PLOS NËMMEN: Ofgeholl Haaptentwéckler-Fucosylation zu Malignancy zu Gastric Cancer

Wat VerfÜgung

D'Ziel vun der Etude ass N-glycan profiling Verännerungen, verbonne mat gastric Kriibs a beschen Impakt vun Kär-fucosylation op biologesche z'identifizéieren Behuelen vu mënschlechen gastric Kriibs Zellen. Eng total vun 244 Punkten dorënner gastric Kriibs, gastric oppent a gesond Kontroll goufen agestallt. N-glycan profiling aus serum a Ganzen Proteinen am gastric Stoffer war vun DNA sequencer-assisteiert fluorophore-assisteiert capillary electrophoresis analyséiert. D'Heefegkeet vun insgesamt Kär-fucosylated Pestiziden an dem Wëllen vun am Kär-fucosylation Équipe Enzymen sech mat lectin blot, grouss ëmgedréint Transkriptiouns-polymerase Kette Reaktioun, westlech blot, Immunohistochemical staining an lectin-histochemical staining analyséiert. D'recombinant plasmids vum PIB-fucose Fernsehn an α-1,6-fucosyltransferase (Fut8) waren gastric Kriibs Zell Linnen BGC-823 an SGC-7901 gebaut a transfected un. CCK-8 a Meter verkënnegt assay sech benotzt der funktionell Impakt vun Kär-fucosylation modulation op Zell Prolifératioun a Migratioun ze bewäerten. Charakteristesche serum N-glycan Profiller ware vun gastric Kriibs fonnt. Am Verglach mat de gesond Kontroll, eng trianntenary Struktur Iwwerfloss, tëscht 9 (NA3Fb), war wiesentlech zu gastric Kriibs fräi, während de ganzen Heefegkeet vun Kär-fucosylated Reschter (sumfuc) ofgeholl huet. Kär-fucosylated Strukturen, peak6 (NA2F) an peak7 (NA2FB) waren an gastric entholl Stoffer verstuerwenen wou mat dass am Verglach zu bascht Net-entholl Stoffer. Konsequent, Lëns Culinaris agglutinin (LCA) waren -binding Proteinen ofgeholl bedeitend an Sera vun gastric Kriibs, an FAQ Niveau vun Fut8 war wiesentlech zu gastric entholl Stoffer Verglach mat deem vun bascht Net-entholl Stoffer ofgeholl. Upregulation vum PIB-TR an Fut8 konnt inhibit Prolifératioun, mä hat kee groussen Afloss op Migratioun vun BGC-823 an SGC-7901 Zellen. Kär-fucosylation Minus vun gastric Kriibs reegelen. Upregulation vum Kär-fucosylation konnt Zouhuelen vun der mënschlecher gastric Kriibs Zellen inhibit VerfÜgung

Fro:. Zhao Y-P, Xu X-Y, Fang M, Wang H, Dir Q, Yi C-H, et al. (2014) ofgeholl Haaptentwéckler-Fucosylation zu Malignancy zu Gastric Cancer dréit. PLoS NËMMEN 9 (4): e94536. Doi: 10.1371 /journal.pone.0094536 VerfÜgung

Redakter: Salvatore V. Pizzo, Herzog University Medical Center, Vereenegt Staate vun Amerika VerfÜgung

Arnaque: 19 August, 2013; Akzeptéiert: 17. Mäerz 2014; Publizéiert: April 14, 2014 VerfÜgung

Copyright: © 2014 Zhao et al. Dëst ass eng oppen-Zougang Artikel ënnert de Bedingunge vun der Lizenz BY Creative Commons verdeelt, déi bereet benotzen Genehmegungen, Distributioun, an Reproduktioun vun all mëttelgrouss, gëtt d'Original Auteur an d'Quell Kaiser sinn VerfÜgung

Funding:. D'Etude war déi National Natural Science Foundation of China (Nr 81201697, 81101639 an Nr 81271925) ënnerstëtzt; Wëssenschaft an Technologie Kommissioun vu Shanghai Gemeng (Nr 10ZR1439100 an Nr 11JC1416400) Éislek funders hu keng Roll am Etude Design, Daten Kollektioun an Analyse, Décisiounen ze publizéieren, oder Virbereedung vun der mëttelalterlech Handschrëft VerfÜgung

Interessen Wettsträit.: d'Auteuren hunn deklaréiert, datt keng Competitioun Interessen existéieren VerfÜgung

