Veranderingen van E-cadherine en β-catenine bij maagkanker

Veranderingen van E-cadherine en β-catenine bij maagkanker
De abstracte Achtergrond
E-cadherine-catenine complex speelt een cruciale rol in epitheliale cel-celadhesie en het onderhoud van weefselarchitectuur. Perturbatie in de expressie of functie van dit complex resulteert in het verlies van intercellulaire adhesie, eventueel daaruit celtransformatie en tumorprogressie.
Methods
We bestudeerden de veranderingen van E-cadherine en β-catenine in een set van 50 primaire maagtumoren door verlies van heterozygositeit (LOH) analyse genmutatie screening, detectie van afwijkende transcripten en immunohistochemie (IHC).
Resultaten
hoogfrequent (75%) van LOH werd gedetecteerd op 16q22.1 met E -cadherin locus. Drie gevallen (6%) vertoonden de identieke missense mutatie, A592T. Deze mutatie waarschijnlijk geen sterke mate bijdragen tot carcinogenese van maagkanker, omdat een lage frequentie (1,6%) van deze mutatie werd aangetroffen in 187 normale individuen. Detecteerden we een lage frequentie (0,36%, 0%) van deze mutatie in 280 borsttumoren en 444 andere tumoren, waaronder colon en het rectum, long, endometrium, ovarium, testis, nier, schildklier carcinomen en sarcomen, respectievelijk. We analyseerden ook de afwijkende E-cadherine mRNA in de maag tumoren en vonden dat 7 tumoren (18%) hadden een afwijkende mRNAs in aanvulling op de normale mRNA. Deze afwijkende mRNAs kan abnormale-E cadherine moleculen, wat resulteert in zwakke adhesie van cellen en invasieve gedrag van carcinoomcellen. Verminderde expressie van E-cadherine en β-catenine werd geïdentificeerd op de frequentie van 42% en 28%, respectievelijk. Speciaal, 11 tumoren (22%) vertoonde positieve cytoplasmatische kleuring voor β-catenine IHC. Een associatie werd gevonden tussen verminderde expressie van E-cadherine en β-catenine. Verder werd een verband aangetoond tussen verlaagde expressie van E-cadherine en diffuse histotype.
Conclusie
Onze resultaten ondersteunen de hypothese dat veranderingen van E-cadherine en β-catenine een rol bij de initiatie en progressie van maagkanker spelen . achtergrond
E-cadherine (120 kDa; chromosoom 16q) een klassieke cadherine en vormt de belangrijkste functionele component van hechting verbindingen tussen epitheelcellen [1]. Het is gebonden via een reeks onderlaag eiwitten, de catenines (α, β en γ) aan het actine cytoskelet [1]. De combinatie van de transmembraan cadherins en actine filamenten van het cytoskelet noodzakelijk sterke adhesie van cellen te vormen. Een intact E-cadherine - catenine complex vereist is voor handhaving van normale intercellulaire adhesie. In het licht hiervan hebben verschillende groepen voorgesteld in carcinomen, E-cadherine functioneert als een invasie suppressor molecuul zodat het verlies toestaat of de invasie van aangrenzende normale weefsels bevordert. Immunohistochemische studies in humane kankers, zoals maagkanker, zijn herhaaldelijk aangetoond dat een deel van invasieve carcinomen en carcinomen in situ
tonen afwijkende niveaus van E-cadherine en /of catenine expressie in vergelijking met hun verwante normale weefsel [2-4] . In het algemeen, E-cadherine en catenine kleuring is sterk in goed gedifferentieerde kankers die hun mobiele hechting te behouden en zijn minder invasief, maar wordt verminderd in slecht gedifferentieerde tumoren die hun cel-cel adhesie hebben verloren en vertonen een sterke invasief gedrag [2, 3].
E-cadherine is betrokken bij contact inhibitie van celgroei door het induceren celcyclus [5]. Het heeft het vermogen om celproliferatie te remmen door de opwaartse regulatie van p27 betrokken is bij de regulatie van de celcyclus [5], alhoewel het mechanisme waardoor E-cadherine reguleert p27 is nog onduidelijk. Derhalve E-cadherine, algemeen beschreven als een invasie suppressor [6], kan fungeren als een belangrijke groei /proliferatie suppressor.
