O papel do eixo CCL22-CCR4 na metástase das células cancerosas gástricas em leitosa omental spots

o papel do eixo CCL22-CCR4 na metástase das células cancerosas gástricas em manchas esbranquiçadas omento da arte abstracta
Fundo
A omento é um dos sítios iniciais para metástase peritoneal porque possui manchas leitosas que fornecem um micro-ambiente para as células cancerosas para migrar facilmente e crescer em micrometástases. Este estudo investigou o papel do eixo CCL22-CCR4 em células cancerosas gástricas infiltrando seletivamente em manchas esbranquiçadas.
Métodos
câncer gástrico células MFC marcadas com DII foram injetados por via intraperitoneal em tensão de 615 camundongos. Os ratinhos foram sacrificados em intervalos especificados e o omento foi excisado para imuno-histoquímica. Os efeitos de CCL22 sobre a proliferação e migração de MFCs foram avaliadas por ensaios de MTT e trans poços. RT-PCR e análise de Western blot de ARNm detectada R4CC e os níveis de expressão de proteína em MFCs. A imuno-histoquímica foi utilizada para analisar CCL22 e expressão CCR4 nos micrometástases local leitoso.
Resultados
Duas semanas após a injeção intraperitoneal, as áreas pontuais leitoso foram completamente ocupada por proliferação de células de câncer gástrico e de células do tipo cluster de micrometástases foram observados. Em contraste, as células cancerosas formadas micrometástases-único tipo de células nas áreas à vista não-lácteas. MFCs expressa CCR4, a qual foi localizada na superfície da célula e no citoplasma ou. Diferentes concentrações de CCL22 aumentou significativamente a capacidade de proliferação de MFC. Além disso, as concentrações de CCL22 entre 10-100 ng /mL aumentou significativamente a migração de MFC. Dentro de manchas leitosas omental, CCL22 foi localizada principalmente na superfície da célula e no citoplasma ou. Dentro das seções de micrometástases local leitoso do omento, CCR4 foi reconhecido em ou em células cancerosas gástricas, células constituintes leitosa manchas, células sanguíneas e as células endoteliais do sangue.
Conclusões
Omental manchas esbranquiçadas são um microambiente adequado para as células cancerosas gástricas livres peritoneal migrar, sobreviver e estabelecer metástases de células do tipo cluster. O eixo CCL22-CCR4 contribui para esse processo de infiltração seletiva.
Palavras-chave
O câncer gástrico Omental mancha leitosa Peritoneal metástase CCL22 CCR4 Introdução
metástase peritoneal é um padrão comum de metástases à distância no cancro gástrico. Numerosos estudos confirmaram que o prognóstico de pacientes com câncer gástrico com metástase peritoneal é pobre, mesmo naqueles pacientes tratados com cirurgia radical [1]. metástase peritoneal desenvolve a partir de micrometástases provenientes de células de câncer peritoneal livre [2]. Portanto, é importante compreender as características e mecanismos envolvidos na formação de micrometástases peritoneais. Tal entendimento vai ajudar na prevenção e recorrência de metástases peritoniais, melhorando assim o prognóstico dos pacientes com câncer gástrico.
Manchas esbranquiçadas são tecidos linfóides primitivos na cavidade peritoneal de seres humanos e animais, que existe principalmente no omento maior. Em contraste, relativamente poucas manchas leitosas são encontrados no chão mesentério e pélvica, e sem manchas leitosas são encontradas em outras áreas do peritoneu [3]. manchas leitosas compreendem numerosos macrófagos e linfócitos agregações e estão envolvidos na depuração de partículas, bactérias e células de tumor a partir da cavidade peritoneal, que joga um papel importante na defesa peritoneal [4] - [6]. Em particular, os macrófagos foram omental ser citotóxico contra as células de tumor [7], [8]. Alguns estudos têm demonstrado que os pontos leitoso do omento são bem conhecidos sites de metástases de carcinomas dos ovários, estômago e cólon [9]. As células cancerosas selectivamente infiltrar nas manchas leitosas nas fases iniciais de disseminação do cancro peritoneal e localizar um microambiente no qual eles são capazes de sobreviver, crescer e formar metástases sólidas [10]. Esta ligação preferencial pode ser explicado pela existência de determinadas características especiais de manchas leitosas, incluindo os níveis mais elevados de moléculas de adesão celular e factores de crescimento-estimuladoras [11], [12]. Portanto, enquanto manchas leitosas têm propriedades citotóxicas contra células tumorais e desempenham um papel importante na defesa peritoneal, eles também fornecem sítios onde a proliferação de células tumorais e ocorrem micrometástases.
