la guérison de l'ulcère et le mécanisme (s) d'action impliqué dans l'activité gastroprotective des fractions obtenues à partir de Syngonanthus arthrotrichus et Syngonanthus bisulcatus

la guérison de l'ulcère et le mécanisme (s) d'action impliqué dans l'activité gastroprotective des fractions obtenues à partir de Syngonanthus arthrotrichus
et Syngonanthus bisulcatus
Résumé de l'arrière-plan
Syngonanthus arthrotrichus
et Syngonanthus bisulcatus
, actuellement connu pour Comanthera Aciphylla
(Bong.) LRParra & Giul.
Et Comanthera bisulcata
(Koern.) L.R. Parra & Giul, populairement connu au Brésil comme "sempre-vivas
," sont des plantes de la famille Eriocaulaceae. Ils se trouvent dans les Etats de Minas Gerais et Bahia. Les espèces sont connues pour être riches en flavonoïdes à laquelle leur activité gastroprotective a été attribué. Dans cette recherche, les protocoles expérimentaux ont été réalisés pour élucider les mécanismes associés d'action.
Méthodes
L'activité a été évaluée en utilisant des modèles induits gastriques ulcéreuses (acide acétique et des lésions gastriques induites par l'éthanol dans NEM ou L-NAME pré-traité les souris et par une ischémie /reperfusion). enzymes antioxydantes, la somatostatine sérique et la gastrine ont également été évalués
. Résultats
Dans les ulcères gastriques chroniques, une dose orale unique quotidienne de Sa
-FRF ou Sb de la -FRF (100 mg /kg de poids corporel .) pendant 14 jours consécutifs accéléré la cicatrisation des ulcères dans une mesure similaire à celle observée avec une dose égale de la cimétidine. Le pré-traitement des souris avec du NEM (N-éthylmaléimide) ou L-NAME (N-nitro-L-arginine) abolit l'activité protectrice de la SA -FRF, Sa s -FDF, Sb et Sb DFF
-FRF ou Sa de la -FRF et Sb de -FRF, respectivement, ce qui indique que les composés antioxydants et de l'activité de l'oxyde nitrique synthase sont impliqués dans le gastroprotective. Sa et Sb
-FRF
-FRF (100 mg /kg p.o.) a protégé la muqueuse gastrique contre l'ulcère qui a été induite par une ischémie /reperfusion (72 et 76%, respectivement). Elle a également diminué la peroxydation lipidique et rétablit les thiols totaux dans la paroi gastrique des souris qui avaient été traitées avec de l'éthanol. Lorsqu'il est administré à des rats soumis à des lésions gastriques induites par l'éthanol, Sa et Sb de -FRF s -FRF (100 mg /kg, po) a augmenté les taux sériques de la somatostatine, alors que les taux sériques de la gastrine ont été proportionnellement réduites.
Conclusions
les résultats indiquent des effets de guérison importants et l'activité gastroprotective pour la -FRF et Sb de -FRF, ce qui implique probablement la participation des groupes SH, de l'oxyde nitrique (NO), le système antioxydant, la somatostatine de la Sa et la gastrine. Tous font partie intégrante des mécanismes cytoprotecteurs de la muqueuse gastro-intestinale contre les facteurs agressifs.
Mots-clés
Eriocaulaceae Syngonanthus arthrotrichus
Syngonanthus bisulcatus
Flavonoid Healing activité gastroprotectrice Contexte
L'ulcère gastrique est une maladie qui touche beaucoup de gens autour le monde, et sa progression est attribuée à un déséquilibre entre les facteurs agressifs (acide, la pepsine, la bactérie Helicobacter pylori,
le stress, l'alcool et l'utilisation continue de médicaments anti-inflammatoires non stéroïdiens) et des facteurs de protection (mucus, du bicarbonate, la prostaglandine, la circulation sanguine, le système anti-oxydant, les composés sulfhydryle, l'oxyde nitrique et la prolifération cellulaire) [1-3]. le plus ulcère gastrique est une maladie courante à des étiologies multiples. Des facteurs tels que le tabagisme, le stress, une mauvaise alimentation, et les carences en gastro-protection sont étroitement liées au développement de la muqueuse gastrique ulcération. L'infection bactérienne à Helicobacter pylori
a également été mis en évidence comme un facteur prédisposant important pour le développement des ulcères gastriques [4].
