PLoS ONE: izocitrat dehidrogenaze Helicobacter pylori potencijalno uzrokuje humoralni imuni odgovor kod ispitanika s čira želuca i Gastritis

Sažetak pregled

Pozadina pregled

H. pylori pregled uzrokuje gastritis i peptički ulkusi te je faktor rizika za razvoj želučanog karcinoma. Mnogi od proteina, kao što ureaza, porin, flagellins i toksina, kao što su polisaharidi, Lipo-identificirani su kao potencijalnih čimbenika virulencije koji uzrokuju protuupalne reakcije. Prikazujemo imunogene potencijale izocitrat dehidrogenaze (ICD), važan domaća proteina H. pylori pregled. pregled

Metodologija /glavne nalaze

aminokiselina sekvence H. pylori pregled ICD podvrgnuti su u silico
analize u regijama s predvidljivo visokim antigene indeksa. Također, računalna modeliranja H. pylori
ICD kao suprotstavljena E. coli
ICD je provedeno kako bi se utvrdilo razinu strukture sličnosti i dostupnost površina izložena motiva, ako ih ima. ICD pregled gen je kloniran, i pročišćeni na vrlo visoku homogenost. Humoralni odgovor usmjeren na H. pylori pregled ICD je otkrivena kroz imunoenzimskim testom (ELISA) u 82 ljudskih subjekata koja se sastojala od 58 bolesnika s H. pylori
povezana gastritisa ili čira bolesti i 24 asimptomatski zdravih kontrola. H. pylori pregled ICD izazvao potencijalno visoku humoralni imuni odgovor i otkrio visoki titar protutijela u serumu odgovaraju endoskopski potvrdio gastritis i ulkusne bolesti predmete. Međutim, urea-dah-testa negativni zdravih kontrolnih uzoraka i uzoraka asimptomatske kontrole nije otkrio bilo kakve vidljive imuni odgovor. ELISA za proupalnih citokina IL-8 nije pokazao nikakvu naglašenu upalnu aktivnost ICD. Pregled

Zaključci /Značaj pregled

ICD u H. pylori pregled je imunogen koji u interakciju s imunosnog sustava domaćina uslijedi nakon eventualnog autolytic oslobađanje i time znatno izaziva humoralne reakcije u pojedinaca s invazivnom H. pylori
infekcije. Međutim, ICD ne može značajno potaknuti indukciju IL8 u kultiviranim makrofaga staničnoj liniji (THP1) i stoga, ne može biti značajan proupalnih sredstvo za pregled

Izvor:. Hussain MA, Naveed SA, Sechi LA, Ranjan S, Alvi A, Ahmed I, et al. (2008) izocitrat dehidrogenaze Helicobacter pylori
potencijalno uzrokuje humoralni imuni odgovor kod ispitanika s peptički ulkus i gastritis. PLoS ONE 3 (1): e1481. doi: 10,1371 /journal.pone.0001481 pregled

Akademska Urednik: Keertan Dheda, University College London, Ujedinjeno Kraljevstvo pregled

Primljeno: 29. kolovoz, 2007; Prihvaćeno: 24. prosinca 2007; Objavljeno: 23 siječanj 2008 pregled

Copyright: © 2008 Hussain i sur. Ovo je otvorenog pristupa članak distribuirati pod uvjetima Creative Commons Imenovanje License, koja omogućuje neograničeno korištenje, distribuciju i reprodukciju u bilo kojem mediju, pod uvjetom da je izvorni autor i izvor su zaslužan pregled

sredstva:. Financiranje iz CDFD Temeljni Grants (Odjel za biotehnologiju, Vlada Indije) pregled

suprotstavljenih interesa. autori su izjavili da ne postoje suprotstavljeni interesi pregled

