PLOS ONE: NMe2 Réduit la prolifération, la migration et l'invasion des cellules de cancer gastrique à limiter la métastase

Résumé

Le cancer gastrique est l'une des tumeurs malignes les plus courantes et a un taux élevé de métastases. Nous supposons que (nucléoside diphosphate Kinase 2) de NMe2, qui a déjà été considéré comme un gène anti-métastatique, joue un rôle dans l'invasivité des cellules de cancer gastrique. En utilisant une technologie de puces de tissu et immunohistochimie, nous avons démontré que l'expression NMe2 était associée à des niveaux de différenciation des cellules cancéreuses gastriques et leurs métastases dans les ganglions lymphatiques. Lorsque le le produit du gène de NMe2 a été surexprimé par; in vitro
transfection stable, les cellules de BGC823 et MKN45 lignées cellulaires de cancer gastrique ont réduit les taux de prolifération, la migration et l'invasion par le collagène matrice, ce qui suggère une activité inhibitrice de NMe2 dans la propagation et l'invasion d'un cancer gastrique. NMe2 pourrait, par conséquent, sévère comme un marqueur de risque de invasivité de cancer de l'estomac et une nouvelle cible potentielle pour la thérapie génique pour améliorer ou induire l'expression NMe2

Citation:. Liu Yf, Yang A, Liu W, Wang C, Wang M, Zhang L, et al. (2015) NMe2 Réduit la prolifération, la migration et l'invasion des cellules de cancer gastrique pour limiter Métastase. PLoS ONE 10 (2): e0115968. doi: 10.1371 /journal.pone.0115968

Academic Editor: Jian Cao, Stony Brook University, ÉTATS-UNIS

Reçu le 18 Avril 2014; Accepté 3 Décembre 2014; Publié 20 Février, 2015

Droit d'auteur: © 2015 Liu et al. Ceci est un article en accès libre distribué sous les termes de la licence Creative Commons Attribution, qui permet une utilisation sans restriction, la distribution et la reproduction sur tout support, pourvu que l'auteur et la source originelle sont crédités

Financement: Cette étude a été soutenue par le programme de soutien pour Chang-Jiang Scholars et innovante équipe de recherche de l'Université (PCSIRT: IRT1137) et les fonds de recherche de base pour les universités centrales (lzujbky 2013-CT06). Les bailleurs de fonds ont joué aucun rôle dans la conception de l'étude, la collecte et l'analyse des données, la décision de publier, ou de la préparation de ce manuscrit

Intérêts concurrents:.. Les auteurs ont déclaré aucun conflit d'intérêts existent

Présentation

Le cancer reste une cause majeure de décès, représentant 14,1 millions de nouveaux cas et 8,2 millions de décès en 2012 [1]. sont attendus Le nombre de nouveaux cas d'augmenter de 70% dans le monde à 22 millions au cours des deux prochaines décennies [2]. Les cancers du poumon, de l'estomac, du foie, du côlon et seins ont la plus forte mortalité [3]. les cellules cancéreuses gastriques peuvent directement se propager à des organes adjacents (invasion locale) tels que le pancréas, le côlon transverse, le foie et la rate ainsi que de noeuds distants lymphatiques, les poumons et le tissu osseux. Tout en étant deux processus pathologiques différents, l'invasion locale et les métastases à distance sont reliés entre eux où l'ancien favorise souvent et propage ce dernier. Les mutations génétiques et leurs produits aberrants sont les caractéristiques clés et les catalyseurs de cellules cancéreuses pour la prolifération, la résistance à l'apoptose, l'invasion locale, les métastases, l'évasion immunitaire, l'angiogenèse, et la réponse aux dommages de l'ADN. NME
(nucléoside diphosphate Kinase 2 ou cellules non métastatiques) représente un groupe de gènes du cancer de régulation associés au cancer et /ou.

