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PLOS ONE: Intestinal marqueurs de cellules souches dans la métaplasie intestinale de l'estomac et de Barrett Esophagus

Résumé

de la métaplasie intestinale gastrique (IM) est une lésion prénéoplasique très répandue; Cependant, les mécanismes moléculaires régulant son développement restent floues. Nous avons précédemment montré que la population de cellules exprimant le marqueur cellules souches intestinales (ISC) augmente LGR5 de remarquablement dans IM. Dans cette étude, nous avons encore étudié les caractéristiques moléculaires de ces LGR5
+ cellules dans IM en examinant le profil d'expression de plusieurs marqueurs ISC. Notamment, nous avons constaté que ISC marqueurs, y compris OLFM4
et EphB2
-Y positivement associée à la expression CDX2 de dans les tissus gastriques non-tumoraux. Cette constatation a été confirmée dans les lésions de l'estomac avec ou sans métaplasie, qui ont démontré que OLFM4 et l'expression de EphB2 progressivement augmenté avec la progression métaplasique. En outre, l'ARN hybridation in situ a révélé que LGR5
+ cellules coexpriment plusieurs marqueurs ISC et sont restés confinés à la base des glandes métaplasiques, rappelant à celle des cryptes intestinales normales, tandis que ceux dans les glandes antrales normales exprimées ne de ces marqueurs. En outre, un grand nombre de cellules exprimant des marqueurs ISC a été répartie de manière diffuse dans les adénomes gastriques, ce qui suggère que ces marqueurs peuvent faciliter la tumorigenèse gastrique. En outre, l'oesophage de Barrett (BE) -qui est histologiquement similaire à intestinal métaplasie-présentait une distribution similaire des marqueurs ISC, indiquant la présence d'une population de cellules souches avec un potentiel de différenciation intestinale. En conclusion, nous avons constaté que LGR5
+ cellules IM gastrique et BE coexprimer marqueurs ISC, et présentent le même profil d'expression que ceux trouvés dans les cryptes intestinales normales. Pris ensemble, ces résultats impliquent une population de cellules souches intestinales comme dans la pathogenèse de la GI, et constituent une base importante pour comprendre le développement et le maintien de cette maladie

Citation:. Jang BG, Lee BL, Kim WH (2015) Intestinal souches marqueurs cellulaires dans la métaplasie intestinale de l'estomac et de l'oesophage de Barrett. PLoS ONE 10 (5): e0127300. doi: 10.1371 /journal.pone.0127300

Academic Editor: Anthony W.I. Lo, Queen Mary Hospital, HONG KONG

Reçu: 8 Janvier 2015; Accepté le 13 Avril 2015; Publié: 21 mai 2015

Droit d'auteur: © 2015 Jang et al. Ceci est un article en accès libre distribué sous les termes de la licence Creative Commons Attribution, qui permet une utilisation sans restriction, la distribution et la reproduction sur tout support, pourvu que l'auteur et la source originelle sont crédités

Disponibilité des données: Toutes les données pertinentes sont dans le ses fichiers de renseignements à l'appui du papier et

financement: Cette recherche a été soutenue par une subvention de la Korea Health Technology R & D projet par l'Institut coréen de l'industrie de la santé pour le développement (KHIDI), financé par le ministère de. Santé & Bien-être, République de Corée (numéro de subvention: HI14C1277). Les bailleurs de fonds ont joué aucun rôle dans la conception de l'étude, la collecte et l'analyse des données, la décision de publier, ou de la préparation du manuscrit

Intérêts concurrents:.. Les auteurs ont déclaré aucun conflit d'intérêts existent

Introduction

prénéoplasiques métaplasie intestinale (GI) est associée à un risque accru de cancer de l'estomac et présente dans environ un quart des individus à travers le monde. [1] IM résulte souvent de la gastrite atrophique chronique après une infection par Helicobacter pylori
, qui peut alors passer à la dysplasie ou un carcinome épithélial gastrique. [2] Une variété d'altérations génétiques et épigénétiques ont été impliqués dans la pathogenèse de l'IM humaine. [3] en outre, à long terme IM induite par l'expression de CDX2 a été démontré que conduire à un cancer gastrique chez des souris transgéniques, indiquant que IM joue lui-même un rôle important dans la genèse du cancer de l'estomac. [4]

