PLoS ONE: In Vivo Antioxidant und Antiulkuswirksamkeit von Parkia speciosa Ethanolisches Blattextrakt gegen Ethanol-induzierten Magengeschwüren bei Ratten

Abstrakt

Hintergrund

Die aktuelle Studie wurde durchgeführt, um die Auswirkungen von magen Parkia speciosa
gegen Ethanol-induzierten Magenschleimhaut Verletzungen bei Ratten zu untersuchen.

Methodik /wesentlichen Ergebnisse

Sprague Dawley Ratten wurden in 7 Gruppen getrennt. Gruppen 1-2 wurden oral mit Carboxymethylcellulose (CMC) in Frage gestellt; 3-Gruppe erhielten 20 mg /kg Omeprazol und Gruppen 4-7 50 empfangen, 100, 200 und 400 mg /kg ethanolischer Blattextrakt, respectively. Nach 1 h, CMC oder absolutem Ethanol wurde 2-7 oral an Gruppen. Die Ratten wurden nach 1 h getötet. Dann wurden die Verletzungen der Magenschleimhaut durch Beurteilung der Magenwand Schleim geschätzt wird, die Gesamterscheinung des Ulcus Bereichen, Histologie und Immunhistochemie enzymatischen Assays. 2 Gruppe zeigten signifikante Schleimhautverletzungen, mit reduzierten Magenwand Schleim und schwere Schäden an der Magenschleimhaut, während Verringerung der Schädigung der Schleimhaut für Gruppen 4-7 beobachtet wurden. 3-7 Gruppen zeigten eine Umkehr in der Abnahme der Periodic-Acid-Schiff (PAS) Färbung durch Ethanol induziert. Keine Anzeichen von Toxizität oder Tod wurden während der akuten Toxizitätstests beobachtet.

Fazit

Die Behandlung mit dem Extrakt zur Hochregulation von Hitzeschock-Protein führte 70 (HSP70) und die Herunterregulierung des Pro -apoptotic Protein BAX. Deutliche Zuwächse in den Ebenen der antioxidativen Abwehrenzyme Glutathion (GSH) und Superoxid-Dismutase (SOD) in der Magenschleimhaut Homogenat beobachtet wurden, während die von einer Lipidperoxidation Marker (MDA) signifikant verringert. Die Signifikanz wurde definiert als p < 0,05 im Vergleich zu dem Geschwür Kontrollgruppe (Gruppe 2)

Citation. Al Batran R, Al-Bayaty F, Jamil Al-Obaidi MM, Abdualkader AM, Hadi HA, Ali HM, et al. (2013) In Vivo Antioxidant und Antiulkuswirksamkeit von Parkia speciosa
Ethanolisches Blattextrakt gegen Ethanol-induzierten Magengeschwüren bei Ratten. PLoS ONE 8 (5): e64751. doi: 10.1371 /journal.pone.0064751

Editor: Herbert B. Tanowitz, Albert Einstein College of Medicine, Vereinigte Staaten von Amerika

Received: 20. Januar 2013 beginnen; Akzeptiert: 17. April 2013 beginnen; Veröffentlicht am: 28. Mai 2013

Copyright: © 2013 Al Batran et al. Dies ist eine Open-Access-Artikel unter den Bedingungen der Lizenz Creative Commons, die uneingeschränkte Nutzung erlaubt, die Verteilung und Vervielfältigung in jedem Medium, vorausgesetzt, der ursprüngliche Autor und Quelle genannt werden

Finanzierung:. Die Autoren Dankbarkeit an die University of Malaya für die finanzielle Unterstützung von uM /Mohe High Impact Research Grant (HIR Grant No F000009-21001). Die Geldgeber hatten keine Rolle in Studiendesign, Datenerfassung und Analyse, Entscheidung oder Vorbereitung des Manuskripts zur Veröffentlichung

Konkurrierende Interessen:.. Die Autoren haben erklärt, dass keine Interessenkonflikte bestehen