Uvod pregled

Helicobacter pylori pregled je gram negativna, zakrivljena bakterija koja uspostavlja kronične infekcije u ljudskom želucu. To je važan patogen koji je mislio da su zajedno razvili s ljudima [1], [2]. Tu obitava oko polovice svjetske populacije i smatra se kao potencijalni faktor rizika za razvoj želučanog adenokarcinoma [3]. H. pylori pregled je priznata uzrok kroničnog gastritisa, peptičkog ulkusa, želučani rak, i sluznicu limfnog tkiva (MALT) limfom. Nekoliko mehanizmi su predložene da objasni svoju ulogu u patogenezi crijevima. Unatoč visokim stopama kolonizacije samo mali podskup zaraženih ljudi doživljavaju H. pylori pregled -associated bolesti [2]. Udruge h. pylori
s bolesti specifične faktore su ostali više ili manje zagonetna iako genoma sekvence su dešifrirao gotovo deset godina [2]. pregled

Jedan od najosebujnijih značajki H. pylori pregled je genetska raznolikost između kliničkih izolata dobivenih iz različitih populacija pacijenata [3]. Recasting genoma je norma s ovom bakterijom, stvarajući time puno alela i fazne varijacije [3], što predstavlja teškoće u razvoju dijagnostike i cjepiva. Pregled

Nakon što je stekla, infekcija ostaje godinama i, izaziva se može detektirati imunološke odgovore u zaraženim osobama [4], [5] karakteriziraju povišene razine specifičnih IgG i IgA u serumu i uzvišenje sekretorni IgA i IgM u želucu [6]. Dakle, neinvazivna serološka ispitivanja su preporučene i razvijena za dijagnozu H. pylori
infekcije. Među njima, enzimski vezanog imunosorbentnog ispitivanja (ELISA) je jedna od metoda najčešće koriste kao što je relativno pristupačne, brz, jednostavan za izvođenje i mogu se lako usvojiti za probir velikog broja uzoraka [7]. Istražujući za anti H. pylori pregled antitijela često propisane prije endoskopije ili prije početka liječenja. Iako je zbog imunološke memorije, serodiagnosis ne može biti poželjna provjeriti uspjeh ili ishod iskorjenjivanja liječenja, ostaje izbor kao osjetljivom metodom, vjerojatno zbog svoje ne-invazivne prirode. [8] pregled

Trenutno postoji nije bilo nikakve singl 'zlatni standard' antigen, što nedvojbeno se može koristiti u svim populacijama. Jedan od važnih razloga za to mogao bi biti izvanredna raznolikost prisutna u H. pylori pregled [9] - [13] i njegove specifične prilagodbe u različitim vojskama [12], [13]. Iako proteini kao katalaze, gro pregled EL, a flagellin su jako imunogen, oni daju nespecifičnih unakrsne reakcije s ostalim Gram-negativnih bakterija, točnije, Campylobacter jejuni pregled [14], [15]. Za razliku od toga, virulencije povezani antigeni kao CagA ili Vaca, pokazuju vrlo visok stupanj varijabilnosti sekvence, kao što postoje H. pylori pregled, sojevi, koji su genetski raznolik i fenotipski varijabla za jedan ili oba antigena [16] - [18]. Unatoč tome, zadovoljavajući povezanost između protutijela u serumu i invazivne bolesti su opisane [19]. Pregled

domaćih gena za H. pylori pregled nedavno koristi za praćenje migracije stanovništva te su otkrili da je stabilan u genomu i kroz stoljeća [20]. U ponudi proteina, međutim, nisu testirani i veliki za njihovu primjenu u dijagnostici ili cjepivima. Metabolički enzimi, čini se da je dobar kandidat za uključivanje u imuno-dijagnostički test kit, jer oni često ne unakrsno reagirati s seruma zdravih osoba [21]. Isto tako, zbog njihove rutine funkciji, oni su visoko konzervirani između različitih H. pylori pregled sojevi bez obzira na njihovu genotipova, te stoga može poslužiti kao idealan imuno-dijagnostički kandidata.