Parce que IM est un précurseur essentiel dans la carcinogenèse gastrique, le potentiel d'inverser ces lésions est d'un grand intérêt. [5] des études antérieures ont indiqué que l'éradication de la H
. pylori
est suffisante pour inverser la messagerie instantanée, d'autres encore ont constaté qu'une proportion significative de patients encore présents avec IM, même après l'éradication effective. [5] IM est considéré comme le «point de non-retour dans le histologique cascade de gastrite chronique à adénocarcinome [6]; ainsi, les efforts pour comprendre les mécanismes moléculaires régissant la création et le maintien de la GI sont cruciales pour élaborer des stratégies pour interrompre la carcinogenèse gastrique. Par exemple, CDX2 autorégulation est suggéré d'avoir un impact majeur sur la stabilité des lésions IM. [7] Bien que cryptes IM dans l'estomac humain sont clonale et contiennent des cellules souches multipotentes, [8], il reste mal compris si les cellules souches gastriques indigènes sont la source initiale de métaplasie ou si elles ne servent qu'à maintenir des lésions établies.

la découverte de cellules normales souches de la muqueuse gastrique a coïncidé avec l'identification du gène cible Wnt LGR5
comme marqueur de cellules souches l'épithélium intestinal. [9] Une étude de lignage-tracing révélé plus tard que LGR5
+ cellules sont des cellules souches multipotentes responsables de renouvellement de l'épithélium gastrique chez les souris [10]. Notre groupe précédemment démontré que un petit nombre de LGR5
+ cellules résident également au fond des glandes antrales humaines et d'augmenter de façon spectaculaire dans les lésions IM. [11] Ces résultats nous ont conduit à spéculer que LGR5
peut être un marqueur pour les cellules souches intestinales (CSI) impliqués dans le maintien de la GI.

l'oesophage de Barrett (BE) est une conversion métaplasique à l'épithélium intestinal colonnaire et est associée à un risque accru d'adénocarcinome, similaire à celle observée avec IM gastrique. [12] en particulier, l'homme BE lésions présentent une surexpression de LGR5 de l'expression par rapport à l'épithélium malpighien normal, et suggère la présence d'un LGR5
+ les cellules souches dans BE. [13]

Plusieurs marqueurs moléculaires ISC ont été identifiés en plus de LGR5
, y compris PROM1
[14], BMI1
[15], LRIG1
[16], et ASCL2
, qui a été identifié comme un facteur de transcription pour contrôler intestinal destin des cellules souches. [17] En outre, OLFM4
[17] et EphB2
[18] sont également fortement exprimé dans EVI. Dans cette étude, nous avons cherché à découvrir des marqueurs supplémentaires ISC impliqués dans la genèse et l'entretien des IM gastrique et BE, et d'examiner leur colocalisation avec LGR5
+ cellules par hybridation d'ARN in situ pour révéler davantage le moléculaire caractéristiques de LGR5
+ cellules IM en ce qui concerne la cellule souche phénotype intestinale ressemblant.

Matériel et méthodes

Sujets

formol -fixed et paraffine (FFPE) des échantillons gastriques avec ou sans métaplasie intestinale (GI) ont été recueillies auprès de cinq patients qui ont subi une endoscopie dissection sous-muqueuse à l'hôpital de l'Université nationale de Séoul (SNUH) de 2008 à 2010. les lésions de la GI ont été classés dans l'estomac et (I) sous-types -intestinal mixte (GI) et uniquement intestinales (également connu sous le nom des types incomplets et complets, respectivement). [19] les échantillons des oesophage de Barrett ont été isolés à partir de deux patients atteints d'un adénocarcinome de gastroesophageal jonction, et un petit échantillon de l'intestin normale a été obtenu à partir d'un patient atteint d'un cancer du côlon. tissus gastriques non-tumoraux frais-congelés étaient disponibles à partir de 28 patients atteints de cancer gastrique qui avaient subi une gastrectomie chirurgicale 2001-2005 à SNUH.

