Background VerfÜgung
Achlorhydria vun e.g. ëmmer atrophic gastritis erlaabt fir bakteriell overgrowth, déi chronesch inflammation a Schued un der mucosal Zellen vun Krankheet Persounen dreiwend gastric malignancies a Kriibs induces. Enterococcus faecalis VerfÜgung ( E. Faecalis VerfÜgung) kann achlohydric Mamm colonize a mir wollten dofir de Impakt vun E studéieren. faecalis VerfÜgung Harnweeër op demagogesch Äntwert, reaktiv Sauerstoff Aarten (Ros) Opstellung, Kënschtlech sin, an Kënschtlech genetesch Stabilitéit an gastric mucosal Zellen. VerfÜgung Method VerfÜgung d'Ännerunge vun Bakterien entschlof Fir separat aus déi vun der demagogesch Zellen mer etabléiert eng kënschtlech E. faecalis VerfÜgung Wonn Modell System d'gastric carcinoma Zell Linn MKN74 benotzt. Total Ros an superoxide war vun fluorescence microscopy gemooss. Bewosst Sauerstoff Konsum war Net-invasively charakteriséiert XF24 microplate baséiert respirometry benotzt. Gene Ausdrock war vun microarray iwwerpréift, an Äntwert Weeër sech duerch Gene Set Analys (GSA) identifizéiert. Ausgewielt Gentherapie gët sech déi grouss real-Zäit polymerase Kette Reaktioun (qRT-Hinnen alleguer) ubelaangt. Kënschtlech kennen sech duerch sequencing alles. VerfÜgung Resultater VerfÜgung Wonn vun MKN74 Zellen mat E. faecalis VerfÜgung entschlof intracellular Ros Produktioun duerch eng Passerelle onofhängeg vun oxidative phosphorylation (oxphos). Ausserdeem, E. faecalis VerfÜgung Wonn Kënschtlech DNA Onstabilitéit entschlof. No Wonn, coding Genen fir demagogesch Äntwert Proteinen sech transcriptionally up-reegelen iwwerdeems DNA Schued gefléckt a Zell Zyklus Kontroll Genen huet verwandelt-reegelen. Zell Wuesstem Emstänn erof wann mat onerwaarden E infizéiert. faecalis VerfÜgung an enger Portioun ofhängeg Manéier ze E ënnerhal. faecalis VerfÜgung lysate. VerfÜgung Konklusiounen VerfÜgung Wonn vun E. faecalis VerfÜgung entschlof en oxphos-onofhängeg intracellular Ros Äntwert an beschiedegt der Kënschtlech Nepgen zu gastric Zell Kultur. Endlech d'Bakterien esou wéi leider DNA Schued Äntwert an Zell Zyklus Kontroll Gentherapie Ausdrock. VerfÜgung ët profiling VerfÜgung Singular Express Bäitrëtt Zuel E-MEXP-3496 eng NF-κB demagogesch Äntwert entschlof. Fro: Strickertsson rennes, Desler C, Martin-Bertelsen T, Machado AMD, Wadstrøm T, Winther O, et al. (2013) Enterococcus faecalis VerfÜgung Wonn Erlaabt Inflammation, Intracellular Oxphos-Onofhängeg Ros Production, an DNA DKierperschaftssteier zu Mënscherechter Gastric Cancer BTS. PLoS NËMMEN 8 (4): e63147. Doi: 10.1371 /journal.pone.0063147 VerfÜgung Redakter: Shree Ram Singh, National Cancer Institut, Vereenegt Staate vun Amerika VerfÜgung Arnaque: 28. August 2012; Akzeptéiert: April 2, 2013; Publizéiert: April 30, 2013 VerfÜgung Copyright: © 2013 Strickertsson et al. Dëst ass eng oppen-Zougang Artikel ënnert de Bedingunge vun der Lizenz BY Creative Commons verdeelt, déi bereet benotzen Genehmegungen, Distributioun, an Reproduktioun vun all mëttelgrouss, gëtt d'Original Auteur an d'Quell Kaiser sinn VerfÜgung Funding:. AMDM ass vun enger Gemeinschaft vu Portugal Wëssenschaft, Technologie Foundation ënnerstëtzt. LFH ass vum däneschen MRC ënnerstëtzt. JABS ass vum däneschen Cancer Society, a Universitéit vu Kopenhagen SUND ënnerstëtzt. TMB an mee ech awer sinn duerch Subventiounen aus der Novo Nordisk Foundation an der Bioinformatik Centre ënnerstëtzt. CD an LJR sinn duerch NORDEA-fonden ënnerstëtzt. D'funders hu keng Roll am Etude Design, Daten Kollektioun an Analyse, Décisioun, oder Virbereedung vun der mëttelalterlech Handschrëft ze publizéieren VerfÜgung Wettsträit Interessen:.. D'Auteuren