proteini koji se oslobađaju iz bakterija tijekom kasne logaritamske faze rasta, kao što je superoksid dismutaza i izocitrat dehidrogenaze (ICD), su opisao kao Autoliza markeri [22] - [24], a neke od njih su se pokazala izvrsna dijagnostička antigene. Na primjer, ICD od M. tuberkuloza pregled je opisana kao potencijalni antigena diskriminirati plućnih bolesnika tuberkuloze od zdravih [24]. Međutim, prethodne usporedbe antigenske obrazaca H. pylori pregled proteini (uključujući i neke od domaćinstva proteina) priznata od strane pacijenta seruma pokazala nikakvu povezanost specifičnog H. pylori pregled antigena sa slučajevima od posebne gastroduodenalnog patologije [21]. pregled

Ova studija pokazuje interakciju imunosnog sustava domaćina s H. pylori
ICD u obliku značajnih humoralnog odgovora vidio u bolesti ispitanika. Nadalje, opisujemo H. pylori pregled ICD antigen razlikovati ulkus i gastritis pacijente iz nezaraženih zdravih osoba. pregled

Rezultati pregled

U silico modeliranje, izražavanja i pročišćavanje H. pylori ICD proteina pregled

Protein slijed ICD od H. pylori pregled analiziran predvidjeti svoju imunogenost temelju antigenske indeksa, hidrofilnosti i površine vjerojatnosti. Slika 1A prikazuje u silico
antigena profilima ICD generira korištenjem raznovrsnu softvera (DNAStar Inc. SAD). Ukratko, nekoliko tragova koji odgovaraju imunološki motive aminokiselina s predvidljivo veće antigenske indeksa (~3.4) su identificirani. H. pylori pregled ICD tako prikazuje glavne antigenske proteže (Slika 1A) nas je navelo na to gledati kao navodno imunogenim proteinom. Indeksi antigenost ICD bile usporedive s onima opisanima za Rv2430c PPE antigena od mikobakterije podrijetla, koji je dalje pokazala da se imunodominantan antigen [25]. E. coli pregled ICD također analizirana na sličan način i čini se da je navodno imunogen; postojala je jasna razlika pronađena u odnosu na H. pylori
ICD, s obzirom na brojnosti i položaju antigene ostataka. Kasnije, konstruirali smo homologija model H. pylori pregled ICD temelju kristalne strukture E. coli pregled ICD (PDB kod 1AI2) i bili su u stanju prikazati organizaciju okosnica H. Pylori pregled (26695) ICD zajedno s onom E. coli pregled. Dva ICD nađeno da su značajno slična (RMS odstupanje 0.45), ali se razlikuju s obzirom na 3 važna površina izložena područja petlji koje se vjeruje da predstavljaju područja strukturnih razlika odgovaraju pretpostavljenim antigenskih epitopa eventualno prenošenje reakcije diferencijal antitijela (slika 1B ) pregled

overekspresija N-terminalne His-tag ICD je pročišćen na >, 95% homogenost na nikal afinitetnoj koloni (Slika 2). Molekulska masa rekombinantnog ICD je određeno da 47 kDa. Pročišćavanje proteina se provodi pod prirodnim uvjetima, uz iskorištenje od 2.0 mg proteina po 500 ml polaznom kulturom. pregled

Interakcija H. pylori ICD s ljudskom imunološkom sustavu pregled

humoralni imuni odgovor usmjeren protiv H. pylori pregled ICD uspoređene su između bolesnika s H. pylori
infekciju (gastritis, NUD, DU i GC) i zdravih kontrola (slika 3). Podaci imunoreaktivnost su statistički analizirani i uspoređeni s priključkom na obje zaražene i zdrave seruma. Ovi podaci pokazuju da serume svih pacijenata inficiranih pripadaju gastritis i čir na dvanaestercu (DU) kategorije provodi statistički značajne ( P pregled i 0.0001) anti ICD razine antitijela u usporedbi s onima iz zdravih kontrola. ICD protein, koji ima očito važnu ulogu metabolizma, čime je utvrđeno da je u stanju izazvati snažnu humoralni odgovor u ispitanika s gastritis i DU. Međutim, u slučajevima neulcerozne dispepsije (NUD), te rak želuca (GC), smanjene humoralni odgovor uočen. S obzirom na ove primjedbe, vjerojatno je da je oslobađanje ICD proteina je povezana s aktivnim, H. pylori
infekcije. Za razliku od promatranih humoralnog odgovora, rekombinantni, H. pylori pregled ICD nije izazvala značajne stanični imunološki odgovor što je dokazano s nedostatkom sekrecije IL-8 iz humanih makrofaga izazvanih s rekombinantnog, H. pylori pregled ICD In vitro pregled (Slika 4). Stoga, predlažemo da ICD uzbuđuje samo humoralni pretinac i ne može doprinijeti želučane patologije ili induciranih promjena citokina u želučanom fiziologije. pregled