As quimiocinas são proteínas secretadas pequenas classificadas em quatro subfamílias com base na sequência de resíduos de cisteína conservada N-terminal: CXC, CC, C e CX3C [13], [14]. Muitos estudos têm demonstrado que as quimiocinas e receptores de quimiocina está causalmente envolvida na metástase de câncer [15] - [21]. A quimiocina MDC /CCL22 derivado do macrófago é um dos quimiocinas CC produzidas por macrófagos e R4CC foi identificado como o seu receptor específico [17] - [21], que é também o receptor funcional para outras quimiocinas CC. A expressão de receptores de quimiocina é conhecida por estar associada com metástases do cancro, tal como CXCR4, CCR7 e CCR10 no cancro da mama [16] e CXCR5, CCR6, CCR7, e CCR4, em cancros pancreáticos, gástricos e da próstata [22], [23] . Alguns estudos demonstraram que definitivamente CXCR4 e CXCL12 desempenhar um papel importante na metástase de células de cancro gástrico para a cavidade peritoneal [23] - [25]
manchas leitosas compreendem omental numerosos macrófagos, mas o papel do MDC /CCL22-. eixo R4CC em células de cancro gástrico infiltrantes selectivamente em manchas leitosas ainda não foi identificado. Estudámos, portanto, a expressão de MDC /CCL22 e CCR4 na micrometástases local leitoso, com o objectivo de estabelecer um novo método de tratamento para prevenir a metástase peritoneal, concentrando-se sobre a quimiotaxia de células cancerosas gástricas.
Materiais e métodos
células tumorais linha e animais
murino MFCs câncer gástrico, derivadas do carcinoma murino estirpe 615 do estômago proximal, foram obtidos do laboratório Central do Hospital Filiado Frist, do University Medical Dalian. MFCs foram cultivadas em meio RPMI-1640 (Gibco) suplementado com 10% de soro fetal bovino (Sigma) numa incubadora de 5% de CO 2 a 37 ° C. Uma vez confluentes, as células foram tripsinizadas e lavadas em meio de D-Hanks. Uma contagem de células viáveis ​​foi realizada utilizando exclusão com azul de tripano.
Seis semanas de idade, estirpe 615 ratinhos foram obtidos a partir do Dalian Medical University of China. Os ratinhos foram mantidos sob condições de laboratório padrão e tiveram acesso livre a alimentos padrão de laboratório e água. protocolos de estudo foram aprovados pelo Comitê de Pesquisa Animal do Dalian Medical University of China de acordo com as diretrizes nacionais (número de autorização: SYXK2008-0002). foram tomadas todas as medidas para minimizar qualquer dor ou desconforto. Microscopia eletrônica de varredura
amostras Omental foram coletadas, fixadas durante a noite com 2,5% de glutaraldeído em 0,1 M tampão PIPES (pH 6,9), lavadas três vezes em Pipes frescos tampão (pH 6,9), e pós-fixados durante 1,5 horas em 1% de tetróxido de ósmio em 0,1 M de tampão PIPES (pH 6,9). As amostras foram lavadas em dH 2O três vezes e, em seguida, desidratadas em concentrações crescentes de etanol (50, 70, 90 e 100%). As amostras foram microscopia electrónica crítica de dióxido de carbono líquido, revestidos até uma espessura de 3 nm com um revestidor de plasma de ósmio, e observadas com um microscópio electrónico de varrimento Hitachi S-520. Secou-se ao ponto
Transmissão
seis bandas de gordura omental obtido de três foram utilizados 615 ratos de cada sexo. As bandas foram imersas numa solução de fixação contendo 2% de glutaraldeído, durante 2 horas, e depois pós-fixados numa solução contendo 2% de tetróxido de ósmio e 1,5% de sacarose em tampão de fosfato 0,05 M durante 2 horas a 4 ° C. Os espécimes foram desidratados numa série graduada de etanol. Após substituindo acetona por etanol, os espécimes foram incluídos em blocos de resina epóxi. seções ultra-finas foram coradas com acetato de uranilo e citrato de chumbo e observados com um microscópio eletrônico de transmissão (JEM-2000EX).
