La expresión de proteínas asociadas a la resistencia a múltiples fármacos y su relación con la quimioterapia postoperatoria en la expresión individualizada cancer

gástrica de las proteínas asociadas a la resistencia a múltiples fármacos y su relación con la quimioterapia individualizada postoperatoria en el cáncer gástrico
Resumen Antecedentes

La quimioterapia adyuvante podría reducir residual las células tumorales y prevenir las recaídas, sin embargo, no todos los pacientes son adecuados para quimioterapia adyuvante. La detección de pacientes apropiados basados ​​en marcadores moleculares para la quimioterapia adyuvante individualizada es necesaria.
Métodos
Entre junio de 2002 y junio de 2004, 119 pacientes que fueron sometidos a una gastrectomía radical se analizaron retrospectivamente. Algunos pacientes tuvieron quimioterapia adyuvante basada en platino y 5-FU durante cuatro a seis ciclos. La topoisomerasa II (topo II) negativa, resistencia a múltiples proteínas (MRP) positivo y glutatión π S-transferasa (GST-π) fueron considerados como positivos tres factores de riesgo que pueden estar asociados con la resistencia a la quimioterapia y de mal pronóstico. Los pacientes fueron divididos en dos grupos:. Un grupo de alto riesgo (al menos 2 factores de riesgo) y un grupo de riesgo bajo (< 2 factores de riesgo), y se analizaron recurrencia del tumor y el tiempo de supervivencia de pacientes de los dos grupos
Resultados Francia el tiempo de recurrencia media del grupo de bajo riesgo fue significativamente mayor que la del grupo de alto riesgo (21,29 ± 11,10 frente a 15,16 ± 8,05 meses, P Restaurant < 0,01). Las tasas de supervivencia a 3 años y 5 años del grupo de alto riesgo fueron 57,4% y 42,6%, sin embargo, no tenía ninguna diferencia significativa en comparación con el 66,2% y el 58,5% del grupo de bajo riesgo (P Hotel > 0,05). En el grupo de alto riesgo, las tasas de supervivencia de 3 años de los pacientes con /sin quimioterapia fueron 62,1% y 52,0%, y las tasas de supervivencia a 5 años fueron del 44,8% y 40,0%, respectivamente, pero la diferencia no fue estadísticamente significativa (P Hotel > 0,05). En el grupo de bajo riesgo, las tasas de supervivencia de 3 años de los pacientes con /sin quimioterapia fueron 81,2% y 51,5%, y las tasas de supervivencia a 5 años fueron del 71,9% y 45,5%, respectivamente, estas diferencias fueron estadísticamente significativas (P
<. 0,05) Conclusiones