Aféierung VerfÜgung

d'gastric Kriibs (GC) ass de véiert stäerkste gemeinsam Kriibs an der zweeter stäerkste gemeinsam Ursaach vum Kriibs Zesummenhang Doud weltwäit [1]. - [3], besonnesch verwandelt an vill asiatesch Länner, virun allem a China [4]. Protein glycosylation ass eent vun de meescht gemeinsam ze Proteinen feieren posttranslational Ännerungen [5]. Glycans kënnen ze Proteinen entweder iwwer eng amide Grupp (N-Hausnummeren glycosylation) oder engem hydroxyl Grupp (O-Hausnummeren glycosylation) verbonnen ginn, déi duerch verschidde biosynthetic Weeër geschéien an eventuell onofhängeg Funktiounen hunn [6]. N-Hausnummeren glycosylation spillt fundamental Roll an vill biologesch Prozesser wéi Zell Haftung, Zell Migratioun, an Signal transduction [7]. Anormal Expressioun vun N-Hausnummeren glycoproteins gouf zu verschidde Krankheete observéiert [8] - [10]. Nodems mer zu-Déift characterization vun N-Hausnummeren glycoproteins a Krankheet-verbonne glycosylation Ännerungen, hunn e puer Méthodologie entwéckelt gouf. An eiser leschter studéieren, hunn mir e puer N-glycan lues zu heptatocellular carcinoma (HCC) an Colon Kriibs mat engem capillary baséiert electrophoresis genannt DNA sequencer-assisteiert fluorophore-assisteiert capillary electrophoresis (DSA-FACE) [11] identifizéiert. Ausserdeem, ass et gouf confirméiert, datt α-1, 6-fucosyltransferase (Fut8) Aktivitéit an Ausdrock vun e puer Mënsch Cancers fräi ass, eng wichteg Roll fir dës Aktivitéit am entholl Entwécklung an Werdegang suggeréiert, wéi HCC [12], [colorectal Kriibs ,,,0],13], nonsmall Zell haett Kriibs [14] a spillt serous adenocarcinoma [15]. Verännert Kär-fucosylation ass eent vun de wichtegste Manque glycosylated Modifikatioun vun malignancies identifizéiert. Fut8 catalyzes den Transfert vun fucose aus guanosine diphosphate (PIB) -fucose zu der Exoplanéit GlcNAc vun Hybrid a komplex N-Hausnummeren oligosaccharides via eng α-1,6-linkage geplatzt Kär-fucosylated glycoproteins [16] - [17] an Wou muss ech biologescher Funktioun vun doraus glycoproteins [18]. Obwuel vill Studien der Associatioun tëscht verännert Kär-fucosylation an aner aggressiv erhéijen gemellt hunn, fir eist Wëssen, bleift den Afloss vun Kär-fucosylation op gastric Kriibs onbekannt. An dëser Etude, analyséiert mir N-glycan profiling mat DSA-FACE Souwuel serum Echantillon vun gastric Kriibs, gastric oppent, gesond Kontrollen an Otemschwieregkeeten Proteinen vun erhéijen an bascht Net-erhéijen. Dunn verlängeren der funktionell Fuerschung op der identifizéiert spezifesch glycosylations. VerfÜgung

spontan a Methode VerfÜgung

IFLA- breakpoint VerfÜgung

D'Etude Protokoll vun der chinesescher IFLA- Comité vun Human Resources bei der Zweeter ofgeseent gouf militäresch Medical Universitéit. All Etude Participanten gëtt Awëllegung geschriwwen. VerfÜgung

Sécuritéit Populatioun VerfÜgung

Am Ganzen, 105 Patienten mat gastric Kriibs (n = 80) an gastric oppent (n 25 =) waren tëscht Dezember iwwregens 2007 an Oktober 2010 bei Changzheng Spidol vun der zweeter Military Medical University (Shanghai, China). All Fäll mat Coursë gastric Kriibs huet histopathologically vun 2 pathologists a Fäll mat gastric oppent bestätegt rekrutéiert goufen duerch gastroscope confirméiert. Patienten mat gastric Kriibs deen preoperative Chimiotherapie dobäi, an déi hu aner Krankheeten wéi Aids sech aus der Etude ausgeschloss. Serum Echantillon waren ier chirurgesch resections kritt. Fir eng Kontroll Grupp, 139 Alter stemmt, sech gesond Fräiwëlleger aus engem Pool vu Kriibs-gratis Persounen iwwregens deen de selwechte Spidol fir eng regulär kierperlech Ënnersichung besicht an déi fräiwëlleg d'Fuerschung am selwechten Zäitraum matzeman. Mir definéiert eng gesond individuell wéi een deen sech gratis vu Krankheeten gehale (och keng Geschicht vum Kriibs) op Gesondheet Check-up. Déi folgend Medeziner Charakteristiken vun Sujete waren op der Zäit vum ganze Blutt Kollektioun kritt. E Resumé vun den Donnéeë vun deene Sujeten ass an Table 1. D'Werdegang vun all Patienten mat gastric Kriibs gëtt war no der Unioun fir International Cancer Control (UICC) TNM Stadium Critèrë fir gastric Kriibs séiert, 13 Patiente (16.25%) haten Etapp ech, 24 Patiente (30,00%) haten Etapp II, 30 Patiente (37.5%) déi Etapp III, an 13 Patienten (16.25%) haten Etapp IV. Den Duerchschnëtt vun all Patienten war 54,35 ± 6,69 dorënner 60 Männercher an 20 Weibercher. Serum war mat engem normalen Protokoll vum ganze Blutt gesammelt, behandelt vun centrifugation bei 10.000 g fir 20 Minutten, an bei -80 ° C gespäichert. VerfÜgung

