PLoS One: RhoC Szabályozza a proliferáció gyomorrák sejtek kölcsönhatás révén IQGAP1

absztrakt katalógusa

A korábbi kutatási eredmények azt mutatták, hogy mind a Ras homológ családtag C (RhoC) és az IQ-tartomány áz aktiváló protein 1 ( IQGAP1) voltak túlzottan kifejezett gyomorrák szövetek és sejtek, de ezek szerepe tumorigenensis nem foglalkoztak világosan. Itt már beszámoltunk elterjedése stimuláló hatása RhoC és IQGAP1 a gyomor rákos sejteket, és a kölcsönhatás a két fehérje szabályozásában elterjedése gyomor rákos sejteket. Plazmidok és virális kódoló konstrukciókat cél siRNS és DNS-t használni, hogy megváltoztassa a kifejezés a RhoC és IQGAP1. MTT módszer és a BrdU beépülését assay használtunk hatásainak elemzésére RhoC és különböző struktúrák IQGAP1 a proliferációra. Fehérje szint IQGAP1 és RhoC sejtvonalakban detektáltuk Western-blottal. Immunfluoreszcenciás és Co-immunprecipitációs vizsgálatok vittük hogy vizsgálja meg a lokalizáció és kötelező között RhoC és IQGAP1. Az eredmények azt mutatták, hogy RhoC, IQGAP1 és a C-terminális fragmensének IQGAP1 jelentősen stimulálta proliferációját gyomorrák-sejtek, és a fokozott expresszióját ciklin E és a ciklin D1. Ezzel szemben csökkentése endogén IQGAP1 vagy RhoC siRNS legyengített sejtproliferációt. Kimerülése IQGAP1 expresszió siRNS szignifikánsan gátolta a proliferatív aktivitása konstitutívan aktív RhoC, míg RhoC hangtompító siRNS nem volt hatása a IQGAP1-indukált proliferációt gyomor rákos sejtek. Co-immunprecipitációs és Immunfluoreszcenciás vizsgálatok azt mutatták, hogy RhoC és IQGAP1 kötött egymással. Összefoglalva, eredményeink arra utalnak, hogy RhoC stimulálja elterjedése gyomorrák sejtek toborzása útján IQGAP1 mint effektor. Katalógusa

Citation: Wu Y, Tao Y, Chen Y, Xu W (2012) RhoC Szabályozza elterjedése Gyomor a rákos sejtek révén Kölcsönhatás IQGAP1. PLoS ONE 7 (11): e48917. doi: 10,1371 /journal.pone.0048917 katalógusa

Szerkesztő: Zoran Culig, Innsbrucki Orvosi Egyetem, Ausztria katalógusa

Beérkezett: június 26, 2012; Elfogadva: október 2, 2012; Megjelent: november 7, 2012 katalógusa

Copyright: © 2012 Wu et al. Ez egy nyílt hozzáférésű cikk feltételei szerint terjeszthető a Creative Commons Nevezd meg! Licenc, amely engedélyezi a korlátlan használatát, a forgalmazás és a reprodukció bármilyen adathordozón, feltéve, hogy az eredeti szerző és a forrás jóváírásra. Katalógusa

Forrás: Ez a tanulmány támogatta a Specialized Kutatási Alap vezetőinek Program Jiangsu Egyetem (No. 11JDG114) és a Nemzeti Természettudományi Alapítvány Kína (No. 31040002). A finanszírozók nem volt szerepe a tanulmány tervezés, adatgyűjtés és elemzés, döntés, hogy közzéteszi, vagy a készítmény a kézirat. Katalógusa

Érdekütközés: A szerzők kijelentették, hogy nem ellentétes érdekek léteznek. Katalógusa