combinadas de detección de la resistencia a múltiples fármacos (MDR) relacionados con las proteínas Topo II, MRP y GST-π puede ser prospectiva valiosa para la quimioterapia individualizada postoperatorio y en la predicción de los resultados de más gástrica pacientes con cáncer de estómago.
neoplasias proteínas asociadas a la resistencia a múltiples fármacos de quimioterapia Antecedentes pronóstico Palabras clave
Hay todavía un alto riesgo de recurrencia y metástasis después de la cirugía gástrica radical y quimioterapia adyuvante puede reducir las células tumorales residuales postoperatorios y prevenir las recaídas [1, 2]. En los últimos años, los nuevos resultados de los estudios controlados aleatorios indican que la quimioterapia postoperatoria puede mejorar el pronóstico de los pacientes [3, 4]. Estos resultados han sido aceptados en las Guías de Práctica Clínica de la NCCN cáncer gástrico y se recomiendan como base de los programas de tratamiento postoperatorio. Sin embargo, algunas cuestiones que aún deben ser abordados: (1) el análisis de subgrupos indica que algunos pacientes (sexo femenino, con ganglios negativos, etapa tardía, más viejo, etcétera
) no se benefician de la terapia adyuvante y (2) se producen problemas con la quimioterapia toxicidad y el cumplimiento, lo que hace que algunos pacientes se retiren del tratamiento debido a eventos adversos.
por lo tanto, la quimioterapia adyuvante postoperatoria es beneficioso para algunos pacientes, sin embargo, puede aumentar la carga del tratamiento y reducir la inmunidad de otros pacientes. Por lo tanto, es demasiado pronto para determinar un programa como la quimioterapia adyuvante estándar para el cáncer gástrico. Todavía hay muchos problemas que necesitan investigaciones de alta calidad para responder antes de la quimioterapia adyuvante individualizada se convierte en norma. Lo que es particularmente digno de mención es que el estudio ToGA ha confirmado el valor de Herceptin en el tratamiento del cáncer gástrico avanzado [5]. Recientemente, Deng y sus colegas proporcionadas por primera vez un mapa molecular detallada de las alteraciones genómicas en el cáncer gástrico, que reveló varios objetivos prometedores para terapias subtipo específico [6]. La detección de pacientes apropiados basados ​​en marcadores moleculares se convertirá en una línea de investigación importante para la quimioterapia individualizada [7].
A múltiples fármacos proteínas asociadas a la resistencia de la topoisomerasa II (topo II), la proteína de resistencia a múltiples fármacos (MRP) y π glutatión S-transferasa (GST π) son la base de la resistencia a múltiples fármacos en tumores malignos [8, 9]. Se había confirmado que MRP y GST-π sobreexpresión, y disminución de la expresión de Topo II son importantes mecanismos que median la resistencia a múltiples fármacos [10]. Por lo tanto, se llevó a cabo este estudio de la resistencia a múltiples fármacos (MDR
) proteínas de genes asociados a un tratamiento individualizado en el postoperatorio de cáncer gástrico.
Métodos
Pacientes y muestras de tejidos
El Entre junio de 2002 y junio de 2004, una total de 119 pacientes que fueron sometidos a una gastrectomía radical en el Departamento de Cirugía abdominal, hospital del cáncer de Zhejiang, se analizaron retrospectivamente. De estos pacientes, 77 casos eran varones y 42 casos eran mujeres, edades 25 a 78 años (media 57,3 ± 6,7 años). Fase I /II incluyó 39 casos y la Fase III /IV incluyó a 80 casos; lesiones mayores de 5 cm se encontraron en 76 casos y lesiones < 5 cm se encontraron en 43 casos; y los pacientes con /sin metástasis de los ganglios linfáticos fueron identificados durante 93 casos y 26 casos, respectivamente. Ninguno de los pacientes recibió quimioterapia preoperatoria u otro tratamiento para el tumor, y algunos pacientes tuvieron quimioterapia adyuvante basada en platino y 5-fluorouracilo (5-FU) durante cuatro a seis ciclos. escrito el consentimiento informado se obtuvo de todos los participantes en el estudio. El estudio fue aprobado por el Comité de Ética del Hospital Zhe Jiang cáncer.