Een belangrijke functie van β-catenine in cell signaling is opgehelderd [7]. Aangezien een mitotisch signaal van buiten de cel, β-catenine afgezonderd in een complex met het adenomateuze polyposis coli (APC) genproduct, een serine threonine glycogeen synthetase kinase (GSK-3β) en een adapter eiwit axine (of homoloog Conductin), waardoor fosforylatie en afbraak van vrije β-catenine door de ubiquitine-proteasoom-systeem [8]. Wanneer een mitotisch signaal door de Wnt route wordt geleverd door de combinatie van de Wg /Wnt familie van uitgescheiden glycoproteïnen en hun membraanreceptor frizzled, leidt tot activatie van de slordig (Dsh) eiwit dat wordt aangetrokken om de celmembraan. De geactiveerde Dsh downregulates het eiwitcomplex, zodat het niet langer β-catenine, die dan niet wordt afgebroken kunnen fosforyleren. De afgifte van β-catenine van de fosforylatie en degradatie complex bevordert β-catenine stabilisatie en signalering. Dit resulteert in een toename van vrije cystolic β-catenine die naar de kern en bindt direct de transcriptiefactoren Lef en Tcf, leidt tot de activering van genexpressie. Daarom β-catenine vervult verschillende functies in de E-cadherine-gemedieerde cel-cel adhesie en Wnt signalering [8].
Verlies van E-cadherine locus op de lange arm van chromosoom 16 (16q22) komt in de maag (24 %), hepatocellulaire (50%), lobulair borst (50-100%) en slokdarm (66%) carcinomen [4, 9-12]. Er zijn verschillende rapporten over E-cadherine-gen mutaties in humane kankers [13] is. In slecht gedifferentieerde tumoren, zoals borstkanker en lobulaire diffuse type maagkanker, speel-E cadherine mutaties een belangrijke rol bij de ontwikkeling van tumoren [14, 15]. Verschillende studies hebben kiemlijn mutaties in het E-cadherine-gen gerapporteerd in families met een erfelijke diffuse type maagkanker [16, 17]. Slechts een minderheid van maagkanker kan worden verklaard door E-cadherine mutaties. Frequent somatische mutaties van β-catenine gen gevonden in kleine colorectale adenomen en intestinale Type maagkanker [18, 19]. De meeste mutaties betrokken verlies van serinen of threoninen de GSK-3β fosforylering regio. Genetische veranderingen in β-catenine intrekking cel- hechting waargenomen in twee maagkanker cellijnen, HSC39 en 40A; zowel uit dezelfde zegelring cel carcinoom van de maag en vertonen een diffuus groeipatroon [20, 21]. Deze mutatie resulteert in een afgeknot β-catenine dat de regio mist tot interactie met β-catenine. Transfectie van deze cellijnen met wildtype β-catenine herstelt cellulaire hechting [21].
Hier voerden wij E-cadherine en beta-catenine gen mutatie en expressie analyse in een reeks van 50 primaire maagtumoren om te begrijpen beter de betrokkenheid van de veranderingen van E-cadherine en β-catenine in de carcinogenese van maagkanker.
Materialen en werkwijzen
monsters
inbegrepen in de studie werden 50 tumoren en overeenkomstige normale monsters, waarvan twee tumors (17 en 23) werden uit dezelfde familie, de rest sporadische (tabel 1). Deze gevallen werden gediagnosticeerd door de afdeling Pathologie, Universitair Ziekenhuis van IJsland. Weefsel werd vers verkregen op de dag van de operatie of paraffine ingebedde materiaal. Informatie met betrekking tot de tumor stadium, histotype en graad werd eveneens overgenomen uit dezelfde afdeling. DNA voor PCR werd geïsoleerd door proteinase K behandeling [22]. RNA voor RT-PCR werd geëxtraheerd met behulp Tri Reagent (Molecular Research Center, INC. USA). Voor de A592T mutatie, we gescreend 187 normale personen, 280 en 444 borst- kankerpatiënten met andere colon en rectum, long, endometrium, ovarium, testis, nier, schildklier carcinoma's en sarcoma's. Alle individuele identificatiemiddelen werden uit de controlemonsters vóór de analyse en de onderzoekers waren blind dus de identificatie van de monsters die niet meer kan worden herleid tot bepaalde personen. Toestemming werd geacht voor de patiënt monsters. Voor gevallen 294 en 728 met A592T mutatie, analyseerden we hun stambomen en vond dat er geen andere gevallen van kanker in de stamboom van de zaak 294 waren, maar er waren andere 5 gevallen van kanker in de stamboom van de zaak 728, waaronder 2 prostaatkankers, 1 huid kanker, longkanker en 1 1 kanker onduidelijke origin.Table 1 Samenvatting van veranderingen van E-cadherine en β-catenine in een reeks van 50 maagtumoren.
