Diminution de l'expression de la prényl diphosphate synthase sous-unité 2 est en corrélation avec la survie réduite des patients atteints de cancer gastrique

Diminution de l'expression de la prényl diphosphate synthase sous-unité 2 est en corrélation avec la survie réduite des patients atteints de cancer gastrique
Résumé de l'arrière-plan
identification de biomarqueurs moléculaires permettra d'améliorer la prise en charge des patients atteints de cancer gastrique (GC). Prényl diphosphate synthase sous-unité 2 (PDSS2) est nécessaire pour la biosynthèse de la coenzyme Q10 et agit comme un suppresseur de tumeur; Cependant, le rôle et la réglementation des mécanismes de PDSS2
en GC ne sont pas compris. Le but de cette étude était de déterminer le statut d'expression et les mécanismes de régulation de PDSS2
en GC.
Méthodes
associations entre l'expression et la méthylation de PDSS2
ont été évalués en utilisant des lignées de cellules de GC. Résultats de la signification clinique de PDSS2 de l'expression a été évaluée à l'aide de 238 paires de tissus gastriques réséqués chirurgicalement avec une analyse de sous-groupe sur la base des sous-types du GC.
L'expression de l'ARNm de PDSS2 a diminué dans 73% des cellules de GC des lignes par rapport à la cellule témoin non cancéreuse. Le promoteur du PDSS2 était hyperméthylé dans des cellules à l'expression de diminution PDSS2 et le traitement de ces cellules avec un inhibiteur de la méthylation réactivée PDSS2 de l'expression. les tissus du GC ont exprimé des niveaux moyens sont significativement inférieurs de PDSS2 de l'ARNm par rapport aux tissus normaux adjacents (P
< 0,001). Le motif d'expression de la protéine PDSS2 était conforme à celle de son ARNm. La diminution de l'expression de l'ARNm dans les tissus PDSS2 GC (moins de la moitié du niveau d'expression détectée dans les tissus adjacents normaux correspondants) corrélé de manière significative avec des niveaux élevés d'hydrate de carbone antigène 19-9 (P = 0,015
), les ganglions lymphatiques métastases (P = 0,022
), et plus courte survie sans récidive après résection curative (P = 0,022
). En outre, l'analyse multivariée a identifié ARNm l'expression de PDSS2 comme un facteur pronostique indépendant (hazard ratio 1,95, 95% intervalle de confiance de 1,22 à 3,09, P
= 0,005), et son modèle d'expression et signification pronostique étaient similaires chez les trois sous-types de GC .
Conclusions
PDSS2
code pour un suppresseur de tumeur putatif, et nous montrons ici que son expression était régulée par hyperméthylation de son promoteur dans les cellules du GC. L'inhibition de l'ARNm expression de PDSS2 peut servir de nouveau biomarqueur de tous les types de GC.
Mots-clés
cancer gastrique Prenyl sous-unité diphosphate synthase 2 Expression méthylation Subtype Contexte
Bien que l'incidence du cancer gastrique (GC) est en baisse dans les pays les plus développés, il reste l'une des causes les plus fréquentes de décès liés au cancer dans le monde entier [1] - [3]. stratification appropriée des patients est un aspect essentiel du traitement individualisé, ce qui conduit à la réduction de la mortalité par ce cancer [4], [5].
Selon son épidémiologie, la pathologie, et l'emplacement dans le corps, GC est reconnue comme trois tumeurs malignes distinctes résultant dans le même organe [6] - [8]. Shah et al. [9] ont proposé une classification convaincante de GC selon l'une histopathologiques et anatomiques critères suivants: (1) proximale non diffus GC où la tumeur est localisée principalement dans le cardia avec des preuves de précurseur dysplasie glandulaire ou d'un carcinome in situ, en présence d'une inflammation chronique chez , généralement sans atrophie; (2) CG diffus, qui peut être situé n'importe où dans l'estomac sans gastrite apparente qui présente un motif entièrement diffus de l'infiltration de cellules présentant un phénotype faiblement différencié; et (3) de la CG non diffus distale, qui se trouve principalement dans l'estomac distal avec des preuves d'une gastrite chronique qui est essentiellement différenciée ou présente un phénotype intestinal. Dans cette étude, ils ont démontré que les trois sous-types de GC se distinguent par leurs profils d'expression génique. Par conséquent, la diversité génétique des sous-types du GC devrait être pris en compte dans les études d'altérations génétiques et épigénétiques liés à la cancérogenèse gastrique et la progression.