La tinción inmunohistoquímica
Los anticuerpos utilizados en este estudio fueron adquiridos de la empresa GBI (Golden Bridge International, Inc., Mukilteo, WA, EE.UU.). La tinción inmunohistoquímica se llevó a cabo en las, de 4 micras de espesor, las muestras de tejido incluido en parafina fijado en formol. Páncreas, colon, y muestras de ovario se utilizaron como controles positivos para la Topo II, MRP, y GST-π, respectivamente. Las muestras se evaluaron de forma independiente por dos patólogos a ciegas. Sólo se consideraron las células con tinción de color marrón como positivo. La intensidad de la expresión de MDR
relacionados con las proteínas se estratificó en cuatro categorías que se anotó la siguiente manera: 1) negativos (-) no tuvo citomembrana apreciable, la tinción nuclear o citoplasmática o habían tinción de < 10% de células neoplásicas; 2) 1+ tenía tinción apreciable en 10 a 25% de las células neoplásicas; 3) 2 + tenía tinción apreciable en 25 a 75% de las células neoplásicas; y 4) 3+ tenido tinción apreciable de >. el 75% de las células neoplásicas
seguimiento de los pacientes
Los pacientes recibieron seguimiento de rutina después de la gastrectomía radical vez cada trimestre durante dos años y posteriormente, una vez cada medio año ( los pacientes que recibieron quimioterapia fueron seguidos con los ciclos de quimioterapia). Topo II negativa, positiva y MRP GST-π positiva fueron considerados como los tres factores de riesgo que pueden estar asociados con la resistencia a la quimioterapia y de mal pronóstico. Los pacientes fueron divididos en dos grupos: el grupo de alto riesgo (al menos 2 factores de riesgo) y el grupo de bajo riesgo (< 2 factores de riesgo), y se analizaron la recurrencia del tumor y el tiempo de supervivencia de pacientes de los dos grupos
. el análisis estadístico
Todos los datos del experimento se han integrado en un conjunto de datos completa. Los datos numéricos se registran directamente y los datos de medición se describen como mediana y rango. El análisis estadístico se realizó en el programa SPSS versión 16.0 (SPSS Inc., Chicago, IL), y P
. < 0,05 fue considerado estadísticamente significativo
Resultados
La tinción positiva de Topo II se reconoció que se expresa en el núcleo celular (Figura 1A), mientras que MRP y GST-π se expresaron en el citoplasma de las células malignas (Figura 1B y la Figura 1C). Figura 1 Tinción inmunohistoquímica de las proteínas asociadas a la resistencia a múltiples fármacos. Una tinción inmunohistoquímica de la Topo II se identificó en el núcleo celular (aumento original x 400). La tinción inmunohistoquímica B de MRP se reconoció que se expresa en el citoplasma de las células malignas (aumento original x 400). C tinción inmunohistoquímica de GST-π se reconoció que se expresa en el citoplasma de las células malignas (aumento original x 400). México La tasa de expresión de Topo II en tejidos normales (75,1%) fue mayor que en los tejidos tumorales (73,9 %) (no significativo, P
> 0,05). Al comparar el bien, moderadamente y pobremente diferenciado grado de expresión, una correlación significativa entre la expresión se demostró Topo II y el nivel de diferenciación (86,3%, 64,5% y 64,9%, respectivamente, P
< 0,05). En cuanto a la planificación de necesidades, la tasa de positivos fue del 42,9% en los tejidos tumorales, mientras que todos los tejidos gástricos normales no estaban manchadas. No hay diferencias significativas en la expresión de MRP se encontraron en relación con los factores clinicopatológicos. La tasa positiva de GST-π en pacientes con cáncer gástrico fue mayor que la de los tejidos normales (51,3% frente a 23,2%, P
< 0,05). También se encontraron diferencias significativas en la expresión de GST-π en relación con el sexo (masculino frente al femenino, 59,7% frente a 35,7%, P Hotel < 0,05) y diferenciación (bueno, moderado y mal, 40.5%, 41.9% y 64.7 %, respectivamente, P Hotel < 0,05) (Tabla 1) .Tabla 1 La expresión de la topoisomerasa II, MRP, y GST-π y su relación con los factores clínico-patológicos
Características clínico
Protectores
Topo II
MRP
GST-π
+ (%) guía empresas χ2