fixação das células do tumor para o omento
As células MFC foram incubadas em completo RPMI-1640 com uma concentração de 2 mg /L de DII (Sigma) durante 60 min a 37 ° C. As células foram lavadas três vezes com solução salina equilibrada de Hanks. A taxa de rotulagem celular foi de 100% e 1 × 10 4 células foram injectados por via intraperitoneal. Os ratinhos foram sacrificados aos 4, 12, 36, 48, 72 e 120 horas, e 7, 10, e 14 dias após injecção intraperitoneal. O omento foi excisada e esticada em lâminas de microscópio para processamento adicional.
HE e coloração imuno-histoquímica
omental amostras foram recolhidas, fixadas em solução de formaldeído a 4% (pH 7,4) a 4 ° C durante 24 horas, enxaguadas três vezes com solução salina tamponada com fosfato (pH 7,4) durante 3 horas, desidratados numa série graduada de etanol e embebidos em parafina. Em seguida, 5 mm de espessura consecutivos foram processadas para HE e imunocoloração por deparaffinisation com xileno e re-hidratação com etanol graduado.
Para aumentar a expressão do antigénio nos tecidos, solução tampão de citrato foi adicionada às amostras e que foram cozidos no forno de microondas forno. As amostras foram tratadas com uma solução de peróxido de hidrogénio a 3% durante 10 min para suprimir a actividade da peroxidase endógena e depois enxaguou-se com solução salina tamponada com fosfato (PBS). Para evitar reacções imunitárias não específicas, as amostras foram tratadas com soro de cabra normal a 3% durante 10 min, e lavados com PBS. A CCL22 anticorpo anti-ratinho de coelho policlonal primário (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, EUA) e anticorpo de coelho R4CC anti-murganho (Abcam, Cambridge, Reino Unido) foram diluídos 1: 100 com soro de cabra e incubou-se à temperatura ambiente durante 1 hora. Após três mínimo de duas lavagens com PBS, as secções foram incubadas com um anticorpo secundário de cabra biotinilada, durante 30 min (DAKO, Carpinteria, CA, EUA). Após três mínimo de duas lavagens com PBS, estreptavidina peroxidase de rábano (DAKO) foi adicionado à secção durante 30 min, seguido por mais três mínimo de duas lavagens com PBS. As amostras foram reveladas com substrato de 3,3'-diaminobenzidina (Vector Laboratories, Burlington, Ontário, Canadá) durante 1 min e contrastadas com hematoxilina de Mayer. Os slides foram desidratados seguindo um procedimento padrão e selado com lamelas. O controlo negativo foi preparado através do mesmo procedimento utilizando PBS em vez do anticorpo primário. tecidos normais do estômago foram usadas como controlo positivo.
coloração imunocitoquímica de células CCR4
cancro gástrico foram plaqueadas em lâminas com câmara revestidas com poli-L-lisina, deixadas a aderir durante 48 horas e, em seguida, utilizados para imunocitoquímica. As células foram fixadas com 0,3% H 2O 2 em metanol durante 60 minutos à temperatura ambiente, lavadas 4 vezes em PBS, bloqueadas com BSA a 3% e permeabilizadas com PBS contendo 0,1% de Triton X-100 durante 60 min à temperatura ambiente. O anticorpo, o anticorpo policlonal conjugado com FITC anti-ratinho de CCR4 (1 ug /ml, eBioscience), foi incubada durante 60 min a 37 ° C, lavaram-se 4 vezes e inspeccionadas sob um microscópio de fluorescência (BX-51 TR32000, Olympus).