Prenyl diphosphate synthase sous-unité 2 (PDSS2
) a été identifié en 2005 [10], et la preuve indique qu'il agit comme un suppresseur de tumeur [11], [12]. PDSS2
est nécessaire pour la synthèse de la coenzyme Q10 (CoQ10) [13], [14], qui est synthétisé dans la membrane interne mitochondriale et joue un rôle vital dans la chaîne respiratoire mitochondriale, biosynthèse de la pyrimidine nucléoside, et la modulation de l'apoptose [15]. PDSS2
réside dans le locus chromosomique 6q16.3-21, un site de fréquentes instabilité de l'ADN microsatellite et de la perte d'hétérozygotie (LOH) dans GC [16], [17], en soutenant son rôle de suppresseur de tumeur dans les cellules épithéliales gastriques . En outre, PDSS2
peut supprimer le développement des mélanomes malins et les cancers du poumon [11], [12]. Par ailleurs, Chen et al. a rapporté que la surexpression de PDSS2 appliquée
conduit à l'apoptose dans une lignée cellulaire de GC en provoquant un arrêt du cycle cellulaire dans la phase G0 /G1 [18]. Ces rapports nous ont amenés à faire une hypothèse que PDSS2
est un gène lié à la GC-potentiel et un candidat du nouveau marqueur pronostique cliniquement pertinente du GC.
Dans cette étude, l'expression et le statut de méthylation de PDSS2
dans GC était déterminé à évaluer l'importance clinique et les mécanismes de régulation de l'expression de PDSS2 en GC. Nos résultats indiquent que PDSS2 de l'expression fournit un biomarqueur clinique potentielle de la progression et la récurrence de GC.
Matériel et méthodes
éthique
Cette étude était conforme aux directives éthiques de la Déclaration de l'Association Médicale Mondiale d'Helsinki Principes -Ethical pour la recherche médicale impliquant des sujets humains et a été approuvé par le Conseil d'examen institutionnel de l'Université de Nagoya, au Japon. Le consentement éclairé pour l'utilisation d'échantillons cliniques et des données, tel que requis par le comité d'examen institutionnel, a été obtenu à partir de tous les patients [4]. De collecte
Sample
lignées cellulaires Eleven GC (H111, KATOIII, MKN1, MKN28, MKN45 , MKN74, NUGC2, NUGC3, NUGC4, SC-2-NU et SC-6-LCK) et CCL-241 (lignée cellulaire non cancéreuse dérivée de l'intestin grêle) ont été obtenus à partir de la American type Culture Collection (Manassas, VA, USA) ou l'Université de Tohoku, au Japon. Les lignées cellulaires de GC ont été cultivées à 37 ° C dans du RPMI-1640 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) additionné de 10% de sérum de veau fœtal dans une atmosphère contenant 5% de CO 2. CCL-241, on a ajouté 30 ng /ml de facteur de croissance épidermique (Sigma-Aldrich) dans le milieu. tissus GC primaires et des tissus adjacents normaux correspondants ont été recueillies auprès de 238 patients ayant subi une résection gastrique pour GC à l'hôpital de l'Université de Nagoya entre 2001 et 2012. Les patients qui ont reçu une thérapie néoadjuvante ont été exclus parce qu'il était difficile d'obtenir des cellules cancéreuses à partir de tissus cicatriciels. Les échantillons ont été classés histologiquement en utilisant la 7e édition de l'Union for International Cancer Control (UICC) classification [19]. paramètres clinicopathologiques pertinentes ont été acquises à partir des dossiers médicaux. Pour évaluer si le niveau de PDSS2 d'expression
corrélation avec le phénotype de la tumeur, les patients ont été classés en trois groupes en fonction de la définition des sous-types de GC selon les critères de Shah et al. [9] comme suit: non diffus proximal, diffuse et distale de type non diffus. Depuis 2006, la chimiothérapie adjuvante utilisant S-1 (un pyrimidine fluoré par voie orale) est administré à tous les stades UICC II-III patients avec GC sauf contre-indication par l'état du patient [20]. Les patients ont été suivis au moins une fois tous les 3 mois pendant 2 ans après la chirurgie, puis tous les 6 mois pendant 5 ans ou jusqu'à ce que la mort. L'examen physique, des tests de laboratoire, et amélioré la tomodensitométrie (la poitrine et la cavité abdominale) ont été effectuées à chaque visite. La chimiothérapie pour les patients atteints de métastases à distance ou après récidive a été déterminée par la discrétion du médecin. Échantillons