Thru les années, un grand magasin de la connaissance a été acquise concernant le développement de l'ulcère gastrique, et un large spectre de médicaments pour le traitement anti-acides, tels que les inhibiteurs de la pompe à protons, les anticholinergiques, les antagonistes des récepteurs de l'histamine [5], a mis au point. Néanmoins, les traitements existants ont souvent des effets indésirables (hypersensibilité, arythmie, impuissance, gynécomastie et les changements hématopoïétiques), et sont coûteux. Cela a stimulé la recherche continue de nouvelles alternatives thérapeutiques. À ce stade, nous insérons des plantes médicinales pour leurs divers avantages tels qu'une plus grande disponibilité, une protection plus efficace, à moindre coût, et une toxicité plus faible [6, 7].
La recherche rapide dans le domaine des plantes médicinales dans le traitement de gastroduodénal ulcères a ouvert la découverte du premier médicament efficace contre l'ulcère gastro-duodénal; carbénoxolone de Glycyrrhiza glabra
[8-10], et l'extrait de liquide de racine de réglisse ont été utilisés pour traiter les ulcères de l'estomac chez les patients n'a pas amélioré avec les médicaments conventionnels. La glycyrrhizine de la réglisse a été trouvé pour arrêter deux enzymes qui décomposent la prostaglandine E [11]. Efficacité des autres ressources végétales comme le chou dans l'amélioration des ulcères gastro-duodénaux ont été rapportés [12-14].
Parmi les plantes médicinales présentés comme candidats pour le traitement de l'ulcère gastrique nous notons ceux qui appartiennent à la famille Eriocaulaceae. La famille se compose de plus de 10 genres, étant à peu près de 1200 espèces. Bien qu'il ait une distribution tropicale pan, la plupart des espèces se produire dans les régions tropicales près, comme dans les montagnes du Venezuela, ou au Brésil [15-17]. Eriocaulaceae est la famille à base de plantes dominante de la gamme Cipó Montagne dans l'état de Minas Gerais, au Brésil. Nous nous sommes concentrés sur les espèces appartenant au genre Syngonanthus
(Comanthera
), S. arthrotrichus et S. bisulcatus.
Ces espèces sont actuellement connus comme Comanthera Aciphylla et Comanthera bisulcata
[18],
respectivement, et populairement connu comme "sempre-vivas-mini-saia" et "sempre-vivas-chapadeira".
Le criblage phytochimique des extraits de Syngonanthus bisulcatus
(Comanthera bisulcata
(Koern. ) LR Parra & Giul) et Syngonanthus artrotrichus
(Comanthera Aciphylla
(Bong) LRParra &. Giul) réalisée par Batista [19] ont montré que les principaux composés présents dans les extraits sont des flavonoïdes et des composés phénoliques.
l'étude chromatographique des fractions riches en flavonoïdes obtenus à partir des hampes de
et S. arthrotricus de
de l'espèce S. a été effectuée comme décrit par Batista [19]. les espèces Syngonanthus bisulcatus
présenté majeure des composés tels que la lutéoline et de dérivés glycosylés de la lutéoline confirment les études antérieures décrites par Agrawal [20] et Harbone [21]. des études menées par
Coelho [22] a montré dans cette fraction aussi la présence d'isovitexine, lutonarine et 5, 6 , 3 ', 4'-tetrahidroxi-7-OD-glucopiranosilflavone. Dans les fractions riches en flavonoïdes des Syngonanthus arthrotrichus
était possible d'isoler le composé lutéoline. Dans les études décrites ci-dessus Agrawal [20] et Rinaldi [23] ont également été identifiés luteolina, l'apigénine et de la lutéoline-6-C-β-D-glucopiranoside
. Les recherches ont montré que les plantes médicinales favorisent anti-inflammatoire, anti-oxydant, et effets gastroprotective [24-29]. L'activité gastroprotective promue par les flavonoïdes a été démontrée dans une revue de la littérature publiée par Mota et al. [30]. Des études réalisées par notre groupe ont montré l'activité gastroprotective des espèces végétales telles que S. arthrotrichus
[31], S. bisulcatus
[32], et S. macrolepsis
[33] qui ont tous été collectés dans l'état de Minas Gerais, au Brésil.