NME
se compose d'une famille de 10 gènes qui sont également connus comme les gènes de la nM23 [4] et a été associée à la suppression de la métastase du cancer et invasion tissulaire locale [5]. Parmi les membres de cette famille de gènes, NME1
et NMe2
ont été largement étudiés pour leurs activités de cancer supprimer.
NMe2, qui est mappé sur le chromosome 17q21 [6,7], code pour la sous-unité B de la kinase nucléoside diphosphate (NDP) [4]. Son produit a été rapporté pour inhiber la métastase du cancer du sein et des cellules de mélanome; et une diminution de son expression est corrélée à un potentiel métastatique plus élevé de ces cancers [8,9]. Cependant, NMe2 de la surexpression a également été associée à un mauvais pronostic pour le neuroblastome et l'ostéosarcome [10,11]. En outre, le gène de la NMe2 n'a pas été corrélée à la métastase de hépatocellulaire endomètre et carcinome thyroïdien [12-14]. Ces données apparemment contradictoires suggèrent que NMe2 peut avoir des effets différents sur les différents types de cellules cancéreuses et leur capacité d'envahir localement les tissus environnants ou métastaser à des organes éloignés.

En raison de ces activités de NMe2 diverses sur différents types de cancer, nous avons analysé tissus enlevés chirurgicalement de patients atteints de cancer gastrique et associés l'expression NMe2 dans ces tissus avec leurs caractéristiques pathologiques. Cette étude de la pathologie a été complétée par in vitro
expériences, où nous avons examiné les taux de prolifération, la migration et l'invasion des cellules cancéreuses gastriques qui ont été transfectées de façon stable avec un humain NMe2
ADNc pour surexprimer son produit . Ces in vitro
expériences sont conçues pour comprendre l'invasivité des cellules cancéreuses qui expriment différents niveaux de NMe2.

Matériel et méthodes

Cette étude a été approuvée par le comité d'éthique sur mener des recherches humaines de l'Université de Lanzhou, School of Medicine. Les patients ou leurs tuteurs à condition que leur consentement éclairé avant d'être recruté dans l'étude.

Tissue immunohistochimie

Nous avons analysé l'expression NMe2 dans le cancer gastrique et adjacents tissus normaux enlevés chirurgicalement à partir de 139 patients admis dans l'armée Hôpital régional dans la ville de Lanzhou à partir de 2011 à 2012. Aucun patient n'a reçu une chimiothérapie ou une radiothérapie avant la chirurgie. Ces tissus cancéreux enlevés chirurgicalement ont été traitées pour hématoxyline et l'éosine (HE) coloration. En bref, un module de cire a été frappé 42 trous d'ouverture (6 × 7 trous /puce) de 2 mm chacune. blocs de tissus ont été intégrés dans ces trous (un échantillon /trou). Ce module de cire a ensuite été sectionné de telle sorte que les tissus de 40 patients ont pu être examinées simultanément sur une seule lame pour assurer l'uniformité tache. Pour le contrôle, les premiers et derniers trous ont été intégrés avec les tissus du foie non-cancéreuses et les reins, respectivement. NMe2 expression a été détectée en utilisant un kit d'immunohistochimie commerciale (Beijing ZSGB Biotechnology Co., Ltd.) avec un anticorps anti-humain NMe2 lapin (dilution 1: 300, Beijing Biosynthèse Biotechnology Co., Ltd.) selon les instructions du fabricant. Les niveaux d'expression NMe2 ont été numériquement marqué comme indiqué dans le Tableau 1 par un pathologiste qui a été aveuglé à l'information clinique de ces patients.

Culture cellulaire et transfection d'ADNc

Les cellules de l'estomac BGC823 et MKN45 des lignées de cellules cancéreuses ont été achetés à l'Académie chinoise des sciences (Shanghai, Chine). Les cellules de la ligne de BGC823 étaient à l'origine d'un homme de 62 ans présentant un adénocarcinome peu différencié de l'estomac et ceux de la ligne MKN45 dérivée d'une masse métastatique du foie à partir d'un 62-year-old femme japonaise avec un adénocarcinome indifférencié l'estomac. Les cellules provenant de deux lignées avaient des taux résiduels d'expression NMe2 et sont donc idéal pour étudier l'impact de la surexpression de ce produit de gène dans des cellules de cancer gastrique in vitro.