de tissus ont été immédiatement congelés dans de l'azote liquide et stockés à -80 ° C. Des échantillons de tumeur sans zones nécrotiques (environ 5 mm 2) ont été extraites par l'observation brute et seuls les échantillons confirmés comprennent plus de 80% des composants de la tumeur par H & E coloration ont été inclus dans cette étude. Correspondant échantillons >normaux adjacents de la muqueuse gastrique; 5 ° cm du bord des tumeurs ont été obtenues à partir du même patient [21] Le plus quantitative en temps réel transcription inverse réaction en chaîne par polymérase (qRT-PCR)
ARN totaux. (10 ug par échantillon) ont été isolés à partir des lignées cellulaires 11 GC, CCL-241, 238 tissus GC primaire et les tissus adjacents normaux correspondants ont été utilisés pour générer des ADNc, qui ont été amplifiés en utilisant des amorces de PCR spécifiques (fichiers supplémentaires 1: Tableau S1). Détection en temps réel de SYBR® intensité de la fluorescence verte a été réalisée à l'aide d'un système ABI StepOnePlus Real-Time PCR (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). L'expression de GAPDH de l'ARNm a été quantifié dans chaque échantillon de normalisation. Les réactions qRT-PCR dans chaque échantillon ont été effectuées en triple. Le niveau de chaque échantillon d'expression est présenté comme étant la valeur de la PDSS2
amplicon divisé par celui de la GAPDH
[22]. L'expression de l'ARNm de PDSS2 a été définie comme une diminution dans les tissus du GC lorsque son niveau est inférieur à la moitié de celle du tissu adjacent normal correspondant de. L'analyse de la région promotrice du PDSS2
La séquence nucléotidique du PDSS2
région de promoteur a été analysé pour déterminer la présence ou l'absence d'îlots CpG définies comme suit: au moins une région de 200 pb d'ADN ayant une teneur en GC élevée (> 50%) et un rapport CpG /CpG attendu observé ≥0.6 [23] . Nous avons utilisé le logiciel CpG île Searcher (http:.. //Cpgislands usc edu /) pour déterminer les emplacements des îlots CpG [24]
PCR (MSP) spécifique à la méthylation et la séquence bisulfite analyse
. PDSS2
possède une île CpG près de sa région de promoteur, et nous ont émis l'hypothèse que la méthylation aberrante est responsable de la régulation de la transcription de PDSS2
en GC. Les échantillons d'ADN provenant de lignées cellulaires 11 GC traités par le bisulfite ont été soumis à MSP et analyse de la séquence nucléotidique [25]. Les séquences d'amorces utilisées pour MSP et le séquençage bisulfite sont répertoriés dans les fichiers supplémentaires 1: Tableau S1
5-aza-2'-désoxycytidine (5-aza-dC) traitement
Pour évaluer la relation du promoteur hypermethylation à PDSS2.
transcription, des cellules GC (1,5 x 10 6) ont été traitées avec la 5-aza-dC (Sigma-Aldrich) à inhiber la méthylation de l'ADN et cultivées pendant 6 jours avec des changements de milieu aux jours 1, 3 et 5. on extrait l'ARN et RT-PCR a été effectuée comme décrit [7].
immunohistochimie (IHC)
IHC analyse de la localisation de PDSS2 a été réalisée en utilisant un anticorps monoclonal de souris contre PDSS2 (ab119768, Abcam, Cambridge, Royaume-Uni ) dilué 1: 150 dans le diluant d'anticorps (Dako, Glostrup, Danemark) à la sonde 30 sections fixés au formol et inclus en paraffine représentatifs du tissu GC bien conservé précédemment décrit [3]. Les motifs fluorescents ont été comparés entre les CG et les tissus adjacents normaux correspondants. Pour éviter la subjectivité, les spécimens ont été randomisés et codés avant l'analyse par deux observateurs indépendants qui ne connaissaient pas le statut des échantillons. Chaque observateur a évalué tous les échantillons au moins deux fois pour minimiser la variation intra-observateur [7] de. L'évaluation de la signification clinique d'expression PDSS2
Corrélation entre le motif de l'expression de l'ARNm de PDSS2 et les paramètres clinicopathologiques ont été évalués en fonction de les différences entre les trois sous-types de CPG. l'analyse des sous-groupes de la survie selon GC sous-type a été effectuée pour déterminer l'influence de PDSS2 de l'expression sur les résultats des patients.