Tumour

Stage

Type

Grade

LOH

E-cad genmutaties
Afwijkende mRNA
E-cad
β-cat
Sample



16q22.1
en polymorfismen
van E-cad
IHC
IHC

1
T3N3
diff
+
IVS1+6T→C
-
+/-
++/-∇
3
T3N1
squ
G1
+
IVS4+10C→G
ND
-
+/-
17
T3N1
diff
ND
GTG (Val) → GTC (Val) bij cd832
ND
-
- 23
voldaan
+
GCC (Ala) → ACC (Thr ) bij cd592 *
ND
+++ /-
+++ /-
43
T3N2
diff
+
- -
-
+++ /-
50
T3N1
diff
-
IVS1+6T→C
-
++/-
++/-
165
T3N1
int
G3
ND
-
-
+++/-
+++/-∇
174
T3N2
int
G3
-
-
ND
+++/-
++/-
193
T3N2
int
G3
+
-
ND
-/+++
-/++
200
T3N1
int
G2
-
IVS4+10C→G
-
++/-
+++/-
231
T3N0
mi
G3
+
-
-
++/-
++/-∇
283
T3N0
int
G3
ND
-
ND
++/-
++/-
287
T3N1
int
G2
+
-
-
-/+
++/-
294
T3N1M1
mi
G4
+
GCC(Ala)→ACC(Thr) op cd592♦
-
++/-
++/-∇
304
T3N3
int
G2
-
-
-
-/+++
+/-
308
T3N1
int
G2
+
-
-
+++/-
++/-
314
T3N1
diff
-
CAC (His) → CAT (His) bij cd632
- +++ /-
++ /- ∇
GGC (Gly) → GGT (Gly) bij cd865
360
T2N1
int
G3
+
IVS4 + 10C → G
+ ♣
++ /-
+/-
369
ontmoet
+
-
+♣
+++/-
++/-
433
T3N1
mi
G3
-
IVS4+10C→G
-
-/++
-/+
435
T2N0
int
G3
+
-
-
-/+++
-/++
443
T2N0
int
G4
-
-
-
+++/-
+++/-
451
T4N0
int
G2
ND
-
ND
+++/-
++/-
474
T3N1
int
G3
ND
-
ND
-
+/-
493
T3N1
int
G3
+
-
-
-/+++
+/-
503
T3N1
int
G3
ND
-
-
-
+++/-
556
T3N2
int
G2
-
IVS1+6T→C
ND
++/-
+/-
5 'UTR-71C → G
568
T3N2
mi
G3
+
-
+♣
++/-
++/-
612
T3N0
int
G2
ND
IVS4+10C→G
-
+++/-
+/-
AAC (Asn) → AAT (Asn) bij cd751
636
T3N1
diff
+
IVS4+10C→G
ND
+++/-
+++/-∇
650
T2N0M1
int
G2
+
-
ND
-/+
++/-
675
T2N0
mi
G3
+
IVS4+10C→G
-
+/-
++/-∇
676
T3N1
int
G2
+
-
-
+++/-
-∇
680
T3N1
mi
G3
+
IVS1+6T→C
-
++/-
++/-
AAC (Asn) → AAT (Asn) bij cd751
694
T3N1
int
G1
+
-
-
+++/-
+++/-
717
T3N1
int
G3
+
-
+♣
-/+++
+++/-
726
T2N1
int
G2
+
IVS4+10C→G
-
-/+++
++/-
728
T3N0
int
G2
+
GCC(Ala)→ACC(Thr) op cd592♦
-
-/+++
++/-
729
T3N1
int
G1
-
IVS1+6T→C
-
-/+++
+++/-
732
T2N1
int
G3
+
-
-
-/+++
+++/-
735
T4N3
diff
ND
AAC (Asn) → AAT (Asn) bij cd751
- +++ /-
+++ /- ∇
738
T3N2
diff
+
- - -
-∇
750
voldaan
ND
AAC (Asn) → AAT (Asn) op cd751
+♣
++/-
+++/-
755
T2N1
int
G2
ND
-
+♥
+++/-
++/-
808
T3N0
int
G1
+
ACG(Thr)→ACA(Thr) op cd251
+♠
+++/-
++/-
811
T2N1
int
G2
+
-
-
+++/-
-/+
832
T3N2
int
G2
+
-
-
+++/-
+++/-∇
855
T3N2
int
G2