P
+ (%) guía empresas χ2
P
+ (%) guía empresas χ2
P
Sexo Masculino

77
54 (70,1%)
29 (37,7%)
46 (59,7%)
Female
42
34(81.0%)
1.65
0.198
22(52.4%)
2.40
0.121
15(35.7%)
6.27
0.012*
Age
≤50 y
33
24 (72,7%)
16 (48,5%) página 14 (42,4%) Hotel > 50 y
86
64(74.4%)
0.03
0.851
35(40.7%)
0.59
0.442
47(54.7%)
1.42
0.232
Tumor tamaño
≥5 cm
76
59 (77,6%)
35 (46,1%)
40 (52,6%) Hotel < 5 cm
43
29(67.4%)
1.48
0.224
16(37.2%)
0.88
0.349
21(48.8%)
0.16
0.691
Differentiation
Así
51
44 (86,3%)
20 (39,2%)
33 (40,5%)
Moderadamente
31
20 (64,5%) página 13 ( 41,9%) página 13 (41,9%)
Poorly
37
24(64.9%)
7.04
0.029*
18(48.6%)
0.79
0.672
15(64.7%)
6.47
0.039*
TNM puesta en escena
I /II
39
25 (64,1%)
17 (43,6%)
16 (41,0%)
III/IV
80
63(78.8%)
2.92
0.087
34(42.5%)
2.57
0.109
45(56.3%)
2.43
0.119
Lymph
nodo positivo
93
71 (76,3%)
40 (43,0%)
47 (50,5%)
Negative
26
17(65.4%)
1.27
0.260
11(42.3%)
0.004
0.949
14(53.8%)
0.09
0.765
* P Hotel < 0.05. México La tasa de supervivencia de 3 y 5 años de los 119 pacientes fueron 57,3% y 49,2%, respectivamente. No se observó ninguna diferencia estadística entre la proteína sola (topo II, MRP o GST-π) expresión y el tiempo de recurrencia o la supervivencia. Cuando los pacientes se dividieron en dos grupos: el grupo de alto riesgo (al menos 2 factores de riesgo) y el grupo de bajo riesgo (< 2 factores de riesgo), el tiempo medio de recurrencia del grupo de bajo riesgo fue de 21.29 ± 11.10 meses y estaba significativamente más larga que 15.16 ± 8.05 meses del grupo de alto riesgo (P Hotel < 0,01). La tasa de supervivencia a 3 años y 5 años del grupo de alto riesgo fue del 57,4% y el 42,6%; Sin embargo, no hubo una diferencia significativa en comparación con el 66,2% y el 58,5% del grupo de bajo riesgo (P Hotel > 0,05).
En el grupo de alto riesgo, las tasas de supervivencia de 3 años de los pacientes con la quimioterapia y los pacientes sin quimioterapia fueron 62,1% y 52,0%, y las tasas de supervivencia a 5 años fueron del 44,8% y 40,0%, pero la diferencia no fue estadísticamente significativa (P Hotel > 0,05) (Figura 2). En el grupo de bajo riesgo, las tasas de supervivencia de 3 años de los pacientes con quimioterapia y los pacientes sin quimioterapia fueron 81,2% y 51,5%, las tasas de supervivencia a 5 años fueron del 71,9% y el 45,5%, y la diferencia fue estadísticamente significativa (p
< 0,05) (Figura 3). Figura 2 La supervivencia global de los pacientes con o sin quimioterapia en el grupo de alto riesgo.
Figura 3 la supervivencia global de los pacientes con o sin quimioterapia en el grupo de bajo riesgo. Discusión