Déclaration éthique

Tous les spécimens humains ont été obtenus grâce à une exérèse chirurgicale . Cette étude rétrospective a été réalisée en utilisant des échantillons stockés après le diagnostic histopathologique. Les échantillons ont été anonymisées avant l'étude, ainsi consentement écrit n'a pas été nécessaire. La conception de l'étude a été approuvée par le comité d'examen institutionnel à l'Hôpital de l'Université nationale de Séoul sous la condition d'anonymisation (référence: H-1209-037-424).

ARN hybridation in situ
dans

In situ hybridation pour LGR5
, ASCL2
, OLFM4
et EphB2
a été réalisée avec le kit de dosage RNAscope FFPE (Diagnostics de Advanced Cell, Inc. , Hayward, CA, USA) comme décrit précédemment. [11] tache positive a été définie comme la présence de points de ponctuations brun dans le noyau et /ou le cytoplasme. L'ubiquitine C et bactériennes Les gènes dapB de servi comme témoins positifs et négatifs, respectivement.

extraction de l'ARN et quantitative en temps réel
PCR

L'ARN total a été extrait de paraffine embarqué coupes de tissus avec un kit RNeasy FFPE (Qiagen, Valencia, CA, USA) comme décrit précédemment. [20] reverse-transcrite ADNc a été préparé à partir de 1-2μg de l'ARN total avec des amorces hexamères aléatoires et l'GoScript inverse système de transcription (Promega, Madison , WI, USA). PCR en temps réel (qRT-PCR) réactions quantitatives ont été effectuées en utilisant Premix EX Taq (Takara Bio, Shiga, Japon) selon les recommandations du fabricant, et les données analysées en utilisant le logiciel Sequence Detection System (version 1.4, Applied Biosystems). Les gènes TaqMan essais d'expression suivants ont été utilisés: Hs00173664_m1 ( LGR5
), Hs00362096_m1 ( EphB2
), Hs00270888_s1 ( ASCL2
), Hs00197437_m1 ( OLFM4
), Hs01009250_m1 ( PROM1
), Hs00394267_m1 ( LRIG1
), Hs00995536_m1 ( BMI1
), Hs00178027_m1 ( DCLK1
), Hs010780810_m1 ( CDX2
), Hs00212584_m1 ( CLDN18
) et Hs0275899_g1 ( GAPDH
). GAPDH
servi de contrôle endogène.

Transfection de CDX2

CDX2 ADNc (pCMV6-CDX2) a été acheté chez OriGene (Rockville, MD, USA). les cellules cancéreuses gastriques ont été ensemencées à 1 x 10 6 cellules /puits dans une plaque à 6 puits et transfectées avec 2,5 pg d'ADNc ou d'un vecteur de contrôle vide en utilisant Lipofectamine 2000 réactif de transfection (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) selon le fabricant instructions. Les cellules ont été soumises à une analyse qRT-PCR environ 24 h après la transfection.

L'analyse statistique

Les analyses statistiques ont été réalisées dans Prism 5 (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA, USA). Des corrélations entre l'expression de marqueurs de cellules souches intestinales et CDX2
a été évaluée par une analyse de régression linéaire. Les différences moyennes entre les groupes de spécimens gastriques FFPE ont été évalués par ANOVA à une voie. comparaisons entre groupes après transfection de CDX2
dans des lignées cellulaires de cancer gastrique ont été effectuées à l'aide des étudiants t
-Tests. Les résultats ont été considérés comme significatifs lorsque p
< 0,05.

Résultats

1. marqueurs ISC sont en corrélation avec les niveaux de Cdx2 dans la muqueuse gastrique

