PLoS ONE: aumentata espressione di RNA non codificante lungo HOTAIR è associato con lo sviluppo della gastrico Cancer

Estratto

L'RNA non codificante lungo HOTAIR è stato segnalato per essere un povero biomarker prognostico in una varietà di tumori maligni. Tuttavia, poco si sa circa l'associazione tra HOTAIR con cancro gastrico. Abbiamo esaminato l'espressione di HOTAIR in 68 campioni di cancro gastrico mediante quantitativa real-time RT-PCR e analizzato la sua correlazione con i parametri clinici. Il ruolo funzionale di HOTAIR è stata esaminata mediante la generazione di linee di cellule di cancro gastrico umano con maggiore o soppressa l'espressione HOTAIR. La crescita -indipendente di ancoraggio è stata valutata mediante analisi morbido agar. Il HOTAIR maggiore o soppressa esprimendo cellule di cancro gastrico è stato iniettato nella vena della coda o cavità peritoneale di topi immunodeficienti per esaminare l'effetto di questa molecola sulla metastasi e diffusione peritoneale. L'espressione di HOTAIR era significativamente più alta nelle lesioni tumorali rispetto ai tessuti non tumorali adiacenti a tumori gastrici umani. Nel tipo diffuso di cancro gastrico, il gruppo ad alto HOTAIR (HOTAIR /GAPDH > 1) ha mostrato invasione significativamente più venosa, frequenti metastasi linfonodali e un tasso di sopravvivenza complessivo più basso rispetto al Low-HOTAIR gruppo (HOTAIR /GAPDH < 1). formazione di colonie su agar morbido è stato migliorato in modo HOTAIR-dipendente. HOTAIR esprimono MKN74 formata più metastasi epatiche rispetto ai controlli quando sono stati iniettati nella vena della coda di topi. Inoltre, ridotta espressione di HOTAIR a Kato III soppresso diffusione peritoneale. Questi risultati suggeriscono che HOTAIR svolge un ruolo fondamentale nello sviluppo del cancro gastrico

Visto:. Endo H, Shiroki T, Nakagawa T, Yokoyama M, Tamai K, Yamanami H, et al. (2013) di espressione migliore di RNA non codificante lungo HOTAIR è associato con lo sviluppo del cancro gastrico. PLoS ONE 8 (10): e77070. doi: 10.1371 /journal.pone.0077070

Editor: Dajun Deng, Peking University Cancer Hospital e Institute, Cina |

Ricevuto: 10 giugno 2013; Accettato: 5 settembre 2013; Pubblicato: 10 ottobre 2013

Copyright: © 2013 Endo et al. Questo è un articolo ad accesso libero distribuito sotto i termini della Creative Commons Attribution License, che permette l'uso senza restrizioni, la distribuzione e la riproduzione con qualsiasi mezzo, a condizione che l'autore originale e la fonte sono accreditati

Finanziamento:. Questo lavoro è stata sostenuta da JSPS KAKENHI concessione numbers24791480 e 24.591.022 (http://www.jsps.go.jp/j-grantsinaid/index.html), e grant-in-aiuto HIROMI Medical Research Foundation (http: //www.smtb .jp /personali /affidamento /gestione /public /es /pdf /naturale-06a.pdf) e Daiwa Securities Health Foundation (http://www.daiwa-grp.jp/dsh/grant/outline.html). I finanziatori avevano alcun ruolo nel disegno dello studio, la raccolta e l'analisi dei dati, la decisione di pubblicare, o preparazione del manoscritto

Competere interessi:.. Gli autori hanno dichiarato che non esistono interessi in competizione

Introduzione

l'incidenza e la mortalità del cancro gastrico sono diminuiti drasticamente negli ultimi 50 anni nella maggior parte delle aree del mondo, ma rimane ancora la seconda causa di decessi correlati al cancro in tutto il mondo [1]. Nonostante i recenti progressi nelle tecniche diagnostiche, come la lente d'ingrandimento l'endoscopia con immagini a banda stretta (NBI) [2], e in cura, ivi compresa la terapia bersaglio [3,4], ci sono ancora un gran numero di pazienti affetti da cancro gastrico con prognosi infausta. Il meccanismo patogenetico che contribuisce alla funzione biologica aggressiva in questo tipo di tumore rimane da chiarire.