hunn deklaréiert, datt keng Competitioun Interessen existéieren VerfÜgung Gastric Kriibs ass ënnert de zéng heefegen Cancers, a mat engem globale Chiffer Doud Quote vun 700,000, ass et déi zweet Équipe gemeinsam Ursaach vun veruerteelt Kriibs Zesummenhang [1]. D'intestinal Typ gastric Kriibs entwéckelt duerch eng Serie vun agebousst Evenementer mat chronescher inflammation ugefaange, atrophic gastritis, intestinal metaplasia, an endlech Kriibs [2]. VerfÜgung Kliniken inflammation a Kriibs huet an e puer Studien vun Patienten verbonne ginn a vun genetesch modifizéiert Mais, an ass gegleeft weltwäit am pathogenesis vun iwwer 25% vun all Kriibs Fäll Équipe ze ginn [2] - [4]. Charakteristike vun Kriibs-Zesummenhang inflammation och d'Presenz vun chemokines an cytokines zu entholl Stoffer, déi potentiell mussen entholl-Zell Prolifératioun an Iwwerliewe vun malignant Zellen [5], [6] ze stimuléieren. Chronescher inflammation favoriséiert och eng overproduction vun DNA Lupp reaktiv Sauerstoff Aarten (Ros), deenen hir Produktioun kann zu oxidative phosphorylation samt ginn (oxphos) Reaktioune vun der Mitochondrie (oxphos-ofhängeg) oder ausserhalb der Mitochondrie stäerkste Toast vun nicotinamid adenine dinucleotide phosphate produzéiert ( NADPH) oxidases (oxphos-onofhängeg) (fir review gesinn [7] - [9]). Chronescher Produktioun vun Ros Ursaach DNA Schued, der Heefung vun Projet'en wouduerch déi am Tour aktivéieren kann oncogenes an /oder entholl suppressor Genen inactivate domat de Risiko vun Kriibs Entwécklung waarden [3]. VerfÜgung De stäerkste gemeinsam Risk Faktor fir Entwécklungslänner gastric Kriibs ass chronescher bakteriell Wonn vun de Mo mat Helicobacter pylori VerfÜgung ( H. pylori VerfÜgung) [10]. Chronescher Krankheet vun de Mo. vun H. pylori VerfÜgung der gastric pH Gläichgewiicht Afloss an kann achlorhydria oder hyperchlorhydria Ursaach [11]. Obwuel dës Bakterie wéi enger Klass een carcinogen kleng ass, ass et net ëmmer mat engem fräi Risiko vun gastric Kriibs Entwécklung assoziéiert. Zum Beispill, H. pylori VerfÜgung Krankheet Patienten mat ausléisen ulcers an héijen Niveau vun gastric Seier vun Entwécklungslänner gastric Kriibs am Verglach zu deene vun der Allgemengheet Populatioun eng reduzéiert Risiko hunn [11] - [13]. Am Géigesaz, Patienten mat atrophic gastritis a reduzéiert gastric Seier secretion eng grouss Gefor vun den Entwécklungslänner gastric Kriibs [11], [13], [14]. D'fräi Kriibs Risiko vun achlorhydric Persounen konnten wéinst bakteriell overgrowth vun anere Bakterien am gastric lumen ginn [15]. An souwuel achlorhydric Mënsch an Déier Modeller bakteriell overgrowth Ursaach chronescher gastritis déi an intestinal metaplasia entwéckelt an endlech gastric Kriibs [16] - [18]. Ënnert der am Mo vun achlorhydric Mais fonnt Bakterien sech Enterococci VerfÜgung Aarten, déi Gramm-positiv COCCI gebass gi fir am Ëmfeld iwerliewen mat engem PH, wéi héich den 4.5 [19], [20]. Enterococcus faecalis VerfÜgung ( E. Faecalis VerfÜgung) ass e Member vun der mënschlecher commensal microbiota an ee vun de stäerkste gemeinsam Bakterien am gastrointestinal TRACT [19]. An trotz deem, E. faecalis VerfÜgung kann als e Mënsch pathogen Akt [21], an huet an bedeitend méi Zuelen am Elysée kriibserreegend lesions a mënschlechen Colon Cancers [22], [23] fonnt ginn. Am Bezug op dëser E. faecalis VerfÜgung ass kapabel produzéiert N-nitrosamines a genetesch Onstabilitéit an colonic epithelial Zellen duerch oxidative Schued vun der DNA [24] vun Pinguin, [25]. VerfÜgung Gastritis ass mat einfach vun immun Zellen am Zesummenhang Otemschwieregkeeten, déi et schwéier ze dissect der