Nous avons précédemment rapporté sur l'augmentation relative de LGR5
+ cellules dans les lésions IM de l'estomac humain. [11] Cela nous a incité à présument que ces LGR5
+ cellules peuvent agir en tant que cellules souches auto-renouvellement pour aider à l'entretien et à la propagation de l'épithélium métaplasique dans la muqueuse gastrique. Ainsi, nous avons cherché à identifier des marqueurs ISC supplémentaires corrélées avec expression CDX2 de la GI. Pour cela, nous avons mesuré les niveaux d'expression de CDX2
et huit ISC markers- LGR5
, ASCL2
, OLFM4
, EphB2
, PROM1
, DCLK1
, LRIG1
et BMI1
-en tissu gastrique normale. Les tissus examinés ont montré une large gamme de niveaux Cdx2
, représentant les divers degrés de IM, puisque expression CDX2 de corrélation positive avec la progression IM (figure 1A). Trois marqueurs ISC ont été trouvés en corrélation avec expression CDX2 de: OLFM4
, EphB2
et BMI1
. En particulier, OLFM4
( p
< 0,0001, r 2 = 0,56) (figure 1B) et EphB2
( p
< 0,0001, r 2 = 0,52) (figure 1C) affiche une forte corrélation positive avec CDX2
, alors que BMI1
a été inversement corrélée ( p =
0,0002, r 2 = 0,42) (figure 1D). Aucune association significative avec expression CDX2 de a été identifié avec les cinq autres marqueurs ISC (S1 Fig).

2. ISC expression du marqueur est en corrélation avec la progression IM

Pour confirmer l'association positive de OLFM4
et EphB2
avec IM, nous avons sélectionné quatre types de tissus gastriques histologiquement distincts; muqueuse antrale normale sans IM (n = 4), la gastrite chronique active sans IM (n = 3), gastrique et intestinale de type mixte (type GI) IM (n = 6), et le type uniquement intestinal (type I) IM (n = 5) (figure 2A). Claudin-18 est la protéine la plus fortement exprimé des jonctions serrées dans l'estomac. Comme prévu, nos analyses ont révélé que la claudine-18 expression diminuée avec les degrés croissants de IM ( p
< 0,0001) (figure 2B), tandis que expression CDX2 de augmenté ( p
< 0,0001) (figure 2C). Nous avons également constaté que OLFM4
et EphB2
niveaux ont augmenté régulièrement avec chaque lésion ultérieure, confirmant que ces marqueurs sont étroitement liés à la progression IM ( p
= 0,008 et 0,001, respectivement; la figure 2D et 2E). En revanche, BMI1
et expression LRIG1 de a montré une tendance à diminuer avec la progression IM. ( p
= 0,002 et 0,0006, respectivement; la figure 2F et 2G)

3. LGR5
+ cellules dans la métaplasie intestinale colocalisent avec d'autres marqueurs
ISC

Pour déterminer si une relation directe existe entre LGR5
et ISC marqueurs dans IM, nous avons examiné si leur co-expression par hybridation d'ARN in situ. L'expression de LGR5
, ASCL2
, EphB2
et OLFM4
ont été examinés d'abord dans une section normale de l'intestin grêle humain pour valider cette technique, et ont été trouvés pour localiser spécifiquement aux cellules au sein de la niche de cellules souches de cryptes intestinales comme prévu (S2 Fig). Depuis LGR5
+ cellules cryptes intestinales normales expriment également des marqueurs ISC, nous théorisé que LGR5
+ cellules IM pourrait également présenter un modèle d'expression similaire. Ainsi, nous avons répété le mode opératoire sur des sections consécutives d'échantillons muqueux endoscopique de dissection (n = 5), contenant chacun des foyers multiples ou GI- type I IM parmi un tissu non tumoral. Un petit nombre de LGR5
+ cellules à la base des glandes antrales normales étaient dépourvues d'expression marqueur ISC (figure 3A), tandis que ceux de type I IM a montré exprimé tous les trois marqueurs (figure 3B) . En outre, les lésions gastro-IM type affiché le même profil d'expression globale à l'exception de ce que l'expression du marqueur de CSI se trouvait au-dessus des autres glandes gastriques, plutôt que de limiter les zones de base (S3) Fig. Ce schéma d'expression a été systématiquement observée dans tous les échantillons. Ces résultats indiquent que LGR5
+ cellules IM diffèrent de celles antrum normale dans l'expression des marqueurs ISC qui sont généralement limités à des cellules dans les cryptes intestinales. Fait intéressant, IM dérivé des glandes fundiques, où LGR5
+ cellules sont normalement pas présents, ont produit les mêmes résultats (S4 Fig). Ainsi, il semble probable que la population de LGR5
+ cellules IM ne résultent pas de la prolifération des préexistantes LGR5
+ cellules, mais est plutôt une émergence de LGR5
+ cellules ayant un potentiel de différenciation acquise, ce qui suggère que la population de cellules souches intestinales comme est établi dans IM. En outre, les adénomes gastriques (n = 5) ont également exprimé des niveaux élevés de marqueurs ISC à travers les lésions, plutôt que limitée aux cryptes glandulaires (figure 3C). Comme le montre la figure 3, cette accumulation de cellules de marqueur exprimant ISC sur métaplasie à la séquence de la dysplasie est implicative de la participation des cellules de type souches intestinales dans la tumorigenèse gastrique et des études supplémentaires pour étudier le lien entre les marqueurs de cellules souches intestinales et le développement de la tumeur gastrique sont certainement justifié.