La quimioterapia adyuvante después de la operación ha sido considerado como necesario para eliminar las micrometástasis sistémicas y células malignas remanentes en la mayor medida posible, en última instancia, mejorar la supervivencia [11, 12]. Lamentablemente, hasta ahora, este tipo de estrategia de tratamiento adyuvante ha sido decepcionante como resultado de la resistencia a múltiples fármacos (MDR) de las células malignas a diversos agentes quimioterapéuticos [13, 14]. Por lo tanto, la detección y la evaluación de la MDR
genes o proteínas pueden ayudar a guiar la quimioterapia adyuvante en el cáncer gástrico y determinar el pronóstico de los pacientes.
MRP, uno de los mecanismos más estudiados de MDR, actúa como un transporte hacia el exterior dependiente de ATP bombear y disminuye la acumulación intracelular de los fármacos mediante la reducción del mecanismo de co-transporte de glutatión [15]. Varios estudios anteriores han indicado también que la sobreexpresión de MRP más frecuentemente predice MDR. MRP confiere resistencia a los agentes alquilantes, la ciclofosfamida y otros fármacos [16]. GST-π es una enzima multifuncional que juega un papel crítico en la desintoxicación celular por catalizar la conjugación de glutatión reducido a compuestos hidrófobos y electrófilos [17]. GST-π se considera que está asociada con el flujo de salida de cis-diaminodichloroplatin (CDDP), fluorouracilo y doxorrubicina (DOX) a través de unión a ATP cassette transportistas [18]. Topo II es el objetivo de varios agentes contra el cáncer, tales como doxorrubicina, VM26, VP16 y mitoxantrona [19]. La disminución de expresión de Topo II y los cambios en la actividad de la enzima resultado de la disociación de los complejos escindibles y la reducción de daños en el ADN, y finalmente causan la resistencia a los medicamentos [20].
En nuestro estudio, el análisis estadístico indica que ninguna de las tres proteínas eran correlacionó significativamente con las tasas de recidiva y supervivencia, por lo que la determinación de un único indicador de la eficacia de la quimioterapia adyuvante es difícil. Debido positivo y GST-π positiva fueron considerados como factores de riesgo de tres que pueden estar asociados con la resistencia a la quimioterapia y de mal pronóstico, estos pacientes se dividieron en dos grupos Topo II negativa, MRP: el grupo de alto riesgo (≥ 2 factores de riesgo) y la grupo de riesgo bajo (< 2 factores de riesgo). El tiempo de recurrencia del grupo de bajo riesgo fue significativamente mayor que la del grupo de alto riesgo, lo que sugiere que la disminución de expresión de Topo II y alta expresión de MRP y GST-π se asoció con la invasión del tumor, recurrencia y de mal pronóstico, y la esta conclusión ha sido confirmada en el cáncer de ovario [21]. En el grupo de bajo riesgo, la tasa de supervivencia a 3 años y 5 años de los pacientes con quimioterapia fue mayor que la de los pacientes sin quimioterapia. Este resultado indica que el 5-FU y la quimioterapia adyuvante basada en platino pueden aumentar los beneficios de supervivencia para los pacientes en el grupo de bajo riesgo. resistencia a la quimioterapia era poco frecuente en estos pacientes, y en teoría, la quimioterapia postoperatoria se puede hacer en plena forma, y ​​el pronóstico del paciente será mejorado significativamente. En el grupo de alto riesgo, la tasa de supervivencia a 3 años y 5 años de los pacientes con quimioterapia fue mayor que la de los pacientes sin quimioterapia, pero la diferencia no fue estadísticamente significativa. Por lo tanto, el 5-FU y la quimioterapia adyuvante basada en platino no mejoró el pronóstico del grupo de alto riesgo, y para estos pacientes, la quimioterapia postoperatoria debe ser cuidadosamente analizado y seleccionado. Estas conclusiones se basan en un pequeño número de casos y pueden tener algunas limitaciones. Una amplia muestra de pacientes está siendo objeto de seguimiento en nuestro centro, y los resultados detallados, incluyendo el análisis de subgrupos (de género, la metástasis de los ganglios linfáticos, puesta en escena, etcétera
.), Se informó en un futuro próximo.
Conclusiones
por lo tanto, la determinación combinada de MDR
relacionados con las proteínas Topo II, MRP y GST-π puede ser prospectiva valiosa para la optimización de los regímenes de quimioterapia y predecir aún más los resultados de los pacientes. Las investigaciones futuras deberían centrarse en la detección combinada de marcadores moleculares (como HER-2, MDR
relacionados con las proteínas, moléculas de señalización RTK /RAS, etcétera
.) Para la quimioterapia individualizada y llevar a cabo ensayos clínicos multicéntricos, los resultados . puede ser emocionante
consentimiento
escrito el consentimiento informado se obtuvo de la paciente para la publicación de este informe y las imágenes que lo acompañan
abreviaciones
CDDP:.
CIS-diaminodichloroplatin

DOX: doxorubicina

GST-π:
glutatión S-transferasa π
MDR:
resistencia a múltiples fármacos
MRP:
proteína de resistencia a múltiples fármacos
Topo II:
topoisomerasa II

5-FU:. página 5-fluorouracilo
Declaraciones
Agradecimientos
Este estudio fue apoyado por la Fundación de Ciencias Naturales de la provincia de Zhejiang de China (No.LY14H160007). 'original presentado archivos de imágenes
a continuación se presentan los enlaces a los archivos de los autores presentados original para imágenes
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Contribuciones de los autores Yu PF, Du YA, Cheng XD, Yu QM, Huang L, Dong RZ diseñarse y realizarse el estudio, analizaron los datos, y ayudó a escribir el manuscrito. Yu PF es el investigador principal, y se revisó y corrigió el manuscrito. Todos los autores leído y aprobado el manuscrito final.

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