+
-
-
+++/-
+++/-
875
T3N2
int
G2
-
IVS4+10C→G
ND
+++/-
+++/-
904
T2N0
int
G3
+
IVS4+10C→G
-
-/+++
++/-
Useful
30
3
7
21
14
Totaal
40
50
38
50
50
%
75
6
18
42
28
T, tumor (grootte en invasief); N, knooppunt (mate van metastase); M, metastase; G1, goed gedifferentieerd; G2, matig gedifferentieerd; G3, slecht gedifferentieerde; G4, niet gedifferentieerd; diff, diffuse (mate van differentiatie = G4); mi, gemengde; int, darm; ontmoette, uitgezaaide tumor waarschijnlijk van maag tumor; squ, plaveiselepitheel; LOH, verlies van heterozygositeit; E-cad, E-cadherine; β-cat, β-catenine; IHC, immunohistochemie; cd, codon; UTR, niet getranslateerde gebied; +, Positieve LOH, afwijkende E-cad mRNA, E-cad en β-cat IHC, -, negatief LOH, E-cadherine genmutatie, afwijkende E-cad mRNA, E-cad en β-cat IHC; ND, niet of bepaald niet gedaan; +/-, ++ /- En +++ /-, meer dan 50% van de cellen positief; - /+ - /++ En - /+++, meer dan 50% cellen negatief; *, Somatische mutatie; ♦, kiembaanmutatie; ♣, insertie van intron 7 tussen exons 7 en 8, stop codon 374; ♥, schrapping van de laatste 72 basen van exon 7, exon 8 en de eerste 124 bases van exon 9, stopcodon 322; ♠, schrapping van exons 8 en 9; schrapping van de laatste 84 basen van exon 8, stopcodon 358; ∇, deze monsters bleek ook cytoplasmatische kleuring voor β-catenine IHC
LOH bepaling
microsatelliet markers gebruikt voor LOH analyse van chromosoom 16q waren:. D16S503, D16S496, D16S421, D16S545 en D16S512 voor de regio 16q22.1 met E -cadherin locus (Genome Database). De polymerase kettingreactie (PCR) werden gescheiden op een acrylamide gel sequencing en overgebracht naar een positief geladen nylon membraan Hybond-N + (Amersham, Aylesbury, UK) en gebakken gedurende ten minste 2 uur bij 80 ° C. De niet-radioactieve detectie methode voor de PCR-producten te visualiseren is eerder [23] beschreven. Autoradiogrammen werden visueel geïnspecteerd door minstens twee beoordelaars, de intensiteit voor allelen van normale en tumor DNA. De afwezigheid of een significante afname van één allel in de tumor in vergelijking met de normale referentiemonster beschouwd als LOH.