rotulagem imunofluorescente de macrófagos em manchas leitosas omental
para imuno-histoquímica, foi o omento fixados em formalina durante 60 min e lavadas três vezes com solução salina tamponada com fosfato. O omento foi incubada durante 60 min a 37 ° C com um ratinho anti-F4 /80 marcador conjugado com FITC murino de macrófagos (1 ng /ml; BioLegend), lavou-se três vezes em solução salina tamponada com fosfato e em seguida, em uma obscuridade seco ao ar ambiente durante 12 horas. coloração imuno-histoquímica foi directamente marcado e as imagens foram capturadas usando um microscópio de fluorescência. (BX-51 TR32000; Olympus)
reverso análise de PCR de transcrição-
O ARN total foi extraído e purificado a partir MFCs cultivadas utilizando um Kit RNeasy Mini (Qiagen, Milão, Itália). A extracção incluem um passo de digestão com DNase I. quantidade e qualidade do ARN foi avaliada por espectrofotometria UV. O RNA foi transcrito em ADNc utilizando o SuperScript First-Strand Synthesis System (Invitrogen). RT-PCR foi realizada com SuperScript One-Step (Invitrogen). Os iniciadores utilizados foram os seguintes: iniciador de sentido directo 5'R4CC-GGGGTCATCACCAGTTTG-3 ', iniciador anti-sentido 5'R4CC-TCTTCACCGCCTTGTTCT-3'), GAPDH iniciador directo 5'-CCACCCATGGCAAATTCCCATGGCA-3 ', e iniciador inverso 5'GAPDH-TCTAGACGGCAGGTCAGGTCCACC- 3 '.
análise Western blot
As células foram lavadas com solução salina tamponada com fosfato (PBS) e lisadas no ensaio de radio-imunoprecipitação (RIPA) de tampão de lise (NaCl 150 mM, Tris-HCl a 50, 0,1% de sulfato de dodecilo de sódio, 1% de Nonidet P-40, fluoreto de fenilmetilsulfonilo 1 mM). Os lisados ​​foram clarificados por centrifugação (15000 rpm durante 5 min) e as concentrações de proteína foram determinadas usando o método do ácido bicinconínico antes do armazenamento a -80 ° C. quantidades equivalentes de proteína foram separadas em SDS-poliacrilamida gel de electroforese (PAGE) e transferidos para membranas de difluoreto de polivinilideno. As membranas foram bloqueadas em leite isento de gordura a 5% em solução salina tamponada com Tris com Tween 20 a 0,1% e incubadas com o anticorpo primário durante a noite a 4 ° C. Os complexos imunitários foram então detectados utilizando o sistema de quimioluminescência aumentada (Amersham, Buckinghamshire, Reino Unido).
ensaio de proliferação celular
MFCs foram semeadas em placas de 96 poços a uma densidade de 1 x 10 4 células por poço ( 200 mL) e incubadas em meio completo durante 24 horas. O meio foi substituído com meio isento de soro contendo várias concentrações de CCL22, com RPMI 1640 que serve como controlo negativo. Após incubação durante 24 horas, 20 ul de MTT reagente; foi adicionado (5 mg /mL de Sigma-Aldrich Co.) e incubadas durante 4 horas. Ensaio de Migração
Em seguida, 100 ul de reagente de detergente foi adicionado, deixada à temperatura ambiente no escuro durante 2 horas e a absorvância a 492 nm registada.
ensaios de migração de células foram realizados em câmaras de diâmetro 6,4 mm com 8 mm filtros de poro (Becton Dickinson Labware, Franklin Lakes, NJ). MFCs foram colocados na câmara superior (100 células por cavidade), enquanto a câmara inferior foi preenchida com DMEM contendo várias concentrações de CCL22 (0, 1, 10, e 100 ng /mL). As células foram incubadas durante 24 horas a 37 ° C em 5% de CO2. As células que não passam através dos poros da membrana foram removidos. células migradas foram fixadas e coradas. O número de células na câmara inferior foram contadas em 10 campos aleatórios (200 ×) e expressa como o número médio de células por campo de visão. Os dados foram representados como a média de três experiências independentes.