Aktioun vun der immun Zellen aus, datt vun der Doropshin mucosal Zellen zu VIVO VerfÜgung mécht. Mir ginn also eng kënschtlech VerfÜgung Otemschwieregkeeten Kultur Modell dass eis ënnersicht entfale wéi isoléiert mucosal Zellen ze Bakterien an der molekulare Mechanismen déi intestinal Bakterien wéi E z'äntwerten. faecalis VerfÜgung Schued zu gastric epithelial Zellen induce. Benotzt dëse Modell iwwerpréift mer den Impakt vun E. faecalis VerfÜgung Wonn vun gastric adenocarcinoma Zell Kulturen op Ros Produktioun, bewosst sin, Wuesstem, DNA Schued /flécken an demagogesch Äntwerte. VerfÜgung Zell Kultur, E. faecalis VerfÜgung, an VerfÜgung Wuesstem Konditioune Mënscherechter MKN74 gastric adenocarcinoma Zell Kulturen aus der japanescher Collection vun Research Bioresources Zell Bank (JCRB # JCRB0255) waren an RPMI 1640 mëttelfristeg (Invitrogen, Karlsbad CA) haten, ergänzt mat 10% an et Bovine serum (FBS) (Invitrogen), 100 μg /ml streptomycin, an 100 U /ml penicillin (Invitrogen) bei 37 ° C, a 5% CO 2 humidified Atmosphär. Aids sech mat E gesuergt. faecalis VerfÜgung Deformatioun (ATCC 29212). Bakterien sech an 5% Blutt Agar Placke bei 37 ° C ugebaut. Optesch Dicht (sel) vun am RPMI 1640 mëttelfristeg ugebaut Bakterien war um 550 nm op engem UV-1601 spectrophotometer (Shimadzu, Kyoto, Japan) (Dorënner S1) gemooss. E. faecalis VerfÜgung lysate war vun KHTML /thawing der bakteriell Ophiewe dräimol bereet, iwwerdeems d'Ophiewe tëscht all Cycle sonicating. VerfÜgung Wonn vun Gastric BTS fir RNS an DNA Isolatioun VerfÜgung Fir 24 h Aids , 80% a Spuenien wär MKN74 Zellen sech mat PBS gewäsch an am Antibiotike gratis mëttelfristeg incubated. Kolonie vun E Iwwernuechtung-ugebaut. faecalis VerfÜgung sech bei enger Zuel vun Wonn (MOI) vun 50 Bakterien pro Zell un der MKN74 Zell Kultur notéiert. 5 Dag Aids sech duerch bestéet 65% a Spuenien wär MKN74 Zellen mat E duerchgefouert. faecalis VerfÜgung op engem MOI vun 10 oder mat engem lysate FAQ Konzentratioun vun 40 μg /μl. All 24 h, goufen Zellen mat PBS a frësch mëttelfristeg gewäsch a Bakterien oder lysate bäigebaut. Kontroll Zellen waren ähnlech an d'Feele vu Bakterien oder bakteriell lysate Filteren. An kënschtlech VerfÜgung Studie mat enger gastric Kriibs Zell Linn standing d'Lupp Effet vun E zu Test. faecalis VerfÜgung op gastric adenocarcinoma Zellen. Dës Zellen ofwäichen normal gastric epithelial Zellen vun e puer chromosomal geometrescher Figur Droen, mä bidden de Virdeel vun engem reproducible Modell System ginn, dass an villen Hisiichten gefaart d'Evenementer am Mo. geschitt. Am Krankheet Zellen ze uninfected Zellen gëtt eng zouverlässeg Bild vum Schued an hire Restaurant op der Gentherapie Ausdrock vun der Wonn ëmmer. VerfÜgung RNS an DNA Isolatioun VerfÜgung No Wonn, RNS an DNA sech Quecksëlwer vun Schan Trizol Reagent (Invitrogen) zu all Kultur flask. RNS war isoléiert no der fabrizéiert Protokoll. Den DNA-haltege Tëscherapport Phase war vun Schan 100% Ethanol Preisen. Echantillon waren um 4 ° C centrifuged, 3500 g fir 6 min. D'phenol-Ethanol supernatant gouf geläscht an déi reschtlech DNA Extraktioun war mat engem NucleoSpin Otemschwieregkeeten Kit (Macherey-Nagel, DUREN, Däitschland) gemaach. RNS an DNA Konzentratioune sech op enger NanoDrop ND-1000 Spectrophotometer gemooss. RNS Integritéit Zuelen sech op enger 2100 Bioanalyzer (Agilent Technologies, Santa Clara, California) gemooss no de Protokoll fabrizéiert. VerfÜgung Kilometréierung vun Ros an Superoxide VerfÜgung Zwee Deeg virun Wonn 8 × 10 Lokalisatioun vun E. während Wonn faecalis 8 × 10 XF24 Microplate baséiert respirometry VerfÜgung Respirometry vun MKN74 Zellen war