Analyse statistique
niveaux relatifs d'expression de l'ARNm (PDSS2 /GAPDH de
) entre GC et adjacent les tissus normaux ont été analysés en utilisant le
test de Mann-Whitney U. Le χ
essai 2 a été utilisé pour analyser l'importance de l'association entre l'expression et la méthylation état de PDSS2
et les paramètres clinicopathologiques. spécifique de la maladie et les taux de survie sans maladie ont été calculées en utilisant la méthode de Kaplan-Meier, et la différence dans les courbes de survie ont été analysées en utilisant le test du log-rank. Nous avons effectué une analyse de régression multivariée pour détecter les facteurs pronostiques en utilisant le modèle de Cox des risques proportionnels et variables avec P
< 0,05 ont été introduites dans le modèle final. Toutes les analyses statistiques ont été réalisées avec le logiciel JMP 10 (SAS Institute Inc, Cary, NC, USA). Une valeur de P
< Résultats de 0,05 a été considérée comme statistiquement significative.
Identification d'un îlot CpG dans le promoteur de PDSS2
Un îlot CpG a été identifié dans le PDSS2 de la région du promoteur en utilisant l'île Searcher CpG. Les propriétés de l'îlot CpG sont les suivantes: 1655 bp 55,9% GC et 0,70 Observé CpG /CpG rapport attendu (figure 1A). Par conséquent, nous avons supposé que hyperméthylation des îlots CpG régule l'expression de PDSS2
en GC. La figure 1 Méthylation de l'analyse PDSS2 dans des lignées cellulaires GC. (A) L'île CpG indiquée par la ligne bleue est centrée sur le site d'initiation de transcription de l'PDSS2 étendant en amont dans la région du promoteur. graphiques (B) Bar indiquent PDSS2 de niveaux d'expression de l'ARNm dans le CCA-241 (contrôle cellule non cancéreuse) et des lignées cellulaires GC avant ou après le traitement 5-aza-dC. Le statut de méthylation du promoteur du PDSS2 a été évaluée en utilisant MSP, et les résultats sont enfermés dans la boîte. M, méthyle; pM, partiellement méthylé; U, non méthylé. (C) Les résultats représentatifs de l'analyse de séquence bisulfite. Tous les sites CpG dans la cellule KATOIII ont été conservés comme ceux de CG et MKN74 ont été convertis en TG.
PDSS2 l'expression de l'ARNm et de l'état de méthylation dans des lignées cellulaires GC
Des diminutions significatives dans les taux d'ARNm de PDSS2 ont été détectées dans sept (73 %) des 11 lignées cellulaires de GC par rapport au niveau de la cellule CCL-241 (données pour l'expression des tissus GC sont décrits ci-dessous). Il n'y avait aucune différence apparente entre les niveaux d'expression des lignées cellulaires dérivées de différenciée et non différenciée GCS (figure 1B). Hyperméthylation du promoteur du PDSS2 a été détectée dans MKN1, SC-2-NU, KATOIII, MKN45 et les cellules NUGC3 (figure 1B). Pour déterminer si une hyperméthylation du promoteur du PDSS2 inhibe la transcription, les niveaux d'expression d'ARNm ont été comparés avant et après le traitement des cellules avec l'inhibiteur de méthylation de 5-aza-dC. Les niveaux d'ARNm de PDSS2 ont été restaurés dans les cellules avec l'expression de PDSS2 régulé à la baisse d'accompagnement hypermethylation après le traitement 5-aza-dC (figure 1B), indiquant que le promoteur hypermethylation inhibée PDSS2 de la transcription dans GC. Des chromatogrammes représentatifs de l'analyse de séquence de la PDSS2 de la région de promoteur dans MKN28 (de méthylation complète) et NUGC4 (absence de méthylation), les cellules sont représentées sur la figure 1C.