Bevezető

Rho GTP-ázok indukálhatja bizonyos intracelluláris jelátviteli és hatás különböző sejt tevékenységek, beleértve átszervezése az aktin citoszkeleton, gén transzkripcióját, túlélés és proliferáció [1], [2]. Bár a három Rho izoformák, RhoA, RhoB, és RhoC mutatnak több mint 85% aminosav azonosság, akkor biztosítanak különbségek funkció sejtekben [3]. RhoA és RhoC fehérjékről kimutatták, hogy pozitív szerepet proliferáció és a malignus transzformáció [4], [5], [6], mivel a szerepe az RhoB az ezekben a folyamatokban úgy tűnik, hogy több eltérő [7], [8]. A legtöbb tanulmány kimutatta, hogy RhoC volt több funkciót tumormetasztázisban, összehangolva az intézkedés több downstream hatások, lebomlás és rekonstrukciója az extracelluláris mátrix (ECM). Továbbra is fennáll azonban némi vita a szerepe RhoC a sejtproliferációt szabályozó, [9] [10], [11], [12]. Az eredmények halom laboratóriumi jelezte, hogy a RhoA és RhoC siRNS jelentenek hatékony eszközöket gátlására rákos sejtburjánzást, invazív, és az angiogenezis mindkét in vitro
és a in vivo
[9]. Sun és munkatársai
találták, hogy intratumorális injektálása RhoA vagy RhoC siRNS nude egerekben is gátolja a tumor növekedését [13]. Ezzel szemben a Faried és munkatársai számoltak be, hogy katalógusa RhoA elősegíti a tumor növekedését több mint RhoC, míg RhoC indukál távoli áttét képest RhoA [11], egyetértésben ezen észrevételek Clark és munkatársai [14]. Egy tanulmány szerint Ikoma és munkatársai kimutatták, hogy RhoC nem befolyásolja a daganat növekedését, de fokozza a metasztatikus jellege tüdőrák stimulálásával sejtmotilitással [10]. Ezért további vizsgálatok szükségesek, hogy azonosítsa a szerepét RhoC szabályozásában biológiai aktivitását tumorsejteket.

IQ-domén GTPáz aktiváló proteinek (IQGAPs) fontos szabályozói a sejtes folyamatok, amelyek magukban foglalják a citoszkeletális átrendeződések sejtmigráció , proliferáció és citokinézist [15], [16], [17]. IQGAP1 egyik tagja a három kapcsolt emlős IQGAPs és változó a sejten belüli IQGAP1 expresszióját vagy működését jelentette, hogy megváltoztassa sejt tevékenységét [17], [18], [19], [20]. Vázként fehérje, IQGAP1 kötődik többszörös fehérjék, mint például az onkogének β-catenin és Src, tumor szupresszor E-cadherin és a Rho GTP-ázok Cdc42 és Rac1, és az okozza a megváltozása celluláris viselkedések, különösen a rákos sejteket. A mi korábbi tanulmány kimutatta, hogy a magasabb kifejezései RhoC és IQGAP1 gyomorrákban szövetben szignifikánsan fordítottan korrelált a differenciálódás a gyomor rákos sejtek [21]. Továbbá, a fehérje szintje is lényeges, hogy a proliferációját és migrációját a rákos sejteket. Ezért feltételezzük, hogy mind a RhoC és IQGAP1 játszhatnak fontos szerepet a rákos sejt átalakulás és proliferációját, és van egy potenciális egyesület közöttük. A jelen kutatás során vizsgáltuk a hatását RhoC és különböző struktúrák IQGAP1 rákos sejtek szaporodását, és sejtciklus kapcsolódó fehérjéket. Vizsgáltuk azt is, a kapcsolat a két molekula közös alkalmazása siRNS interferencia és vírusfertőzés technika. Katalógusa