Les cellules ont été cultivées dans un milieu DMEM (Sigma, St. Louis, MO, États-Unis) contenant 10% de sérum de veau fœtal (Hangzhou Sijiqing Biological Engineering Materials Co., Ltd, Hangzhou, Chine) à 37 ° C avec 5% de CO _{2 et 95 % air. À 70-80% de confluence, ces cellules ont été transfectées avec un ADNc pour le gène
NMe2 humain qui a été clone dans un vecteur pcDNA3.1 (Shanghai GenePharma Co., Ltd. Shanghai, Chine) en utilisant la lipofectamine 2000 en tant que support d'ADN (Invitrogen, grand Island, NY, États-Unis). Les cellules exprimant de manière stable NMe2 (désigné par NMe2) ont été sélectionnées en cultivant les cellules transfectées dans du milieu DMEM contenant 1 mg /ml de G418. Les cellules de contrôle ont été transfectées avec le vecteur pcDNA sans ADNc de la NMe2 insert (désignés comme mock) et ont subi la même sélection. cellules parentales Un transfectées ont également été examinés en tant que témoins de référence. Une surexpression de NMe2 a été déterminée par RT-PCR pour quantifier le niveau de NMe2
ARNm et par immunoempreintes de lysats de cellules transfectées en utilisant un anticorps NMe2 polyclonal (1. 100 dilution, Beijing Biosynthèse Biotechnology Co., Ltd.)}

l'isolement de l'ARN et RT-PCR

l'ARN total a été isolé à partir de cellules transfectées et non transfectées en utilisant un kit d'isolement d'ARN commercial (Takara biotechnologie, Dalian, Liaoning, Chine) selon les instructions du fabricant. ARN (2 pg) provenant de chaque échantillon a été transcrit en inverse en utilisant un kit de RT PrimeScript suivant le protocole du fabricant. L'ADN complémentaire inverse transcrit à partir de l'ARN extrait à partir de ces cellules a été amplifié par une Taq polymérase en utilisant les amorces suivantes pour le NMe2
ADNc: 5'-AAGCAGCACTACATTGACCTGAAA-3 '(avant) et 5'-3-GGTCTCCCCAAGCATCACTC ' (sens inverse). Glycéraldéhyde 3-phosphate déshydrogénase (GAPDH) a également été amplifié en tant que témoin en utilisant les amorces suivantes: 5'-GCACCGTCAAGGCTGAGAAC-3 '(avant) et 5'-TGGTGAAGACGCCAGTGGA-3' (inverse). La réaction d'amplification a été initiée par l'ADN dénaturation à 95 ° C pendant 5 min, suivie de 30 cycles de matrice dénaturants à 94 ° C pendant 1 min, un annelage d'amorce à 60 ° C pendant 1 minute et une extension d'amorce à 72 ° C pendant 1 min. La surexpression NMe2 a été quantitativement définie comme une augmentation de NMe2
ARNm par deux fois ou plus à partir de la ligne de base fixé par les cellules transfectées simulacres.

Immunofluorescence du produit
NMe2

des cellules transfectées de façon stable avec l'ADNc
NMe2 et un vecteur de véhicule ont été étalées sur des lamelles de verre et on les laisse croître jusqu'à la confluence. Ils ont été rincées deux fois avec une solution saline physiologique glacée tamponnée au phosphate (PBS), fixées dans 4% de paraformaldehyde dans du PBS pendant 15 mn, perméabilisées avec 0,5% de Triton X-100 et incubées avec 1% de sérum-albumine bovine (SAB) pour 30 minutes pour bloquer la liaison non spécifique. Les cellules ont ensuite été incubées avec un anticorps de lapin contre NMe2 humain (1: 100, Beijing Biosynthèse Biotechnology) pendant 24 heures à 4 ° C, suivie d'une incubation avec un anticorps secondaire conjugué à FITC (1: 100, Beijing Biosynthèse Biotechnology) pendant 1 h . Tous les anticorps ont été dilués dans du PBS contenant 1% de BSA. Les noyaux ont été DAPI (1: 100 dans du PBS, 10 min à température ambiante).

Cycle cellulaire analyse

Les cellules exprimant de manière stable les cellules NMe2 et de contrôle dans la culture ont été recueillies et fixées avec 70% d'éthanol glacé à 4 ° C pendant 24 heures, on l'a lavé deux fois avec du PBS glacé, puis traitée avec de la RNase A (20 ug /ml) pendant 30 min à 37 ° C. Ils ont été incubés avec l'iodure de propidium (10 ug /ml de concentration finale) dans l'obscurité pendant 30 min à température ambiante avant l'analyse par cytométrie en flux pour l'ADN ploïdie.