Les caractéristiques des patients
La population de patients inclus 179 hommes et 59 les femmes âgées de 20 à 84 ans (65,3 × 11,7 années, signifie × écart-type). Pathologiquement, 139 et 99 patients ont été diagnostiqués avec GC indifférencié et différencié, respectivement. Les patients ont été classés dans les trois phénotypes GC comme suit: non diffus, 54; diffuse, 48; et non diffus distal, 136. Selon la 7ème édition de la classification UICC, 58, 40, 71 et 69 patients étaient aux stades I, II, III et IV, respectivement. Cent soixante-quatre patients aux stades I-III ont subi une résection R0. Soixante des 69 patients au stade UICC IV ont été diagnostiqués comme stade IV en raison de cytologie positive péritonéale de lavage, métastases péritonéales localisée ou lointain métastases des ganglions lymphatiques. Huit des patients au stade IV ont synchrone des métastases hépatiques, on avait des métastases pulmonaires et ils ont subi une gastrectomie visant à contrôler le saignement ou une obstruction au passage de la nourriture. Les niveaux de PDSS2 d'expression d'ARNm et de protéines dans les tissus réséquées chirurgicalement
La niveau moyen de PDSS2 de l'ARNm d'expression était plus faible dans les tissus du GC par rapport à celle des tissus adjacents normaux (P
< 0,001); cependant, il n'y avait pas de différence significative dans les niveaux de PDSS2 d'expression d'ARNm entre les patients atteints de GC indifférenciées ou différenciées (figure 2A). Le profil d'expression de PDSS2 a été évaluée par IHC. cas représentatifs avec une coloration réduite PDSS2 des tissus du GC sont présentés dans la figure 2B. Dans l'ensemble, les motifs de coloration de PDSS2 étaient cohérentes avec les données qRT-PCR. analyse Figure 2 Expression de PDSS2 dans les échantillons cliniques. (A) Le niveau moyen de PDSS2 d'ARNm dans des tissus de GC par rapport aux tissus adjacents normaux correspondants et dans les tissus des patients atteints de GC entre GC et GC indifférenciée différenciée. données (B) représentant IHC comparant l'expression PDSS2 dans la tumeur et les tissus adjacents normaux adjacents (grossie 100 × 400 ×). N, tissus adjacents normaux; implications pronostiques T, le tissu tumoral. des niveaux d'expression d'ARNm PDSS2
L'expression de l'ARNm de PDSS2 dans les tissus GC a diminué chez 76 (32%) des 238 patients (moins de la moitié du taux d'expression détecté dans les tissus adjacents normaux correspondants). Le taux de patients atteints de la survie spécifique de la maladie a diminué les niveaux de PDSS2 de l'ARNm dans GCS était significativement plus faible par rapport à ceux sans (taux survie à 5 ans, 36% et 64%, respectivement, P
< 0,001, Figure 3A). Une diminution des niveaux de PDSS2 de l'ARNm en glucocorticoïdes étaient significativement associés à des glucides antigène (CA) 19-9 > 37 UI /ml et les métastases des ganglions lymphatiques (tableau 1). L'analyse univariée de la survie spécifique de la maladie a montré que le sous-type GC (non diffus proximale ou diffuse), CA 19-9 > 37 UI /ml, la taille de la tumeur (≥50 mm), pT4, tumeur indifférenciée, la participation lymphatique, invasion du vaisseau, la croissance invasive, métastase ganglionnaire, lavage cytologie péritonéale positive et une diminution de l'ARNm l'expression de PDSS2 dans les tissus du GC étaient significatives pronostique facteurs de résultats défavorables. L'analyse multivariée a identifié diminué ARNm l'expression de PDSS2 comme un facteur indépendant de pronostic (hazard ratio 1,95, 95% intervalle de confiance de 1,22 à 3,09, P = 0,005
, tableau 2). L'hypothèse des risques proportionnels dans le modèle de Cox a été évaluée avec des modèles, y compris le temps par covariables interactions et aucune violation significative n'a été trouvée dans le modèle. Figure 3 implications pronostiques d'expression PDSS2 ARNm chez les patients avec GC. survie (A) Maladie spécifique des patients avec une diminution PDSS2 de l'ARNm dans le tissu GC. (B) (C) Maladie spécifique (B) et sans récidive (C) la survie chez 168 patients ayant subi une résection R0.