Resultados
Morfologia das manchas esbranquiçadas
microscopia electrónica revelaram que as manchas esbranquiçadas foram em grande parte composta de macrófagos abundantes (Figura 1A), com alguns linfócitos, neutrófilos e várias células do estroma (figura 1B). Figura 1 Transmissão e microscopia eletrônica de varredura dos pontos leitoso do omento. (A) A microscopia electrónica revelou que a composição celular das manchas leitosas foi em grande parte, composto por abundantes macrófagos (M). (B) Alguns linfócitos (L) e de neutrófilos (N) também foram observados (ampliação, 4,000X). (C) no ponto áreas leitosas, as células da camada de superfície constituída de macrófagos, linfócitos e células mesoteliais descontínuos e foram separadas por lacunas intercelulares ou poros. (D) No não-leitoso zonas pontuais, não foram observadas lacunas intercelulares ou poros (ampliação, 500X). A microscopia electrónica de varrimento revelou que
a superfície destas manchas leitosas era morfologicamente distinta da das zonas pontuais não-lácteas do omento. As células da camada de superfície constituída de macrófagos, linfócitos e células mesoteliais descontínuas, as quais foram separadas por espaços intercelulares ou poros (Figura 1C). Nas zonas pontuais não-lácteas, as aberturas intercelulares ou poros não foram observados (Figura 1D).
Imunofluorescência e HE para manchas leitosas omental
toda O omento maior dos ratinhos 615 foi limitado caudalmente por um tecido gorduroso estreita listra (Figura 2A), ao longo do qual se observaram agregados celulares (verde), conhecido como manchas leitosas, (Figura 2B). Os capilares do sangue, arteríolas e vasos lymphocapillary foram encontrados dentro das zonas pontuais leitosas (Figura 2C). Figura 2 Morfologia das manchas esbranquiçadas. (A-B) O omento maior dos ratinhos foi 615 delimitada por uma faixa estreita de tecido de gordura (ampliação, 50X), ao longo da qual os agregados celulares, conhecidos como manchas leitosas, foram observadas. (C) e os vasos capilares do sangue de arteríolas são encontrados dentro das zonas pontuais leitosas (ampliação, 200X).
Visualização de células tumorais no omento em pontos de tempo iniciais
MFCs começou a aderir às manchas leitosas omental em 4 horas pós-injecção. Ao fim de 12 horas após a injecção, foram MFCs particularmente concentrada nas manchas leitosas (Figura 3A), enquanto que não há células tumorais foram encontradas nas áreas local não leitoso do omento (Figura 3B). Figura 3 células de cancro gástrico aderir às zonas pontuais leitoso do omento em diferentes pontos de tempo. (A-B) Imagem de macrófagos leitosas local (verde) e um grande número de DII-MFCs (vermelho) concentrada em zonas pontuais leitosas 12 h após a injecção intraperitoneal. (C-D) Após 72 h, o número de DII-MFCs diminuiu em áreas ponto leitosas proliferam enquanto que células tumorais nas manchas leitosas e foi observada a formação de micrometástases. células tumorais esporádicos foram encontradas nas áreas à vista não-lácteas omental. (E-F) Duas semanas após a injecção intraperitoneal, as áreas no local leitosas foram completamente ocupada pelas células cancerosas em proliferação gástricas e observou-se a célula de tipo aglomerado metástase. agregados em proliferação de células de cancro não foram observadas nas áreas local não lácteas e células cancerosas formado metástases do tipo de célula individuais. (Ampliação, x 200).
Após 72 horas, proliferação de células tumorais e a formação de micrometástases foram observadas nas áreas ponto leitosas (Figura 3C). Em contraste, às 72 horas pós-injecção, as células de tumores esporádicos foram encontradas nas áreas à vista não-lácteas, enquanto não há grupos de células foram detectados (Figura 3D).
Em 2 semanas após a injecção intraperitoneal, as zonas pontuais foram completamente leitosas ocupada pelos proliferam células cancerosas gástricas e células do tipo cluster de metástases foram observados (Figura 3E). Em contraste, os aglomerados de células cancerosas em proliferação não foram observadas nas áreas local não lácteas e células cancerosas formado de um único tipo de células de metástases (Figura 3F).