Colony-formation test

transfectées et des cellules témoins ont été cultivées à une densité initiale de 1.000 cellules par 100 mm de boîte de culture dans un milieu DMEM complet pendant 4 semaines. Ils ont ensuite été colorées avec du violet de méthyle. Toutes les colonies de cellules qui sont plus grandes que 2 mm de diamètre (≥ 50 contenaient des cellules) ont été comptées dans trois plats séparés et exprimés en moyenne ± SEM. Aux fins de la validation des données, nous avons également compté les cellules viables qui avaient été mises en culture pendant 96 heures. En bref, les cellules BCG823 et MKN45 parentales et des cellules qui ont été transfectées de manière stable avec soit un NMe2
ADNc humain ou le vecteur de véhicule (PC-ADN 3,1) ont été étalées à une densité de 2 x 10 ^{4 cellules /ml. Ils ont été détachés 48-96 heures après l'ensemencement initial avec 1% de trypsine et centrifugés à 1600 x g. Les culots cellulaires ont été remis en suspension dans du PBS et mises en incubation avec 0,04% de bleu trypan pendant 3 min. Les cellules survivantes ont été comptées sur un hémocytomètre.}

Des tests pour la migration des cellules

Deux analyses complémentaires ont été effectués pour mesurer l'impact de la surexpression NMe2 sur le taux de migration des cellules. La première était un essai de cicatrisation, où les cellules ont été étalées dans des plaques à 6 puits et on les laisse croître jusqu'à ≥ 95% de confluence. Après avoir lavé les cellules deux fois avec du PBS, une pointe de pipette stérile a été utilisé pour rayer la monocouche cellulaire (4-5 rayures parallèles /plaque). Les cellules ont été à nouveau lavées avec du PBS, photographiées pour marquer les pistes grattées et mises en incubation avec 2,5 ml de milieu DMEM exempt de sérum. À un taux de référence de la migration cellulaire, une zone rayée a été partiellement couverte par les cellules ont migré dans la zone blessée 24-48 h après la blessure, résultant dans une zone exempte de cellules plus petites. Étant donné que cet essai de cicatrisation est semi-quantitative, les résultats ont ensuite été validés par un test de migration cellulaire Transwell. En bref, 6 × 10 ^{5 cellules en suspension dans 500 ul de milieu sans sérum contenant 0,1% de BSA ont été étalées dans un Transwell (BD Biosciences), qui a été placée dans une plaque à 24 puits. La chambre inférieure contient 500 ul de milieu DMEM complet. Les cellules ont été autorisés à se développer dans la chambre supérieure pendant 24 heures afin de faciliter la migration des cellules de la chambre supérieure à la chambre inférieure. A la fin de cette période d'incubation, la membrane dans la chambre supérieure a été fixé avec 4% de paraformaldehyde pendant 30 minutes, lavé avec de l'eau distill et séché à l'air. Les cellules sur le côté opposé de la chambre (transmigré) ont été colorées avec 0,1% de violet de méthyle (Dade-Behring, Newark, DE) pendant 30 minutes, lavées, et visualisées sous un microscope en haut à droite (x 400, NIKON). La migration cellulaire a été définie comme le nombre de cellules sur la membrane dans 5 champs d'examen aléatoires.}

Essai pour

Transwell les chambres de cellules invasion ont été revêtues avec le type de queue de rat I collagène fibrillaire [15] pendant 30 min à 37 ° C. Le fluide en excès a été éliminé et les chambres d'air revêtues ont été séchées pendant 1 heure dans un environnement stérile. Les cellules ont été mises en suspension dans 500 ul de milieu DMEM sans sérum contenant 0,1% de BSA à une densité finale de 6 x 10 ^{5 et plaquées sur la matrice de collagène dans un Transwell qui a été placée dans une plaque à 24 puits. La chambre inférieure contient 500 ul de milieu DMEM complet. Les cellules sont restées sur la surface de la membrane ont été doucement retiré 24 heures après que les cellules ont été ensemencées et la membrane ont été fixées et colorées pour les cellules qui avaient transmigré à travers la matrice de collagène sur le côté opposé de la membrane Transwell.}

Analyses statistiques

Toutes les données ont été analysées en utilisant le programme statistique SPSS 20.0. Des valeurs quantitatives ont été exprimées en moyenne et SEM. Les analyses statistiques suivantes ont été utilisées dans l'étude: Fisher test exact ou le test du chi carré pour définir la relation entre l'expression NMe2 et les caractéristiques pathologiques de tissu cancéreux; un moyen de comparaison ANOVA de groupe entre les cellules parentales et des cellules transfectées avec soit un vecteur de véhicule ou d'un NMe2
ADNc humain; et Pearson analyse de la corrélation entre l'expression NMe2 et la différenciation et la métastase des cellules cancéreuses.