4. marqueurs ISC sont exprimés dans les lésions de l'oesophage de Barrett

Nous avons ensuite cherché à déterminer si les marqueurs de l'ISC ont également été exprimées dans l'oesophage de Barrett (BE). Pour cela, deux spécimens de adénocarcinomes dans le fond de BE ont été évalués pour l'expression de CDX2
, OLFM4
, EphB2
et PROM1
par analyse qRT-PCR (figure 4A). De manière significative, à la fois BE et adénocarcinomes ont exprimé des niveaux plus élevés de tous les quatre marqueurs ISC par rapport à celui de l'épithélium pavimenteux normal (figure 4B, 4C, 4D et 4E). Alors que LGR5
et ASCL2
montré aucun changement significatif de l'analyse par RT-PCR, probablement en raison d'un faible nombre de copies de transcriptions, hybridation d'ARN in situ ont montré une population de cellules claires avec LGR5
, ASCL2
et OLFM4 de l'expression à la jonction des glandes gastriques et métaplasiques, qui rappelle de type GI IM (figure 4F, 4G, 4H, 4E et 4J).

Discussion

la région isthme /col de l'unité gastrique a été précédemment pensé pour englober la niche de cellules souches dans lequel IM se produit, et il a été suggéré que la progression métaplasique à partir d'une seule unité clonale gastriques grâce à l'expansion clonale et la fission crypte. [8] parce que LGR5
+ cellules sont identifiées comme des cellules souches intestinales comme multipotentes chez la souris [10] et existent dans l'antre gastrique humaine [11], il est plausible de penser que IM pourrait se développer à partir de cette population cellulaire. Cependant, il reste une possibilité qu'une autre population de cellules souches pourrait sous-tendre ce processus. Par exemple, SOX2
+ cellules ont également été identifiés comme des cellules distinctes gastriques souches, et la population de cellules d'étiquettes exclusifs à ceux avec l'expression
LGR5. [21] La transdifférenciation peut aussi donner lieu aux cellules métaplasiques. Spasmolyitc polypeptide exprimant métaplasie-dans laquelle les glandes de type pyloriques apparaissent dans oxyntique muqueuse proviennent de cellules principales matures, [22] plutôt que LGR5
cellules exprimant. [23] En effet, transgénique CDX1
ou les résultats de l'expression de Cdx2 en pariétale dérivée des cellules de développement de IM chez des souris transgéniques. [24] par conséquent, il reste difficile de savoir si IM est une conséquence de l'intestin reprogrammation de cellules souches ou la transdifférenciation des cellules avec l'acquisition ISC-like propriétés. [12, 25]

Divers efforts ont cherché à classer les IM de types de lésions de l'estomac. Matuskura et al. a suggéré un système de classification basé sur la présence de petites enzymes digestives intestinales; défini comme type complet et incomplet IM, [26] alors Jass et Filipe introduit trois grades de IM sur la base de la morphologie et la coloration histochimique mucine. [27] Plus récemment, une nouvelle classification a été proposée par Tatematu et al., Dans laquelle IM peut être divisé en gastrique et intestinale mixte (GI) et uniquement intestinaux (I) types. [19] Dans de type GI IM , marqueurs phénotypiques gastriques et intestinaux apparaissent aux niveaux glandulaires et cellulaires, ainsi il a été suggéré que la GI pourrait être causé par la intestinalization progressive des cellules souches de la GI- à I-Type. [28] ici, nous avons observé augmentation progressive des marqueurs ISC OLFM4
et EphB2
avec plus intestinalization de la muqueuse gastrique. Avec les croissants niveaux CDX2 de
qui induisent la différenciation intestinale et phénotype, ces profils d'expression suggèrent une conversion de la population totale de cellules souches vers un phénotype de cellules souches plus intestinale ressemblant. De plus, la corrélation inverse inattendue de BMI1
et LRIG1
avec IM a besoin d'autres études pour confirmer ce résultat et de clarifier ses implications cliniques.