R4CC expressão em células de cancro gástrico
MFCs claramente expressas ARNm R4CC (Figura 4A). A expressão da proteína de CCR4, também foi examinada por manchas de Western (Figura 4B). MFCs proteína expressa CCR4, que se localizou a superfície da célula e /ou no citoplasma (Figura 4C). Figura expressão 4 CCR4 em células cancerosas gástricas. MFCs (A) claramente expressa R4CC ARNm. (B) A expressão de proteínas de CCR4, também foi examinada por manchas de Western. (C) MFCs proteína expressa R4CC e os seus foi localizada sobre a superfície da célula e /ou no citoplasma das MFCs.
Os efeitos de CCL22 sobre a proliferação e invasão de MFCs
Os efeitos de CCL22 sobre a proliferação de MFCs foram avaliados por um ensaio com MTT. CCL22 aumentou significativamente a capacidade de proliferação em diferentes concentrações (1-100 ng /ml), quando comparado com o grupo de controlo (P < 0,05) (Figura 5A). Figura 5 O efeito de CCL22 sobre a proliferação e invasão de MFC. (A) CCL22 aumentou significativamente a capacidade de proliferação em diferentes concentrações (1-100 ng /ml) em comparação com o grupo de controlo (P < 0,05). (BC) Concentração de CCL22 entre 10-100 ng /ml, aumentaram significativamente a migração de MFC, com a resposta óptima de 10 ng /ml (p < 0,01).
Uma concentração de CCL22 entre 10-100 ng /ml, significativamente o aumento da migração de MFC, com a resposta óptima de 10 ng /ml. (P < 0,05 em comparação com o meio sozinho) (Figura 5B-C)
CCL22 e expressão R4CC nos omental micrometástases ponto leitosas
no manchas leitosas omental, CCL22 foi observada principalmente na superfície da célula e ou no citoplasma das células constituintes (Figura 6A). Nos omental micrometástases ponto leitosas 12 horas, 7 dias e 14 dias após injecção intraperitoneal, R4CC foi observada sobre ou no interior das células de cancro gástrico, células constituintes da mancha leitosa, células mesoteliais, células do sangue e as células endoteliais no sangue (Figura 5B-D ). Figura 6 CCL22 e expressão R4CC nos omental micrometástases mancha leitosa. (A) Na secção das manchas leitosas omental, CCL22 foi localizada principalmente na superfície da célula e ou no citoplasma das células constituintes. (B-D) Na secção das micrometástases local leitoso do omento (12 h após a injeção intraperitoneal), CCR4 foi localizada sobre ou dentro das células cancerosas gástricas, células constituintes da mancha leitosa, células mesoteliais, células sanguíneas e as células endoteliais do sangue. (C) Sete dias após a injecção intraperitoneal. (D) Quatorze dias após a injecção intraperitoneal.
Discussão
A etiologia da metástase peritoneal no câncer gástrico continua a ser elucidado. A libertação de células cancerosas livre de uma lesão onde o tumor primário invade a serosa é considerada para ser a origem de metástase peritoneal [26]. Mais de um século se passou desde Paget desenvolveu a teoria da `sementes e do solo" [27]. Ele a hipótese de que certas células tumorais (sementes) colonizar selectivamente órgãos distantes (solo), com um ambiente favorável que facilita a sobrevivência das células tumorais. Neste estudo, descobrimos que manchas esbranquiçadas omento foram microambientes agradáveis ​​por causa de suas propriedades físicas e químicas, para as células cancerosas gástricas livres peritoneal para migrar, sobreviver, crescer e formar metástases sólidos. A microscopia eletrônica de varredura
revelou que a superfície destes manchas leitosas era morfologicamente distinta da das zonas pontuais não-leitoso do omento. As células da camada de superfície constituída de macrófagos, linfócitos e células mesoteliais descontínuos e foram separados por muitas lacunas intercelulares ou poros. Os espaços vazios ou poros intercelulares importantes causados ​​ao tecido conjuntivo e células submesotelial para ser exposta à superfície peritoneal, o que é proposto para representar um local preferencial para a aderência de células de tumor.