eng XF24 Extracellular jo Organer (Seahorse Bioscience standing benotzt, North Billerica, MA ). Halschent vun der plated MKN74 Zellen sech mat E infizéiert. faecalis VerfÜgung op engem MOI vun 50 fir 4, 8 oder 24 Stonnen, déi aner Hallschent huet uninfected lénks. No incubation, sech Bakterien mat 4% Penicillin /streptomycin (5 U /ml) an 4% cefotaxim (100 μg /ml) (ACS Dobfar Generics S.A., Lëtzebuerg, Belsch) geläscht. Zellen sech zu enger CO 2 gratis incubator bei 37 ° C fir 1 Stonn incubated zu Temperatur an pH equilibration erlaben. D'microplate mat Zellen war dunn erausgestallt an der XF24 an de Sauerstoff Konsum Taux vun all gutt war iwwer eng Period vun 100 Minutten gemooss. D'Drogen oligomycin (0,5 μM), FCCP (0.3 μM) an antimycin A (2.0 μM) waren déi Virwërf un all gutt dobäi. Méi Detailer ginn an Fichier S1 sinn. VerfÜgung Kënschtlech DNA Onstabilitéit VerfÜgung D'Heefegkeet vun Projet'en an der D-Glück Regioun vun Kënschtlech DNA, waren déi vun Hinnen alleguer amplification benotzt primers C6-CA5 (Table S1 sech ). Implikatioune Fragmenter waren an der pCR2.1 Vecteure (Invitrogen) gekloonten an Text aus 328 Kolonien huet de VectorD-Glück Implikatioune primers (Table S1). Implikatioune Fragmenter waren sidd an Nepgen d'Abi Prism BigDye Terminator Cycle Sequencing Kit mat an eng Abi Prism 3730 DNA Sequencer (Perkin-Elmer, Waltham, Massachusetts). Ze bestëmmen kennen, huet de Message als ufroën géint d'Cambridge Referenzmaterial Haaptrei aus MitoMap kritt benotzt (http://www.mitomap.org. Rampen Febof 9. 2012). VerfÜgung Microarray an GSA VerfÜgung RNS mat engem RNS Integritéit Zuel vun 8 oder uewen aus dräi Kontroll an dräi Wonn Echantillon (mat onerwaarden e. faecalis VerfÜgung oder mat e. faecalis VerfÜgung lysate 40 μg /μl) fir 24 Stonne a 5 Dag Experiment um Kopenhagen University Hospital zu der RH Microarray Center ofginn. RNS war Kick an Fortgeschratten den 3 'IVT Express Kit benotzt (Affymetrix, Santa Clara, CA, USA) no fabrizéiert Uweisungen. 250 NG total RNS war den Input benotzt. D'Bezeechnung Echantillon waren hybridized Genom U133 plus 2 flamenden Ofgrond (Affymetrix) zu GeneChip. D'flamenden Ofgrond sech mat phycoerytrin conjugated streptavidin mat engem Affymetrix Fluidics Station® 450, gewäsch a Kierchefënster an der flamenden Ofgrond sech zu engem Affymetrix GeneArray® 2500 Scanner gescannt ze unisse Biller generéieren, wéi am Affymetrix GeneChip® Protokoll beschriwwen. 24 Matière Zell Intensitéit Dateien (CEL-Fichieren) waren an der GeneChip® Command Console® Software (AGCC) (Affymetrix) entsteet. D'Matière CEL-Fichier'en sech um ArrayExpress mat Bäitrëtt Zuel E-MEXP-3496 publik gemaach. Preprocessing vun microarrays fir d'Gene Formatioun Analyse (GSA) mat R /Bioconductor gemaach gouf [26], [27]. Background Upassung, quantile normalization an final summarization Formatioun Ausdrock intensities bis ewell war vun der GCRMA sind standing [28] fir all experimentell Conditioun, getrennt (Datei S2). VerfÜgung Chemeschen Réckproduktioun Transkriptiouns Hinnen alleguer VerfÜgung cDNA Hëllef SuperScript III éischt-Strand Synthes SuperMix fir qPCR (Invitrogen) war Wierderbuch. Gene Ausdrock war vun qRT-Hinnen alleguer analyséiert benotzt SYBR GreenER q-Hinnen alleguer SuperMix fir Abi PRISM (Invitrogen). Primers sech mat der Primer-Blast Software aus NCBI [29] entworf. D'Reaktioune waren op en Abi PRISM 7900HT liichtkraaftarm Detektioun System (SDS) aus Obwuel Biosystems lafen. Donnéeën war normalized zu GAPDH mRNA Ausdrock. VerfÜgung Wuesstem assay VerfÜgung 8.000 Zellen bei 37 ° C a 5% CO zu all gutt vu sechs 24-och Telleren an incubated verdeelt waren 2 fir