Rasprava

Identifikacija i karakterizacija vrlo imunogenog H. pylori pregled proteina je obvezni su uvjeti za razvoj serološke testove na temelju rekombinantne pročišćenih antigena. U kombinaciji s testa urea daha, serološki je neinvazivna pristup za otkrivanje H. pylori
infekcija, i nekoliko serološki test kits temelji na mnogo različitih H. pylori pregled antigeni su komercijalno dostupni. Iako humoralnog imunološkog odgovora na H. pylori pregled čini se da je vrlo varijabilni, kombinacije često priznatih antigena moglo pokazati korisnim za dijagnostičke svrhe [21]. Metabolički enzimi, kao što su ICD Čini se da su dobre šanse da se iskoristiti za serološko razvoj test kit uglavnom zbog toga što oni ne unakrsno reagirati sa serumima uzetim od nezaraženih ili zdravih osoba [24]. Pregled

Značaj mnogih imunogeni proteini h. pylori
uključujući neke metaboličke enzime nije cijenjen koliko u kliničkim uzorcima u prethodnim proteomika temelji studiji [21]. Naša studija je ipak usmjeren na procjenu Pročišćeni, rekombinantni, H. pylori
ICD po imunoloških svojstava u različitim klasama H. pylori
zaražene pacijente kiseline peptičkog. Pokušali smo sustavno ispitati prisutnost i korisnost imunoloških odgovora dobivenih od ICD proteina u H. pylori
zaražene pacijente. pregled

Naša analiza pomoću rekombinantne ICD H. pylori
pokazala značajno visok titar antitijela među pacijentima peptički ulkus i gastritis, u usporedbi s NUD i pacijenata s karcinomom (Slika 3). Mi nagađaju da je imunološki odgovor u peptički ulkus slučajevima i gastritis mogao možda biti zbog visokih opterećenja od bakterija povezanih s invazivnom patologije i time veći broj raspadaju patogena ili patogena koji predstavljaju ICD na površini. To možda može objasniti relativno visok-antitijelo odgovor u bolesnika invazivnih kategorija. Pregled

H. pylori pregled antigeni su opisani biti pušten u izvanstanični prostor preko više mehanizama, kao što su posebnim izlučivanja putova, autolize i formiranje vezikula membrana [23] i svojstvima površine H. pylori pregled se sugerira da budu jedinstveni za čime adsorpcije /površina lokalizaciju takvih proteina [26]. ICD tradicionalno poznat kao markere autolize [22], [24], [27], objavio tijekom kasne logaritamske faze. S otpuštanjem proteina potencijalno moglo biti događa samo u In vitro
rasta H. pylori
. Međutim, in vivo pregled postojanje takvih mehanizama, ako je pokazao, možda bi mogli objasniti ulogu različitih izlučenih proteina u molekularnoj patologiji ulkusne bolesti. Ulazak H. pylori pregled proteini u želučanom submukozne prostor može imati značajne funkcionalne posljedice kao što je poticanje kemotaksije i proinflamatornih odgovora kroz oslobađanje citokina iz aktiviranih makrofaga. Također, s otpuštanjem i ili adsorpcije ili površinski lokalizacija [26] potencijalno imunogenih proteina može podržavati bakterijsku strategiju za preusmjeravanje učinkovitu lokalnu imunološku reakciju [23]. Imajući ove višestruke mehanizme u vidu, provjerili smo proupalnih potencijale ICD uz pomoć IL-8 ELISA testom. U našem opažanju, ICD nije značajno inducira sekreciju IL-8 u diferenciranim, kulturi makrofaga. Međutim, budući da nismo analizirati ulogu ICD Što se tiče indukcije drugih proupalnih citokina kao što je TNF-a i IL-1-p, to će biti prerano pravom isključila svoj angažman u želučanom upalom. Pregled