Anyagok és módszerek katalógusa

Reagensek katalógusa

A gyomorrák-sejtvonalak BGC-823 [22] és az afrikai zöld majom vese fibroblaszt sejtvonalat COS-7 biztosította Intézet Cell Biology (Sanghaj, Kína). A zöld fluoreszcens protein (GFP) plazmidot és a sejt transzfekciós reagens Lipofectamin ™ 2000 volt (Invitrogen, Carlsbad, CA); A kódoló plazmidok Flag tagged IQGAP1 (PFLAG-IQGAP1), Flag tagged IQGAP1 C-terminális fragmens (PFLAG-IQGAP1-C), és a Flag címkézett IQGAP1 N-terminális fragmens (PFLAG-IQGAP1-N), és adenovirális vektorok kódoló β-galaktozidáz (pAD-LacZ), konstitutív módon aktív formáját RhoC (pAD-RhoC-V14), teljes hossza IQGAP1 (pAD-IQGAP1), és a C-terminális töredéke IQGAP1 (pAD-IQGAP1-C) volt kedves ajándéka Dr. Gerry Boss és Dr. Renate Pilz a University of California, San Diego, USA. Ember-EGF, a BrdU, egér anti-BrdU antitesttel, DNáz I, MTT, Hoechst 33342, FITC- és Cy3-konjugált másodlagos antitestekkel voltak a Sigma (St. Louis, MO). Az anti-IQGAP1 antitest (szemben az N-terminális fragmentum, 314-422 AA), anti-RhoA antitest, anti-IgG antitesttel, anti-CDK1 /CDK2 ellenanyag, a rövid interferáló RNS-ek (siRNS-t) a RhoC és negatív kontroll volt a Santa Cruz Biotechnology (santa Cruz, CA). A Rho C siRNS egy medence 3 target specifikus 20-25 nt siRNS célja, hogy leüt a génexpresszió a sorozatok a következők: sequence1, érzékelik 5'-CUACUGUCUUUGAGAACUAtt-3'and antiszensz 5'-UAGUUCUCAA- AGACAGUAGtt-3 '; sequence2, érzékelik 5'-GCAGGAAGACUAUGAUCGAtt-3 'és antiszensz 5'-UCGAUCAUAGUCUUCCUGCtt-3'; sequence3, érzékelik 5'-CAC- ACCAGCACUUUAUACAtt-3 'és antiszensz 5'-UGUAUAAAGUGCUGGUGUG- TT-3'. Az anti-IQGAP1 antitest (szemben a C-terminális fragmens aminosavának megfelelő 863-1657 emberi IQGAP1) volt a Millipore (Billerica, MA). Az anti-RhoC antitest a ABCAM (Cambridge, MA). Az anti-ciklin B antitest a Bioworld Technology (St. Louis Park, MN). Az anti-ciklin D1 antitest és anti-ciklin E ellenanyag voltak Boster (Wuhan, Kína). Az siRNS esetében IQGAP1 szintetizálunk Qiagen (Valencia, CA), a cél-szekvencia volt IQGAP1 5'-AAGTTCTACGGGAAGTAATTG-3 '(5058-5078 bp). Torma-peroxidáz (HRP) konjugált másodlagos antitest a Rockland Immunochemicals (Gilbertsville, PA). Protein G Plus /Protein A-agaróz a Calbiochemtől volt (San Diego, CA). Elektrokemilumineszcenciás (ECL) reagenst a Millipore (Billerica, MA). Minden reagenst ebben a vizsgálatban alkalmazott analitikai tisztaságú volt.

Cell Culture, Transzfekció és a fertőzés

BGC-823 és COS-7-sejteket tenyésztettünk 1 × Dulbecco-féle módosított Eagle-tápközegben (DMEM) 10% magzati borjúszérumot (FBS), 37 ° C-on, 5% CO _{2 atmoszférában. A táptalajt minden második nap cseréltük és a sejteket szub-tenyésztettük konfluencia. A transzfekcióhoz a sejteket szubkultúrát előtti napon a folyamat, és a transzfekciós gyomorrák sejtek a plazmidok vagy siRNS szerint végeztük a gyártó utasításai. A fertőzéshez 293A sejteket transzfektáltunk adenovirális vektorok Pad-LacZ, Pad-RhoC-V14, Pad-IQGAP1 és a PAD-IQGAP1-C, és a vírusrészecskék által termelt a sejteket összegyűjtöttük és felszaporítottuk. A vírusokat nevezték Ad-LacZ, Ad-RhoC-14, Ad-IQGAP1 és Ad-IQGAP1-C illetőleg és használtak fertőzésére BGC-823 sejtekben. Azon a napon, mielőtt a fertőzés, BGC-823 sejteket frissen oltottuk 70-80% összefolyás, és a fertőzés folyamat szerint végeztük a gyártó utasítást második napon.}

