreten in verschiedenen Organen oder Geweben kann durch differentiell exprimierten Ebenen der gleichen Gene oder die gleichen lncRNAs [18, 19] geregelt werden. Dies kann, warum HNF1A-AS1 erklären
in verschiedenen Arten von Krebszellen abweichende Expressionsprofile aufweist. Weitere Untersuchungen können erforderlich sein, die genauen molekularen Mechanismus für diese Unterschiede zu offenbaren
Es ist bekannt, dass Krebsinvasion und Metastasierung häufig über drei gemeinsame Wege auftritt. Lymphknotenmetastasen, reisen durch das Gefäßsystem und die lokale Aussaat und Wachstum. PNI ist ein zusätzliches Mittel zur Invasion, die in der Regel mit Lokalrezidiv korreliert ist. Da lokale Rezidiv eng mit einer schlechten Prognose assoziiert ist, hat Patienten mit hohem Risiko für PNI Identifizierung großer klinischer Bedeutung.
Die Prognose und das Überleben von Patienten mit GC kann auch durch die Größe des Tumors beeinflusst werden, die zu seiner Zeit in Beziehung steht des Wachstums. Kleinere Tumoren zeigen weniger Verletzung in den Magen als größere Tumoren tun. Darüber hinaus erhöhte sich die Tiefe der Invasion durch größere Tumoren erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass das lymphatische System verletzt wird. Erhöhen Lymphknotenmetastase ermöglicht der Krebs leichter zu wachsen und zu einer schlechten Prognose.
Sowohl CEA und CA19-9 sind bekannte Tumormarker, die normalerweise in Serum oder Gewebeproben von Patienten mit frühen oder primären malignen Tumoren von hochregulierten den Verdauungstrakt. RRM1 ist einer der drei bekannten menschlichen Ribonukleotidreduktase mit den Funktionen der über die Vermittlung der DNA-Synthese und Reparatur der Krebszellproliferation regulieren, und Nachweis der Expression von RRM1 in GC Geweben durch IHC wurde bei Patienten mit GC prognostische Bedeutung zu haben, identifiziert [ ,,,0],20].
Schlussfolgerungen
Insgesamt analysierten wir die Assoziation des Expressionsniveaus von HNF1A-AS1
mit den klinisch-pathologischen Eigenschaften von Patienten mit GC. Unsere Ergebnisse zeigten, dass die Expression von HNF1A-AS1
signifikant in beiden GC Geweben und Zelllinien herunterreguliert wurde. Darüber hinaus wurde verringerte Expression mit der Tumorgröße /Durchmesser und Serumspiegel von CEA, CA19-9 und Gewebe RRM1 verbunden. Diese Ergebnisse zeigen, dass HNF1A-AS1
Unterdrückung des Magenkrebs Auftreten beteiligt sein können und die Entwicklung und es hat das Potential als neuartige Behandlungsziel und Biomarker für die Beurteilung der Schwere der Erkrankung mit GC in Patienten zu dienen. Da die Stichprobengröße dieser Studie relativ klein war, kann eine weitere Überprüfung erforderlich sein HNF1A-AS1
ist wahr klinischen Wert.
Erklärungen
Danksagung
Diese Arbeit wurde unterstützt von der Innovation Team Foundation zu bestätigen von Fuzhou General Hospital für Lie Wang (2014CXTD04); die Postdoc-Stiftung von Fuzhou General Hospital (43853) für Yuan Dang; die National Natural Science Foundation of China (Erteilungsnummer 81372788), der medizinisch-wissenschaftlichen Forschung Schlüssel Gründung der Nanjing Militärkommando (Nr 11Z032) und der Natural Science Foundation der Provinz Fujian (Nr 2014J01427) für Qiaojia Huang; . Und The Medical Scientific Innovation Foundation of Nanjing Militärkommando (Nr 2013-MS122) für Yinghao Yu
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Wettbewerb. Interessen
die Autoren erklären, dass sie keine Interessenkonflikte haben.
Beiträge der Autoren
YD die Experimente und die Datenanalyse durchgeführt. FL einige Experimente geführt. XO, KW, und YL nahmen an Proben gesammelt. YY geführt, die in Formalin fixierten und in Paraffin eingebetteten Gewebeproben gesammelt und immunhistochemischen Assays. LW und YW geführten großen frischen Proben gesammelt. LW trug auch zur wichtigsten Finanzierungsunterstützung. QH entwickelt, um die Studie. QH und YD schrieb das Manuskript. Alle Autoren gelesen und genehmigt haben das endgültige Manuskript.

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