N-Glycan profiling aus serum Proteinen VerfÜgung

Serum FAQ N-glycan analyséiert goufen virdrun ëmschriwwen standing [11]. Kuerz, mat 8-aminonaphtalene-1, der N-glycans Moment op der Proteinen an 2 μl vun serum waren 3, mat peptide N-glycosidase-F (PNGaseF) (New England Biolabs, Boston, Massachusetts) an dann mam Label verëffentlecht 6- trisulphonic Seier (APTS) (Invitrogen, Karlsbad ersetze) .Sialic Seier mat arthrobacter geläscht war ureafaciens sialidase (Roche Bioscience, gekësst Alto, ersetze kéint), an de Filteren Echantillon waren mat DSA-FACE Technik mat engem capillary electrophoresis-baséiert ABI3500 genetesch analyséieren Organer (Obwuel Biosystems, Foster City, ersetze). Den 9. stäerkste enorm Moundalpen dass zu all Echantillon fonnt goufen (zesummen, virgesin dës Moundalpen fir > 90% vun insgesamt serum N-glycans) waren GeneMapper Software (Obwuel Biosystems) analyséiert benotzt. All Struktur vun N-glycan war déi norméierend seng Héicht un der Zomm vun de Spëtzte vun all Bierger numerically beschriwwen. VerfÜgung

Ray Echantillon VerfÜgung

All Stoffer sech am Aklang mat den institutionnelle Kritik Verwaltungsrot Spillconditiounen Ufank vun Zweete Military Medical Universitéit. Ray Echantillon waren from10 vun 80 Patiente mat gastric Kriibs kritt huet. Ray Echantillon dorënner 2 eraus, eng entholl Otemschwieregkeeten an enger bascht Net-entholl Otemschwieregkeeten. Vläit Otemschwieregkeeten Echantillon (ongeféier 0,5 × 0,5 × 0,5 cm 3, fir all Prouf verduebelt) ausgewielt entweder waren direkt bei -80 ° C gefruer fir RNS an FAQ Extraktioun oder zu 10% gefiermt formalin fix fir bis zu 24 Stonnen an duerno Filteren an engem paraffin Ënnerbewosstsinn Spär a bei Raumtemperatur fir histochemical staining gespäichert. VerfÜgung

N-Glycan profiling aus Otemschwieregkeeten Proteinen an strukturell Analys benotzt exoglycosidase unzereegen VerfÜgung

Proteinen vun ongeféier 25 mg gefruer Otemschwieregkeeten uplanzen ofgebaut goufen . D'Otemschwieregkeeten uplanzen sech zu lysis gefiermt wouvun protease inhibitors Cocktail (Roche kinnt, Meylan, Frankräich) Sursis an pestled. Unlysed Deeler goufen duerch centrifugation (12000 g fir 10 Minutte bei 4 ° C) zweemol geläscht. D'Konzentratioun vun solubilized Proteinen war mat der BCA Kit (Pierce Déi /Thermo Fisher Wëssenschaftlech, Rockford, IL) alles, an d'FAQ Echantillon waren op -80 ° C bis benotzen gespäichert. Eng total vun 40 μg Otemschwieregkeeten Proteinen sech benotzt N-glycan Profiler benotzt reegelméisseg N-Glycan profiling Method d'selwecht wéi déi an serum uewen beschriwwen standing ze etabléieren. Fir Kär-α-1, 6-fucosylated N-glycan Strukturen, eng adäquat Zuel vun APTS-Label N-glycans sech mat béide arthrobacter ureafaciens sialidase an Bovine Nier α-1 verdaut, 6-fucosidase (Prozyme, San Leandro, CA z'identifizéieren , USA). DSA-FACE Technik war benotzt ze analyséieren war d'Verdauung Produiten an GeneMapper Software benotzt der Héicht vun de Moundalpen ze analyséieren. VerfÜgung

RNS erauszéien a grouss real-Zäit Hinnen alleguer VerfÜgung

Total RNAs sech aus gefruerenem ofgebaut Stoffer an Zellen, am Ganzen RNS Extraktioun Kit mat laut den Hiersteller d'Instruktioune (Axygen Biosciences, Hangzhou, China). De Rengheet an Konzentratioun vun RNS sech duerch spectrophotometer (Eppendorf, Hamburg, Däitschland) alles, an dann bei -80 ° C bis benotzen gespäichert. D'cDNA war mat ReverTra Ace-α-RT-Hinnen alleguer Kit (Toyobo Co., Rekorder, Japan) Wierderbuch no den Instruktioune vum Produzent. Primers sech mat der Primer Express Programm (Obwuel Biosystems; de Message sinn an Table S1 gewisen) entworf. Chemeschen Hinnen alleguer real-Zäit Leeschtung war d'SYBR® Green Real-Zäit Hinnen alleguer Master Mix Kit benotzt (Toyobo Co., Rekorder, Japan) an war op applizéiert Biosystems 7300 Real-Time Hinnen alleguer System (Abi, Foster City, CA, USA) analyséiert . All assays sech onofhängeg vun triplicate duerchgefouert. Hinnen alleguer gemiddlech aus denaturation bei 95 ° C fir 5 Minutten, gefollegt vun 40 Zykle bei 95 ° C fir 15 Sekonnen an um 59 ° C oder 55 ° C fir 15 Sekonnen, an erkennen fir 45 Sekonnen op 72 ° C. Der relativer Montant vun Fut8 oder guanosine diphosphate (PIB) -fucose Fernsehn (PIB-TR) gët an all Prouf war normalized dem housekeeping Gentherapie β-actin an Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) vum Zyklus subtracting. Den Niveau vun der Gentherapie Ausdrock benotzt Delta-Delta CT Method alles. Absolut ët ​​Ausdrock Wäerter iwwer 40 geknuppt ënnert Magnéitfeld Niveauen considéréiert. Schocken Kéiren sech fir all Reaktioun vergewësseren ze garantéieren, dass en eenzelt Produit Implikatioune verstärkt gouf. VerfÜgung