zwee Deeg virun ze behandelen. Zellen sech am quadruplicates behandelt wéi follegt; 4 Wells vun uninfected Kontroll Zellen, 4 Wells mat 400 μg /μl E behandelt. faecalis VerfÜgung lysate, 4 Wells mat 40μg behandelt /μl lysate, 4 mat 4 μg /μl lysate a 4 Wells behandelt mat onerwaarden E behandelt Wells. faecalis VerfÜgung op engem MOI vum 10. One Plack vun Zellen war all Dag fixated. Zéien war vun wäschen mat PBS gemaach an fixating mat 1 ml 10% formalin fir 10 min. Fixated Zellen sech mat 1 ml vun 0,1% glaskloer mauve (Fläch-Aldrich, St. Louis am Missouri) geschriwwen, an Placke waren fir 30 min Hënt. Zellen sech gewäsch, gedréchent, an glaskloer mauve war mat 500 μl 10% acetic Seier ofgebaut. Absorbance war um 620 nm op engem PowerWave XS (BioTek Instrumenter, Winooski, Vermont) gemooss. VerfÜgung statistique Analys VerfÜgung Single Klassifikatioun Analyse vun Varianz (ANOVA) benotzt gouf Differenzen am Bäschten Otmungsproblemer Muecht ze testen , ATP Ëmsaz a oxphos-onofhängeg Sauerstoff Konsum. ANOVA war och während verschidden Traitementer mat E zu Test Differenzen zu Zell Wuesstem benotzt. faecalis VerfÜgung. Wann der ANOVA uginn Differenze ënnert der Behandlung, war Tukeys éierlech bedeitendst Method benotzt fir Ënnerscheeder tëscht Sauerstoff Konsum Tariffer oder Zuel vun Zellen ze testen. mtDNA stattfannen Ofstänn sech duerch Chi-Feld a Fisher ass genau Test évaluéieren. Ros Resultater als mengen Wäerter vu mindestens zwanzeg onofhängeg Miessunge ausgedréckt huet an analyséiert vum unpaired zwee-tailed t VerfÜgung Azeton. qRT-Hinnen alleguer Resultater als mengen Wäerter vun op d'mannst dräi onofhängeg Experimenter zu dräi technesch gefaart gemooss ausgedréckt huet, an analyséieren unpaired zwee-tailed t VerfÜgung Azeton. D'Ënnerscheeder tëschent Donnéeën baut sech um p Wäerter ≤0.05 bedeitendst considéréiert. Feeler Baren = ± Sem wann et net anescht uginn. VerfÜgung Umeldung vun reegelen Édouard war vun engem GSA Method gemaach, italieneschen [30], verstäerkte sinn Informatiounen Aféierungs--Repressioun ze exploitéieren (fir extensiv Detailer an Berechnungen Fichier S2 gesinn). Weeër sech duerch Lëschte vun Genen (Gene ausgedréckt) erofgeluede representéiert aus der cuisine Ënnerschrëfte Datebank (MSigDB) 3.0 [31]. C2 Kollektioun vun curated Gene ausgedréckt (kanonesche Weeër an der Gentherapie Ausdrock Ënnerschreften vun genetesch a chemesch Wierkung) benotzt Gentherapie Symboler Identifikatiounen. Gene Formatioun p-Wäerter sech fir Multiple Testen korrigéiert déi falsch Entdeckung Taux estimating a Bedeitung Niveau war bei 1% gesat. VerfÜgung E. intracellular Ros an superoxide Produktioun VerfÜgung Anerer faecalis VerfÜgung Wonn induce a mir hu virdrun gewisen, datt d'achlorhydric gastrin KO Maus mat bakteriell overgrowth haten enterococci VerfÜgung dat normalerweis net Deel vun der gastric Flora sinn [ ,,,0],20]. Obwuel Enterococci VerfÜgung allgemeng geduecht ginn vun niddereg pathogenicity gin, nohalteg overgrowth zu achlorhydric Mais mat enger demagogesch Äntwert verbonne ass a schlussendlech dës Mais entwéckelen gastric Kriibs [20], [32]. der agebousst Prozess bannent de gastric Zellen ze Markenzeeche mir iwwerpréift wéi d'Bakterien d'gastric epithelial Zelle betraff. Benotzt Ämter iwwerwaacht intracellular Ros Produktioun, hunn mir déi 30 Minutte vun Wonn engem groussen Zouhuele intracellular Ros Opstellung (Dorënner 1A) stimuléiert. Mat Ämter spezifesch fir superoxide Produktioun zougedréckt mir dass d'Ros haaptsächlech vun superoxide bestoung zu MKN74 Zellen (Dorënner 1A). Fluorescence Intensitéit war mat der LSM 510 Software an eng statistesch relevant