Tableau 1 Association entre le niveau d'expression de l'ARNm PDSS2 et les paramètres clinicopathologiques des variables de 238 patients
DecreasedPDSS2
ARNm dans les tissus GC (n)
autres (n)
P
valeur
Age
0,408
< 65 années
29
71
≥ 65 années
47
91
Sexe
0,551 59
120
Femme
Homme
17
42
Subtype
0,298
proximal
22
non diffus 32
diffuse
14
33
distal
40 non diffus
96
antigène carcinoembryonnaire (ng /ml)
0,490
≤ 5
59
132
> 5
17
30
Glucides antigène 19-9 (UI /ml)
0,015 *
≤ 37
55
139
> 37
21
23
Tumor taille (mm)
0,104
< 50
29
80
≤ 50
47
82
Tumor profondeur (UICC)
0,419
pT1
14
32
pT2
6
24
pT3
19
33
pT4
37
73
Différenciation
0,217
Differentiated
36
63
indifférencié
40
99
participation lymphatique
0,201
Absent 8
27
Présent
68
135
invasion du navire
0,535
Absent
31
73
Présenter
45
89
type de croissance Infiltrative
0,443
croissance invasive
24
59
52
102
ganglionnaire de métastase de croissance expansive (UICC)
0,022 *
19
70
pN1
pN0
8 37
49
péritonéale cytologie de lavage de 12
24
pN3
19
pN2
0,306
négatif
57
131
positif
19
31
métastases à distance (UICC)
0,228
M0
50
119
M1
26
43
* statistiquement significatif (P
< 0,05). GC, cancer de l'estomac; UICC, Union internationale contre le cancer.
Tableau 2 Facteurs pronostiques de survie spécifique à la maladie des variables de 238 patients
n (%)
univariée
multivariable
rapport Hazard
IC à 95%
P
valeur
rapport Hazard
95% CI

P
valeur
Âge (≥65)
138 (58%)
1,04
0,67 à 1,61
0,843
Sexe (femelle)
59 (25%)
1,29
0,79 à 2,05
0,301
Subtype (de non diffus distal)
136 (57%)
0,43
de 0,28 à 0,67
< 0,001
0,64
0,40 à 1,01
0,056
antigène carcinoembryonnaire (> 5 ng /ml)
47 (20%)
1,48
0,86 à 2,42
0,149
Glucides antigène 19-9 (> 37 UI /ml)
44 (18%)
1,98
1,17 à 3,20
0,012
1,23
0,71 à 2,06
0,445
taille de la tumeur (≥50 mm)
129 (54%)
2,86
1,78 à 4,80
< 0,001
1,40
0,83 à 2,42
0,211
profondeur de la tumeur (pT4, UICC)
110 (46%)
4.17
2,61 à 6,88
< 0,001
1,38
0,78 à 2,50
0,273
différenciation tumorale (indifférencié)
139 (58%)
2.03
1,28 à 3,32
0,002
1,45
0,83 à 2,60
0,197
lymphatique implication
203 (85%)
6,31
2,36 à 25,8
< 0,001
1,45
0,45 à 6,50
0,559
invasion du navire
134 (56%)
2,65
1,66 à 4,37
< 0,001
1,75
1,07 à 2,97
0,026 *
croissance invasive
83 (35%)
3,03
1,97 - 4,70
< 0,001
1,19
0,70 à 2,05
0,520
métastases ganglionnaires
149 (63%)
7,02
3,70 à 15,1
<0,001
1,38
0,56 à 3,81
0,503
péritonéale lavage cytologie (positif)
50 (21%)
4.33
2,76 à 6,74
< 0,001
1,87
1,14 à 3,06
0,014 *
stade UICC (III-IV)
140 (59%)
9,68
4,97 à 21,8
< 0,001
2,63
0,94 à 7,83
0,065
Diminué PDSS2 de l'ARNm dans 76 (32%) de GCS
2.18
1,40 à 3,37
< 0,001
1,91
1,19 à 3,04
0,008 *
* statistiquement significatif en analyse multivariée. GC, cancer de l'estomac; CI, intervalle de confiance; UICC, Union internationale contre le cancer.