Western-blot

Tenyésztett sejteket háromszor mostuk PBS-sel, és lizáltuk RIPA-pufferben (50 mM Tris-HCI, pH = 7,4, 1% (v /v) Triton X-100, 1 mM EDTA-t, 1 mM leupeptin, 1 mM fenil-metil-fluorid, 10 mM NaF , 1 mM Na _{3VO 4). Egyenlő mennyiségű fehérjét elválasztottuk 8% -os vagy 12% -os SDS-PAGE-szerint a fehérje molekulatömege. A primer antitesteket inkubáltuk egy éjszakán át 4 ° C-on, és a megfelelő szekunder antitesteket inkubáltuk 1 órán át szobahőmérsékleten kevertük. Három mosást végeztünk TBS /T után mindegyik antitest inkubáció. ECL reagenseket alkalmaztuk, hogy bemutassák a pozitív sávok a membránon.}

MTT vizsgálat

0,5-1 × 10 ^{3cells 150 ul tápközeget szélesztettünk a jól a 96 lyukú tányérok. A megkötés után a sejteket fertőztünk megfelelő adenovírus 48 órán át, vagy transzfektált siRNS 72 h. A kombinációs csoportban, sejteket transzfektáltunk a siRNS célzási RhoC vagy IQGAP1 24 órán át, majd a fertőzött Ad-IQGAP1-C /Ad-IQGAP1 vagy Ad-RhoC-V14 további 48 órán át 37 ° C-on, 5% CO _{2. A tenyésztett sejteket PBS-sel mostuk, kezeljük 20 ul MTT-t (0,5 mg /ml), majd inkubáljuk 37 ° C-on 1 órán át. A táptalajt eltávolítottuk, és 100 ul dimetil-szulfoxidban (DMSO) adunk az egyes lyukakhoz. Az abszorbanciát meghatároztuk 490 nm-en mikrotiter leolvasóval. Minden vizsgálatot háromszoros ismétlésben végeztünk.}}

BrdU egyesítési vizsgálat

A DNS-szintézis mértéke mértük BrdU beépülését immunfluoreszcenciával. A vetés sejtek mennyisége állítottuk be, hogy elérje a sűrűsége 70-80% összefolyás a transzfekció napján. A plazmid PFLAG-IQGAP1, PFLAG-IQGAP1-C vagy PFLAG-IQGAP1-N-t együtt transzfektáltuk GFP plazmid BGC-823 sejtek használatával Lipofectamin ™ 2000 a fent leírt módon. 24 órával a transzfekció után a sejteket szérum-éheztetett éjszakán át keverjük, hozzáadunk 200 μ
M BrdU és inkubáljuk körülbelül 16 órán át. A sejteket ezután PBS-sel mostuk, rögzített frissen készített 4% -os (v /v) paraformaldehid szobahőmérsékleten 10 percig, és permeabilizált 0,5% (v /v) Triton X-100, majd inkubáltuk DNáz I (0,5 U /ul), 30 percig 37 ° C-on. A sejteket primer antitesttel inkubáltuk ellen BrdU éjszakán át 4 ° C hőmérsékleten, majd Cy3-konjugált másodlagos antitesttel 1 órán át szobahőmérsékleten kevertük. Végül, a sejtmagok voltak ellen-festettük Hoechst 33342 15 percig öblítjük foszfáttal puffereit sóoldattal háromszor, és láthatóvá tettük alatt fluoreszcens mikroszkópia. Minden assay-t négyes és háromszor megismételjük. Katalógusa