I progetti di sequenziamento del genoma rivelato che il genoma umano è composto di geni codificanti meno del 2% di proteine, e più del 90% del genoma è trascritto da RNA non codificanti (ncRNA) [5-7]. Questi ncRNAs sono classificati in due gruppi a seconda delle dimensioni nucleotide. Micro RNA sono circa 18-25 nucleotidi in lunghezza, mentre lungo non codificante RNA composto da più di 200 nucleotidi. HOTAIR è una lunga RNA non codificante, che è stato identificato da una matrice di lavorazioni su misura del locus HOXC. HOTAIR ha dimostrato di trimethylate Histon H3 lisina-27 di Hoxd locus con il Polycomb repressiva complesso 2 (PRC2) e di inibire l'espressione del gene Hoxd, che si trova su un cromosoma diverso [8]. HOTAIR promuove le metastasi attraverso l'interazione con PRC2 di reprimere la trascrizione di geni multipli soppressore delle metastasi nel cancro al seno [9]. L'aumentata espressione di HOTAIR è associata con invasività, metastasi e prognosi infausta in una varietà di tumori come il seno, del colon, del pancreas e del polmone [9-12]. Tuttavia, poco si sa circa l'espressione e /o la funzione di HOTAIR nello sviluppo di carcinoma gastrico. In questo studio, abbiamo studiato il coinvolgimento di HOTAIR nello sviluppo del cancro gastrico umano e esaminato se la sua espressione sarebbe correlazione con il comportamento aggressivo di cancro gastrico.

Materiali e Metodi

tessuti

68 tessuti di cancro gastrico sono stati ottenuti da pazienti che hanno subito un intervento chirurgico a Miyagi Cancer center (Natori, Giappone), tra il 2007 e il 2011. Tutti i campioni sono stati immediatamente congelati subito dopo la resezione in azoto liquido e conservati a -80 ° C o fissati in 10% di formalina tamponata e incorporato in paraffina. I tumori gastrici sono stati istopatologicamente classificati come tipo intestinale (n = 36), tipo diffuso (n = 32) secondo la classificazione dell'Organizzazione Mondiale della Sanità e precedenti relazioni [13]. Nessun pazienti hanno ricevuto chemioterapia e la radioterapia prima dell'intervento chirurgico. Per l'analisi statistica, la sopravvivenza globale è stata definita dalla morte per qualsiasi causa, e le curve di sopravvivenza di Kaplan-Meier sono stati utilizzati.

Le linee cellulari

Le linee di cellule di cancro gastrico MKN74 (tipo intestinale) [14] e Kato III (tipo diffuso) [15] sono stati ottenuti da RIKEN Bioresource Center (Tsukuba, Giappone). Entrambe le linee cellulari sono state mantenute in RPMI-1640 (Gibco /tecnologie della vita Co., CA) contenente 10% FBS inattivato (EuroClone, Milano, Italia) con 100 unità /ml di penicillina e 100 mg /ml streptomicina (Gibco /tecnologie della vita Co. , CA) e coltivate in un umidificata al 5% di CO _{2 incubatore a 37 ° C.}

preparazione dell'RNA, trascrizione inversa, e quantitativa real-time PCR

L'RNA totale da campioni congelati e linee cellulari è stato estratto dal ISOGENE (NIPPON GENE, Tokyo, Giappone) secondo il protocollo del produttore. cDNAs da tutti i campioni sono stati sintetizzati da 1,0 mg di RNA totale da PrimeScript® 1 ° Strand cDNA Synthesis Kit (Takara Bio, Siga, Japan) seguendo il protocollo del produttore. L'espressione di HOTAIR è stata quantificata LightCycler SYBR Brilliant kit verde qRT-PCR (Roche Applied Science, IN) seguendo il protocollo del produttore con le specifiche set di primer secondo lo studio precedente [9]. Il livello di espressione HOTAIR in ogni campione è stato normalizzato al rispettivo livello di espressione GAPDH. La specificità di ogni reazione PCR è stata confermata dalla fusione analisi della curva.

espressione HOTAIR vettore retrovirale

umana HOTAIR cDNA (Addgene, Cambridge, MA) è stato amplificato mediante PCR ed è stato inserito nel puro pBabe vettore (pBabe -HOTAIR). retrovirus ricombinante è stato prodotto con Platinum-A (Plat-A, fornito dal Prof. Kitamura) confezionamento linee di cellule, come descritto in precedenza [16]. In breve, le cellule Plat-A sono state trasfettate con pBabe -HOTAIR o pBabe-puro Vector (EV). Fugene-6 (Roche Applied Science) e Opti-MEM I (tecnologie Gibco /Life Co.) sono stati aggiunti in seguito il protocollo del produttore. Quarantotto ore dopo la trasfezione, il supernatante retrovirus contenente è stato raccolto e fatto passare attraverso un filtro da 0,45 micron. cellule MKN74 sono state infettate con i retrovirus ricombinanti e poi selezionati con puromicina.