Considérant ce qui précède, nous avons cherché à explorer les effets gastroprotective promus par fractions obtenues à partir de S. arthrotrichus
et S. de
, en utilisant des modèles d'ulcère gastrique induits variés, pour ainsi évaluer les mécanismes d'action impliqués.
Méthodes
Animaux
les protocoles expérimentaux ont été approuvés par le Comité pour l'éthique dans l'expérimentation animale (CEEA /UNICAMP) avec le numéro de registre 502-1, en 2002. souris albinos Swiss Homme (30-40 g) ou des rats albinos mâles Wistar (180-250 g), de la Maison des animaux Central de l'Université d'Etat de Campinas (Cemib /UNICAMP) ont été utilisés. Les animaux ont été nourris avec un régime alimentaire Nuvilab CR-certifié, et en plus, ont eu libre accès à l'eau dans des conditions d'éclairage fixes (12/12 h cycle lumière /obscurité), l'humidité (60 ± 1,0%), et une température de (21 , 5 ° ± 1,0). Le jeûne a été utilisé pour tous les tests avant, parce que les médicaments classiques ont été administrés par voie orale (par gavage), soit par voie intra-duodénale à l'aide d'une solution saline à 0,9% (10 ml /kg) lorsque le véhicule (témoin négatif). Les animaux ont été gardés dans des cages avec des planchers de mailles larges soulevées pour empêcher la coprophagie.
Drogues
Les médicaments et les réactifs ont été préparés immédiatement avant utilisation. Les médicaments suivants ont été utilisés: cimétidine (Sigma Chemical Co, USA), lansoprazole (Aché, Brésil), l'éthanol absolu (Merck, Allemagne), l'acide chlorhydrique (Merck, Allemagne), Nω-nitro-L-arginine chlorhydrate de l'ester méthylique (Sigma Co Chemical, USA), et N-éthylmaléimide (Sigma Chemical Co, USA). Tous les médicaments et les fractions ont été administrés par voie orale (gavage), ou intraduodénale. Matériau
Plant
Scapes de S. arthrotrichus,
et S. bisulcatus
ont été recueillies en 2002 à Cipó Mountain, Diamantina City, dans l'état de Minas Gerais, au Brésil. S. arthrotrichus
a été authentifié par le Dr Ana Maria Giulietti, et S. de
a été authentifié par le Dr Paulo Takeo Sano. Un bon de réduction de chaque échantillon (n ° 2122 et 2137, respectivement) a été déposé dans le Herbier du Département de botanique, à l'Institut de Biosciences, USP.