Co-immunprecipitációs katalógusa

Annak vizsgálatára, a kölcsönhatás RhoC és IQGAP1, COS-7 és BGC-823 sejteket együtt fertőzött Ad- IQGAP1 vagy Ad-IQGAP1-C, és az Ad-RhoC-V14 48 órán át, majd lizáltuk RIPA-pufferben a leírtak szerint. Az antitest ellen RhoC, IQGAP1 vagy izotípusú IgG-t alkalmaztunk immunoprecipitációra, ill. Immunprecipitátumokat analizáltuk Western-blottal, mint fent, anti-RhoC vagy anti-IQGAP1 antitest.

Immunfluoreszcens mikroszkópia

A sejteket tenyésztettük fedőlemezeket fixáltuk frissen készített 4% -os (v /v ) paraformaldehid PBS-ben 15 percig, permeabilizált 0,3% Triton X-100 PBS-ben 10 percen keresztül, és blokkoltuk 3% (w /v) szarvasmarha-szérumalbumin (BSA) PBS-ben. Immunfluoreszcencia a sejteket fedőlemezeket egymást követően inkubáltuk nyúl poliklonális antitesttel szemben IQGAP1 át 4 ° C-on egy éjszakán át, FITC-vel konjugált kecske anti-nyúl IgG-t 1 órán át szobahőmérsékleten, egér monoklonális antitest ellen RhoC 2 órán át szobahőmérsékleten, és végül kecske anti-egér IgG-vel konjugált Cy3 1 órán át szobahőmérsékleten kevertük. Három mosás után végeztük mindegyik antitest inkubáció. A sejtmagokat ellen-festettük Hoechst 33342. Az eredmény volt megfigyelhető fluoreszcens mikroszkóp alatti összeállítva egy CCD kamerával (Leica).

Statisztikai elemzés

Az adatokat elemeztük két mintás ANOVA vagy Student t katalógusa -teszt SPSS statisztikai szoftver, és átlag ± szórás (SD). P katalógusa < 0,05 értéket tekintettük szignifikánsnak. Katalógusa

Eredmények katalógusa

RhoC promotált proliferációját BGC-823 sejteket katalógusa

A hatás RhoC sejt proliferáció is vizsgálták. BGC-823 sejteket fertőztünk kódoló adenovírus konstitutívan aktív RhoC és sejtproliferáció detektáltuk MTT assay. Az eredmények azt mutatták, hogy RhoC is elősegítette elterjedése gyomorrák sejtek BGC-823. Túlzott expressziója RhoC-V14 a BGC-823 sejtek okozta 48,7% -os növekedést a sejtburjánzás (1A. És B). Eközben kimerülése RhoC siRNS csökkent elterjedése BGC-823 sejt 43,1% (ábra. 1C és D). Katalógusa

IQGAP1 Továbbfejlesztett elterjedése BGC-823 sejteket katalógusa

(1) Eredmények MTT assay. katalógusa

Annak felmérése hozzájárulását IQGAP1 a proliferáció, MTT assay-t kimutatására használják életképességének gyomorrák sejtvonal BGC-823. Az eredmények azt mutatták, hogy míg a kontroll sejtek (Ad-LacZ-csoport), magas szintű expresszióját a C-terminális fragmensének IQGAP1 (Ad-IQGAP1-C csoport), vagy teljes hosszúságú IQGAP1 (Ad-IQGAP1 csoport) fokozott sejt proliferáció által 116% és 39% -kal ( * katalógusa P < 0,05, * katalógusa P < 0,05, 2A. és B). Ezzel szemben, az N-terminális fragmentuma IQGAP1 nincs nyilvánvaló hatása a sejtek proliferációját. Másrészt, interferencia a IQGAP1 expresszió siRNS-sel csökkentette a sejtproliferációt 43%, szemben a negatív kontroll ( *
P < 0,05, Fig. 2C és D). Ezek az eredmények azt mutatták, hogy IQGAP1 képes volt, hogy gyorsítsa a sejtproliferációt; Az aktív tartomány volt található, a C-terminális fragmensének a fehérje.