Résultats

Association d'expression NMe2 avec des caractéristiques histologiques de cancer gastrique

Nous avons recueilli des échantillons chirurgicaux de 139 patients atteints d'un adénocarcinome gastrique. Le tableau 2 présente les données démographiques de ces patients et les caractéristiques histologiques de tissu cancéreux de ces patients. expression NMe2 était faible ou non détectée dans les tissus peu différenciés, mais a été intense dans le tissu bien différencié à un niveau comparable à un tissu normal adjacent (Fig. 1). Un niveau élevé d'expression NMe2 a été associée à un taux significativement réduit de métastases dans les ganglions lymphatiques ( p = 0,038
), mais pas avec la taille de la tumeur primitive et la profondeur de l'invasion du cancer. Une analyse de corrélation de Pearson a montré que l'expression NMe2 était indépendamment associée à des taux de différenciation cellulaire (r = 0,436, p
= 0,000) et la propagation aux ganglions lymphatiques locaux (r = -0,281, p
= 0,001, tableau 1).

effet de NMe2 sur la prolifération de cellules de cancer gastrique dans la culture

Pour examiner davantage l'association d'expression NMe2 avec des caractéristiques pathologiques des cellules de cancer gastrique, nous avons étudié les cellules du BGC823 et MKN45 lignées de cancer gastrique, qui a exprimé NMe2 faiblement à un niveau par rapport à un tissu de cancer peu différencié (Fig. 1). Ces cellules ont été transfectées avec un être humain
NMe2 NMe2 ADNc pour surexprimer quantitativement mesurée par une augmentation de la NMe2
ARNm produit protéique (RT-PCR quantitative) et NMe2 (immunofluorescence, Fig. 2 ).

Nous avons ensuite étudié la façon NMe2 surexprimant la croissance cellulaire régulée par la mesure de la ploïdie de l'ADN et la formation de colonies de ces cellules. Nous avons détecté aucune différence dans la ploïdie de l'ADN entre les cellules surexprimant NMe2 et les cellules non transfectées et faussement transfectées par les deux lignes (tableau 3 et S1 fig.), Ce qui suggère une augmentation de l'expression NMe2 n'a eu aucun effet sur le cycle cellulaire. Cependant, les cellules surexprimant NMe2 avaient une capacité sensiblement réduite à former des colonies dans la culture par rapport à sham transfectées et les cellules non transfectées (Fig. 3). Cette observation a été validée par les résultats d'une méthode cellule de comptage (Fig. 3C)

Effet de NMe2 sur la migration et l'invasion cellulaire

Nous avons ensuite évalué la capacité des cellules à migrer parce NMe2 surexprimant une migration directionnelle est une condition importante pour l'invasion des cellules cancéreuses aux tissus environnants. Cette migration directionnelle a été examinée à l'aide d'un test de cicatrisation, qui mesure le taux de migration des cellules dans la zone de la blessure créée par un objet pointu. Comme on le voit sur la Fig. 4A et 4B, la largeur d'une zone blessée après 48 heures dans les cultures était plus grande pour cellules transfectées de NMe2 que pour les cellules non transfectées et faussement transfectées. La migration lente a été trouvée dans les cellules des deux lignées cellulaires, ce qui suggère que les cellules surexprimant NMe2 ont migré beaucoup plus lent. Parce que cette cicatrisation dosage est semi-quantitative, nous avons également de mesurer quantitativement le taux de migration des cellules en utilisant un dosage Transwell. Conformément à l'essai de cicatrisation, les cellules surexprimant NMe2 migrés à ~ 50% des cellules non transfectées ou faussement transfectées (Fig. 4).