Sur les 168 patients ayant subi une résection R0, le taux de survie spécifique de la maladie était significativement plus faible pour ceux qui ont diminué l'ARNm expression de PDSS2 dans GCS (n = 50) par rapport à ceux sans (n = 118) (taux de survie à 5 ans, 50% et 77%, respectivement, P = 0,006
, figure 3B). Les patients ayant diminué l'expression de l'ARNm de PDSS2 dans GCS connu récurrences significativement plus tôt après la chirurgie par rapport à ceux sans (taux de 2 ans sans récidive survie, 64% et 84%, respectivement, P = 0,022
, figure 3C). sites de récurrence initiale de 43 patients en rechute avec une diminution de l'expression de l'ARNm de PDSS2 en glucocorticoïdes étaient péritonéale dans 21 (49%), le foie en 6 (14%), les ganglions lymphatiques dans 13 (30%) et autres (par exemple les poumons et les os) chez 3 patients. D'autre part, ceux des 61 patients récidivantes sans diminution de PDSS2
étaient péritonéale dans 35 (57%), le foie dans 10 (16%), les ganglions lymphatiques dans 8 (13%) et d'autres chez 8 patients. Les patients ayant diminué l'expression de l'ARNm de PDSS2 en glucocorticoïdes étaient susceptibles d'avoir une rechute de noeud, même si elle n'a pas atteint la signification statistique.
Analyse de sous-groupe d'expression PDSS2 selon GC sous-type
moyenne PDSS2
expression de l'ARNm les niveaux sont équivalents dans GC et les tissus adjacents normaux (Figure 4A). De même, la valeur pronostique d'une diminution de l'expression de l'ARNm de PDSS2 dans GCS était comparable entre les trois sous-types de GC (figure 4B). Figure 4 Analyse des sous-groupes des sous-types du GC. les niveaux d'expression (A) PDSS2
d'ARNm entre les trois sous-types de GC tant en GC et les tissus adjacents normaux. Rapport de (B) Comparaison de la survie spécifique de la maladie des patients avec et sans diminution de l'expression de l'ARNm de PDSS2 dans GCS de chaque sous-type de GC.
PDSSs sont des enzymes hétérotétramériques comprenant des sous-unités codées par PDSS1
(10p12. 1) et PDSS2
[10], [12]. activité PDSS exige que les deux sous-unités [10], [14], [15]. L'association de PDSS2
avec GC a été considéré en raison de son emplacement chromosomique (6q21), et à cause de son inactivation ou la perte de certaines tumeurs malignes [16], [26]. Ici, nous montrons que PDSS2 de l'ARNm a été exprimé de manière hétérogène dans des lignées cellulaires GC, et son expression est inhibée à 73% et 32% des lignées cellulaires GC et les tissus tumoraux, respectivement. Nous avons détecté une hyperméthylation du promoteur du PDSS2 cinq (45%) des 11 lignées cellulaires GC avec une diminution significative des niveaux de PDSS2 de l'expression. En outre, la transcription de PDSS2 a été réactivée après que les cellules ont été traitées avec un inhibiteur de méthylation de l'ADN. Ces résultats sont les premiers à notre connaissance pour montrer que le promoteur hypermethylation régule PDSS2 de la transcription. Cependant, PDSS2 de l'expression a été réduite dans certaines cellules du GC sans hyperméthylation. Parce que le chromosome 6q est un site fréquent de LOH dans GC [17], [26], [27], LOH peut réguler PDSS2 de l'expression aussi bien.
Il y a eu un rapport démontrant que PDSS2
a été exprimé à une diminution ou indétectable expression dans un petit nombre d'échantillons de biopsie GC [18]. Dans la présente étude, nous avons analysé 238 échantillons chirurgicaux de tumeurs et le tissu uninvolved correspondant pour mieux comprendre dans la signification clinique de PDSS2 de l'expression dans GC. Conformément aux analyses du mélanome malin et le cancer du poumon [11], [12], la plupart des patients avec GC abritaient une baisse du niveau de PDSS2 de l'ARNm dans les tissus du GC, et la moyenne du niveau d'expression de PDSS2 était significativement diminué en GC par rapport avec les tissus adjacents normaux. IHC a été réalisée pour déterminer si le niveau d'ARNm de la protéine reflète l'expression de PDSS2. Comme les résultats immunohistochimiques ont indiqué que les données d'ARNm étaient cohérentes avec le niveau de la protéine, des analyses ultérieures ont été réalisées en fonction des données d'ARNm, qui sont plus disposés à l'analyse quantitative [7], [23].