Mutatieanalyse Leer Alle 16 exons van E-cadherine-gen en exon 3 van β-catenine gen werden gescreend inactivering mutaties met een analyse PCR-SSCP (enkelstrengsconformatiepolymorfisme) op genomisch DNA-matrijzen. De primers voor E-cadherine en β-catenine gebruikt in de SSCP analyse beschreven in onze eerdere artikel [4] en Park et al. [1999], respectievelijk, en besteld van Pharmacia Biotech of TAG Copenhagen A /S. Genomisch DNA werd gebruikt bij 30 ng per 25 ul reactiemengsel dat 5 pmol van de voorwaartse en omgekeerde primers, 2,5 nmol van elk dNTP, 0,5 eenheden polymerase Dynazyme. De monsters werden geamplificeerd in 35 cycli bestaande uit 30 s denaturatie bij 94 ° C, 30 s annealen bij 55-70 ° C, en tenslotte 60 en verlenging bij 72 ° C. Een hete gestart door toevoegen van het enzym in de eerste cyclus bij ongeveer 70 ° C, na een voorincubatie van 5 min bij 94 ° C. Een 4 ui aliquot van de PCR producten werd gemengd met 7 pl formamide kleurstof (95% formamide, 0,05% broomfenolblauw en 0,05% xyleencyanol), gedenatureerd bij 94 ° C gedurende 10 min en snapcooled op ijs. Monsters van 2 ui werden simultaan geanalyseerd op twee niet-denaturerende polyacrylamidegels (5% acrylamide met 2% verknoping), of met 5% glycerol of glycerol ontbreekt. Elektroforese werd uitgevoerd in 1 x TBE verticale gels bij 6w nacht of gedurende 6 uur bij kamertemperatuur geroerd. De PCR-producten werden gevisualiseerd als microsatelliet markers. Monsters met afwijkende mobiliteit banden werden opnieuw geamplificeerd voor 35 cycli zoals hierboven beschreven. Een 5 pi aliquot van PCR-producten werd vervolgens geïncubeerd met 10 U exonulease I en 2 U shrimp alkalische fosfatase aan overmatige primers en dNTPs (US70995, Amersham) te verwijderen. Sequenties van beide strengen werd bepaald Thermische Sequenase DNA polymerase (Thermo Sequenase radiogelabeld Terminator Cycle Sequencing Kit, Amersham) met de twee oorspronkelijke PCR-primers. We voerden de A592T mutatie analyse van deze kankers, met uitzondering van de kanker van onduidelijke oorsprong, in de familie van de zaak 728 middels directe sequentiebepaling.
Afwijkende mRNA screenen
1-5 pg van de totale RNA werd omgekeerd getranscribeerd in cDNA met behulp eerste streng cDNA synthese kit (Amersham Pharmacia Biotech). Alle monsters werden onderzocht op E-cadherine-cDNA deleties en inserties. E-cadherine-cDNA werd geamplificeerd met behulp van primerparen EX7-REX10 /2 en EX9 /2a-rEx11 de streek van exons 7-10 coderen calcium bindingsplaatsen [24]. PCR-producten werden gevisualiseerd door agarose gelelektroforese. Abnormale fragmenten werden uitgesneden en gesequenced met behulp voorwaartse en achterwaartse primers voor de grenzen van de deleties en inserties bepalen. Hier gebruikten we BigDye Terminator Cycle Sequencing Ready Reaction Kit (Perkin-Elmer, Foster City, CA) en geautomatiseerde sequencer ABI PRISM ™ 3100 (Perkin-Elmer) voor sequentiebepaling
Immunohistochemische kleuring
Immunohistochemie voor E-cadherine en β catenine werd uitgevoerd op 5 pm coupes van in paraffine ingebedde tumorweefsel blokken met monoklonale antilichamen E-cadherine 5H9 en geit anti-catenine Beta (Research Diagnostic Inc. NJ, USA), respectievelijk met het antigen retrieval protocol beschreven door Hazelbag et al. [1995]. Tumoren werden beoordeeld door de intensiteit van de kleuring als negatief (-), zwak positief (+), gematigd positief (++) en sterk positief (+++)
Statistische analyse Hotels A Χ 2-test of. Fisher's exact test werd gebruikt om het verband tussen de bovengenoemde parameters te beoordelen.
Resultaten
de frequentie van LOH op 16q22.1 gebied was 75% (Tabel 1).
Drie tumoren (6%) vertoonde dezelfde missense mutatie A592T van exon 12, waarvan 2 patiënten hadden kiemlijn mutatie en één geval was somatische mutatie. Informatie over gedetecteerde polymorfismen werd opgenomen in Tabel 1. Drie van 187 (1,6%) en normale individuen 1 van 280 (0,36%) borsttumoren bleek deze kiemlijn mutatie. De mutatie werd niet gevonden in 444 andere tumoren (tabel 2) .table 2 Frequentie van A592T missense mutatie in maagkanker, andere kanker en normale individuen
Variabelen
A592T /totaal
%
Maagkanker
3/50
6
Borstkanker
1/280
0.36
Andere kanker *
0/444
0
Normale bevolking
3/187
1,6
* inclusief dikke darm en het rectum, de longen, endometrium, eierstok, testis, nier, schildklier carcinomen en sarcomen.
Daarnaast 3 van 280 borsttumoren bleek een missense mutatie GCC (Ala) → TCC (Ser) op de identieke codon 592, waarvan 2 gevallen waren kiemlijn mutatie; de derde was onduidelijk omdat het normale weefsel niet beschikbaar was. Het histologische type 4 borsttumoren was ductale.
