Létrehozása és jellemzése egy metasztázis modell a humán gyomorrák meztelen egerekben

Létrehozása és jellemzése egy metasztázis modell a humán gyomorrák nude egerekben
Abstract
alapon
egy egérmodelljében metasztázis humán gyomorrák egyik legfontosabb eszköze tanulmányozására biológiai mechanizmusok mögöttes emberi gyomorrák áttétek. Ebben a tanulmányban, létrehoztunk egy egér modelljét metasztatikus humán gyomorrák nude egerekben, amely magasabb a daganat kialakulásának, valamint az áttétek mint a meglévő modelleket. Katalógusa Módszerek
előállítása A egérmodelljének metasztatikus humán gyomorrák, friss tumorszövetekben betegekből származó, amelyek a műtét gyomorrák szubkután beültetett a jobb és a bal groins meztelen egerekben. Amikor a beültetett szövet nőtt 1 köbcentiméter, az egereket leöltük, és a tumor szövetek vizsgált és kimetszettük. A tumor szöveteket beültettük meztelen egerekbe, és alávetni patológiai vizsgálatok, immunhisztokémiai festéssel, és a valós idejű PCR citokeratin 8/18 (CK8 /18), E-cadherin, a vaszkuláris sejtadhéziós molekula-1 (VCAM-1) és az intercelluláris adhéziós molekula-1 (ICAM-1). Az egereket szintén analizáltuk metasztázis azok hashártya, hasi üreg, és a belső szervek által kórszövettani vizsgálat. A szöveteket gyűjtöttünk Ezeket a szerveket megvizsgáltuk patológia.
Eredmények
után tíz generáció implantáció, minden egér kifejlesztett tumor növekedését a beültetett helyzetben, 94% -a az egerek kifejlesztett metasztázis a retroperitoneumban és zsigerek. A beültetett és metasztatikus tumor megtartotta hisztológiai jellemzői minden generáció, és metasztázis volt megfigyelhető a nyelőcső, a gyomor, a lép, máj, vese, mellékvese, vastagbél, és a hasnyálmirigy. Ezek a metasztatikus tumorok nem mutattak detektálható expresszióját CK8 /18, E-cadherin, VCAM-1 és ICAM-1.
Következtetések
Ez a modell szolgálhat értékes eszköz megértéséhez metasztatikus folyamat az emberi gyomorrák.
Kulcsszavak katalógusa jellemzése Establishment gyomorrák metasztázis egér modellek Háttér katalógusa gyomorrák a negyedik leggyakoribb rosszindulatú daganat, és a második vezető oka a rákos halálesetek csak a tüdőrák a világon. [1] Bár a betegek prognózisát a korai gyomorrák meghosszabbították egyértelműen a jelenlegi módszerek diagnózis és a kezelés, az 5 éves túlélés a diagnózis felállítása után a gyomorrák betegek valamennyi szakaszban < 50% [2]. Metasztázis számlák részben a magas halálozási arány a gyomorrák. A betegek aránya gyomorrák haldokló hashártya áttét mintegy 50% [3]. Ezért áttétek vált hangsúly sok gyomorrák tanulmányokat. Metasztázis egy nagyon összetett folyamat, amely több, egymást követő lépéseket [4]. Kapcsolatos gének sejtadhézió, motilitás, proliferáció, túlélés, az anyagcserét, és a jelátvitel fontos szerepet játszanak a rák metasztázis [5-8]. Hogy ezek a fehérjék közös munka elősegítése metasztázis marad kevéssé ismert.
Egérmodell- áttétes gyomorrák rendkívül értékes eszköz, hogy megértsék az áttétes folyamat. Az első humán karcinóma modell nude egerekben 1969-ben alakult meg Rygaard és Povlsen keresztül hypodermical foglalja humán vastagbél rákos szövetek [9]. Bár az átültetett daganat megőrizte rosszindulatú jellemzőit, elvesztette a metasztatikus potenciál, és az eredeti szerkezetét és viselkedését a daganat változott [10]. Egy metasztatikus modellje az emberi vastagbélrák először kialakításra, Morikawa 1988 humán vastagbél rákos sejteket subserously beültettük vakbél [11]. Ez a modell azt mutatta, orthotopikus a tumor növekedését és a máj metasztázis. Furukawa tovább módosíthatjuk ezt a modellt a 1993 sebészileg varrás humán gyomorrák szövetet a tunica serosa gastria nude egerek [12]. Ez a modell fejlődtek ki tumorok robusztus és mutatott egy nagyon magas aránya metasztázis a májban. Mivel zavar a tapadás a tumorszövet megváltoztatja annak biológiai és rosszindulatú viselkedés, az egér leírt modellek megtartotta a integritását a tumorok, amely lehetővé teszi egy "beteg-szerű-modell" [13, 14]. A továbbiakban számos egér modell a metasztatikus humán gyomorrák által generált ortotopikus transzplantáció gyomorrák szövet [15-18].