Einführung

Verdauungs- Geschwüre, die durch die Anwesenheit von Schleimhautschäden gekennzeichnet sind, werden vor allem verursacht durch eine Infektion mit Helicobacter pylori
, Thrombozytenaggregationshemmer wie Acetylsalicylsäure [1], nicht-steroidale entzündungshemmende Medikamente (NSAIDs) wie orale Bisphosphonate, Kaliumchlorid, immunsuppressive Medikamente [2], Serotonin-Wiederaufnahme-Hemmer [3], Alkoholkonsum und Rauchen [4]. Diese Faktoren können submuköse Erosion verursachen und Cyclooxygenase hemmen, wodurch der Schutz der Magenschleimhaut Schicht zu stören [5]. Anatomisch treten Magengeschwüren hauptsächlich im Magen und im proximalen Zwölffingerdarm. Magengeschwüre werden durch ein Ungleichgewicht zwischen der Defensive (Schleimabsonderung, Schleimhautbarriere, Blutfluss, die Zellregeneration und endogene Schutzmittel) und destruktive (Säure und Pepsin-Sekretion) Funktionen des Magen-System verursacht [6]. Alkohol-induzierten Läsionen des Magens beeinträchtigt Magenabwehrfaktoren wie Schleimabsonderung und Schleimhautdurchblutung [7]. Ethanol verursacht Nekrosen in der Magenschleimhaut durch mehrere Wege, direkt Nekrosen produzieren, was wiederum reduziert defensive Faktoren, Bikarbonat-Sekretion und Schleimproduktion [8]. Die Magenwand Schleim wird gedacht, eine wichtige Rolle als Abwehrbarriere gegen Magen-Darm-Schäden zu spielen [9]. Schleimsekretion gilt als ein entscheidender Faktor Defensive zu sein, die die Magenschleimhaut vor Verletzungen schützt [10]. Die Höhe der Magenwand Schleim wurde zuvor ausgewertet und als Indikator für die Magenschleimabsonderung verwendet [11]. [14] - Forscher haben eine große Anzahl von medizinischen Pflanzen mit antiulcer Eigenschaften [12] berichtet. Pflanzlicher Arzneimittel stellen eine große ungenutzte Ressource, die enorme therapeutische Potenzial gezeigt hat. Parkia speciosa
wird auch als Gestank Bohne oder bekannt "petai." Er trägt lange, flache Bohnenschoten mit grünen Samen. Diese Bohnen sind sehr beliebt in Südost-Asien, darunter Malaysia und Nordosten Indiens. Die Bohnen werden in den Hülsen oder als Samen verkauft, die bereits aus den Schoten getrennt sind. Die Bohnen werden können in Lake und exportiert gerüttelt werden. Darüber hinaus P. speciosa
wird von den Anwohnern angenommen, medizinische Eigenschaften besitzen [15] und wurde berichtet hypoglykämischen, antibakteriell, Anti-Krebs-und antioxidative Wirkung [16] zu zeigen. Die vorliegende Studie wurde durchgeführt, die antioxidative und Antiulkuswirksamkeit von Parkia speciosa
Ethanol Blattextrakt gegen Ethanol-induzierten Magengeschwüren bei Ratten zu etablieren.

Materialien und Methoden

Werkstoffe und Reagenzien

Alle Materialien und Reagenzien von Sigma (Sigma Aldrich, Deutschland) erhalten wurden, und der MDA, SOD und Mess Aktivität GSH Kits wurden von Cayman Chemical Company (Cayman, USA) erworben. Omeprazole wurde als Referenz antiulcer Droge verwendet und wurde von der University of Malaya Medical Centre (UMMC) erhalten. Das Medikament wurde in 0,5% (w /v) Carboxymethylcellulose (CMC) gelöst und oral an die Ratten in einer Dosierung von 20 mg /kg Körpergewicht (5 ml /kg) nach Mahmood verabreicht et al. [17]