Western blot an Lectin blot VerfÜgung

Proteinen sech aus gefruerenem Stoffer mat der Prozedur ofgebaut uewe beschriwwen, an insgesamt 50 μg Proteinen sech duerch electrophoresis zu 10% Natrium dodecyl sulfate-polyacrylamide gelies (SDS-PAGE) getrennt. Gels sech mat coomassie blo G250 oder d'Proteinen am gelies Kierchefënster sech zu engem nitrocellulose Membran () fir d'Detectioun vum Fut8 oder de Prozentsaz vun Kär-fucosylated Proteinen transferéiert. Fir serum Echantillonen, am Ganzen 85 Fäll vum gastric Kriibs (n = 80), gastric oppent (n = 25) a gesond Kontroll (n = 30) huet sech fir SDS-PAGE an lectin-blot benotzt. D'Schläimhait sech Nuecht op 4 ° C mat 5% nonfat Mëllech FAQ oder 5% Bovine serum albumin zu Tris-gefiermt Salins [140 mm NaCl, 10 mm Tris-HCl (TBS)] an dann fir 2 Stonn bei Raumtemperatur incubated virbildlech mat 1:100 antibody anti-Mënsch Fut8 verdënntem (15C6, anti-Mënsch Fut8, Fujirebio Corp., Japan) oder 5 μg /ml vun biotinylated Lëns Culinaris agglutinin a (LCA) (Vecteure Laboratoiren, Burlingame, ersetze) zu TBS mat 0,05% Tween-20 (TBST gefiermt), an dann mat enger 1:10,000 dilution vun fluorescence-Label Secondaire antibodies (LI-Cor Biosciences, Lincoln, héich) oder IRDye 800CW-streptavidin (LI-Cor Biosciences) fir 1 Stonn bei Raumtemperatur incubated . D'Schläimhait sech mat der Odyssee asetzen Imaging System entwéckelt. Anti-Beta actin (1:2000) war fir intern Referenzmaterial antibody fir westlech-blot benotzt. Sidd albumin war den negativen Kontroll fir lectin blot an total FAQ Kierchefënster mat coomassie blo benotzt gouf benotzt de Prozentsaz vun Kär-fucosylated FAQ ze berechnen. VerfÜgung

Immunohistochemical (IHC) staining an lectin-histochemical staining VerfÜgung

Déi fix Otemschwieregkeeten uplanzen an paraffin Ënnerbewosstsinn huet fir Fut8 an lectin-histochemical staining fir LCA fir immunohistochemical staining an 4-mm-krank eraus koum. No engem deparaffinization, abordablel, endogenous peroxidase erauszesichen, an antigen retrieval (10 mm Tris /1 mm héich, pH 9.0, autoclave behandelt), waren uplanzen mat enger Maus monoclonal antibody géint Mënscherechter Fut8 (1:100) oder biotinylated LCA incubated (1 :500) Iwwernuechtung bei 4 ° C, an dann mat horseradish peroxidase-conjugated Secondaire antibody oder Fluorescein Fortgeschratten streptavidin bei 37 ° C fir 30 min. Kären sech mat hematoxylin oder Draq5 counterstained. Negativ Kontroll war vun identically behandelt histological Sektiounen mat Maus IgG komponéiert Maus Fut8 ze schounen. VerfÜgung

Zell Linnen a Kultur VerfÜgung

De Mënsch gastric Kriibs Zell Linnen, BGC-823 an SGC-7901, huet kaaft vun der Shanghai Institut vun Zell Biologie, Chinese Akademie vun de Wëssenschaften an cultured bei 37 ° C ënner 5% CO _{2 zu RPMI 1640 mëttel- a DMEM mëttelfristeg (Invitrogen Life Technologies, Karlsbad CA), respektiv, mat 10% FBS, 1% glutamine, an 1% Antibiotike Léisung. VerfÜgung}

Bau vun PIB-TR an Fut8 Recombinant Plasmids an transfection vun gastric Kriibs Zellen VerfÜgung