RNA interference

Per knockdown HOTAIR a Kato III, abbiamo usato Knockout Sistemi RNAi ™ (Clontech Laboratories, Inc., Mountain View, CA) secondo il protocollo del produttore. Brevemente, abbiamo progettato quattro sequenza shRNA mirato HOTAIR come mostrato nella Tabella 1. Dopo la ricottura di oligonucleotidi complementari shRNA, abbiamo ligato gli oligonucleotidi ricotti in pSIREN vettoriale (shHOTAIR). Poi, abbiamo trasfettato cellule Plat-A con shHOTAIR o pSIREN Vector (EV), e infettati KATO III con i retrovirus ricombinanti e selezionati con puromicina. Le cellule trasdotte con l'SH-HOTAIR2 e -3 vettore sono stati scelti per ulteriori studi. Ogni in vitrto
esperimento è stato condotto in triplice copia, ripetuto tre volte e dati rappresentativi sono mostrati.
shRNA
Sequence
shHOTAIR-1sensegatccgaacgggagtacagagagattttcaagagaaatctctctgtactcccgttcttttttganti-senseaattcaaaaaagaacgggagtacagagagatttctcttgaaaatctctctgtactcccgttcgshHOTAIR-2 sensegatccgccacatgaacgcccagagattttcaagagaaatctctgggcgttcatgtggttttttg anti-senseaattcaaaaaaccacatgaacgcccagagatttctcttgaaaatctctgggcgttcatgtggcgshHOTAIR-3 sensegatccgtaacaagaccagagagctgttttcaagagaaacagctctctggtcttgttattttttganti-senseaattcaaaaaataacaagaccagagagctgtttctcttgaaaacagctctctggtcttgttacgshHOTAIR-4sensegatccaattcttaaattgggctggttcaagagaccagcccaatttaagaattttttttganti-senseaattcaaaaaaaattcttaaattgggctggtctcttgaaccagcccaatttaagaattgTable 1. Sequenze di shRNA inserti per l'espressione vettore shHOTAIR.
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crescita cellulare saggio

1 x 10 ^{4 cellule sono state seminate per pozzetto in piastre da 96 pozzetti in normale crescita cellulare media. Il saggio 3- (4,5-dimethylthiazol-2-il) -2,5-diphenyltetrazolium bromuro, tetrazolo giallo (MTT) è stata eseguita utilizzando un kit di proliferazione cellulare I (GE Healthcare Life Sciences, NJ) secondo il protocollo del produttore. Le misurazioni di assorbanza a 570 nm per VersaMax (Molecular Devices, CA) sono stati fatti per stimare la produzione MTT-formazano dopo 24, 48 e 72 ore di incubazione. L'indice è stato valutato a 48 e 72 ore normalizzati a quello a 24 ore.}

soft agar formazione di colonie test

saggi soft agar sono stati costruiti in 6 pozzetti. Lo strato di base di ogni pozzetto composto da 1 ml con concentrazioni finali di 1 x media (RPMI-1640 più il 10% inattivato FBS) e dello 0,6% punto di agarosio basso punto di fusione. Le piastre sono state raffreddate a temperatura ambiente fino solido, a quel punto uno strato di crescita agar-1 ml è stata versata, costituito da 1 x 10 ^{4 cellule sospese in 1 x media e 0,3% Punto di agarosio low melting. Le piastre sono state nuovamente raffreddati a temperatura ambiente fino al livello di crescita congelato. Un ulteriore 1 ml di 1 x supporti senza agarosio è stato aggiunto sulla parte superiore dello strato di crescita al giorno 0 e anche il giorno 14 di crescita. Le cellule sono state permesso di crescere a 37 ° C per 4 settimane e le colonie totale sono stati contati.}