A egér modell a metasztatikus humán gyomorrák számoltak be eddig jelentenek többszörös kihívásokra; a orthotic beültetés meztelen egerekbe szükséges műtétet, és a tumor szövetek beültetett származnak humán gyomorrák sejtvonal helyett betegeknél. Ennek eredményeképpen az eljárás hosszadalmas, és okozhat súlyos vérzést és a halál egerekben. Továbbá, bár az arány a ortotopikus tumorképződés közel 80-100%, az arány a metasztázis nem olyan magas; a máj tumor metasztatikus arányok voltak 45-60% [16, 17], és hogy a hashártya egy csupán 40% [18]. Így létrehozása ezen egérmodellben hasznot húzhat a továbbfejlesztett módszerek, amelyek a transzplantációs könnyebb és az eredmény egy erőteljesebb metasztázis. Ebben a jelentésben leírtuk, egér modellben metasztatikus humán gyomorrák, amely kitér a problémák a korábbi egér modellek. Hoztuk létre egérmodellben metasztatikus humán gyomorrák szubkután beültetés daganatos szövetek származó műtéti közvetlenül gyomorrákos betegeknél. Összehasonlítva más egérmodellben korábban leírt, az egér modell képezi tumorok nagy sebességgel és ami még fontosabb, azt mutatja, robusztus áttét. Katalógusa módszerek katalógusa Etikai nyilatkozat Tanuld az összes protokollok használatával járó kísérleti állatokban és daganatos szöveteket gyomorrákos betegeknél ebben a vizsgálatban résztvevő által jóváhagyott Etikai Bizottsága Medicine and Science Research Institute Gansu tartomány (laboratóriumi állatok tudomány csoport és a klinikai vizsgálatban csoport, hivatkozási szám: P201108150024), hogy a jóváhagyott programok szerepelnek a gyűjtése, feldolgozása és beültetése tumor származó szöveteket betegek gyomorrák, és a reszekció, tárolása és vizsgálata daganatos szövetek csupasz egerekben. Minden vizsgálatban résztvevők informált beleegyező, hogy vegyenek részt a vizsgálatban. Katalógusa Állatok és klinikai tumor szövetek katalógusa BALB /C nude egerekben 4-6 hetes korban 16-18 g tömegű, hím és nőstény, adtak Shanghai tumor Intézet és nevelt sajátos patogénmentes (SPF) állapotban. Daganatszöveteken nyerték gyomorrákos betegeknél műtéten átesett a Gansu Tumor Kórház. A friss daganatszöveteken ültettünk után azonnal ellátjuk. A klinikai adatok a betegek táblázat sorolja 1.Table 1. A klinikai adatok katalógusa Samplea Matton kórszövettani osztályozás Matton klinikai szakaszban
Rate nyirokcsomó-metasztázis katalógusa
1. katalógusa rosszul differenciált adenocarcinoma katalógusa PT4aN3a M0 lile
30/07 katalógusa 2. katalógusa közepesen differenciált adenocarcinoma katalógusa PT4aN0M0 IIb katalógusa 0/12 katalógusa 3. katalógusa colitis írja közepesen differenciált adenocarcinoma katalógusa PT4aN0M0 IIb
0/30 katalógusa 4. katalógusa rosszul differenciált adenocarcinoma katalógusa PT4aN3a M0 lile
16/17 katalógusa a1st és 4. gyomorrák szövet volt gyengén differenciált adenocarcinoma és nyirokcsomó áttétek. 2. és 3. mérsékelten differenciált adenocarcinoma és nincs nyirokcsomó-metasztázist
szubkután beültetésére friss tumorszövetekben meztelen egerekbe
friss tumorszövetekben kimetszett betegekből gyomorrák vágtunk 1 köbmilliméternyi darabokat, amelyeket hígítjuk DMEM közepes, majd szubkután beültettük a jobb és a bal hónalj és groins csupasz egerek 16-gague tű aszeptikus körülmények között. Minden mintát beültetett négy egér, 5-6 darab (0,8 ml) egerenként. A csupasz egereket később nevelt SPF állapotban, és a tumor növekedés csupasz egerekben vizsgáltuk naponta. Miután a tumor a csupasz egerekben nőtt 1 köbcentiméter, az egeret megöljük, és a tumor szövetek vizsgált és kimetszett az aszeptikus állapotban. A tumorszövet minden egyes egérből elválasztjuk három részre - az egyik használtuk egy újabb beültetés meztelen egerekbe, a másik rögzített 10% -os formaldehidben patológiai vizsgálat és immunhisztokémiai (IHC) festést a CK8 /18, E-cadherin, VCAM-1 és ICAM-1, a harmadik folyékony nitrogénben tároljuk, és -80 ° C-on, valós idejű PCR analízise CK8 /18, E-cadherin, VCAM-1 és ICAM-1. Az egereket felboncoltuk és megvizsgáltuk a tumor metasztázis azok hashártya, hasi üreg, máj, lép, gyomor, belek, vese, tüdő, és az agy. Összegyűjtött szöveteket rögzítettük 10% -os formaldehidben a patológiai vizsgálat.