Une diminution de la migration cellulaire pourrait réduire la capacité de ces cellules pour envahir les tissus environnants. Afin d'étudier cette possibilité, on mesure l'invasion des cellules cancéreuses à la matrice de collagène dans un dosage de la chambre Transwell bien établie. BGC823 cellules qui surexprimaient NMe2 réduit de manière significative leur capacité à envahir une matrice de collagène à 60% des cellules non transfectées et faussement transfectées (Fig. 5). Le taux d'invasion a été similaire réduite MKN45 cellules transfectées avec le NMe2
ADNc par rapport aux cellules parentales et celles transfectées avec un vecteur de véhicule (Fig. 5).

Discussion

Nous avons étudié la relation entre l'expression et les caractéristiques du cancer de l'estomac par voie chirurgicale dans les tissus prélevés chez des patients NMe2 et dans des cellules cultivées à partir de deux lignées de cancer gastrique connu. L'étude est nécessaire parce que NMe2
a été initialement identifié comme étant le premier gène suppresseur de métastases, mais sa capacité à bloquer le cancer invasion locale et les métastases à distance semble être le type de cellule spécifique parmi les cancers qui ont jusqu'à présent été étudiée [8- 14]. Par exemple, une analyse de 35 patients atteints d'un carcinome thyroïdien papillaire et 11 des ganglions métastatiques a montré un niveau significativement réduit de la NME1
ARNm dans les ganglions lymphatiques métastatiques, alors que NMe2 de l'ARNm n'a pas été modifié dans les ganglions lymphatiques et de la tumeur d'origine [14], ce qui suggère des rôles différentiels de NME1 et NMe2 dans les cancers envahissants et les métastases. Une méta-analyse de 278 patients atteints d'un cancer du côlon, 177 avec le cancer du sein, 137 cancer de l'ovaire et 77 atteints d'un cancer du poumon a également révélé un niveau réduit d'expression NMe2 dans le cancer métastatique par rapport à un cancer non métastatique [17]. Cependant, en dépit d'une association négative entre l'expression NME1 /NMe2 et l'invasion du cancer aux ganglions lymphatiques et de l'infiltration de l'endomètre local, l'expression NME n'a pas été associée à des scores TNM et la différenciation d'un carcinome à membrane intra-utérin et le cancer du col [16]. Ici, nous fournissons plusieurs lignes de preuves que NMe2 limite la prolifération, la migration et l'invasion de la matrice extracellulaire des cellules de cancer gastrique.

Tout d'abord, un niveau plus élevé d'expression NMe2 se trouve dans le tissu bien différencié et moins invasive du cancer de l'estomac chirurgicalement enlevé avant chimiothérapie et la radiothérapie dans une grande cohorte de patients (tableau 1 & fig. 1). La métastase du cancer aux ganglions lymphatiques locaux était plus fréquemment trouvée dans le tissu cancéreux qui avait un faible niveau d'expression NMe2 et cette corrélation entre l'expression NMe2 et la différenciation /métastases dans ces tissus du patient reste après que les données ont été stratifiés pour l'âge, le sexe, la la taille de la tumeur primitive et la profondeur de l'invasion (tableau 1 & 2). Ces résultats sont cohérents avec un rapport récent que NMe2 lie la répétition de télomères facteur 2 de liaison dans le noyau pour réduire l'activité de la télomérase [37], ce qui suggère un lien mécanique entre l'expression NMe2 et la survie des cellules cancéreuses.

Deuxièmement, nous effets examinés de surexprimant NMe2 sur le taux de prolifération, la migration et l'invasion de la matrice extracellulaire in vitro de cellules
des deux lignées cellulaires de cancer gastrique bien étudiés et BGC823 MKN45 [18-21]. La transfection avec un humaine NMe2 de l'ADNc a donné lieu à un niveau deux fois ou plus d'expression NMe2 dans ces cellules par rapport à se moquer de cellules transfectées (Fig. 2). Cette surexpression NMe2 n'a pas modifié ploïdie de l'ADN (tableau 3), mais ralentie de manière significative la formation des colonies de ces cellules (fig. 3), suggérant que la surexpression NMe2 retarde la transition de la réplication de l'ADN à la mitose. Ce résultat est cohérent avec des rapports antérieurs qui NMe2 n'a aucune incidence sur la croissance des cellules cancéreuses en culture et ne soit pas associé à la taille du cancer primaire implantés dans des animaux [22-27]. Cependant, il est incompatible avec les rapports qui favorise NMe2 [28,29] ou diminue [30], la prolifération d'autres types de cellules cancéreuses. raisons exactes de l'écart reste à être étudiée plus, mais ces données suggèrent des effets spécifiques du type cellulaire de la NMe2 de gène sur la pathogenèse des cancers.

