NIH-Wissenschaftler entwickeln neue Methode zur Probenvorbereitung zum Nachweis von SARS-CoV-2

Wissenschaftler der National Institutes of Health (NIH) haben eine neue Methode zur Probenvorbereitung zum Nachweis von SARS-CoV-2 entwickelt. das Virus, das COVID-19 verursacht. Die Methode umgeht die Extraktion des genetischen RNA-Materials des Virus, vereinfacht die Probenreinigung und reduziert möglicherweise Testzeit und -kosten. Die Methode ist das Ergebnis einer Zusammenarbeit von Forschern des National Eye Institute (NEI), das NIH Clinical Center (CC), und das National Institute of Dental and Craniofacial Research (NIDCR).

Diagnostische Tests bleiben ein entscheidendes Instrument im Kampf gegen die COVID-19-Pandemie. Standardtests zum Nachweis von SARS-CoV-2 beinhalten die Amplifikation viraler RNA auf nachweisbare Werte unter Verwendung einer Technik, die als quantitative reverse Transkriptions-PCR (RT-qPCR) bezeichnet wird. Aber zuerst, die RNA muss aus der Probe extrahiert werden. Hersteller von RNA-Extraktionskits hatten während der COVID-19-Pandemie Schwierigkeiten, mit der Nachfrage Schritt zu halten. die Testkapazität weltweit behindert. Mit dem Auftauchen neuer Virusvarianten, das Bedürfnis nach besseren, schnellere Tests sind größer denn je.

Ein Team unter der Leitung von Robert B. Hufnagel, M. D., Ph.D., Leiter der Abteilung für medizinische Genetik und ophthalmologische Genomik des NEI, und Bin Guan, Ph.D., Fellow am Ophthalmic Genomics Laboratory am NEI, verwendeten einen von der Laborversorgungsfirma Bio-Rad hergestellten Chelator namens Chelex 100 Resin, um SARS-CoV-2-RNA in Proben für den Nachweis durch RT-qPCR zu konservieren.

„Wir haben Nasopharyngeal- und Speichelproben mit verschiedenen Virionkonzentrationen verwendet, um zu prüfen, ob sie für den direkten RNA-Nachweis verwendet werden könnten. " sagte Guan, der Hauptautor eines Berichts über die Technik, die diese Woche in iScience veröffentlicht wurde. „Die Antwort war ja, mit ausgesprochen hoher Sensibilität. Ebenfalls, dieses Präparat inaktivierte das Virus, Dadurch wird es für das Laborpersonal sicherer, mit positiven Proben umzugehen."

Das Team um Hufnagel machte seine Entdeckung, indem es eine Vielzahl von Chemikalien mit synthetischen und menschlichen Proben testete, um diejenigen zu identifizieren, die die RNA in Proben mit minimalem Abbau konservieren und gleichzeitig den direkten Nachweis des Virus durch RT-qPCR ermöglichen.

Um den Test zu validieren, Blake M. Warner von NIDCR, D. D. S., Ph.D., MPH, und sein Team sammelten Patientenproben (nach Forschungsprotokoll NIH IRB 20-D-0094) und lagerten sie entweder in viralen Transportmedien, oder der neu entwickelte Chelat-Harz-Puffer an der NIH Symptomatic Testing Facility.

Die Proben in viralen Transportmedien wurden vom COVID-19-Testteam im klinischen Zentrum des NIH getestet. geleitet von Karen M. Frank, M. D., Ph.D., mit konventioneller RNA-Extraktion und RT-qPCR-Tests. Die Proben im Chelat-Harz-Puffer wurden erhitzt und die virale RNA wurde dann, getestet durch RT-qPCR. Das neue Präparat steigerte die zum Testen verfügbare RNA-Ausbeute deutlich, im Vergleich zur Standardmethode.

Wir glauben, dass diese neue Methodik klare Vorteile hat, indem sie die Sensitivität erhöht, Kosten- und Zeitersparnis beim Testen. Die Methode stabilisiert die RNA bei Raumtemperatur für einen einfacheren Transport, Lagerung, und Handhabung im klinischen Umfeld."

Robert B. Hufnagel, M. D., Ph.D., Leiter der NEI Medical Genetics and Ophthalmic Genomic Unit

NEI hat das geistige Eigentum rund um diese Technologie geschützt und sucht Partner für die gemeinsame Entwicklung/Lizenzierung. Für weitere Informationen wenden Sie sich bitte an [email protected].

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