Animali

6 settimane di età Shi SCID--IL2Rγ ^{nullo NOD femmina /(NOG ) i topi sono stati acquistati da Istituto centrale per il sperimentali animali (CIEA, Kawasaki, Giappone) e utilizzati in questo esperimento. Essi sono stati autorizzati a ambientarsi per una settimana prima degli esperimenti. Essi sono stati alloggiati in una stanza pulita della funzione di cura degli animali a Miyagi Cancer Research Center e conservati alla temperatura standard, umidità e condizioni di illuminazione temporizzata e fornito libitum del mouse annuncio chow /acqua.}

Tail vena saggio di metastasi delle cellule tumorali

Per valutare l'effetto di espressione HOTAIR su metastasi ematica, abbiamo iniettato 1,0 x 10 ^{5 cellule di HOTAIR- (n = 9) o EV-esprimenti (n = 9) MKN74 con 0,2 ml di PBS nella vena della coda di topi. I topi sono stati osservati in generale per segni di malattia settimanale per la durata dell'esperimento, e sono stati sacrificati 8 settimane dopo l'iniezione. I polmoni, fegato, reni, ghiandole surrenali, e milze dei topi sono stati asportati e sono stati esaminati macroscopicamente la presenza di metastasi.}

peritoneale metastasi

1,0 x 10 ^{6 celle di shHOTAIR- (n = 5) o EV-espressione (n = 5) KATO III sono stati iniettati con 0,2 ml di soluzione in peritoneo di topi per valutare l'effetto dell'espressione HOTAIR sulle metastasi peritoneale. I topi sono stati osservati in generale per segni di malattia settimanale per la durata dell'esperimento, e sono stati sacrificati 8 settimane dopo l'iniezione. La presenza di noduli e ascite nella cavità peritoneale è stato indagato.}

Istologia e immunoistochimica

I tessuti asportati sono stati fissati in formalina al 10% tamponata per 24 ore, poi tagliato e inclusi in paraffina per microscopica indagine. I campioni sono stati tagliati in sezioni di 4 micron di spessore e colorate con ematossilina e eosina (H & E). Abbiamo studiato la presenza di micro-metastasi che non è stato riconosciuto macroscopicamente. I tumori riconosciuti sono stati ulteriormente indagati immunoistochimica utilizzando anticorpi primario per citocheratina umana (Anti Citocheratina Basso, DC10 /5D3, Nichirei Co, Tokyo, Giappone) per assicurarsi che essi sono stati ottenuti da cellule cancro gastrico umano iniettato. Dopo deparaffinizzazione, le sezioni di tessuto sono state incubate in metanolo con perossido di idrogeno allo 0,3% in acqua distillata per 20 minuti per bloccare l'attività perossidasica endogena. Antigen recupero è stato eseguito da pressione cottura a 95 ° C per 5 min a 10 mM tampone citrato, pH 6,0, e poi lasciata raffreddare a temperatura ambiente per 30 minuti. biotin- endogena o siti avidina-binding sono stati bloccati per incubazione sequenziale per 30 minuti. Le sezioni sono state incubate overnight a 4 ° C con l'anticorpo primario descritto sopra e sono stati fatti reagire con il secondo anticorpo. Un complesso perossidasi avidina-biotin- è stato utilizzato per rilevare il secondo anticorpo. La colorazione è stata visualizzata con diaminobenzidina (DAB). Le sezioni sono state di contrasto con ematossilina, lavate e disidratate con un gradiente di etanolo a xilene.

L'analisi statistica

La correlazione di espressione HOTAIR con le variabili clinico-patologiche del paziente e il tasso di metastasi in iniettato i topi sono stati analizzati con il test chi-quadrato. La significatività statistica delle differenze tra 2 gruppi è stata determinata utilizzando test di Wilcoxon e valore di P
(

< 0,05) è stato considerato come statisticamente significativo. differenza statistica tra 3 gruppi è stata valutata usando il test acciaio Dwass o analisi Bonferroni e P valore
(< 0.017) è stato considerato come statisticamente significativa probabilità di sopravvivenza globale è stato analizzato con i metodi di Kaplan-Meier e valutati da log-rank test e valore di P
(< 0,05) era considerato statisticamente significativo. Tutte le analisi statistiche sono state effettuate utilizzando Ekuseru-Toukei 2012 (Social Survey Research Information Co., Ltd., Tokyo, Giappone). Il valore di P
(< 0,05) è stato considerato come statisticamente significativo

Etica

Il Institutional Review Board della Miyagi Cancer Center (MCC) ha approvato questo protocollo di studio,. e consenso informato scritto è stato ottenuto da ogni paziente (permesso Numero: MCC-22-30). Il protocollo di esperimenti sugli animali è stato approvato dal Comitato di MCC cura degli animali e Usa (Permesso Numero: MCC-AE-2011-12).