Scapes (500 g) de S. arthrotrichus
et S . bisulcatus
recueillies dans la Serra do Cipó, Minas Gerais, ont été séchés dans un four à 60 ° C pendant 4 jours, puis en poudre. Le matériau résultant a été macérée séquentiellement à température ambiante dans du chlorure de méthylène, et 70% EEOH EEOH pendant une semaine avec chaque solvant. Les extraits ont été filtrés et concentrés sous vide
Le EEOH et 70% d'extraits de EEOH ont été analysés par Chromatographie sur couche mince sur des plaques de gel de silice en utilisant du n-BuOH /HOAc /H2O. (6: 1: 2, v /v /v). Les taches de CCM ont été détectés en utilisant de la lumière UV et le réactif NP /PEG qui donne des taches jaunes ou orange caractéristique de flavonoïdes. Étant donné que ces extraits contenaient des éléments avec des facteurs de rétention similaires (Rf), ils ont été combinés et pesés. Un échantillon (3,5 g), de l'extrait éthanolique a été dissous dans 10 ml de MeOH et fractionnés sur une colonne de LH-20 Sephadex (CC 10033 cm). L'extrait a été élue dans du MeOH à un débit de 0,5 ml /min et des fractions de 3 ml ont été recueillies. Les fractions ont été combinées en fonction de leur migration dans le système de CCM décrit ci-dessus. Fractions 1-22 étaient déficients en flavonoïdes, les fractions 23-47 étaient fractions intermédiaires et les fractions 58-64 étaient riches en flavonoïdes et ont été administrés à une dose de 100 mg /Healing
Kg. De lésions gastriques induites par l'acide acétique
l'expérience a été réalisée selon la méthode décrite par Takagi et al. [34] avec quelques modifications. Après avoir jeûné pendant 24 h, sous anesthésie, une laparotomie a été effectuée sur tous les animaux par une incision médiane épigastrique. Après exposition de l'estomac, 30% (v /v) d'une solution d'acide acétique (0,05 ml) a été injecté dans la couche sous-séreuse de la partie glandulaire de la paroi antérieure. L'abdomen a ensuite été fermé et tous les animaux ont été nourris normalement. Deux jours après la indution d'acide acétique de lésions gastriques, les traitements ont été initiés avec les administrations orales de Sa de la -FRF, Sa
-FDF; Sb de la -FRF, Sb
-FDF; cimétidine (100 mg /kg); ou une solution saline à 0,9% à 10 mL /kg. Tous les traitements ont été administrés par voie orale une fois par jour pendant 14 jours consécutifs. Le jour après la dernière administration du médicament (et après un jeûne de 12 h), les rats ont été sacrifiés et leurs estomacs, puis enlevés. La zone de la lésion de l'ulcère macroscopique (ULA) des frontières intérieures et extérieures en mm 2 ont été déterminées comme décrit dans la méthode. Les lésions induites par l'éthanol-
gastriques chez des souris pré-traitées NEM
Les souris ont été divisées en groupes (n = 5-7
animaux), et ont été soumis à un jeûne pendant 24 h. Ils ont ensuite été traités par voie intrapéritonéale avec NEM (N-éthylmaléimide) à 10 mg /kg, ou d'une solution saline à 0,9% à 10 mL /kg. A trente minutes, les groupes ont reçu une dose orale de solution saline soit 0,9%, Sa de -FRF, Sa de la -FDF, Sb
-FRF ou Sb de la -FDF. Au bout de 60 minutes, tous les groupes ont été traités par voie orale avec 0,2 ml de HCl /éthanol pour induire un ulcère gastrique [35]. Une heure après l'administration de HCl /éthanol, les animaux ont été euthanasiés par dislocation cervicale et leurs estomacs ont été excisés. dommages gastrique a été déterminée en utilisant l'indice ulcéreuse (UI) comme décrit par Szelényi et Thiemer [36]. souris lésion de la muqueuse gastrique induite par l'éthanol en-L-NAME-prétraités
Les souris ont été à jeun pendant 24 heures et divisé en 3 groupes (n
= 5-7), selon les pré-traitements: un groupe a reçu une solution à 0,9% de solution saline (10 ml /kg, sc), et deux groupes ont reçu Nω arginine-L-ester méthylique de (L -NAME), une synthase d'oxyde agent bloquant, à 70 mg /kg (SC). Trente minutes après l'administration, les groupes ont été traités par voie orale avec une solution saline, soit 0,9%, Sa de -FRF, Sa de la -FDF, Sb
-FRF ou Sb de la -FDF. Soixante minutes plus tard, tous les groupes ont été traités par voie orale avec 0,2 ml HCl /éthanol pour induire l'ulcère gastrique [37]. Une heure plus tard, les animaux ont été euthanasiés par dislocation cervicale, les estomacs ont été excisés et les lésions gastriques ont été déterminés comme décrit précédemment.