Pflanzenmaterial und Herstellung des Rohextraktes

Frische Blätter
Parkia speciosa wurden aus Ethno Ressourcen (Selangor, Malaysia) erhalten. Die Identität der Anlage wurde am Rimba Ilmu Herbarium, Institut für Biologische Wissenschaften, Universität Malaya durch einen Vergleich mit den Belegprobe bestätigt. Frische Blätter wurden auf den Kopf in einem warmen, trockenen Ort (vor direkter Sonneneinstrahlung) mit guter Luftzirkulation zwei Wochen lang zum Trocknen aufgehängt. Dann wird ein elektrischer Mixer verwenden, wurden die getrockneten Blätter in ein feines Pulver umgewandelt. Eine Menge von 100 g des Pulvers wurden 3 Tage lang in einem Kolben durchtränkt, die 500 ml 95% Ethanol enthielt. Die Mischung wurde mit einem feinen Baumwolltuch und Filterpapier (Whatman No. 1) filtriert. Das gefilterte Mischung wurde mit einem Rotationsverdampfer (Eyela, USA) destilliert und ergab fast 17,4% getrocknete Masse. Der getrocknete Extrakt wurde in CMC verdünnt und oral an die Ratten in einer Dosis von 50, 100, 200 oder 400 mg /kg Körpergewicht verabreicht (in 0,5% CMC, 5 ml /kg Körpergewicht), in Übereinstimmung mit früheren Berichten [18 ].

Akute Toxizität

Gesunde männliche und weibliche Sprague Dawley Ratten (6-8 Wochen alt) aus dem Tierhaus (Universität Malaya, Ethik Nr PM /05.07 erhalten /2010/1111 /MAA /R). Die Ratten wogen zwischen 180-200 g. Die Tiere wurden Standard-Rattenpellets und Leitungswasser ad libitum
gegeben und wurden einzeln in getrennten Käfigen mit weitmaschigen Drahtböden coprophagy während des Experiments zu verhindern platziert. Eine Studie der akuten Toxizität wurde eine sichere Dosis für die P zu bestimmen, durchgeführt. speciosa
Extrakt. Insgesamt 48 Ratten (24 männliche und 24 weibliche) wurden zu gleichen Teilen in vier Gruppen unterteilt, die den Träger (0,5% CMC, 5 ml /kg) erhielten oder 1, 3 oder 5 g /kg Blattextrakt (5 ml /kg) . Die Tiere wurden über Nacht fasten (aber Wasser erlaubt) vor der Dosierung. Das Essen wurde für weitere 3 bis 4 Stunden nach der Verabreichung zurückgehalten. Die Tiere wurden 48 Stunden nach der Verabreichung des Pulvers für den Beginn der klinischen oder toxikologischen Symptome beobachtet. Sterblichkeit, wenn überhaupt, über einen Zeitraum von 2 Wochen beobachtet. Die Tiere wurden durch eine Überdosis von Xylazin und Ketamin-Anästhesie am 15. Tag getötet. Histologische, hämatologische und biochemische Parameter Serum wurden nach Standardverfahren bestimmt [19]. Die Ethikkommission für Tierversuche der Fakultät für Medizin der Universität Malaya, genehmigt das Experiment. Während der Experimente wurden alle Tiere auf humane Weise nach den Kriterien im "Leitfaden für die Pflege und Verwendung von Labortieren" [20] skizziert behandelt.

Tier Stock

Gesunde erwachsene Sprague Dawley Ratten (6-8 Wochen alt), die jeweils mit einem Gewicht von 200-220 g, wurden aus dem Tierhaus an der University of Malaya (Ethic Nr PM /12/05/2010 /MAA /R) erhalten. Die Ratten zufällig in 7 Gruppen von 6 Ratten unterteilt wurden jeweils und erhielten eine Standard-Pellet-Diät und Leitungswasser ad libitum., Die Ratten wurden einzeln in getrennten Käfigen mit weitmaschigen Drahtböden coprophagy während des Experiments zu verhindern platziert .