d'pEGFP-N1-PIB-TR an der pEGFP-N1 -Fut8, déi plasmid Vecteure Zeechesaatz Mënsch PIB-TR oder Fut8, war andeems PIB-TR oder Fut8 cDNA an enger pEGFP-N1 Vecteure (Clontech Laboratoiren, Inc., Mountain View, CA, USA), wouvun eng CMV Promoteur generéiert an SV40 fréi Promoteur, wéi och d'neomycin /kanamycin Resistenzgen vun Tn5. D'Vecteure Stäip enthält och eng SV40 Urspronk vum Gedächtnis an mammalian Zellen. D'Multiple Klone Site (MCS) ass nieft der direkter fréi Promoter vun CMV. De Mënsch PIB-TR oder Fut8 Gentherapie war vun der mat TRIzol reagent (Invitrogen, Karlsbad, USA) vu Mënsch Liewer Otemschwieregkeeten vun leeschtungsfäeg RT-Hinnen alleguer mat der primers (Table S2) an deem d'Xho sin oder KPN ech Restriktioun Siten ofgebaut mRNA gekloonten sech och, mat Xho sin oder KPN ech verdauen an der pEGFP-N1 ligating un. D'pEGFP-N1-PIB-TR oder der pEGFP-N1-Fut8 war fir amplification an DNA sequencing an Escherichia belaascht DH5α transfected benotzt huet sech d'Vertrauen ze garantéieren. Plasmid DNA huet mat der QIAGEN DNA Mini Kit (QIAGEN, Hilden, Däitschland) bereet als pro Fabrikant d'Uweisungen. Plasmids sech an de Mënsch Linnen gastric Kriibs Zell transfected, BGC-823 an SGC-7901 bei 80% Niewebaach a 5 × 10 5 Zellen pro och zu engem sechs-gutt Schossel mat der Lipofectamine ™ 2000 (Invitrogen, Karlsbad USA laut) un d'Instruktioune vum Produzent. D'transfected Zellen déi Zil- Gene ausgedréckt duerch grouss RT-Hinnen alleguer bestätegt goufen. VerfÜgung

Zell Prolifératioun assay VerfÜgung

Zell Prolifératioun assays mat Zell Counting Kit-8 gesuergt huet (CCK-8, Dojin, Japan) no der Taktik vum Produzent. Zell Wuesstem war all 24 h iwwer 5 Deeg iwwerwaacht, a fir all Zäit Punkt huet am zweete duerchgefouert. D'absorbance war fir all gemooss gutt op enger Wellelängt vun 450 nm. VerfÜgung

Meter verkënnegt assay VerfÜgung

Fir d'Wonn verkënnegt assay, de Mënsch gastric Kriibs Zell Linnen, BGC-823 an SGC-7901 ( 1 × 10 5 Zellen /35 × 11 mm Platen) goufen géint a fir 24 Stonnen op 37 ° C an dann transfected mat recombinant plasmids incubated. No Niewebaach erreechen, war den bewosst futti an all Plack mat enger Plastikstut Pipette Tipp Kapp. D'Wanderung vun de Zellen op der Südsäit vun der Null op 0, 24 an 48 Stonnen analyséiert huet, huet de Biller ageholl a vun Leica fluorescence microscope iwwereneestëmmen Bild Analyse Software (Koméit Assay IV Image Analyse System, PI, UK) analyséiert.

Routine entholl ofgesinn Detektioun VerfÜgung

Séminairen a biochemical Daten vun de Patienten an Table 1. Routine biochemical Tester zesummegefaasst sinn sech mat normalen Methoden a reagéiert reagents gemooss (Hitachi 7600 Organer (Hitachi, Tokyo, Japan) . entholl Bewaacher Niveauen, dorënner rechnen antigen 19-9 (CA19-9), carcino-embryonal antigen (CEA), Cytokeratin 19 (CK19), CA125 an CA724, sech op enger Roche E170 tip mat reagéiert reagents alles. VerfÜgung

statistique Analys VerfÜgung

All grouss Verännerlechen sech ausdrécke wéi heescht ± normale Hitparad anescht dohinnergestallt. Chemeschen Verännerlechen mat Student t Tester verglach goufen, Analysë vun Varianz (ANOVA), oder nonparametric Tester. Pearson Ech vun Korrelatioun (Spearman Ech vun Korrelatioun fir ordinal Diskussioun Verännerlechen berechent goufen) an hirem Wahrscheinlechkeeten ( p VerfÜgung) waren benotzt kennenzeléieren tëscht Parameteren ze diskutéieren. All Rapport p VerfÜgung Wäerter goufen 2-tailed, an p VerfÜgung Wäerter &Si besteet; 0,05 waren statistesch relevant considéréiert. Statistique analyséiert goufen mat SPSS 16,0 fir Windows statistesch Software (SPSS Galaxy) gesuergt. VerfÜgung

Resultater VerfÜgung

Verschidde serum N-Glycan profiling Musteren an gastric Kriibs, gastric oppent a gesond Kontrollen VerfÜgung