Lésion gastrique induite par l'ischémie /reperfusion d'ischémie
endommagement /de reperfusion a été produit chez les rats atteints par un méthode proposée par Ueda et al. [38]. Les rats ont été soumis à un jeûne pendant 24 heures et divisés (selon pré-traitement) en quatre groupes (n =
5-7): normale (pas de pré-traitement et ni l'ischémie reperfusion, ni), sham (pas de pré-traitement) , 0,9% de solution saline (10 ml /kg), et Sa
-FRF ou Sb
-FRF. Après 15 minutes, les rats ont été anesthésiés par une injection intramusculaire de kétamine (50 mg /kg) et de xylazine (10 mg /kg). Le côté gauche de l'abdomen a été rasé, et une incision a été faite. En bref, l'artère coeliaque a été disséqué, sans excès de graisse, et serré pendant 30 minutes (phase d'ischémie), en utilisant une pince micro-bulldog. Réoxygénation a ensuite été laissé par l'enlèvement de la pince pendant 60 min (phase de reperfusion). La zone de la lésion de l'ulcère macroscopique ont été déterminés.
L'activité antioxydante
Pour évaluer les effets de la -FRF du Sa et Sb de la -FRF sur le système anti-oxydante, nous avons analysé la peroxydation des lipides, et les niveaux de sulfhydryles (GSH), dans l'estomac glandulaire muqueuse chez les rats présentant des lésions gastriques ischémie /reperfusion.
peroxydation lipidique (LPO)
Les substances totales réactives à l'acide thiobarbiturique (TBARS) niveau dans le tissu gastrique, (un indice de malonyldialdéhyde (MDA), la production), a été déterminée selon la méthode développée par Ohkawa et coll. [39]. les segments gastriques ont été découpés en petits morceaux et homogénéisés dans un tampon phosphate glacé (50 mM, pH 7,4), pour obtenir un homogénat à 10%. Le broyât de la partie glandulaire de l'estomac a été dilué dans 0,15 M KCl (rapport 1:10). Ensuite, 0,5 ml de cette homogénat, on a ajouté 0,2 ml de dodécylsulfate (8,1%), 1,5 ml d'acide acétique à 20% (ajusté avec une solution de NaOH à pH 3,5), 1,5 ml d'acide thiobarbiturique (0,8% p /v) et 0,3 ml d'eau distillée. Ensuite, le mélange a été chauffé dans un bain d'eau (bain-marie) avec le thermostat réglé à 95 ° C pendant 1 heure. Après cela, les échantillons ont été refroidis et ajoutés à 1 ml d'eau distillée et 5 ml de n-butanol + pyridine (15: 1, v /v), et on agite au vortex pendant 1 min, puis on centrifuge à 1400 G pendant 10 minutes. Enfin, l'absorbance a été lue à 532 nm. Le TEPP (1,1,3,3-tétraéthoxypropane) dilué dans de l'éthanol a été utilisé comme étalon. Les résultats sont exprimés en picomoles des substances réagissant avec l'acide thiobarbiturique (TBARS), par mg de protéine (TBARS nmol. Mg de protéine -1)
. Nombre total de groupes thiol dans homogénat d'estomac
Les thiols totaux dans le tissu gastrique a été déterminée selon la Faure et Lafond [40] avec des modifications procédé. En bref, 500 ul de Tris 0,25 mM et une solution 20 mM d'EDTA (pH 8,2) ont été ajoutés à une aliquote (100 ml) de l'homogénéisât (dans un tampon phosphate 10 mM, pH 7,8) obtenu à partir du grattage de l'estomac. L'absorbance (A1) de la solution finale a été déterminée par un spectrophotomètre à 412 nm. Ensuite, 10 pi de 5-5'-dithio-bis (2-nitrobenzoïque) (DTNB) 10 mM (dilué dans du methanol) a été ajouté au mélange. Après 15 minutes, nous avons pris une deuxième lecture (A2). DTNB dilué dans du tampon a été utilisé comme ébauche (B). Pour calculer la concentration des groupes sulfhydryle, nous avons utilisé l'équation suivante: (A2 - A1-B) × 1,57 mM. Les résultats ont été exprimés en TBARS nmol /mg de protéine x 10 3.
Sérum somatostatine et gastrine
Pour effectuer ce protocole, les lésions gastriques ont été induites par l'administration orale d'éthanol absolu 1 mL [41]. Trente minutes avant induction de la lésion, les animaux ont reçu une dose par voie orale de la solution saline à 0,9%, le lansoprazole (30 mg /kg), SA

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