Létrehozása és jellemzése egérmodelljében metasztatikus humán gyomorrák katalógusa A kimetszett tumorszövetet szubkután implantált, hogy a jobb és a bal groins 5 csupasz egerek aszeptikus körülmények között használva 5-6 darab (0,8 ml) egerenként. A vágási és hígító tumorszövet, növekedési vizsgálat és eltávolítását a daganat a csupasz egerekben, tárolása és vizsgálata a beültetett tumor szövetekben, metasztatikus tumor szövetekben, és az egér szervek dolgozták a fent leírtak szerint. Beültetett daganat szövetekből passzáltuk tíz generáció.
Vizsgálva hatását az implantáció helyén az arány a metasztázis
Mint leírtuk, a beültetett humán gyomorrák szövetet nude egerekben szubkután implantálunk három csoporttal nude egerek különböző oldalak aszeptikus körülmények között. Átlagosan 5-6 darab ültettünk egerekbe, az egyik csoport kapó a szöveteket a jobb és bal groins, a másik csoport a jobb és bal hónalj, és a harmadik két helyen a hátsó. Amint fentebb említettük, a növekedés vizsgálata és eltávolítását a daganat a csupasz egerekben került feldolgozásra. További elemzések szerepelnek vizsgálata tumor növekedését a különböző helyszínek és áttét a hashártya és a hasüregbe. Katalógusa beültetése, valamint az áttétek a korábban lefagyasztott és passaged emberi gyomor rákos szövetet nude egerekben katalógusa A beültetett emberi gyomorrák szövetek passaged származó negyedik és nyolcadik generációs implantációval csupasz egereket folyékony nitrogénben tároltunk, és szubkután beültettük meztelen egerekbe a jobb és a bal groins a fent leírtak szerint. További elemzések szerepelnek vizsgálata tumor növekedését a különböző helyszínek és áttét a hashártya és a hasüregbe. Katalógusa patológiai vizsgálata a beültetett és metasztatikus emberi gyomorban szöveteket a csupasz egerek katalógusa A beültetett és metasztatikus humán gyomorrák szöveteket a csupasz egereket rögzített 10% -os formaldehid, paraffinba ágyaztuk, vágott szakaszok, megfestettük hematoxilin-eozin-festéssel (HE). A tárgylemezeket alkalmazásával értékeltük Olympus BX50 fénymikroszkóp, és a kép megszerzését végeztük Mias kóros munkaállomás 4.0 rendszer.
IHC festést
expressziós szintjét az E-cadherin, VCAM-1, ICAM-1, és CK8 /18 vizsgáltuk immunhisztokémiai a beültetett és metasztatikus tumoros szövetek meztelen egerek és a sebészeti mintákban használt implantációhoz. Szakasz festésére alkalmazzák kaptuk műtéti mintából származó, a beültetett és metasztatikus tumoros szövetekben, és a szöveteket tartalmazó metasztatikus tumorok. Reagensek festésére alkalmazzák voltak SP-9000 Histostain ™ -PLUS Kits, 3-3' diaminobenzidin-tetrahidroklorid (DAB) Kit-ek, primer egér monoklonális antitestek elleni E-kadherin (1: 200 hígítás), ICAM-1 (1: 500 hígítás) , és az elsődleges nyúl poliklonális antitest ellen VCAM-1 (1: 500 hígításban) (Peking Zhongshan Golden Bridge Biotechnology Co. Ltd., Peking, Kína). Az IHC-festéssel metszeteket egymástól függetlenül két patológusok, és e különbség a döntés kimenetele megoldódott konszenzussal. Festés intenzitása értékelték negatív, gyenge, közepes vagy erős. A fénymikroszkóp és képrögzítő szoftver ugyanaz volt, mint fent.