Micrometástases são presentemente classificados em uma única célula e de cachos de células pequenas tipos [28]. O presente estudo encontrou um tipo diferente de metástase das células tumorais em manchas esbranquiçadas em comparação com as áreas exatas não-Láctea. Duas semanas após a injecção intraperitoneal, as áreas no local leitosas foram completamente ocupada pelas células gástricas cancerosas em proliferação, e células de cancro gástrico formado metástases de células do tipo aglomerado. No entanto, as células cancerosas em proliferação não foram observadas nas áreas à vista não-lácteas, na mesma fase, e células cancerosas formado metástases do tipo de célula individuais. Este fenómeno pode ser explicado por as muitas capilares sanguíneos e vasos arteriais presentes nas áreas do ponto leitoso do omento, que proporcionam um fornecimento de sangue adequado para o crescimento de células de cancro gástrico.
Alguns estudos indicaram que o processo de crescimento de tumores e metástases envolve uma variedade de célula-célula e as interacções célula-matriz extracelular que são mediadas por moléculas de adesão celular. Cada passo requer moléculas de adesão celular e receptores [29]. células mesoteliais que revestem manchas esbranquiçadas produzir níveis mais elevados de moléculas de adesão celular (isto é, molécula-1 de adesão intercelular) do que as áreas exatas não-lácteas, contribuindo assim para a intensificação de adesão [11], [12]. O papel das quimiocinas em células de cancro gástrico infiltrante selectivamente para as manchas leitosas ainda não foi identificado. manchas leitosas compreendem numerosos macrófagos, que produzem o quimiocina MDC /CCL22 [30]. CCL22 e seu 'CCR4 receptor estão envolvidos em uma grande variedade de patologias. doenças inflamatórias CCL22 é altamente expresso nas lesões criadas por células T mediadas por [29]. R4CC foi relatada pela primeira vez de ser preferencialmente expressos por células Th2, que estão envolvidos na imunidade humoral e respostas alérgicas [30]. CCL22 e CCR4 desempenham também um papel importante no crescimento e metástase [17] cancro - [21], assim, muitos antagonistas de receptores de CCR4, bem como um anticorpo anti-R4CC, estão a ser desenvolvidos na indústria farmacêutica [31], [32]. Neste estudo, verificou-se que os MFCs claramente expressa mRNA CCR4. R4CC proteína também foi examinada por manchas de Western. R4CC foi expresso na ou nas células de cancro gástrico na secção dos omental micrometástases ponto leitosas 12 horas, 7 dias e 14 dias após injecção intraperitoneal. CCL22 foi expressa principalmente na superfície da célula e no citoplasma ou dos macrófagos. CCL22 aumentou significativamente a capacidade de proliferação de células de cancro gástrico, e concentrações de CCL22 entre 10-100 ng /ml, aumentaram significativamente a migração de MFC. Os macrófagos em manchas leitosas omental não só têm propriedades citotóxicas contra células tumorais, mas também produzem CCL22, que ajuda as células gástricas cancerosas sobreviver e crescer em metástases sólidas. O eixo MDC /CCL22-CCR4 desempenha um papel importante nas células cancerosas gástricas infiltração seletiva em pontos leitoso do omento e formar metástases sólidos.
Conclusão
células cancerosas livres gástrica (sementes) localizar um microambiente que contém propriedades físicas e químicas favoráveis ​​dentro manchas leitosas no qual eles são capazes de sobreviver e crescer, que cria metástases de células do tipo aglomerado. O eixo CCL22-CCR4 contribui para essa infiltração seletiva.
Informações dos autores
Yi Zhang e Liang Cao são listados como co-autores em primeiro lugar.
Declarações
Agradecimentos
Este projecto foi apoiado pela National Natural Science Foundation da China (número Grant: 81101633), a Fundação de Ciência Natural da província de Liaoning (número Grant: 201.202.047), o projeto Ciência e Tecnologia de Dalian (número Grant: 2012E15SF142)
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Todos os autores declaram que não têm interesses conflitantes.

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