Erhéijung vun intracellular Ros an superoxide vun der Krankheet Zellen am Verglach zu uninfected Kontroll Zellen laachen war observéiert (Dorënner 1B). Mir hunn keng Beweiser, datt déi Bakterien Invasioun vun den Zellen ugeholl sou schléissen mer datt der intracellular Ros vun der Krankheet Zellen produzéiert gouf an net vum Message E. faecalis VerfÜgung (Dorënner 1 C-D). VerfÜgung Wonn Kënschtlech Aktivitéit erof an oxphos-onofhängeg Sauerstoff Konsum VerfÜgung Erhéijunge D'Quell vun Ros fonnt hätt bakteriell Wonn folgenden Equipementer vun extracellular Bakterien generéiert ginn [33] an /oder aus bannent de Zellen produzéiert [34], [35]. Intracellular Ros kann entweder an engem oxphos-ofhängeg oder onofhängeg Manéier generéiert ginn. Ze iwwerpréifen an dono de méiglech intracellular Ros Produktioun mat E verbonne Markenzeeche. faecalis VerfÜgung Wonn; mir gemooss, wéi d'bakteriell Wonn Kënschtlech sin betraff vum ATP Ëmsaz, Otmungsproblemer Muecht an oxphos-onofhängeg Sauerstoff Konsum (Dorënner 2) Moossen. Fir sécherzestellen, datt d'Resultater spigelt sin vun der MKN74 Zellen nëmmen, waren all Bakterien virun de Miessunge geläscht. Et war kee groussen Ënnerscheed zu ATP Ëmsaz vun Kontroll Zellen fir 4-24 Stonnen ugebaut hierkommen e wesentleche 2- a 4 fantastesch erofgoen (p &Si besteet; 0.001) vum ATP Affaire fir 8 an 24 Stonnen incubated tëscht Kontroll Zellen a Personal Zellen präsent waren bzw. (Well 2A). Verglach zu Kontroll Zellen no 8 an 24 Stonnen vun Wonn (Dorënner 2B); A entspriechend Korrelatioun war an der Otmungsproblemer Muecht, wou de Pouvoir vun infizéiert Zelle waren och vill 2- a 4 fantastesch ofgeholl (0.01 p &Si besteet) fonnt. D'oxphos-onofhängeg Sauerstoff Konsum vu Kontroll Zellen war onverännert fir fir 4-24 Stonnen ugebaut Zellen. Am Géigesaz infizéiert der oxphos-onofhängeg Sauerstoff Konsum vun Zellen mat vun ~50% vum ganzen Sauerstoff Notzong no 4 Stonnen vun Wonn fräi Bakterien ze ginn der Primärschoul Sauerstoff utilizer (p &Si besteet; 0.001) (Dorënner 2C). Dëst deit drophin, datt E. faecalis VerfÜgung so mat der epithelial Zellen Pinguin Ros Équipe a Sauerstoff Konsum vun anere intracellular Aktivitéit Systemer wéi oxidative phosphorylation. Ausdrock vun NOX1-5 an Duox1-2 war an der gastric Zell Linn iwwerpréift; Ee, Ausdrock war net vun der Krankheet (Table S2) betraff. VerfÜgung E. faecalis VerfÜgung Wonn ëmmer Kënschtlech DNA Onstabilitéit VerfÜgung Mir hu virdrun déi Krankheet mat pathogenic H gewisen. pylori VerfÜgung analyséieren Projet'en am Kënschtlech Nepgen a mënschlech Zell Kultur [36] entschlof. Well déi Krankheet mat E. faecalis VerfÜgung intracellular Ros Erhéijung mir iwwerpréift wann et och Frankräich mtDNA Onstabilitéit ëmmer. Déi gesamt Frequenz vun Kënschtlech D-Glück Regioun mutational Evenementer war wiesentlech méi héich an MKN74 Zell Kulturen Krankheet mat E. faecalis VerfÜgung (45.5%) wéi an Net-Krankheet Kontroll Zell Kulturen (23.0%; p &Si besteet; 0.01) (Well 3). Doriwwer eraus, awer infizéiert Zelle enger héijer Zuel vu ëmgebaut (36.4%) wéi Kontroll Zellen (21.8%; p &Si besteet; 0,05). Geläscht (0% Kontroll /3,9% Krankheet), insertions (1,1% Kontroll /2,6% Krankheet), an transversions (0% Kontroll /2,6% Krankheet), dee generell als eng Konsequenz vun Ros gesinn, sech méi dacks zu Krankheet erwëscht Zellen. Sou Wonn mat E. faecalis VerfÜgung induces Projet'en am gastric Zellen (Dorënner 3). VerfÜgung Wonn eng NFκB ëmmer demagogesch Äntwert an enger Ros Äntwert VerfÜgung dominéiert an der bewosst Äntwerte vun gastric Zellen weider biologescher Asiicht ze gewannen zu E. faecalis VerfÜgung Wonn mir standing déi global