Teljes RNS extrakció és real-time PCR katalógusa teljes RNS-a Trizol (Sheng gong Biotechnology, Shanghai, Kína) a beültetett és metasztatikus tumor szövetek, nőtt csupasz egerekben, és a sebészeti mintákban való beültetésre használják, a gyártó utasításait követve. A cDNS-t szintetizálunk reverz transzkriptáz (Sheng gong Biotechnology) szerint a gyártó ajánlásainak megfelelően. A SYBR premix Ex TaqTM (TaKaRa Biotechnology, Dalian, Kína) alkalmaztunk a real-time PCR. A 20 ul reakció tartalmazott 10 ul SYBR premix Ex TaqTM, 1 ul DNS-templát, 0,4 ul primer, és 8,2 ul dH 20. A PCR ciklus feltétel volt: 37 ° C-on 5 percig, 95 ° C-on 30 s, és 40 ciklus 95 ° C-on 5 s és 60 ° C-on 30 másodpercig. A β-aktin mRNS-t alkalmazunk belső kontroll, és a reakcióelegyet keverék nélkül a templát DNS-t használjuk negatív kontrollként. Az összes mintát mértük 3-szor egymástól függetlenül, és a kvantitatív PCR adatokat elemeztük az összehasonlító CT módszer. Röviden, a különbség a ciklus küszöböt, ΔCT, határoztuk meg a különbség a vizsgált gén és a humán β-aktin. Ezután kapott ΔΔCT találd meg a különbséget a két csoport között. A szoros változást számították 2 -ΔΔCT. A primereket táblázatban felsorolt ​​2.Table 2 használt primerek a valós idejű PCR-
Gene
Forward primer
Fordított primer

β-actin
5'-TGGCACCCAGCA
5'-CTAAGTCATAGT
CAATGAA-3'
CCGCCTAGAAGCA-3'
E-cadherin
5'-GAGTGCCAACTG
5'-AGTCACCCACCT
GACCATTCAGTA-3'
CTAAGGCCATC-3'
ICAM-1
5'-TGTATGAACTGA
5'-CACCTGGCAGCG
GCAATGTGCAAGA-3'
TAGGGTAA-3'
VCAM-1
5'-GGCGCCTATACC
5'-AGAGCACGAGAA
ATCCGAAA-3'
GCTCAGGAGAA-3'
Eredmények
Tumor képződés és metasztázis
A négy implantált egerekben, az 1. sebészeti mintákban, csak egy kifejlesztett tumor helyén a beültetés 76 napos (1A.). Huszonöt nappal később az egeret megöljük, és elemeztük a daganatok. A daganatos szövetet átlagosan 1 köbcentiméter méretű, megjelenik egy sértetlen borítékban és kemény textúra (ábra. 1b). Metasztázis a retroperitoneumban találták szemrevételezéssel (ábra. 1c). Nem metasztázist detektáltunk, a hashártya, hasi üreg, máj, lép, gyomor, belek, vese, tüdő, és az agy. Ábra. 1 áttétes daganat növekedését a beültetett gyomorrák szövetben műtétileg (X 400). a, b: Beültetett rákos szövet nőtt ~ 1 köbcentiméter, és megjelenik egy intakt borítékot, és kemény textúra; c tumor áttétes az egérbe retroperitoneum; D, E: A beültetett szövet és metasztatikus tumorok állt gyengén differenciált karcinóma sejtek és néhány mesenchyma sejtek és a véredények, némi hasonlóságot mirigyes üreg. A rákos sejtek esetében sötétre pácolt magok és alig citoplazma és hiányzott a szokásos arányát sejtmagban és a citoplazmában; F: beültetett daganat mutató szövet beszűrődés
Patológiai elemzés kimutatta, hogy a beültetett és metasztatikus tumoros szövetekben állt gyengén differenciálódott karcinóma sejteket, és csak egy kis mesenchyma és érbe. Ezeket a szöveteket jelennek szórt, hiányzott szerkezetét, és hasonlítanak mirigyes lumen. Továbbá a sejtek jelennek meg sötét pácolt magok, csekély citoplazma, és misproportioned sejtmagok és a citoplazmában (ábra. 1d, E, F). Hasonló eredményeket kaptunk egy párhuzamos vizsgálatban, amelybe beültetése a tumorszövetben, 4 egerek; csak egy egér kifejlesztett tumor (átlagos méret: 1,5 köbcentiméter) 26 nappal a beültetés után. Nem metasztázis volt megfigyelhető a hashártya, hasi üreg, máj, lép, gyomor, belek, vese, tüdő, és az agy. A másik implantált egerekben, a 2. és 4. sebészeti mintákban nem mutatott a tumor növekedését.