H
. l'éradication pylori
a le potentiel de prévenir les cancers gastriques, [29] et pourrait atténuer la progression des lésions précancéreuses gastriques, tels que la messagerie instantanée. [30, 31] Cependant, une fois établi, il semble que H
. pylori
l'éradication ne peut pas empêcher complètement le cancer gastrique. [6] En fait, environ 80% des sujets avec IM n'a montré aucun changement ou la progression de IM après le traitement avec des antibiotiques. [31] En outre, une méta-analyse a conclu que H
. l'éradication pylori
n'a aucun effet sur IM gastrique. [32] Cette irréversibilité de IM pourrait être expliqué en partie par le maintien de la expression CDX2 de travers une boucle d'autorégulation qui est indépendante de déclenchement initial, le maintien le phénotype intestinal. [33] Nous avons en outre révélé que LGR5
+ cellules à la base des glandes métaplasiques exprimer constamment d'autres marqueurs ISC, indiquant une cellule souche phénotype intestinale ressemblant. Nous croyons que cette population de cellules souches stable peut fournir une explication supplémentaire du caractère durable de la GI. En outre, des stratégies thérapeutiques suffisantes pour cibler spécifiquement le LGR5 population
+ cellulaire combiné avec H
. l'éradication pylori
pourrait potentiellement nuire à la stabilité de la GI, ainsi accélérer le rétablissement de la muqueuse gastrique normale.

L'oesophage de Barrett (BE) est une lésion précancéreuse qui partage plusieurs caractéristiques morphologiques et moléculaires avec IM gastrique, la plupart du temps car il est une conversion métaplasie intestinale de l'épithélium cylindrique résultant de l'inflammation chronique. Nous croyons que la présente étude caractérise une autre similitude entre ces deux lésions en présence de LGR5
+ cellules avec ISC marqueur expression. Cette constatation est conforme à un précédent rapport montrant que LGR5 de l'expression était significativement élevée en BE, et que la population est à l'origine cellulaire de-probable de cette métaplasie. [13] Plus récemment, LGR5
+ cellules ont été identifiées dans le milieu des glandes de Barrett par hybridation in situ et sont suggérées pour agir en tant que cellules souches, car elles présentent à la fois une différenciation gastrique et intestinale. [34] Nous avons également trouvé LGR5
+ cellules au niveau des zones entre les glandes gastriques et métaplasiques dans BE, qui correspondent à la moyenne des glandes de Barrett. En outre, la présence de marqueurs ISC dans le LGR5
+ population cellulaire appuie davantage leur potentiel de différenciation intestinale. Ainsi, sur la base de ces résultats, il semble raisonnable de penser que LGR5
+ cellules dans BE fonction probable que les cellules souches qui soutiennent le phénotype intestinal de BE, similaire à celle observée dans IM.

CDX2 est un facteur de transcription de maître pour l'expression de marqueurs de différenciation intestinale, et l'on pense à la base du développement de BE. Alors que la muqueuse gastrique normale ne se prononce pas CDX2
, forte expression est détectée dans IM. [35, 36] En outre, les souris transgéniques ont démontré que expression CDX2 de seule est suffisante pour induire IM [37 , 38], ce qui suggère que CDX2
peut également faciliter le développement de la population de cellules souches avec un phénotype intestinal. Ainsi, nous avons examiné si CDX2
est directement impliqué dans l'expression des marqueurs ISC: LGR5
, ASCL2
, OLFM4
et EphB2
(S5 Fig). Cependant, des expériences de transfection ont révélé que seulement EphB2
a été légèrement affectée par l'expression
CDX2. Certes, ces données doivent être interprétées avec prudence, car on a obtenu dans des lignées cellulaires GC avec des propriétés biologiques différentes de celle des cellules gastriques non-tumoraux souches épithéliales ou intestinales. Néanmoins, il semble probable que des facteurs de signalisation supplémentaires avec CDX2
sont essentiels pour induire ISC marqueur expression.