In de familie van de zaak 728, vonden we dat de patiënt met huidkanker en een van de patiënten met prostaatkanker vertoonde dezelfde kiembaanmutatie als case 728. Interessant is dat geen mutaties werden gedetecteerd in de tumor monsters van deze twee gevallen. Waarschijnlijk werden de gemuteerde allelen verloren tijdens tumorontwikkeling. Het begin leeftijden voor de gevallen met kiemlijn mutaties in het pedigree waren 78 jaar voor case 728, 73 jaar voor de huidkanker en 76 jaar voor de prostaat kanker.
We hadden geen mutatie te detecteren door SSCP en DNA-sequentie in exon 3 van het β-catenine gen in het 50 maag tumoren.
zeven maagtumoren toonde afwijkende transcripten van de E-cadherine. Tumoren 360, 369, 568, 717 en 750 weergegeven insertie van intron 7 tussen exonen 7 en 8. Tumor 755 toonde schrapping van de laatste 72 basen van exon 7, exon 8 en de eerste 124 bases van exon 9. Tumor 808 weergegeven twee afwijkende mRNA, waarvan één had deletie van exonen 8 en 9, en een geval met deletie van de laatste 84 basen van exon 8 (Tabel 1).
Tenslotte voerden wij immunohistochemische kleuring van E-cadherine en β-catenine. Een regionale variant van de kleuring werd gedetecteerd over de tumoren. De bezettingen +/-, ++ /- en +++ /- verwijzen naar meer dan 50% van de cellen positief, en bezettingen - /+, - /++ en - /+++ vermelding van meer dan 50% van de cellen negatief. Negatief (-) of verlaagd (- /+ - /++ - /+++ en +/-) expressie van E-cadherine en β-catenine werd gedetecteerd in 21/50 (42%) en 14/50 ( 28%) gevallen, respectievelijk. Verder is het voor β-catenine IHC, 11 tumoren vertoonden een positieve cytoplasmatische kleuring (Tabel 1). Een significant verband werd gevonden tussen negatieve of verminderde expressie van E-cadherine en β-catenine (p = 0,048, Χ 2 test). Ook vonden we een verband tussen verminderde expressie van E-cadherine en diffuse histotype (p = 0,04, Fisher's exact test).
Discussie
De hoge frequentie van LOH op 16q22.1 gebied suggereert sterk dat er een of meer tumor suppressor genen in deze regio, waarvan het verlies kon carcinogenese maagkanker veroorzaken. Het E-cadherine-gen is in kaart gebracht op chromosoom 16q22.1 [26]. De verminderde expressie en mutaties van E-cadherine in verschillende soorten kanker zoals maag- en lobulaire borstkanker geïdentificeerd, wat aangeeft dat de E-cadherine-gen een tumorsuppressorgen [2-4], [13-17, 27] . In deze studie 3 gevallen (6%) vertoonden de identieke missense mutatie A592T. De calcium bindende motieven in het extracellulaire domeinen 1-5 worden beschouwd als cruciaal voor de functie van E-cadherine, omdat een synthetisch molecuul met een enkele aminozuursubstitutie in een calciumbindend motief vertoonde geen kleverigheid [28] . Ook in menselijke cellijn MKN45 van maagkanker, die strakke adhesie van cellen miste, werd een 4-aminozuur deletie gevonden op de grens tussen exons 6 en 7, die werd beschouwd als de conformatie rond de toonaard calcium-bindende motieven en de hechtende eigenschappen van de E-cadherine-moleculen [29] schaffen. De enkele aminozuursubstitutie in het onderhavige onderzoek ligt binnen het vijfde extracellulaire domein van E-cadherine, waarbij een calcium bindende motief kan bestaan. Denkbaar is derhalve dat de mutaties in de drie gevallen vernietigde ook de functie van E-cadherine. Interessant is dat de drie gevallen bleek ook LOH op 16q22.1 met de E-cadherine locus. Zo kan worden aangenomen dat twee genetische gebeurtenissen leidt tot inactivatie van het gen zich in beide allelen van E-cadherine-gen, respectievelijk. De bovenstaande bevindingen gaven aan dat de E-cadherine-gen is een tumor-suppressor gen omdat het in overeenstemming met de klassieke twee-hit theorie voor tumorsuppressorgenen [30]. Eerdere studies in lobulair borstkanker ondersteunen ook dit advies [4, 14]. In cellijn genoemd MKN45 hierboven (slecht gedifferentieerd adenocarcinoom) met zwakke cel-cel adhesie, een 12-bp in frame deletie van E-cadherine-gen en verlies van het wild-type-allel werden ontdekt [29]. Maar deze cellijn vertoonden nog steeds sterke expressie van mRNA's en eiwitten, suggereert dat niet alleen verminderde expressie maar ook structurele afwijkingen kan zelf resulteren in inactivering van het E-cadherine-gemedieerde celadhesie systeem [29]. Derhalve kan een enkele aminozuursubstitutie in deze studie structurele veranderingen van E-cadherine en ontstaat beperkte cel-celadhesie, hoewel twee van de gevallen (23 en 294) vertoonden voldoende eiwitexpressie.