Troisième en contraste avec un effet, minimal sur la prolifération des cellules cancéreuses gastriques, la surexpression de NMe2 entraîne une réduction significative de la migration et l'invasion cellulaire par la matrice de collagène comme démontré dans trois essais distincts, mais complémentaires (figures 4 et &. 5). Nos données confirment les résultats antérieurs des effets inhibiteurs similaires sur le cancer du sein [8], le cancer épidermoïde oral [28] et les cellules de mélanome [9], bien que des exceptions ont été de nouveau noté dans hépatocellulaire [13,29] et les cellules colorectales carcinomes [31]. Il reste à déterminer comme si réduit la migration et l'invasion des cellules surexprimant NMe2 sont le résultat d'une diminution de la capacité de ces cellules à la prolifération.

Nos résultats identifiés cellules cancéreuses gastriques comme sensibles aux surexprimé NMe2, mais un question cruciale reste que ce qui réglemente ces activités diverses NMe2 entre les différents types de cellules cancéreuses. Un mécanisme potentiel est qu'une activité NMe2 dépend de molécules amont et en aval qui interagissent avec NMe2 dans un type cellulaire donné. molécules multiples ont déjà été identifiés pour interagir ou réglementer NMe2, tels que EGFR, c-erbB-2
, c-erbB-3
et le sexe récepteur des stéroïdes dans les carcinomes ovariens [32]. Plakoglobine a été signalé à interagir avec NMe2 pour promouvoir son expression dans les cellules de la langue humaine carcinome épidermoïde [33]. NMe2 a également été trouvé pour interagir avec MDM2 (souris à double minute 2 homolog) pour réduire la motilité des cellules de carcinome rénal [34]. MDM2 est une E3 ubiquitine protéine ligase et sert de régulateur négatif du suppresseur de tumeur p53. La relation entre NMe2 de gène et les gènes de myc
famille semble être plus compliquée. Produits de la NME1
et Les gènes NMe2 de ont été proposés pour être en aval de la c- myc
voie réglementaire [7] et impliqué dans la régulation négative de fonction de cdc42 dans le neuroblastome [35]. NMe2 est également rapportée à interagir avec l'ADN de G-quadruplex dans l'élément hypersensible à la nuclease de l'élément c-myc
promoteur pour induire l'expression c-myc [36]. Une approche de la biologie des systèmes pour examiner ces voies spécifiques au lieu de molécules individuelles peuvent être nécessaires pour disséquer les rôles du gène de la NMe2 et son produit dans différents types de cancers.

En résumé, nous avons démontré qu'une surexpression de NMe2 réduit la migration et l'invasion des cellules cancéreuses gastriques dans la matrice cellulaire in vitro
. Par conséquent, l'expression NMe2 est associée à l'histologie bien différencié et moins invasitve du cancer gastrique. Ces résultats suggèrent que le NMe2 de gène et son produit peut servir de marqueur potentiel pour prédire l'invasivité du cancer gastrique et aussi comme une cible thérapeutique qui peut être régulée à la hausse grâce à la thérapie génique.

Informations complémentaires
S1 Fig. Effet de la surexpression NMe2 sur le cycle des cellules cancéreuses des cellules gastriques.
La ploïdie de l'ADN des cellules transfectées avec NMe2 d'ADNc a été analysé par cytométrie en flux à l'aide d'un kit commercial selon les instructions du fabricant. Les panneaux A-C étaient des cellules BCG823 parentales et celles transfectées avec le NMe2
ADNc ou vecteur. Les panneaux D-F étaient pour MKN45 cellules avec les mêmes traitements
doi:. 10.1371 /journal.pone.0115968.s001
(DOC)

• PLOS ONE: Facteurs de transcription et gènes microRNA-Co-réglementés dans Gastric Cancer Invasion dans Ex Vivo
• PLOS ONE: L'importance et facteurs de risque cliniques de Solitary métastase ganglionnaire dans gastrique Cancer