En résumé, nous avons déterminé que LGR5
+ cellules dans IM gastrique et BE marqueurs ISC coexprimer, ce qui est indicatif d'une tige population de cellules intestinales comme qui remplace les cellules souches gastriques préexistantes. Cette conclusion semble fournir un indice important pour comprendre le mécanisme sous-jacent de la persistance de la GI après H
. pylori
éradication. En outre, nos résultats suggèrent LGR5
+ cellules sont une cible prometteuse pour inverser IM, et potentiellement empêcher leur progression dans les cancers gastriques.

Informations complémentaires
S1 Fig. Corrélation des cellules souches intestinales (ISC) des marqueurs avec niveaux dans les tissus gastriques non-tumoraux.
Aucune corrélation CDX2
se trouve entre marqueurs de l'expression CDX2 de et certains ISC tels que LGR5
(r 2 = 0,01, p
= 0,59), ASCL2
(r 2 = 0,01, p
= 0,59) , PROM1
(r 2 = 0,11, p
= 0,08), LRIG1
(r 2 = 0,06, p
= 0,21) et DCLK1
(r 2 = 0,09, p
= 0,11)
doi:. 10.1371 /journal.pone.0127300.s001
( PPTX)
S2 Fig. Visualisation des marqueurs de cellules souches intestinales par hybridation d'ARN in situ (ISH) dans.
ARN ISH effectuée sur un échantillon fixés au formol et inclus en paraffine de l'intestin grêle. (A, B) Un groupe de LGR5
+ cellules souches sont identifiées au bas de tous les cryptes, entremêlées avec des cellules de Paneth. D'autres marqueurs de cellules souches intestinales telles que ASCL2
(C, D), EphB2
(E, F), et OLFM4
(G, H) sont également présents à se limiter aux bases de la crypte. Grossissement: A, C, E, G × 100; B, D, F, H × 400
doi:. 10.1371 /journal.pone.0127300.s002
(PPTX)
S3 Fig. Restants glandes gastriques de Expressions de marqueurs de cellules souches intestinales dans le type de GI IM. On trouve fréquemment dans les zones basales de type GI IM (A et B). ARN ISH montre que LGR5
(C) et EphB2
(D) expressions sont localisées au-dessus des glandes gastriques. Fait intéressant, OLFM4
(E) expression est observée dans les glandes gastriques et même si son intensité est beaucoup plus faible que dans les glandes métaplasiques. Lorsque ces glandes gastriques disparaissent IM développe (A et F), la distribution de tous les LGR5
(G), EphB2
(H) et OLFM4
(I) est strictement limitée aux zones basales. Les flèches indiquent les glandes gastriques restantes. Grossissement: A × 40; B, C, D, E, F, G, H, I × 200
doi:. 10.1371 /journal.pone.0127300.s003
(PPTX)
S4 Fig. marqueurs de cellules souches intestinales dans la métaplasie intestinale (GI) du corpus gastrique.
(A et B) Un petit foyer de la GI au milieu des glandes fundiques, indiquées par des flèches, montre les mêmes profils d'expression de LGR5
(C), ASCL2
(D), et OLFM4
(E) que l'IM de antrum. Grossissements: A × 100; B, C, D, E × 200
doi:. 10.1371 /journal.pone.0127300.s004
(PPTX)
S5 Fig. Effet de CDX2
sur l'expression des cellules souches intestinales (ISC) des marqueurs dans le cancer gastrique (GC) des lignées cellulaires de. Transfection de CDX2
en quatre lignées cellulaires GC, MKN74 (A ), MKN28 (B), SNU484 (C) et SNU668 (D) augmente de manière significative la quantité d'ARNm de CDX2
(**, p
< 0,01; ***, p
< 0,005). Le expression EphB2 de est que marginalement améliorée par l'expression de CDX2
dans trois des quatre lignées de cellules GC (***, p
< 0,005). Aucune différence se trouve dans les niveaux de LGR5
, ASCL2
et OLFM4
sur CDX2
surexpression (ns, non significatif).
doi: 10.1371 /journal.pone.0127300.s005
(PPTX)

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