Interessant is dat de dezelfde volgorde variant van somatische en kiembaanmutatie werd gelijktijdig in verschillende maag-patiënten gevonden. Case 23 met somatische mutatie had een begin leeftijd van 56 jaar, maar de gevallen 294 en 728 met kiembaanmutatie hadden begin leeftijden van 71 en 78 jaar, respectievelijk. Een verklaring voor dit verschijnsel waarmee verlies tweede allel van E-cadherine bij 23 kwamen zeer vroeg, waardoor carcinogenese relatief vroeg bij triggerring 23. Er is een mogelijkheid dat deze mutatie bij 23 een rol alleen progressie van zijn de tumor, maar niet in de initiatie, waar andere genetische gebeurtenissen waarschijnlijk verantwoordelijk voor de initiatie van maagkanker kan zijn. Maar de gevallen 294 en 728 met kiembaanmutaties hadden late onset leeftijd. Dit kan zijn omdat de inactivering van een allel zeer laat opgetreden. Een artikel meldde dat de verplichte dragers met afgeknotte mutaties in E-cadherine-gen in hun jaren '80 en '90 bleef onaangetast [31]. Daarom moet verdere identificatie van genetische en /of omgevingsfactoren die verantwoordelijk zouden kunnen zijn voor de variabele leeftijd bij het begin worden uitgevoerd. Speciaal, case 294 had drie tumoren in de maag, die in lijn is met de genetische tumoren was meestal meerdere [30]. Ondernemingen De frequentie (6%) van de mutatie A592T in 50 maag-tumoren is bijna vier maal dat in normale populatie dit suggereert wederom dat deze mutatie inderdaad bijgedragen tot de tumorgenese in een subset van maag tumoren. Bovendien zijn 0,36% van de borsttumoren en geen andere tumoren, vertoonde dezelfde kiembaanmutatie, wat aangeeft dat er een histologisch verschil voor deze mutatie bij maagkanker en andere kanker kunnen zijn.
Slechts twee andere gevallen vertoonden A592T mutatie in de familie van 728. speciaal geval, werd deze mutatie alleen gedetecteerd in overeenkomstige normale weefsel, maar niet in het tumorweefsel, wat suggereert dat de gemuteerde allelen werden verloren tijdens de tumorgenese. Hieruit kan worden geconcludeerd dat deze mutatie geen rol spelen bij de tumorgenese van prostaatkanker en huidkanker, maar het kan gastrische kanker specifiek.
Wij concluderen dat de A592T mutatie de levensduur risico op maagkanker kan verhogen, maar is duidelijk een opeenvolging variant van lage penetrantie. Onze bevindingen van twee verschillende sequentievarianten op codon 592 (A592T en A592S), als kiemlijn en somatische mutaties, suggereren dat dit codon is een hotspot van mutaties in tumor pathogenese. Ondernemingen De breekpunten voor inserties van intron 7 en schrapping van exons 8 en 9 staan ​​splicing locaties, overeenkomstig "GU-AG 'regel voor mRNA splicing. Er kan worden gespeculeerd dat deze veranderingen niet werden gegenereerd door alternatieve splicing, aangezien geen bewijzen voor alternatieve splicing werden binnen muis E-cadherine-gen [32] en een afwijkende mRNA werden gedetecteerd in goedaardige weefsels. De mutaties op splicing locaties zou moeten verantwoordelijk zijn voor de veranderingen van E-cadherine mRNA, hoewel geen mutaties zijn gevonden op DNA-niveau in deze studie, waarschijnlijk omdat de SSCP voor mutatiescreening een laag rendement. Een extra 2 deleties vertoonde breakpoints op niet-splicing sites, waarvan de splicing is niet in overeenstemming met de "GU-AG", mogelijk aangeeft dat een herschikking in genomische niveau de afwijkende mRNA's kan veroorzaken. Eerdere studies hebben aangetoond overslaan van exon 8 of 9 bij maagkanker [24, 33]. Deze aberraties kunnen leiden tot E-cadherins verliezen calcium bindingsplaats motieven gebrek aan exons 8 en 9, en afgeknotte moleculen wegens frameshift mutaties veroorzaakt door inserties en deleties, uiteindelijk vergemakkelijken verstrooiing van carcinoomcellen.