(2) Eredmények a BrdU beépülés teszttel.

A BrdU beépülését assay engedett egy minta válasz hasonló megfigyelt MTT assay. Kifejeződése Flag-IQGAP1 és Flag-IQGAP1-C jelentősen elősegítette a DNS-szintézis a szintek csaknem 1-flod és 2-szeres, mint amit a Flag-D1 (* P < 0,05, * P < 0,05, Fig. 2E és F) míg IQGAP1-N nem mutatott semmilyen hatást a DNS-szintézist, ami arra utal, hogy IQGAP1 eltérően szabályozza a DNS-szintézis útján különböző területeken. katalógusa

közötti társulás RhoC és IQGAP1 serkentésében elterjedése BGC-823 sejteket katalógusa

(1) RhoC és IQGAP1 nem befolyásolja a kifejezés egymással.

a fenti eredmények erősen arra utalnak, hogy mind a RhoC és IQGAP1 hozzájárult a proliferációját BGC-823 sejtekben. Annak érdekében, hogy tisztázzák közötti lehetséges összefüggést RhoC és IQGAP1 szabályozásában sejtburjánzást, mi először vizsgálni, ha IQGAP1 és RhoC hatnak ezek kifejezésére egymást. BGC-823 sejteket transzfektáltunk siRNS knockdown expressziójának RhoC vagy IQGAP1, majd megfertőztük kódoló adenovírus IQGAP1, IQGAP1-C vagy konstitutívan aktív RhoC volt. Western blot alkalmazták annak észleléséhez, hogy a változó expresszióját és aktivitását egy fehérje befolyásolhatja a kifejezés a többi fehérje, vagy sem. Az eredmények azt mutatták, hogy a növekvő exogén vagy kiütése endogén IQGAP1 vagy IQGAP1-C, nem befolyásolta az RhoC kifejezést. Hasonlóképpen, a növekvő konstitutívan aktív RhoC vagy interferencia endogén RhoC nem befolyásolta a kifejezés a IQGAP1 vagy IQGAP1-C (ábra. 3A).

(2) IQGAP1 volt egy effektora RhoC serkentésében a sejtek proliferációját.

MTT assay-t alkalmaztunk felderítése viszonyának RhoC és IQGAP1 serkentésében elterjedése. Az eredmények azt mutatták, hogy RhoC-siRNS nem volt nyilvánvaló hatása a proliferáció által okozott IQGAP1 (** P < 0,01, Fig. 3B). Azonban kimerülése IQGAP1 expresszió siRNS blokkolta a proliferációt okozott kifejezése konstitutívan aktív RhoC (* P < 0,05, ** P < 0,01, 3C.). Ez azt jelezte, hogy a folyamat során a serkentő proliferációját BGC-823-sejtek, RhoC szükséges a részvétele IQGAP1. Továbbá, mivel RhoC hatása szükséges IQGAP1 míg IQGAP1 hatása nem volt szükség RhoC, RhoC lehet a felfelé IQGAP1 és vett IQGAP1 mint effektor. Katalógusa