Ausschöpfung DSA-FACE, iwwerpréift mir der N-glycan Profiler an desialylated Sera vu Patienten mat gastric Kriibs (n = 80), gastric oppent (n = 25), an Alter reagéiert gesond Persounen (n = 139). Mir laachen an statistesch dës Moundalpen ënner 3 verschidden Gruppen Verglach. Op d'mannst 9 N-glycan Strukturen (Bierger) waren an all Echantillon (Dorënner 1A) identifizéiert. Déi strukturell Analys vun dësen N-glycans war virdrun vun CALLEWAERT publizéiert [11]. D'Moyenne relativ Heefegkeet vun dësen N-glycan Strukturen war an Table 2. D'Heefegkeet vun de Strukturen an de Moundalpen nëmmen 2, 3, 5, 6, 7 beschriwwen, 8 an 9 réischt statistesch relevant Ënnerscheeder tëschent de gastric Kriibs, gastric oppent, a gesond Kontroll Gruppen, beweist dass verschidden N-glycan Musteren an verschidden pathophysiologic Konditiounen wossten. Am Verglach mat de gesond Kontroll Grupp, peak5 (bigalacto biantennary glycan, NA2) an peak9 (muerden α-1,3-fucosylated triantennary glycan, NA3Fb) waren nik (P &Si besteet; 0.001) (Dorënner 1B); Obschonn core- fucosylated Moundalpen, wéi peak2 (agalacto Kär-α-1,6-fucosylated biantennary glycan bisecting, NGA2FB), peak3 (Single agalacto Kär-α-1,6-fucosylated biantennary glycan, NG1A2F), peak6 (bigalacto Kär 0.001); -α-1,6-fucosylated biantennary glycan, NA2F) an peak7 (bigalacto Kär-α-1,6-fucosylated bisecting biantennary glycan, NA2FB) waren an der gastric Kriibs Grupp (P &si besteet ofgeholl. Zerfall (beweist total Kär-fucosylated Strukturen, dorënner Héichpunkt 1, 2, 3, 4, 6, an 7) d'Heefegkeet vun Kär-fucosylated Struktur glycans genannt sumfuc war vill an der gastric Kriibs (P &Si besteet; 0.001) ofgeholl (Dorënner 1c ). D'gastric Kriibs Grupp war weider an 4 subgroups séiert no TNM Stadium vun UICC fir gastric Kriibs. D'Struktur Iwwerfloss an sumfuc hutt net vill ënnert de 4 verschiddene subgroups änneren; Ee, sumfuc war graduell mat Werdegang Etappe vun gastric Kriibs ofgeholl (Table 3). VerfÜgung

Korrelatioun tëscht N-glycans an Iddi entholl lues VerfÜgung

Fir Datum, CEA nach wäit fir d'Kontroll ginn ass an Iwwerwachung vun gastric Kriibs. Mir analyséieren déi kennenzeléieren tëschent eenzelne N-glycan Bewaacher mat CA19-9, CEA, CK19, CA125 an CA724. D'Pearson Korrelatioun Analyse uginn dass CEA positiv mat peak1 verbonne war (r = 0.19; P &Si besteet; 0.01), an peak9 (r = 0,28; P &Si besteet; 0.01) hierkommen negatif mat peak6 (r = -0,18; P &Si besteet; 0.01) an peak8 (r = -0,23; P &si besteet; 0.01). (Table 4) VerfÜgung

Se sumfuc tëscht gastric Kriibs an aner digestive System Cancers VerfÜgung

Virdrun mir der N-Glycan profiling vun hepatocellular carcinoma studéiert hunn (HCC) [19] an colorectal Kriibs (CRC) [20]. D'Heefegkeet vun sumfuc réischt statistesch relevant Ënnerscheeder tëschent de gastric Kriibs (41.32 ± 6.39), HCC (50.99 ± 8.39), CRC (45.33 ± 5.96) a gesond Kontroll (47.67 ± 5.08) Gruppen (P &Si besteet; 0,001, Table 5), déi besot datt verschidde Niveau vun Kär-fucosylation wossten zu Cancers mat verschiddene Otemschwieregkeeten Originen. Ënnert de 4 Gruppen, war de Niveau vun Kär-fucosylation zu HCC der héchster, iwwerdeems de fucosylation Niveau vun gastric Kriibs war den niddregsten, a war och méi déif wéi déi an gesond Kontroll. VerfÜgung

N-Glycan profiling Musteren an gastric entholl an Net-entholl Stoffer VerfÜgung

N-glycan Profiller ware vun desialylated FAQ aus gastric entholl an Net-entholl Stoffer iwwerpréift. Déi dräi stäerkste räich bigalacto biantennary glycans zougedréckt a serum, peak5 (NA2), peak6 (NA2F) an preak7 (NA2FB) huet och an Otemschwieregkeeten Proteinen identifizéiert (Dorënner 2A). Peak6 an Peak7 confirméiert Kär-fucosylated Strukturen aus peak5 der Behandlung mat Kär-α-1, 6-fucosidase unzereegen (Dorënner 2A) dervied gin. D'Héicht vun dësen dräi Moundalpen benotzt GeneMapper Software analyséiert. D'Verhältnis vun peak6 zu peak5 niddreg zu entholl Stoffer wéi dat zu bascht Net-entholl Stoffer (0.83 ± 0,18 vs. 1.05 ± 0,42, Dorënner 2B), souwéi d'Verhältnis vun peak7 zu peak5 (0.13 ± 0,06 vs. 0,16 ± 0,04, Dorënner 2C). Allerdéngs goufen et keng statistesch Differenze (P > 0,05). Tëscht entholl an Net-entholl Stoffer VerfÜgung

Ofgeholl Niveau vun insgesamt Kär fucosylation zu souwuel Sera an Stoffer aus gastric Kriibs identifizéiert VerfÜgung