Risultati

L'espressione HOTAIR di campioni di cancro gastrico umano

i livelli di espressione Hotair di tessuti non tumorali cancerose e adiacenti dei pazienti affetti da cancro gastrico sono stati esaminati da qRT-PCR e normalizzata dal livello di espressione GAPDH. Il livello di espressione dei media HOTAIR era 4,952 ± 6,462 e 3,804 ± 6,721 (HOTAIR /GAPDH ± deviazione standard) nelle lesioni di carcinoma e non cancerose, rispettivamente. I livelli di espressione di HOTAIR erano significativamente più alti nelle lesioni di carcinoma rispetto a quelli delle lesioni non cancerose ( p = 0,019
, Figura 1A).

associazione tra l'espressione di HOTAIR ei fattori clinicopatologiche nei tumori gastrici umani

I tessuti di cancro gastrico umani sono stati classificati in vista istopatologico intestinale (n = 36) e tipologie diffuse (n = 32). I tessuti di cancro gastrico umano sono stati ulteriormente classificati in base al livello di espressione HOTAIR nel gruppo ad alta HOTAIR (HOTAIR /GAPDH > 1.0) ed economici HOTAIR gruppo (HOTAIR /GAPDH < 1.0) (figure 1B e C). L'associazione di espressione HOTAIR con le caratteristiche clinicopatologiche del tipo intestinale e diffusa di cancro gastrico è riassunta nelle Tabelle 2 e 3, rispettivamente. Nel tipo intestinale del cancro gastrico, nessuna correlazione significativa è stata trovata tra l'espressione HOTAIR ei risultati clinico-patologici (tabella 2). Inoltre, nessuna relazione significativa è stata osservata tra l'espressione HOTAIR e la sopravvivenza globale, anche se il gruppo ad alto HOTAIR tendeva a dimostrare la sopravvivenza più breve della bassa HOTAIR gruppo (Figura 2A). D'altro canto, una significativa associazione è stata trovata tra espressione HOTAIR e metastasi linfonodali (p = 0,043), infiltrazione venosa ( P
= 0,0083), e la sopravvivenza globale a breve ( P
= 0,018) nel tipo diffuso cancro gastrico (Tabella 3 e Figura 2B). Tuttavia, non vi era alcuna associazione tra il palco e l'espressione HOTAIR.
HOTAIR basso
HOTAIR alta
P
valore
Age73.07 ± 9.1870.87 ± 10.650.53Gender0.63Male1016female37T0.87T1, T2610T3, T4713N0.26N078N1, N2 , N3615Ly0.68ly069ly1, LY2, ly3714v0.19v089v1, v2, v3514Stage0.501,27153,4680.50Table 2. L'associazione di espressione HOTAIR con le caratteristiche clinico-patologici di tipo intestinale del cancro gastrico.
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HOTAIR bassa
HOTAIR alta
P
valore
Age59.250 ± 10.7566.35 ± 10.160.07Gender0.71male812female48T0.87T1, T212T3, T41118N0.043*N086N1,N2,N3414ly0.40ly067ly1,ly2,ly3613v0.0083*v0119v1,v2,v3111Stage0.311,2783,4512Table 3. L'associazione di espressione HOTAIR con le caratteristiche clinico-patologici di tipo diffuso di cancro gastrico.
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Generazione di HOTAIR monte ea down-regolato cellule e correlazione con la vitalità delle cellule