hatása RhoC és IQGAP1 az Expression sejtciklus rokon fehérjék

Annak további igazolására, proliferációját stimuláló hatását RhoC és IQGAP1 és vizsgálja a lehetséges mechanizmus, amelyen keresztül ezeket a fehérjéket szabályozzák a sejtek szaporodását, amit alkalmazva Western blot kimutatására expressziójának sejtciklus kapcsolódó fehérjék kezelt sejtekben módszerekkel növekvő vagy csökkenő RhoC és IQGAP1. Az eredmények azt mutatták, hogy a növekedés a RhoC és IQGAP1 stimulált kifejeződése ciklin E és ciklin D1, míg nem volt hatással a kifejezés a ciklin B és CDK1 /2. Másrészt, a csökkenés RhoC és IQGAP1 gátolta a kifejezés a ciklin E és a ciklin D1. Eközben, abban az esetben a RhoC hangtompító által siRNS, a növekvő IQGAP1 vagy IQGAP1-C mindig fokozza a kifejezés a ciklin E és a ciklin D1 (ábra. 4). Tézisek eredmények azt mutatták, hogy RhoC és IQGAP1 lehet szabályozni elterjedése révén változó kifejezése sejtciklus rokon fehérje és okoz több sejt belépni S fázisban. Katalógusa

RhoC és IQGAP1 Co lokalizált és kötött egymással Cells katalógusa

Immunfluoreszcenciás és Co-immunprecipitációs módszerrel vittük tovább vizsgálja a lehetséges közötti kötődést RhoC és IQGAP1. Mindkét BGC-823 és COS-7 sejteket együtt fertőzött Ad-IQGAP1 és Ad-RhoC-V14 vagy Ad-IQGAP1-C és Ad-RhoC-V14 48 órán át, és a teljes sejtlizátumot immunoprecipitáltuk anti-RhoC ellenanyag és próbaként ellenanyag ellen IQGAP1, vagy immunoprecipitáltuk anti-IQGAP1 ellenanyag és próbaként ellenanyag ellen RhoC, ill. Az eredmények azt mutatták RhoC és IQGAP1 kötve egymással, a C-terminális fragmensének IQGAP1, mint a kötőhelyen RhoC (ábra. 5A és C). Sőt, Immunfluoreszcenciás vizsgálat feltárta, hogy IQGAP1 osztották elsősorban a citoplazmában, ahol közösen lokalizálható RhoC (ábra. 5B és D). Katalógusa

Vita katalógusa

A szabályozatlan rákos sejtburjánzást igényel összehangolt és szigorúan szabályozott funkció sok fehérjét [23], [24], [25], [26]. Ezért, döntő fontosságú, hogy tanulmányozza a mechanizmus az, hogy hogyan azok a fehérjék kölcsönhatásba szabályozásában rákos sejtek szaporodását. Korábbi eredmények dokumentálta, hogy a kifejezés a IQGAP1 és RhoC emelkedett a gyomorrák szövetek és rákos sejtvonalak [21]. A szint arckifejezésük volt szignifikáns korrelációt a szegény differenciálódását gyomorrák. Azonban ez nem egészen világos, hogy vajon IQGAP1 és RhoC társított sejtproliferációt tumorigenensis. Ebben a vizsgálatban, expressziós szintjének IQGAP1 és RhoC és ezek biológiai aktivitását a gyomorrák sejtvonalon BGC-823 állítottuk be keresztül fertőzés adenovirális konstrukciók vagy transzfekcióval plazmid DNS-t vagy siRNS. A elterjedése a sejt azután vizsgáltuk BrdU beépülését esszében, és MTT-módszerrel. Az eredmények azt mutatták, hogy konstitutívan aktív RhoC jelentősen elősegítette a proliferációs aktivitás gyomorrák sejtvonal BGC-823, és kiürülését RhoC siRNS gátolta a vonások. A kutatási adatok azt mutatják, hogy RhoC volt fontos szerepet játszik a sejtek migrációs és metasztázis [27], [28], [29], [30], [31], de voltak ellentmondások arról RhoC szabályozzák az átalakulási folyamat és a proliferáció a tumorsejtekben [27], [29], [32]. Eredményeink bizonyítják, hogy RhoC megvan elterjedése stimuláló hatása a gyomor rákos sejteket. Ez hasznos lesz szerepének tisztázásához a RhoC szabályozásában elterjedése a rákos sejtek. Katalógusa