Magengeschwür Induktion durch Ethanol

die Tiere auf das Experiment vor 24 Stunden gefastet wurden [17]. Gruppen 1 und 2 erhielten Vehikel (0,5% CMC) oral. Gruppe 3 erhielt eine orale Dosis von 20 mg /kg Omeprazol in 0,5% CMC (5 ml /kg) und Gruppen 4-7 ethanolischen Extrakt von erhielt Parkia speciosa
in Dosen von 50, 100, 200 oder 400 mg /kg als Vorbehandlung. Bei 1 h nach der Vorbehandlung wurde das Vehikel oder absolutem Ethanol oral verabreicht Gruppen 2-7 [12]. Eine Stunde später wurden die Ratten getötet und ihre Mägen wurden seziert.

Die Messung der Magensaft Säure

Die Tiere wurden getötet und ihre Mägen wurden entfernt. Der Mageninhalt wurden gesammelt, gemessen, zentrifugiert und für titrierbare Säure gegen 0,01 N NaOH auf pH 7 [21] einer Analyse unterzogen.

Bestimmung der Magenwand Schleim (GWM)

Das modifizierte Verfahren von Piper et al. wurde verwendet, um die Magenwand Schleim zu analysieren. Die Drüsensegmente aus den Mägen der Kontrolle und der behandelten Ratten wurden entfernt und gewogen. Jedes Segment wurde sofort auf 1% Alcianblau (in Saccharoselösung mit Natriumacetat gepuffert, pH 5) überführt und der überschüssige Farbstoff wurde durch Spülen mit Saccharoselösung entfernt. Der Farbstoff in Komplex mit der Magenwand Schleim wurde mit Magnesiumchlorid extrahiert. Eine 4 ml-Probe des blauen Extrakt wurde dann mit einem gleichen Volumen Diethylether geschüttelt. Die resultierende Emulsion wurde zentrifugiert und die Absorption der wässrigen Schicht wurde bei 580 nm gemessen. Die Menge der Alcianblau pro Gramm (netto) von Drüsengewebe extrahiert wurde dann berechnet [22].

makroskopischen Magen-Läsion Auswertung

Die Ratte Mägen wurden unter einem Stereomikroskop untersucht. Die Länge und Breite (mm) jedes einzelnen hämorrhagische Läsion wurde durch ein Planimeter gemessen (10 × 10 mm ^{2 = Ulcusfläche) unter einem Präpariermikroskop (1,8 ×). Das Geschwür Bereich (UA) wurde entsprechend für jeden Magen unter Verwendung der Summe der Flächen aller Läsionen berechnet zu einem zuvor veröffentlichten Protokoll [23]. Die UA wurde mit der folgenden Formel berechnet:}

Die Hemmung Prozentsatz (I%) wurde wie folgt berechnet:.

antioxidative Aktivität

Herstellung von Homogenat

Magen Gewebehomogenat 10% (w /v) wurde in eiskaltem 50 mM Phosphatpuffer (pH 7,4), die einen Säuger-Protease-Inhibitor-Cocktail hergestellt und dann bei 4.000 rpm für 10 Minuten zentrifugiert (4 ° C).

Messung der Superoxid-Dismutase (SOD) -Aktivität.

wurde die SOD-Aktivität, gemessen nach dem Protokoll von Sun et al. [24] Die enzymatische Aktivität wurde durch Messung der Enzym Fähigkeit ausgewertet, um die photochemische Reduktion von Nitroblau-Tetrazolium (NBT) zu hemmen. In diesem Assay erzeugt die photochemische Reduktion von Riboflavin O ^{2; dies reduziert die NBT ein Formazan-Salz zu erzeugen, die Licht bei einer Wellenlänge von 560 nm absorbiert. In Gegenwart von SOD ist NBT Reduktion gehemmt, da das Enzym die Superoxidradikal zu Peroxid umsetzt. Die Ergebnisse sind ausgedrückt als die Menge an SOD notwendig, die Rate der NBT Reduktion zu inhibieren um 50% in Einheiten des Enzyms pro Gramm Protein. Die Überstände der Homogenate wurden ein zweites Mal (20 min, 12000 rpm, 4 ° C) zentrifugiert und der resultierende Überstand untersucht wurde. In einer dunklen Kammer, 1 ml des Reaktionsmittels (50 mM Phosphatpuffer, 100 nM EDTA und 13 mM L-Methionin, pH 7,8) wurde mit 30 ul der Probe gemischt, 150 ul von 75 uM NBT und 300 &mgr; l 2 &mgr; M Riboflavin. Die Lösung wurde dann auf fluoreszierendes Licht (15 W) für 15 min und Lesen eines Spektrophotometers bei 560 nm verwendet wird.}