Per valutare la ruolo funzionale di HOTAIR nello sviluppo del cancro gastrico, abbiamo generato stabilmente HOTAIR esprimere MKN74 cellule (MKN-Hotair) e le cellule KATO III stabilmente shHOTAIR che esprimono (KATO-shHOTAIR). qRT-PCR analisi ha rivelato che le cellule MKN-Hotair hanno espresso un livello di HOTAIR circa 10 volte quella di EV che esprimono (MKN-EV) o parentali MKN74 cellule e che l'espressione di questa molecola è stata ridotta dal 30 al 70% nelle cellule KATO-shHOTAIR rispetto al EV trasdotte (KATO-EV) o cellule parentali KATO III (KATO-EV) (Figura 3a). I risultati del test MTT dimostrato che né up-regulation né down-regulation di HOTAIR colpiti gastrica proliferazione delle cellule tumorali (Figura S1).

morbida formazione di colonie di agar test

Per chiarire le funzioni di HOTAIR nella crescita ancoraggio-indipendente di cellule di cancro gastrico, abbiamo utilizzato un test agar morbido. cellule MKN-Hotair formato un maggior numero di colonie di cellule MKN-EV ( P
= 0,009, figura 4A). Coerentemente con questa scoperta, le cellule KATO-shHOTAIR hanno mostrato un minor numero di colonie significativi rispetto alle cellule KATO-EV (Figura 4B). Inoltre, le cellule di cancro gastrico con simile livello di espressione HOTAIR (MKN-HOTAIR e shHOTAIR-3, Figura 3B) formate simili numeri di colonie, indicando che la crescita ancoraggio-indipendente di cellule di cancro gastrico è stato regolato in modo HOTAIR-dipendente.

espressione HOTAIR e gastrica le metastasi delle cellule tumorali e peritoneale diffusione

Dal HOTAIR migliorato l'ancoraggio-indipendente, ma non di ancoraggio-dipendente crescita delle cellule di cancro gastrico, abbiamo ipotizzato che HOTAIR potrebbe contribuire a metastasi a distanza e /o diffusione peritoneale piuttosto che l'invasione diretta di organi vicini. Per risolvere questo problema abbiamo impiegato un saggio di coda vena e l'iniezione peritoneale di cellule per esaminare se l'espressione HOTAIR promuove sangue metastasi -borne e la diffusione peritoneale, rispettivamente. Come previsto, le cellule MKN-Hotair frequentemente esposti metastasi epatiche ( P
= 0.01) rispetto alle cellule MKN-EV. Inoltre, il numero e le dimensioni dei tumori del fegato metastatico sono stati significativi più grande con le cellule MKN-Hotair che con le cellule MKN-EV ( P
= 0,03 e P
= 0,019, rispettivamente, figure 5A e B). È interessante notare, un mouse iniettati con MKN-HOTAIR mostrato metastasi al rene e la ghiandola surrenale, oltre al fegato, mentre con cellule MKN-EV tumori metastatici formate esclusivamente nel fegato. Coerentemente, la diffusione peritoneale è risultata significativamente ridotta (1/5, P
= 0.009), quando HOTAIR è stato inattivato nelle cellule KATO III mentre tutte le cellule di controllo formate diffusione peritoneale (5/5) (figure 6A e B). I tumori metastatici sono stati istologicamente confermati e hanno mostrato intensa colorazione positiva per citocheratina umana (Figure 5C e 6C).

Discussione

In questo studio, abbiamo studiato l'espressione di HOTAIR nel carcinoma gastrico ed esaminare la sua correlazione con le caratteristiche clinico-patologici, tra cui la prognosi dei pazienti. I nostri risultati chiaramente rivelato aumentata espressione di HOTAIR nei tessuti tumorali rispetto ai tessuti non cancerose dello stomaco e che l'espressione ad alto livello di questa molecola è stata associata con metastasi linfonodali, invasione venosa e scarsa sopravvivenza nel tipo diffuso di cancro gastrico. Questi risultati sono coerenti con lo studio recente dimostra che up-regolazione di HOTAIR si trova nel carcinoma gastrico rispetto ai tessuti normali ed è correlata con lo stadio del tumore e metastasi linfonodali [17]. Inoltre, HOTAIR esprimono cellule di cancro gastrico esposto il potenziamento della crescita delle cellule ancoraggio-indipendente in vitro
e metastasi al fegato in vivo
mentre ridotta espressione di HOTAIR nelle cellule di cancro gastrico ha provocato diminuzione della crescita ancoraggio-indipendente e la diffusione peritoneale, suggerendo che HOTAIR gioca un ruolo fondamentale nella progressione del cancro gastrico.