Ännerungen am Gentherapie Ausdrock vun Zellen Krankheet mat onerwaarden E engem microarray Analyse waat. faecalis VerfÜgung oder behandelt mat E. faecalis VerfÜgung lysate. Anstatt op der Ausdrock vun eenheetlechen Genen Fredi mir GSA benotzt [30] zu Weeër a Prozesser vun der Wonn ageschalt oder inhibited z'identifizéieren. Schwéierpunkt op besot vun Genen amplaz vun eenzelne Genen Erhéijunge Segele, Empfindlechkeet a biologescher Relevanz och fir mëttelméisseg gereegelt Liewe vun Genen. Dëst ass duerch Cylisten d'Signal-ze-Kaméidi Verhältnis erreecht, zécken méiglech modest Ännerungen an eenzelne Genen [37] zu virzegoen. De GSA getest 2403 Gene ausgedréckt an schéinen 484 gereegelt Weeër fir entweder liewen Aids statistesch relevant ass an /oder lysate stimuli (Dorënner S2). Schwéierpunkt op déi Weeër statistesch relevant fir d'liewen Aids, scho verschidde vun de Gene ausgedréckt ze beschte der aktueller Etude Markenzeeche goufen an dräi Gruppen manuell Eruewerungspolitik (Sauerdall 4, 5 a 6 A). Iweerpréifen inflammation an Ros, E. faecalis VerfÜgung Wonn ëmmer e wichtegen an-Regulatioun vun e puer Weeër an immun Äntwerte Équipe, dorënner Stärekéip vun chemokine kenne an chemokine sécher Genen, Équipe Genen am G-FAQ kräftegen receptor ligand bindend, an NFκB activating Genen (Dorënner 4, ieweschte sechs Gene ausgedréckt). Zousätzlech zwee Gene ausgedréckt spréngt Genen ze pro-demagogesch oxidized phospholipids mat sech staark an-reegelen. Oxidized phospholipids sinn duerch Ros an Funktioun vun enger pro-demagogesch Manéier produzéiert [38], [39] (Dorënner 4, Gentherapie Formatioun siwen an aacht). Ënnerstëtzen d'Präsenz vun Ros, engem Gene Set vun 30 Genen bekannt an Äntwert ze Ros ausgedréckt gin war ageschalt (Dorënner 4, ënnen Gentherapie Set). Et ass bekannt, datt Ros wichteg si fir lipopolysaccharide (LPe) -driven Produktioun vun verschidden pro-demagogesch cytokines [40] Ee, Gramm-positiv Bakterien wéi E. faecalis VerfÜgung do LPe net auszedrécken. Mir iwwerpréift deemno wéi d'Expressioun vun eenzelne Genen coding fir pro-demagogesch cytokines an chemokines an Äntwert zu engem Net-LPe duerchgefouert goufen Wonn während 24 Stonne stimuléiert a 5 Dag Aids (Table 1). Vill Genen vun der NFκB demagogesch Passerelle Équipe sech vill am Laf E up-reegelen. faecalis VerfÜgung Wonn dorënner interleukin-1β (IL-1ß), interleukin-1 receptor-verbonne kinase 2 (IRAK2), VEGF, IL-8, IL-23α, IL-11, an entholl Necrosis Factor-α (TNF- α) meescht vun deenen verierwe kann weider der NF-κB Aktivéierung Äntwert [41] - [44]. Dorënner waren virdrun identifizéiert puer cytokines zu H. pylori VerfÜgung mediated opweisen, wéi IL-8 a wiere endothelial Wuesstem Faktor (VEGF), verbonne souwuel mat angiogenesis a mat Distinction gastric Kriibs, IL-1ß déi e mächtege inhibitor vun Seier secretion ass, an och TNF-α, engem regulator vun Zell Prolifératioun, dat a apoptosis [43] - [45]. Ausserdeem, d'cytokine IL-23α déi entholl Heefegkeet a Wuesstem ënnerstëtzt [46] an ass am H héich produzéiert. pylori VerfÜgung koloniséiert mucosa [47] war bis-reglementéiert mat, IL-11 déi cytokine engem parietal Zell ass dass Bleck gastric Seier secretion, atrophic gastritis an gastric tumorigenesis ënnerstëtzt [48], [49]. Ënnert anere Genen fonnt héich, a wesentleche expressional Niveau während Wonn ze affichéieren sech IL-1α, IL-32, Wuesstem dat Faktor 15 (GDF15) an, chemokine (C-C Motif) ligand 22 (CCL22). Zousätzlech, eng weider-Regulatioun vun superoxide dismutase 2 (SOD2), déi superoxide zu Waasserstoff Hem konvertéiert, huet gesinn. IL-8, Interferon reglementaresche Faktor 1 (IRF-1) an TNFα vun qRT-Hinnen alleguer