Nakon što je prikazano da H. pylori pregled ICD izaziva humoralni odgovor, mi istraživali osnovu imunološkog specifičnosti ovog proteina što se očituje u strukturi modeliranje. Naš slijed analize i molekularne modeliranje H. pylori pregled i E. coli pregled ICD nije otkrio kompletnu strukturne podudarnosti između dva (slika 1); nekoliko područja strukturnih nejednakosti su razaznati koji eventualno odgovaraju pretpostavljenim antigenske epitope u H. pylori
ICD. Osim pitanja vezanih uz strukturne očuvanje ili različitosti, možemo pretpostaviti da je veća reaktivnost H. pylori
ICD u usporedbi s ICD od (istim stolom) E. coli pregled kod imunosnog sustava domaćina in vivo pregled mogao biti povezan s 1) različite invazivnosti H. pylori pregled i E. coli pregled 2) različite veličine bakterijskog opterećenja, prometa i autolize 3) različit repertoar stanicama s antigenom (makrofaga u odnosu na dendritičke stanice) koji su uključeni i njihova relativna gustoća 4) dostupnosti površina izloženih epitopa u H. pylori
ICD (kao i one istaknute na slici 1B) i 5) prisutnost aktivnih lezija kronične upale, sluznice oštećenja i kemotaksije učincima druge H. pylori pregled proteini u miljea Netlogu.

Dok obzirom moguću križnu reaktivnost s drugim invazivnim bakterijama kao što su C. jejuni pregled, testirali smo H. pylori
ICD protiv 8 uzoraka C. jejuni pregled enteritis pacijent serumi i utvrdili da nije značajno unakrsno reagirati (podaci nisu prikazani). H. pylori preuzimanje Free status naše C. jejuni pregled pozitivnih bolesnika utvrđena je na temelju odsutnosti simptoma loše probave, bolovi u trbuhu i žgaravica itd Međutim, budući da smo koristili samo ograničene uzorke seruma iz C. jejuni pregled pacijenata, nismo skloni marke H. pylori
ICD kao samostalni dijagnostički antigena. Ipak, C. jejuni pregled ne mora uvijek sadržavati više konkurentan pozadinu osim ako C. jejuni pregled pacijenti sami klinički su kolonizirali H. pylori
ili obratno. pregled

Na kraju, obećavajuće rezultate dobili smo u pogledu značajnih humoralnog odgovora na H. pylori pregled ICD ne može se tumačiti kao neposredno se primjenjuje za dijagnostiku na razini polja. Ipak, moguće je da su naši rezultati daju čvrste temelje za razvoj sero-dijagnostički test za H. pylori
povezana gastroduodenalnog patologija. Predlažemo potencijal ovog antigena i njegovog epitopa specifičnih peptida može se dalje analizirani pomoću veliku bateriju uzoraka seruma koji predstavljaju različite predmete bolesti. Slično, stanje i značaj unakrsno-reaktivne antitijela u serumu odgovara bolesti uzrokovanih bakterijama, kao što su Salmonella spp., Shigella spp. i druge invazivne enteropathogens također može biti određena. To će biti vrijedno istražiti u dubini uključenosti ICD u signalizacije aktivnosti u submukozne prostoru, posebno njegove interakcije s aktiviranih makrofaga i limfocita. Isto tako, s obzirom na važnu ulogu u ciklusu trikarboksilnakiselina i odsutnost glioksilatnog shunt u H. pylori pregled [27], evaluacija ICD kao mogući interventni cilja predstavlja uzbudljiv prijedlog. pregled