Messung der Lipidperoxidation (MDA).

Tissue Malondialdehyd (MDA) ( mmol /L) wurde mit der doppelten Heizverfahren Draper und Hadley bestimmt [25]. Eine Reaktionsmischung wurde 8,1% Natriumdodecylsulfat, 20% Acetat-Puffer (pH 3,5) und 0,8% Thiobarbitursäure (TBA), die gut für 3 min mit 0,2 ml Magengewebe Homogenat vermischt und dann bei 95 ° C für 60 min inkubiert. Pyridin-Mischung (15.01, v /v): Nach dem Abkühlen wird die TBA-reaktive Substanz (MDA) wurde mit 1 ml H _{2 O und 2,5 ml einer n-Butanol extrahiert. Die obere organische Schicht, die die MDA enthält, die durch Lipidperoxidation hergestellt wurde, wurde bei 532 nm gemessen.}

Bestimmung des Gesamt-Glutathion (GSH).

Die Magenschleimhaut wurde gewogen, mit Schere zerkleinert und bei 48 ° C in phosphatgepufferter Salzlösung (PBS) homogenisiert. Das Homogenat wurde sofort mit 0,1 ml 25% Trichloressigsäure ausgefällt und der Niederschlag wurde durch Zentrifugation bei 4200 rpm für 40 min bei 4 ° C entfernt. Der Überstand wurde in einer 5,5'-Dithiobis (2-nitrobenzoesäure) -Assay verwendet GSH zu bestimmen. Die Absorption wurde bei 412 nm mit einem Spektralphotometer gemessen [26].

Die histologische Untersuchung der Magenschleimhaut

Die Magenwand Proben wurden für 24 Stunden in 10% gepuffertem Formalin fixiert, bevor der Gewebeverarbeitung zu Paraffin (Leica, Deutschland). Die Magengewebe wurden bei einer Dicke von 5 &mgr; m und gefärbt mit Hämatoxylin und Eosin Schnitt histologischen Degeneration [27] zu bewerten.

Studium der Mucosal Glykoproteine ​​

Die Abschnitte des Drüsen Teil der Ratte Magen wurden mit Periodsäure-Schiff (PAS), wie von McManus et al. [28]

immunhistochemischen Färbung

die immunhistochemische Färbung für HSP70 und BAX Proteine ​​gefärbt wurde nach durchgeführt, um dem Protokoll des Herstellers ( DakoCytomation, USA).

Statistische Analyse

Alle Werte sind als Mittelwert ± SEM berichtet und wurden durch Einweg-ANOVA, gefolgt von Tukey-post-hoc-Test für multiple Vergleiche mit dem Statistical Package für Sozialwissenschaften Software (SPSS 18) analysiert. Die Unterschiede zwischen den Mittelwerten wurden als statistisch signifikant angesehen, wenn der p-Wert war kleiner als 0,05.

Ergebnisse

• PLoS ONE: Metabolomics Gekoppelt mit Multivariate Daten und Pathway-Analyse auf potentielle Biomarker in Magengeschwür und Intervention Auswirkungen von Corydalis yanhusuo Alkaloid
• PLoS ONE: Die probiotischen Mischung VSLBeschleunigt Magengeschwür Heilung durch Stimulieren Vascular Endothelial Growth Factor