Well LCA kann speziell d'glycoproteins mat α-1,6-fucosylated-Hausnummeren N-acetyl-d-glucosamine-asparagine (GlcNAc-ASPLanguage) an der trimannosyl Kär unerkennen, ze propagéieren mir de ganzen Kär fucosylated Proteinen vun Sera an Stoffer zu gastric Kriibs LCA benotzt Opklärung an DSA-FACE ze validéieren. An serum, war de Niveau vun LCA-verbindlech Kär fucose Reschter ënneschten an gastric Kriibs wéi dat am gastric oppent a gesond Kontrollen (Dorënner 3A). Total Kär fucose Iwwerfloss och zu gastric erhéijen gin ënneschten se sech am Verglach zu deem zu vläit bascht Stoffer (Dorënner 3B). Fir festzestellen, ob de Verfall vun insgesamt Kär fucosylation an Otemschwieregkeeten gastric entholl ass wichteg fir den Aménagement vun der glycosylation biosynthesis Passerelle, war grouss RT-Hinnen alleguer benotzt d'Heefegkeet vun mammalian Fut8 an PIB-TR zu gastric erhéijen an bascht Stoffer ze analyséieren. D'Resultater bekannt datt keen groussen Ënnerscheed vun Fut8 an PIB-TR mRNA Ausdrock sech tëscht erhéijen an bascht Stoffer (Dorënner 3C an 3D) observéiert. Der relativer Heefegkeet vun Fut8 FAQ war mat westlecher blot illustréiert (raw Daten war zu kengem S1 gewisen). D'Fut8 zu bascht Stoffer war méi héich wéi déi vun entholl Stoffer (P &Si besteet; 0,05) (Well 3). Immunohistochemistry verroden, datt de Fut8 war staark positiv um luminal Grenzen vun Net-entholl gastric Zellen ausgedréckt (Dorënner 4B), awer schwaach et positiv zu entholl Zellen ausgedréckt (Dorënner 4A). Den Ausdrock vun LCA-verbindlech Kär-fucosylated glycoproteins war héich an Net-entholl gastric Zellen wéi dat zu entholl Zellen (Dorënner 4C, 4D). Also gouf den Niveau vun insgesamt Kär fucosylation identifizéiert rofgaang ass an zwee Sera an Stoffer aus gastric Kriibs. VerfÜgung

Effekt vun Fut8 an PIB-TR op Prolifératioun a Migratioun zu Mënsch gastric Kriibs Zell Linnen VerfÜgung

D' Mënsch gastric Kriibs Zell Linnen, BGC-823 an SGC-7901 waren eng kënschtlech Etude benotzt. Zanter BGC-823 ënneschten Niveau ausgedréckt vum PIB-TR iwwerdeems SGC-7901 ënneschten Niveau vun Fut8 an eisem pilot Fuerschung ausgedréckt, war pEGFP-N1-PIB-TR an BGC-823 transfected fir overexpressing PIB-TR an pEGFP-N1- Fut8 war fir overexpressing Fut8 an SGC-7901 transfected. erfollegräich erreecht goufen Recombinant Ausstralung vun reporter Gentherapie GFP Ausdrock (Dorënner S2) gewisen. Fir d'méiglech Abannung vun PIB-TR an Fut8 zu entholl Prolifératioun a Migratioun, BGC-823 an SGC-7901 Zellen ënnersicht goufen no transfection benotzt CCK-8 propagéieren an enger Wanderung assay verkënnegt bzw.. D'Resultater weisen, datt upregulation vum PIB-TR BGC-823 Prolifératioun bei 2 Deeg no transfection (Dorënner 5A an 5B) op 2-5 Deeg an der transfection an upregulation vun Fut8 ofgeholl SGC-7901 Prolifératioun ofgeholl. Dës Resultater uginn, datt héich Ausdrock vun PIB-TR an Fut8 kéint d'Prolifératioun vu mënschlechen gastric Kriibs Zellen oofgesinn. Meter verkënnegt assay bewisen, dass PIB-TR an Fut8 hu kee groussen Afloss op Migratioun zu BGC-823 an SGC-7901 um 48 h der Behandlung (Dorënner 5C an 5D). VerfÜgung

Diskussioun VerfÜgung

Glycosylation ass eent vun den heefegen Ännerunge Post-respektiv zu ronn 70% vun alle bekannte Proteinen wossten. Hire Restaurant zu glycosylation eng Roll an engem ënnerschiddlechen Formatioun vun der biologescher Phänomener wéi entholl Zell Metastasen Leeschtung, intracellular Kommunikatioun an inflammation [21] - [23]. Méi a méi Studien weisen, dass d'hire Restaurant vun glycosylation an de Niveau vun glycosyltransferases Aktivitéiten aus der malignant Transformatioun ofgeleet ginn relevant fir Mënscherechter malignancies [24] - [25]. DSA-FACE ass eng einfach an efficace Technologie fir N-glycan Ännerungen am serum Moossen. Mir benotzt virdrun dëser Technik vun der Diagnos vun HCC an CRC ze hëllefen [19] - [20]. An der aktueller Etude, déi mir et charakteristesche N-Hausnummeren profiling Muster an gastric Kriibs ze analyséieren. D'Resultater uginn, datt et vill verschidden N-Glycan profiling Musteren ënnert gastric Kriibs, gastric oppent a gesond Kontrollen waren. Dorënner verschiddene profiling zeréckzeféieren, peak9 an sumfuc sech fonnt an eng entgéintgesate Muster an gastric Kriibs geännert ginn am Verglach zu deene vun Kontrollen. Wéi déi vun virdrun Fuerschung gewisen, peak9 mat der Entwécklung vun Zorten vun malignancies verbonne war, confirméiert mer erëm, datt d'triantennary N-glycan Struktur Iwwerfloss bedeitend an gastric Kriibs fräi an dëser Ännerung mat CEA gin soll opgedeckt gouf, deen allgemeng e Meeschter ass benotzt CRC Bewaacher geflitzt an ass eng absolut heterogen glycoprotein datt 60% rechnen, [26] enthält. An eenzelne N-glycan Struktur Iwwerfloss Analyse, observéiert mir dass sumfuc bedeitend an gastric Kriibs rofgaang ass am Verglach mat Kontrollen. Fir weider dat fannen validéieren, standing mir lectin blot an zwee Sera an Stoffer. Andeem Dir HCC serum als eng positiv Kontroll, observéiert mir ofgeholl fucosylation vun N-glycans op Ganzen Proteinen am Sera aus gastric Kriibs. Eng ähnlech Trend war an gastric entholl Stoffer verroden. Dës Conclusiounen sinn konsequent mat eis virdrun Reportage op CRC [20]. Allerdéngs sinn d'Resultater Géigendeel zu virdrun Reportage op Cancers mat anere Otemschwieregkeeten Originen. D'Erhéijunge fucosylated oligosaccharides ënner agebousst Konditiounen gewiescht vun aneren an eise Grupp [19] gemellt. D'fucosylated AFP (AFP-L3) gouf als HCC Bewaacher geflitzt an Medeziner Praxis [25] benotzt. D'contradictories vun der Kär-fucosylation Niveauen wossten zu verschiddene Cancers kéint duerch verschidde Stoffer huet zu deene verschiddene Rollen wéinst ginn, e.g. Liewer de groussen Uergel responsabel fir glycoproteins niewt immunoglobulin-produzéiert B-lymphocytes produzéiert [27] -. [28] VerfÜgung