Materijali i metode pregled

U kompjutora antigeničnosti predviđenim H. pylori ICD (HP0023)

slijeda nukleotida u H. pylori ICD pregled (ORF HP0023) i odgovarajućoj sekvenci amino kiselina je dobivena iz Pylorigene baze (http://genolist.pasteur.fr) te je podvrgnut analizu DNAStar paketa (DNAStar Inc. Madison, USA). Aminokiselinski slijed ICD podvrgnut je ispitivanju za sve antigenske determinante pomoću Protean programa u DNAStar paket. Parametri kao što su hidrofilnosti, površine vjerojatnost i antigenske indeksa izračunate su za cijelu proteina pomoću ovog softvera. Antigeni su indeksi koji pokazuju više od 2 maksimume na > 3,0 vage su smatrane znatno antigeni pregled

Računarski modeliranje ICD strukture pregled

Korištenje modelara-6, program za molekularno modeliranje koji implementira automatizirani pristup. modeliranju komparativnoj protein struktura po zadovoljstvo prostornih naslona [28] se koristi za određivanje trodimenzionalni model H. pylori
ICD. ICD model H. pylori pregled generiran na osnovu E. coli pregled ICD predložak 1A12 koji dijeli ukupnu 68% identičnosti sekvence s H. pylori
ICD. pregled

Proizvodnja rekombinantni H. pylori ICD pregled

ORF odgovara H. pylori ICD pregled (HP0023, 1.275 kb) povećan je pomoću PCR iz genomske DNA H. pylori pregled pacijenta izolirati MS8. Rekombinantni ICD protein je više izražen u E. coli pregled i pročišćen do homogenosti (slika 2), u skladu s ranije opisanim postupcima prema Banerjee sur pregled [24]. Žetva pročišćenog proteina je standardiziran do 2,0 mg pročišćenog proteina po 500 ml počevši kulture rekombinantnog E. coli pregled. Pročišćeni rekombinantni protein je dijaliziran od 20 mM Tris HCl, pH 7,5, sa 100 mM NaCl i 3% -tni glicerol. Nadalje, pročišćeni protein je tretirana s polimiksin B isključiti učinke bilo LPS kontaminacije. Pročišćeni rekombinantni ICD je liofilizirana i odmah smrznuti za nizvodnom upotrebu u kliničkom dijagnozom. Pregled

Pacijenti i uzorci humanog seruma

Istraživanje populacija ( n pregled = 82) koji se sastoji 58 H. pylori
zaraženi uzorak pacijenta (za detalje o broju slučajeva analiziranih u svakoj kategoriji, molimo vidi sliku 3) dobivene od slučajeva izvještavaju uglavnom Dekana fakulteta medicinskih znanosti i srodnim Bolnice, (DKP), Hyderabad, a 24 klinički zdrava donatori. Zdrava kontrolna skupina je sastavljena od 18 dokazane H. pylori pregled negativni slučajevi testiran s Urea daha ispitivanje (UBA) i 6 asimptomatskih pojedinaca koji su potvrđeni H. pylori
negativni testirani ELISA kompleta dostupnog (Pyloriset EIA-GIII, Orion, Espoo, Finska). U svim skupinama bolesnika, dijagnoza ulkus ili gastritis potvrđena ili isključena endoskopije koji prati gastroenterolog. Prisutnost H. pylori
kod bolesnih ispitanika u ovom istraživanju je prethodno potvrdio Gram bojanja, brzo ureaza testom (RUT), 16S rRNA i CAG pregled Gen temelje PCR i kulture [29]. Istraživanjem su imali spol ili dob pristranost. Pismeni informirani pristanak dobiven je od svih bolesnika i zdravih kontrola na odgovarajućim centrima. Pregled