Stabilitás a beültetett daganat való bejutást követően több generációját
a daganatot, hogy fejlődött ki az 1. sebészeti minta passzáltuk tíz generáció. Az arány a tumor növekedésének 100% volt, és hogy a metasztázis retroperitoneumban és zsigerek volt 80-100% (átlag 94%), függetlenül attól, hogy a primer szövetet használjuk friss vagy fagyasztott (3. táblázat). A zsigereket metasztázis volt megfigyelhető a nyirokcsomókban körül a nyelőcső, az alábbiakban gyomor nyálkahártya, tunica serosa gastria, lép, máj portál terület, központi venae és a sinus hepaticus, máj parenchyma, a máj kapszula, vese köldökseb, vese parenchima, mellékvese, vastagbél serosa, hasnyálmirigy és spermaduct (ábra. 2). A generációs idő 16 days.Table 3 Stabilitás és mértéke metasztázis tumorok beültetett különböző positionsa katalógusa Változó Matton Nem Matton növekedés beültetett helyzetben (%) Matton metasztázis retroperitoneum (%) Matton zsigereket (%) Matton generációs idő (nap) Matton Passage száma
1. katalógusa 5 katalógusa 100 (05/05 ) hotelben 100 (5/5) hotelben 80 (4/5) hotelben 20 katalógusa 2. katalógusa 5 katalógusa 100 (5/5) hotelben 80 (05/04)
100 (5/5) hotelben 14 katalógusa 3. katalógusa 5 katalógusa 100 (5/5) hotelben 100 (5/5) hotelben 80 (4/5) hotelben 14 katalógusa 4. katalógusa 5 katalógusa 100 (5/5) hotelben 80 (4/5) hotelben 100 (5/5) hotelben 15 katalógusa 5. katalógusa 5
100 (5/5) hotelben 100 (5/5) hotelben 80 (4/5) hotelben 14 katalógusa 6. katalógusa 5 katalógusa 100 (5/5) hotelben 80 (4/5) hotelben 100 (5/5) hotelben 13 katalógusa 7. katalógusa 5 katalógusa 100 (5/5) hotelben 100 (5/5) hotelben 100 (5 /5) hotelben 17 katalógusa 8. katalógusa 5 katalógusa 100 (5/5) hotelben 100 (5/5) hotelben 100 (5/5) hotelben 18 katalógusa 9.
5
100 (5/5) hotelben 100 (5/5) hotelben 100 (5/5) hotelben 17 katalógusa 10. katalógusa 5 katalógusa 100 (5 /5) hotelben 100 (5/5) hotelben 100 (5/5) hotelben 18 katalógusa folyékony nitrogénben tárolják katalógusa 4. katalógusa 5 katalógusa 100 (05/05)
100 (5/5) hotelben 100 (5/5) hotelben 17 katalógusa 8. katalógusa 5 katalógusa 100 (5/5) hotelben 100 (5/5) hotelben 100 (5/5) hotelben 18 katalógusa beültetés különböző helyzetben katalógusa groins katalógusa 50 katalógusa 100 (50/50) hotelben 94 (47/50) hotelben 94 (47/50 ) hotelben 16 katalógusa Vissza
10 katalógusa 100 (10/10) hotelben 30 (3/10) hotelben 10 (10/01) hotelben 20 katalógusa Hónalj
10 katalógusa 100 (10/10) hotelben 0 (0/10) hotelben 30 (3/10) hotelben 14 katalógusa a tíz generáció beültetés minden egereknek tumor növekedését a beültetett helyzetben, és 94% -a az egereknek áttét a retroperitoneum és zsigerek, függetlenül attól, hogy a daganat forrása volt friss vagy fagyasztott. Az átlagos ideje viselő tumor 16 nap. A lágyéki egerek legjobb implantáció helyzetét, így a 94% retroperitoneumban zsigerek metasztázis katalógusa ábra. 2 patológiai vizsgálata a daganat áttéteket a zsigerek (X 100). Micro-metasztázis volt megfigyelhető a nyirokcsomókban körül a nyelőcső (A), az alábbiakban a gyomornyálkahártya (B), és más területeken, mint például tunica serosa gastria (C), parenchyma alatt hepatikus kapszula (D), máj portál terület (e ), sinus hepaticus (f), lép (g), venae centrals hepatikus (H), hasnyálmirigy (I), a vese köldökseb (J), a vese parenchima (K), a mellékvesében (L), a belek serosa (m), spermaduct (N), és a tüdő (O)
aránya metasztázis a daganat ültetik különböző pozíciókban