Verminderde expressie van E- cadherine en β-catenine gevonden in sommige kankers waaronder maagkanker [8]. Heterogene of instabiele expressie van zowel E-cadherine en β-catenine in de tumoren gevonden. Is aangetoond dat 40% van de adenocarcinomen E-cadherine niveaus in de intravasculaire tumor componenten werden verhoogd in vergelijking met hun extravasculaire compartimenten [34]. Een verklaring kan deze ingang van een carcinoom in een intravasculaire compartiment is geassocieerd met een verhoogde expressie van E-cadherine, en die volgende afslag naar extravasculaire weefsels geassocieerd met downregulatie [35]. Aangezien E-cadherine en β-catenine zijn de belangrijkste componenten adhesie van cellen te vormen, kan het verlies daarvan resulteren in de verstoring van de functie van het complex, dat zwakke cel-celadhesie kunnen veroorzaken verlenen invasieve advertenties op een tumor . Bovendien vermin- adhesie van cellen geassocieerd met verlies van contact inhibitie van proliferatie, waardoor ontsnappen aan groei stuursignaal tenslotte triggering carcinogenese kankersoorten [8]. In deze studie, een associatie tussen abnormale expressie van E-cadherine en β-catenine werd gevonden, wat erop wijst dat het verlies van E-cadherine binding kan een herverdeling van β-catenine veroorzaken van het celmembraan naar het cytoplasma. De toegenomen vrije β-catenine in het cytoplasma kan naar de kern en leiden tot activering van genexpressie. Dit wordt ondersteund door de bevindingen dat beide gevallen (676 en 738) vertoonden negatieve kleuring in het binnenoppervlak van membraan en positieve kleuring in het cytoplasma, gelijktijdig. Maar andere 9 tumoren (tabel 1) tonen matige tot sterke kleuring in membraan vertoonde ook positieve kleuring in cytoplasma, wat suggereert dat de normale achteruitgang van de vrije β-catenine in cytoplasma wordt geremd. Ook hebben wij een associatie tussen abnormale expressie van E-cadherine en diffuse histotype, wat aangeeft dat de veranderingen van de E-cadherine een rol spelen bij slecht gedifferentieerde maagtumoren. Interessant is dat afwijkende expressie van E-cadherine en /of catenines blijkt een onafhankelijke prognostische marker voor korte overleving bij maagkanker patiënten [8]. Van bijzonder belang is de constatering dat de E-cadherine is een onafhankelijke voorspeller van occulte lymfeklier en micrometastasen in knooppunten zoals No geclassificeerd door middel van routine histopathologische methoden [8].
Conclusies
Onze resultaten ondersteunen dat de veranderingen van E-cadherine en β-catenine spelen een rol bij de initiatie en progressie van maagkanker. Expressie van beide genen worden verlaagd maagkanker, maar het mechanisme van neerwaartse regulatie is niet duidelijk. LOH, mutaties en veranderingen in RNA splicing kan een deel van de downregulatie van de E-cadherine bij maagkanker
leggen. Verklaringen
Dankwoord
Dit werk werd ondersteund door de IJslandse Raad voor Onderzoek, de Universiteit van IJsland Wetenschap Fonds en de IJslandse Cancer Society.
Competing belangen
geen gemeld

• Een case-control studie naar het effect van apolipoproteïne E genotypes op maagkanker het risico en progressie
• Support Vector Machine model voor de diagnose van lymfeklier metastase bij maagkanker met multidetector computertomografie: een voorbereidende study