ELISA za humoralne reakcije

ELISA test je izveden kako bi provjerili humoralni imuni odgovor kod ljudi u odnosu rekombinantni ICD. Ukratko, mikrotitarske ploče s 96 jažica obložene su s ~500 ng rekombinantnog ICD proteina. Obložene Ploče su inkubirane preko noći na 4 ° C, isprane tri puta s PBS-T (0.05% Tween 20 u 1 × PBS), te dva puta s PBS. Ploče su zatim blokirane s 100 ul pufera za blokiranje (2% BSA u 1 × PBS) pri 37 ° C kroz 2 sata. Ploče su isprane tri puta s puferom za ispiranje PBS-T i dva puta s PBS-om. H. pylori pregled -infected humani serum pripadaju različitim kliničkim skupine su serijski razrijeđeni (1:50, 1:100, 1:200 i 1:400) u puferu za blokiranje (1% BSA u PBS-u), kako bi se dobio optimalni antitijela. Razrijeđen sera [50 ul razrijeđenog seruma 1:200] dodani su u jažice obložene antigen i inkubira 1 sat na 37 ° C. Ploče su isprane tri puta s PBS-T i dva puta s PBS te dalje inkubirane s anti-humanim IgG peroksidaze hrena (Sigma) na 37 ° C tijekom 1 sata. Aktivnost peroksidaze iz hrena bila detektirana kromogenim tvar, O pregled -phenylenediamine tetrahidroklorid (Sigma) u citrat-fosfatnog pufera (pH 5.4), 'H-sub> 2O _{2 kao 1 ul /ml. Reakcije su zaustavljene s 0,5 M H 2SO 4, te je očitana apsorbancija na 492 nm u ELISA čitaču (Bio-Rad). Svaki ELISA ponovljen je najmanje dva puta sa svih kliničkih seruma izolata. Student je t pregled ispitivanje provedeno je izračunati p
vrijednosti temelji na sredstvima titra seruma antitijela koja odgovaraju zdravih i oboljelih klasa korištenjem online znanstveni kalkulator za GraphPad (www.graphpad.com_quickcalcs_ttest1 .cfm). P pregled vrijednosti manje od 0,05 smatrane su statistički značajne. Pregled}

ELISA za proupalnih citokina IL-8 pregled

Stanice THP-1 (humani monocita, ATCC TIB 202) rasle su i održavane u RPMI 1640 (Invitrogen) s dodatkom 10% fetalnog goveđeg seruma, 2 mM glutamina i 1% anti-bakterijskog i anti-gljivičnih otopinom (Gibco). Za makrofage, kao fazu, oko 1 × 10 ^{-6 stanica /jažica diferencirane 5 ng /mL forbol-12-miristat 13C-acetata (PMA, Sigma). Nakon 24 sata, stanice su jednom isprane s RPMI 1640 medija i stimulirane s 10 ug /ml rekombinantnog ICD. Proupalnu protein, HP940, u H. pylori pregled [30], pročišćen pod sličnim uvjetima se koristi kao pozitivna kontrola (1 ug /ml). Stanice su inkubirane 24 sata u vlažnoj atmosferi na 37 ° C. Stanice bez tretmana proteina (nestimulirane stanice) služili su kao negativna kontrola. Supernatant kulture sakupljen nakon 24 sata je korišten za procjenu IL-8 koristeći komercijalno dostupan OptEIA ELISA kompletom (BD Biosciences). Test je izveden u skladu s uputama proizvođača i razine citokina izračunate su pomoću rekombinantnog standarda isporučenu u kompletu. Osjetljivost IL-8 je 3,1 pg /ml. Vrijednosti su izražene kao srednja vrijednost ± SD. Pregled}

Izvori pregled

Mi smo zahvalni Seyed E. Hasnain i Sharmistha Banerjee za rasprave. Zahvaljujemo našim suradnicima CM Habibullah i Barik Salih pomoć na materijalu pacijenta i informacija. Hvala također zbog Franje Megraud za pružanje različitih uzoraka kontrolnih seruma. NA je odgovarajuća suradnik za europske Helicobacter Study Group (EHSG). Pregled