Fucosylation ass vun fucosyltransferases catalyzed, guanosine 5'-diphosphate (PIB) -fucose syntheteschen Enzymen, an PIB-fucose Fernsehn (s). PIB-fucose ass eng gemeinsam Donateur Realitéiten fir all fucosyltransferases. No PIB-fucose huet am Zytosol Wierderbuch gouf, ass et zu der Golgi Staatsapparat duerch PIB-TR transportéiert wéi enger Realitéiten fir fucosyltransferases ze déngen [17], [29]. Dofir, ass PIB-TR e Schlëssel Faktor fir de PIB-fucose Wierderbuch Passerelle. Fut8 ass déi eenzeg fucosyltransferase am Kär-fucosylation Équipe [29]. Mir fonnt ofgeholl Fut8 FAQ Ausdrock vun entholl Otemschwieregkeeten, déi eis Conclusiounen zu Sera ënnerstëtzt. Allerdéngs war Fut8 mRNA Ausdrock kee groussen Ënnerscheed zu gastric erhéijen an bascht Stoffer. Glycosylation ass héich Onmass vun Ännerungen an d'Ëmwelt vun enger Zell. Epigenetic Modifikatioune vum Daniel Nepgen stably iwwerdroen ginn ze Duechter Zellen ouni d'Noutwendegkeete fir genetesch Haaptrei hire Restaurant. [30] ze klären, ob d'Verréngerung Kär fucosylation spillt eng wichteg Roll an carcinogenesis vun gastric Kriibs, louchen mer der Etude vun gastric Zell Linnen kënschtlech. Mir hu fonnt, dass de weider-reegelen PIB-TR an Fut8 Ausdrock vun mënschlecher gastric Kriibs Zellen ze niddreg Prolifératioun Féierung konnt. Mä mir dunn keng Auswierkung vun Kär-fucosylation op Zell Migratioun ze fannen. Dës Resultater hëllefen d'Potential Mechanismus ze erklären firwat Kär-fucosylation ofgeholl wossten zu gastric Kriibs an dësem Ugrëff-reegelen Kär-fucosylation soll mat e puer malignant biologescher Behuele vun gastric Kriibs Zellen. VerfÜgung

An de leschte Joeren, et sinn e puer Conclusiounen demaskéierte datt d'hire Restaurant vun glycosylation wichteg Roll an Werdegang vun Krankheeten niewt Liewer Kriibs an autoimmune Krankheeten Leeschtung. Déi bedeitendst hire Restaurant am glycosylation vun secreted glycoproteins dorënner eng Reduktioun am Kär fucosylation, fräi muerden a fräi sialylation, an Modifikatioune epigenetic Maschinnen hunn e staarken Effekt op d'glycan Strukture vun Zellen während spillt Kriibs Werdegang entsteet [30]. Den Niveau vum Kär-fucosylated biantennary glycans an α-2,3-Hausnummeren sialic Saieren waren an Aarbecht Kriibs vill fräi. [31] Et gouf eng Hausse vun 40% am Kär fucosylation zu der Haaptrei sialylated biantennary glycans am pancreatic Kriibs serum, déi schonns vun engem Ziel vun entholl-verbonne glycoforms [32]. VerfÜgung

Viru Kuerzem, d'Funktioun vun Kär-fucosylation wier sech gemellt mat der Funktioun vun EGFR [33] verbonne ginn. D'Modalitéite vun EGF fir seng receptor verlaangt Kär fucosylation vun N-glycans vun EGFR.

• PLOS Genetik: Germline kennen MAP3K6 Sidd mat FAMILIAL Gastric Cancer Associéierten
• PLOS NËMMEN: Discovery vun entholl lues fir Gastric Cancer vun Proteomics