Augmenté PDSS2
l'expression de l'ARNm dans GCS était significativement associée à des niveaux de CA19-9 préopératoires élevées et des métastases ganglionnaires et a été identifiée comme un facteur pronostique indépendant. En outre, les patients ayant diminué ARNm l'expression de PDSS2 dans le tissu GC connu beaucoup plus tôt récidive après résection R0. Récemment, Chen et al. étudié l'activité suppresseur de tumeur de PDSS2
dans le cancer du poumon [28]. Ils ont rapporté que la surexpression forcée des PDSS2
a provoqué une mort cellulaire massive par des voies apoptotiques et la formation de colonies significativement inhibé et il y avait une corrélation inverse entre l'expression et la gelsoline expression de PDSS2, qui est connu pour inhiber l'apoptose et améliorer l'invasion des cellules et métastases [29], bien que PDSS2 n'a pas influé sur la sensibilité des cellules cancéreuses aux médicaments chimiothérapeutiques [28]. Ce mécanisme suppresseur de tumeur de PDSS2
pourrait être appliquée à GC ainsi.
Le profil d'expression de l'ARNm de PDSS2 et son impact pronostique ont été similaires entre les trois sous-types de GC (non diffus proximal, diffuse, et non diffus distal) , ce qui indique que l'expression de PDSS2 influe sur la pathogenèse de tous les types de CPG. Shah et al. a rapporté que un tiers des gènes amplifiés, y compris éventuellement PDSS2
, a montré motif d'expression équivalente entre les trois sous-types de GC GC [9]. est l'une des tumeurs avec une fréquence élevée de méthylation aberrante, et il présente fréquemment l'îlot CpG methylator phénotype [30], [31]. L'expression d'un grand nombre de gènes est inhibée par l'îlot CpG hyperméthylation dans des cellules GC, y compris les suppresseurs de codage de la tumeur, les régulateurs du cycle cellulaire, des inducteurs et des exécuteurs de l'apoptose, les protéines qui favorisent le phénotype invasif et les enzymes ADN de réparation des mésappariements [32]. Ces altérations épigénétiques peuvent servir de biomarqueurs qui éclairent un phénotype accru potentiel métastatique et agressif tumeur [33], ainsi que des cibles thérapeutiques [34]. Par conséquent, l'identification d'autres gènes qui sont réglementés par la méthylation dans les cellules du GC sera probablement améliorer la gestion du GC
La fonction suppressive de tumeur du PDSS2
sont pris en charge par les présentes conclusions comme suit:. (1) diminution de l'expression de PDSS2
a été fréquemment détectés dans les tissus du GC, (2) le niveau moyen de PDSS2 de l'expression était significativement plus faible dans les tissus du GC, et (3) diminution de l'expression de PDSS2
était associée à une récidive précoce et à la suite de mauvais pronostic. Les niveaux d'expression de PDSS2 dans les tissus de biopsie obtenus en utilisant des échantillons de surveillance endoscopique ou dans des échantillons chirurgicaux peuvent être utiles pour prédire la récidive précoce et de mauvais pronostic, qui seront probablement les efforts d'aide à concevoir des stratégies thérapeutiques plus efficaces.
Cette étude a été limitée par sa absence d'analyse fonctionnelle suffisante de PDSS2
, qui tempère la conclusion selon laquelle il agit comme un suppresseur de tumeur en GC. D'autres études, y compris l'analyse des voies dans la carcinogenèse gastrique et l'analyse fonctionnelle devraient clarifier les mécanismes moléculaires sous-jacents des activités biologiques de PDSS2
en GC.
Conclusion
En conclusion, nos résultats appuient la conclusion selon laquelle l'expression de la putative suppresseur de tumeur PDSS2 gène
est régulée par le promoteur hyperméthylation dans les cellules de GC et d'indiquer. Nos résultats indiquent en outre que la diminution de l'expression de l'ARNm de PDSS2 peut représenter un nouveau biomarqueur pour la progression et la récurrence de tous les types de GC. Les contributions de
Auteurs
MK, HO, FS, DS, HT, RH et KM effectué des expériences et l'analyse des données. DK, CT, SY, TF, GN, HS, MK, MF et YK collectés cas et les données cliniques. MK et SN conçu et conçu l'étude, et a préparé le manuscrit initial. YK a supervisé le projet. Tous les auteurs ont contribué au manuscrit final.

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