Implantációs különböző pozíciókba befolyásolta az arány a metasztázis, de nem az arány a tumor növekedését. Beültetésre az ágyék eredményezett 94% retroperitoneumban és zsigerek metasztázis; beültetés a hátsó vezetett 30% retroperitoneumban metasztázis és 10% zsigerek metasztázis; beültetésre hónalj nem eredményezett retroperitoneumban metasztázis és 20% zsigerek áttét. A generációs idő volt: 16 nap tumorok beültetett a groins, 20 nap azok számára, beültetett a hátsó, és 14 nappal azok számára, beültetett a hónalj (3. táblázat). A metasztatikus zsigerek tartalmazza májban (50%), vese (44%), a bélben (28%), a nyelőcső (12%), a hasnyálmirigy (12%), gyomor (6%), a lép (6%), és spermaduct (6 %) (4. táblázat) .table 4 metasztázis a visceraa katalógusa beültetett helyzetben Matton Nem Matton zsigerek metasztázis (%) Matton Máj (%) hotelben
Vese (%) Matton bél (%) Matton nyelőcső (%) Matton Pancreas (%) Matton Gyomor (%) hotelben
Spleen (%) Matton Spermaduct (%) Matton groins katalógusa 50 katalógusa 94 (47/50) hotelben 50 (25/50) hotelben 44 ( 22/50) hotelben 28 (14/50) hotelben 12 (6/50) hotelben 12 (6/50) hotelben 6 (3/50) hotelben 6 (3/50)
6 (3/50) hotelben Vissza katalógusa 10 katalógusa 10 (10/01) hotelben 0 katalógusa 0 katalógusa 0 katalógusa 0 katalógusa 0 katalógusa 10 ( 10/01) hotelben 10 (10/01) hotelben 0 katalógusa Hónalj katalógusa 10 katalógusa 30 (3/10) hotelben 20 (2/10) hotelben 0 katalógusa 0 katalógusa 10 (10/01) hotelben 0 katalógusa 0 katalógusa 0 katalógusa 0 katalógusa a máj és a vese a zsigerek legmagasabb a metasztázis (44-50%), és a gyomor, a lép és spermaduct volt a legalacsonyabb (6%)
jellemzése a beültetett és metasztatikus tumor
az IHC és real-time PCR-eredmények azt mutatták, hogy az ICAM-1, VCAM-1 és CK8 /18, de nem E-cadherin, túlnyomórészt kifejezett műtét és a beültetett tumor primer és az első generációs (ábra. 3). Amint az 5. táblázatban látható, az elsődleges és a első generációs a tumor mutatott pozitív festődést VCAM-1 és CK8 /18, de az azt követő generációk mutatott gyenge festődést ezeket a fehérjéket: a VCAM-1 festődést pontoztuk mérsékelten pozitív (++) az elsődleges, gyenge jel (+) az első generáció, és CK8 /18 festést szerzett, mint a gyenge jel (+) az első generáció. Daganatok minden szakaszában mutatott negatív festéssel az E-cadherin, míg a metasztatikus tumor egyáltalán generáció mutatott negatív festéssel az E-kadherin, ICAM-1, VCAM-1, és CK8 /18. Ami a átiratok, észleltünk a VCAM-1 mRNS a primer és az első generációs beültetett tumor, de nem a metasztatikus szakaszban. E-kadherin és az ICAM-1-transzkriptumok nem voltak kimutathatók minden generáció a beültetett és metasztatikus tumorok. Ábra. 3 IHC expressziójának vizsgálata az E-cadherin, VCAM-1, ICAM-1 és CK8 /18 (x 200). CK8 /18 expresszió kimutatható volt a sebészeti minta beültetésre használják fel az (A) és a primer implantált tumor szövetekben (b), de nem az F1 generációban beültetett tumor szövetekben (c), a VCAM-1-ben kifejezve a sebészeti mintát ( d), és az elsődleges implantált tumor szövetekben (e), de nem az F2 generációs beültetett tumor szövetekben (f). E-cadherin expresszió nem volt kimutatható a sebészeti minta (g) és a primer implantált tumor szövetekben (H). Az ICAM-1-ben kifejezve a sebészeti minta (I), de nem az elsődleges implantált tumor szövetekben (j) katalógusa 5. táblázat expressziója az E-cadherin, ICAM-1, VCAM-1 és CK8 /18 a daganatok műtét, a beültetés és közben metasztázis katalógusa változó Matton Nem Matton Protein expressiona Matton mRNS expressiona

E-cadherin

ICAM-1

VCAM-1

CK8/18

E-cadherin

ICAM-1

VCAM-1

surgical mintának katalógusa 1 -
+++ +++ katalógusa katalógusa +++ katalógusa Elsődleges katalógusa 1 katalógusa beültetett tumor
- -
++ katalógusa + katalógusa 0 katalógusa 0 katalógusa 0,0927 katalógusa áttétes daganat
- - -
- www.Booked.hu 0 katalógusa 0