maggiore espressione di HOTAIR è stata rilevata nelle cellule tumorali rispetto alle cellule non tumorali corrispondenti a vari tipi di cancro, tra cui seno, del colon, del fegato, del pancreas e cancro del rinofaringe [9-11,18-20]. In questi tipi di cancro, HOTAIR stato anche dimostrato di essere associati con metastasi e /o prognosi infausta. Inoltre, l'elevato livello di espressione HOTAIR è stata correlata con breve sopravvivenza libera da malattia nel cancro del polmone [12]. Pertanto, i nostri risultati attuali sono coerenti con gli studi precedenti che indicano che l'espressione di HOTAIR è coinvolto nella maggiore aggressività dei vari tipi di cellule di carcinoma. D'altra parte, ma non abbiamo trovato effetto prognostico negativo del HOTAIR nel tipo intestinale del cancro gastrico, anche se il gruppo ad alto HOTAIR tendeva a dimostrare più breve sopravvivenza globale rispetto al gruppo a basso HOTAIR. Questo potrebbe essere dovuto al numero ridotto di pazienti in questo studio, dal momento che l'espressione forzata di HOTAIR in un gastrica linea di cellule di cancro intestinale (MKN74) ha guadagnato il fenotipo aggressivo in vitro
e in vivo
. Ulteriori indagini con un gran numero di campioni in aggiunta allo studio sperimentale utilizzando altre linee di cellule di cancro gastrico intestinale sarebbe necessario per affrontare questo problema.

Nel corso di studio, nessuna associazione è stata trovata tra l'espressione HOTAIR e la crescita delle cellule in tumore gastrico. In seno, del colon e cancro del fegato, il coinvolgimento di HOTAIR nella crescita cellulare, non è stato dimostrato [9,10,18], mentre HOTAIR promosso e riduce la proliferazione delle cellule nel cancro del pancreas [11] e il cancro ai polmoni [12], rispettivamente. Inoltre, nessuna differenza significativa è stata trovata nella crescita del tumore per via sottocutanea nei topi NOG tra HOTAIR-esprimere e cellule di controllo in questo studio (i dati non sono stati mostrati). Sulla base di questi risultati, è probabile che il legame tra espressione HOTAIR e proliferazione cellulare dipende dal tipo di cancro. Al contrario, la crescita ancoraggio-indipendente di cellule di cancro gastrico è stato chiaramente migliorato in modo HOTAIR-dipendente. Inoltre, l'espressione HOTAIR causato più metastasi al fegato e di altri organi, e un difetto di HOTAIR soppressa la diffusione peritoneale delle cellule di carcinoma gastrico. Queste osservazioni, insieme con il fatto che l'espressione HOTAIR contribuisce alla metastasi in vari carcinomi [9-12,18], suggeriscono che HOTAIR è principalmente coinvolto nel processo metastatico piuttosto che nella crescita del tumore primario.

In conclusione, l'espressione HOTAIR rafforzata nel tipo diffuso di cancro gastrico è stato associato con l'incidenza di invasione venosa e prognosi infausta indipendentemente fattore T, e costretto espressione di HOTAIR in cellule di cancro gastrico promosso la crescita delle cellule ancoraggio-indipendente in vitro
e metastasi al fegato in vivo
. Questi risultati indicano che HOTAIR rischia di essere coinvolti nello sviluppo del cancro gastrico e potrebbe anche essere un obiettivo terapeutico nel trattamento del cancro gastrico.

Informazioni di supporto
Figura S1.
L'associazione della proliferazione delle cellule con l'espressione HOTAIR. I risultati del saggio MTT valutata a 72 ore sono stati normalizzati a quello a 24 ore. Nessuna relazione è stata trovata tra espressione HOTAIR e la proliferazione delle cellule del cancro gastrico
doi:. 10.1371 /journal.pone.0077070.s001
(TIF)

Riconoscimenti

Ringraziamo Kitamura (L'Università di Tokyo, Tokyo, Giappone) per la fornitura di celle Platinum-a.

• PLoS ONE: storia naturale della malattia ossea maligna nel cancro gastrico: risultati finali di un sondaggio Multicenter metastasi ossee
• PLoS ONE: attivazione di STAT3 in cellule umane cancro gastrico mediante interleuchina (IL) -6-Type citochine segnalazione si correla con implicazioni cliniche