Eredményeink azt mutatták, hogy hasonló RhoC, túlzott expressziója exogén IQGAP1 és IQGAP1-C is elősegítette elterjedését BGC-823 sejtekben, mivel knockdown endogén IQGAP1 legyengített proliferációját képes-e a sejt, jelezve, hogy IQGAP1 is hozzájárul, hogy a sejtproliferációt szabályozás. Tekintettel arra, hogy mind a RhoC és IQGAP1 van szabályozásában betöltött szerepe proliferáció a rákos sejtek és azok kifejeződése nagymértékben korreláltak, akkor tovább vizsgálandó funkcionális összefüggés a RhoC és IQGAP1. Az eredmények azt mutatták, hogy a BGC-823 sejtek leütött a IQGAP1 kifejezés, fertőzés kódoló adenovírus alapvetően aktív RhoC nem serkentik a proliferációs aktivitás többé; míg BGC-823 sejtek leütött a RhoC kifejezés, túlzott kifejeződése IQGAP1 vagy IQGAP1-C keresztül megfertőzni adenovírus kódoló megfelelő DNS mindig okoztak nagyobb proliferációs aktivitás. Ez azt jelezte, hogy RhoC hajtott tumor proliferációját keresztül IQGAP1, elsősorban a C-terminális fragmensének IQGAP1. Ez a funkcionális összefüggés a RhoC és IQGAP1 tovább támogatta Co-immunprecipitációval és Immunfluoreszcenciás. Ezek az eredmények arra utalnak, hogy a RhoC vett IQGAP1 mint effektor szabályozásában rákos sejtek szaporodását, dobás új csipetnyi a kapcsolat ezeknek a fehérjéknek. Katalógusa

elsősorban felfedezni a későbbi mechanizmus, amelyen keresztül RhoC /IQGAP1 szabályozzák elterjedése gyomorrák sejtek , megvizsgáltuk a hatását RhoC /IQGAP1 a kifejezés a sejtciklus kapcsolatos fehérjék, beleértve a ciklin E, ciklin D1, ciklin B és a ciklin-függő kináz (CDK). Az eredmények azt mutatták, hogy mind a RhoC és IQGAP1 stimulált kifejeződése ciklin E és ciklin D1, de nem volt hatással a kifejezés a ciklin B és CDK. A elterjedése eukarióta sejtek ellenőrzött speciális pontjain a sejtciklus, különösen az első rés fázis (G1), hogy a DNS-t szintetikus fázis (ok) és a második rés fázis (G2) a mitózis (M) átmenetek. Ebből, a G1-S átmenet a fő szabályozás pont a sejtciklust. Ciklin D1 és ciklin E ellenőrzik a sejt progresszió elősegítése révén a G1-S fázis sejtciklus. Eredményeink azt mutatják, hogy amikor RhoC aktiválták az extracelluláris vagy intracelluláris jel, akkor kötődik IQGAP1 majd befolyásolta a kifejezés a sejtciklus-kapcsolatos fehérjék közvetlenül vagy közvetetten valamilyen tisztázatlan jelátviteli lépésekben, ami végül a változás a sejt progresszió és a proliferáció (6.). katalógusa

Összefoglalva, ezek az adatok aktuális tanulmány, összefüggésben korábban publikált adatok [21], alátámasztják azt a hipotézist, hogy RhoC részt vesz mind migrációja és proliferációja gyomor rákos sejteket. IQGAP1 is részt szabályozásában rákos sejtburjánzást downstream effektor RhoC. Ezek az adatok ragyog világítás fejlesztésére terápiás megközelítések gyomorrák. Katalógusa

Köszönetnyilvánítás katalógusa

Köszönjük Dr Gerry Boss és Dr. Renate Pilz a University of California, San Diego, CA, USA, az az a fajta ajándék adenovírus konstrukciók. katalógusa

• PLoS One: polimorfizmusok gyakorisága ERCC1 és XPF gének és a kockázat az gyomorrák kelet kínai népesség
• PLoS One: Reg IV közvetlen célpontja a bél transzkripciós faktor CDX2 gyomorrákban