0 katalógusa 1. katalógusa 5 katalógusa beültetett tumor katalógusa - (0/5) hotelben - (0/5) hotelben + (5/5) hotelben - (0/5 ) hotelben 0 katalógusa 0 katalógusa 0,1997 katalógusa áttétes daganat katalógusa - (0/5) hotelben - (0/5) hotelben - (5/5) hotelben - ( 0/5) hotelben 0 katalógusa 0 katalógusa 0 katalógusa 2. ~ 10. katalógusa 45 katalógusa beültetett tumor katalógusa - (0/45) hotelben - (0/45)
- (0/45) hotelben - (0/45) hotelben 0 katalógusa 0 katalógusa 0 katalógusa áttétes daganat katalógusa - (0/42) hotelben - (0 /42) hotelben - (0/42) hotelben - (0/42) hotelben 0 katalógusa 0 katalógusa 0 katalógusa aMolecular elemzése a beültetett és metasztatikus tumorok nem mutattak kimutatható kifejezése CK8 /18, E-cadherin, VCAM-1 és ICAM-1, azzal a pozitív festéssel az VCAM-1 a beültetett tumor szövetekben az első generációs
Discussion
Rák jellemzi proliferáció, invázió, és a metasztázist. Több, mint 90% -os mortalitást a rák miatt van metasztázis ezáltal megkérdezése intenzív kutatások [19]. Metastasis egy bonyolult és nehezen érthető folyamat, a fehérjék, amelyeknek szerepük van sejtadhézió, ECM degradáció, és motilitás [19-21]. Számos tanulmány a gyomor rák áttétek számoltak [22-26]. Azonban a legtöbb ilyen vizsgálatot végeztek in vitro, mivel nem utánozza a metasztatikus folyamatban, amely akkor fordul elő in vivo. Ez arra utal, hogy szükség lenne egy állati modellben a rákos áttétek, hogy van egy szilárd és következetes fenotípus. A jelen vizsgálatban, a modell a metasztatikus humán gyomorrák hozta létre injekciós beoltás csupasz egerekben a rák szöveteiben kapott sebészetileg gyomorrákos betegeknél. Az összes egér kifejlesztett tumor növekedését a beültetett pozíció és retroperitoneum metasztázis, és 94% az egerek kifejlesztett metasztázis a zsigerek, függetlenül attól, hogy a tumor forrás volt friss vagy fagyasztott. A beültetett és metasztatikus tumor tartjuk az azonos funkciók minden generáció, és a zsigereket metasztázis volt megfigyelhető nyirokcsomók körül a nyelőcső, az alábbiakban a gyomor nyálkahártya, tunica serosa gastria, lép, máj portál terület, központi venae és a sinus hepaticus, máj parenchyma, máj kapszula, vese köldökseb, vese parenchyma, mellékvesében, a belek serosa, és a hasnyálmirigy. Metasztázist robusztus ebben az egérmodellben. A retroperitoneum metasztázis esetleg adódó disszociációs tumorsejtek a beültetett tumor, bevezetés a lágyéki mirigyek, és a szállítás retroperitoneum. Ez megmagyarázhatja a daganat áttétet a májban portál területen, a központi venae, és sinus hepaticus, valamint a tunica serosa gastria, vese köldökseb, mellékvese, és a bél savós hártyák. Metasztázis is történt a nyirokcsomók tumorokat figyeltünk meg a nyirokcsomók körül a nyelőcső, az alábbiakban gyomor nyálkahártya, a lép, a hasnyálmirigy, és a vese parenchima.
A előfordulása metasztázis úgy tűnik, hogy függ az implantáció helyén szubkután: beültetésre az ágyék eredményezett 100% retroperitoneális metasztázis és 94% zsigerek metasztázis; beültetés a hátsó vezetett 30% retroperitoneumban metasztázis, és 10% zsigerek metasztázis; beültetésre hónalj nem eredményezett retroperitoneumban metasztázis és 20% zsigerek áttét. Ez a megfigyelés összhangban van a metasztázis társított tumornövekedés mikrokörnyezetében beleértve a véredények és a nyirok eloszlás. Valóban, az egér ágyék több ereket és a nyirok hálózatok ömlő hasüregi zsigerek, mint a hátsó. Bár a hónalj gazdag erek és nyirokrendszeri hálózatok irányába a vena az anterográd, és a legtöbb nyirok kapcsolatot tüdő, légcső és a mellhártya, olyan helyeken, ahol a gyomorrák ritkán kerül áttelepített. Ezért az egyszerű módszert szubkután beültetése rákos sejtek a groins csupasz egerek hatékonyan eredményez a modell metasztatikus humán gyomorrák. Ez a modell egy magasabb zsigerek metasztázis aránya, mint hogy az irodalomban leírták [13-18], és könnyen alkalmazható más típusú emberi rák.
Tumorinvázió a későbbi áttétek a fő oka a morbiditás és mortalitás betegeknél rák. Cancer Metastasis egy komplex folyamat, amelyben a tumorsejtek elválhat a primer tumor tömege, vándorolnak keresztül az érrendszer, átlépni más szövetekben, és növekszik az új daganatok [27-30]. Ezek közül a különböző folyamatok megváltozása a ragasztó tulajdonságait a primer tumorsejtek kritikus tényező a tumor progresszióját [28]. Kimutatták, hogy a sejt adhézió felelős a tumor progresszióját, beleértve a molekulák, amelyek szerepet játszanak a sejt-sejt adhéziót és a sejt-mátrix tapadás [31-34]. Sejtadhéziós fontos szerepet játszik a két különböző szakaszaiban a tumor metasztatikus folyamatban - a leválás a primer tumor és annak tapadását a keringési rendszer [27]. Ezért, a sejt adhéziós molekulák kritikus szerepet játszanak az invázió és metasztázis a különböző emberi tumorok.
E-cadherin fontos szerepet játszik a sejt-sejt adhézió epiteliális szövetekben [35]. Amellett, hogy szerepet játszik a normális sejtekben, ez a sejtadhéziós molekula fontos szerepet játszanak a malignus sejt transzformációt, a tumor fejlődését, és progressziójában. A veszteség a tumorszövetben integritásának vezethet helyi invázió [36]. Ezért funkciójának elvesztése E-cadherin a daganatos szövetekben korrelál invazivitását és metasztázis tumorok [37]. Tanulmányok kimutatták, hogy az aberráns E-cadherin expresszió társul megszerzése invazivitásának és fejlettebb tumorstádium gyomorrák [38-40].
ICAM-1 és VCAM-1 nagyon fontos sejtadhéziós molekulák tartozó immunglobulin szuper család. Az ICAM-1 funkciója a sejt-sejt és az ECM adhézió, beleértve a fiziológiai polimorfonukleáris (PMN) szoros tapadású és transz endoteliális migráció útján leukocita integrinek limfocita functionassociated antigén-1 (LFA-1) (CD11a /CD18) és a makrofág-1 antigén ( MAC-1) (CD11b /CD18) [41]. A VCAM-I közvetít a celluláris adhéziót keresztül integrin [42]. Az ICAM-1 fontos szerepet játszik a sejt-sejt és sejt-ECM kölcsönhatások, különösen a tumor invázió és citotoxicitását limfociták. Tanulmányok kimutatták, hogy a pozitív expresszióját mértéke az ICAM-1-ben összefügg nyirokcsomó-metasztázis és mélysége tumor invázió és a VCAM-1-expresszió pozitív gyomor- rákok voltak invazív és jártak több nyirokcsomó metasztázisok, mint VCAM-1-expresszió negatív azok [43-45]. Citokeratin megjelenni az összes hámsejtek, néhány nem-epiteliális sejtek, és a legtöbb tumor sejteket. A citokeratin tartozó intermedier filamentum (IF) fehérje család, elsődleges összetevői kürt sejtek és fenntartja a szervezet hámszövet. Tanulmányok kimutatták, hogy a citokeratin nagyon erősen konzervált és fontos a szöveti differenciálódás. Jelenleg több mint 20 különböző citokeratin azonosítottak [46], amelyek közül CK 8, 18, és 19 a legnagyobb mennyiségben egyszerű hámsejtek. A jelen vizsgálatban a IHC és RT-PCR-eredmények azt mutatták, hogy ez a kifejezés az E-cadherin negatív, és hogy az ICAM-1, VCAM-1, és CK8 /18 pozitívak a sebészeti minta beültetésre használják fel, összhangban Korábbi vizsgálatokban [38, 40, 43, 45]. Minden szerző elolvasta és jóváhagyta a végleges kéziratot. Katalógusa

• Ellenállás bendő baktériumok murein szarvasmarhák gyomor lysozyme
• Rákhoz kapcsolódó fibroblasztok pozitívan korrelál a metasztatikus potenciálja a humán gyomor cancers