validéiert goufen (Dorënner 4 B). VerfÜgung Reparatur DNA Schued sinn während E verwandelt reegelen. faecalis VerfÜgung Wonn VerfÜgung D'Passerelle Analyse uginn, datt de Begrëff vun Genen vun DNA Schued gefléckt Équipe war vill verwandelt-reegelen Verglach zu uninfected Zell Kulturen no 24 Stonnen vun Wonn (Dorënner 5A). qRT-Hinnen alleguer confirméiert, datt de Begrëff vun e puer net fonnt Reparatur (MMR) Genen huet verwandelt-reegelen no souwuel 24 h a 5 Deeg vun E. faecalis VerfÜgung Wonn (Dorënner 5, B). An 24 h infizéiert Zelle PMS1 an MSH6 war vill verwandelt-reegelen (4 fantastesch an 1,8 fantastesch bzw.; P &Si besteet; 0.001). Eng bedeitend erof-Regulatioun vun MSH2 (3 fantastesch), MSH3 (1,9 fantastesch), MSH6 (2 fantastesch), an PMS1 (3 fantastesch) (p &Si besteet; 0,05) (Dorënner 5, B) war an Zellen 5 Deeg Post Wonn observéiert. D'expressional fantastesch-Verännerunge vun ausgewielt DNA Schued gefléckt Genen der Wonn sinn an Table S3 gewisen. Dës Resultater hindeit, datt E. faecalis VerfÜgung Wonn verwandelt-reguléieren grouss DNA Reparatur Weeër an Frankräich Onstabilitéit doraus gläicht Aids mat H. pylori VerfÜgung [36], [50], [51]. VerfÜgung Wonn vun E. entschlof vun E faecalis VerfÜgung bremst Kontroll a Wuesstem Zell Zyklus vun MKN74 Zellen VerfÜgung Fir d'Ännerungen am Zell Wuesstem diskutéieren. faecalis VerfÜgung Wonn, ze propagéieren mir den Afloss vun de Bakterien op den Ausdrock vun Zell Zyklus Kontroll Genen an op MKN74 Zell Wuesstem. Gene ausgedréckt mat Zell Zyklus Kontroll an Bomm Genen huet verwandelt-reegelen no 24 Stonnen vun Wonn mat onerwaarden Bakterien suggeréiert eng bedeitend bewegt zu Zell Prolifératioun awer och eng grouss Gefor vun Projet'en an nei Zellen (Dorënner 6 A). Am Géigesaz, goufen dës Weeër an Zellen mat bakteriell lysate suggeréiert Krankheet an-reegelen dass dësen Zellen nach no 24 Stonne waren Partitur (Dorënner 6 A). Mir gemooss nächst Zell Prolifératioun fir 5 Deeg an fonnt dass liewensfäeg Bakterien MKN74 Zell Prolifératioun ëmmer komplett ze aggressiv oder stoppen (Dorënner 6 B). Zell proliferations sech betraff och wann mat bakteriell lysate incubated. No 24 Stonnen, Zellen sech nach behandelt lysate Partitur (wéi och am Dorënner 6A gewisen), a bis Dag 4 do war keen Ënnerscheed tëschent uninfected Zellen a mat lysate Krankheet Zellen. Mä op den Dag 4 do waren vill manner Zellen der incubation mat bakteriell lysate wann Verglach zu uninfected Kontroll Zellen. Op Dag 5 enger Portioun-Äntwert Relatioun tëscht lysate Konzentratioun an Zell Wuesstem war observéiert (Dorënner 6 B), weist datt Aids vun E. faecalis VerfÜgung mat Zell Wuesstem Amëschung. Eng ähnlech Resultat ass vun der Mënschheet lymphocytes an déi dräi Deeg vun incubation mat E observéiert. faecalis VerfÜgung lysate entschlof Zell Zyklus verhaft [52]. Well dës Aarbecht an isoléiert System gemaach huet, konnt den Uschlossgoal Prolifératioun vu Krankheet Zellen vun spréngt immun Zellen zu de Manktem u Wuesstem Faktor Stimulatioun zougeschriwwen ginn. VerfÜgung Microbial pathogens belafe ze féieren ongeféier 1,2 Milliounen Fäll vu Kriibs all Joer [5]. Mënsch Studien an e puer Déier Modeller hunn gewisen, datt achlorhydria fir bakteriell overgrowth vun de Mo. erlaabt, déi chronesch gastric inflammation féieren kann, datt duerch gastric Kriibs entwéckelt [20], [53], [54]. Ënnerstëtzen de etiologic Roll vun anere Bakterien am gastric malignancies, sinn Kampf Studie vun H. pylori VerfÜgung Krankheet déi duerch intestinal Bakterien gastric Kolonisatioun erlaben [55], an enger nächster Entwécklung gastric Kriibs [56]. Dëst deit drophin, datt aner Spiller wéi H. pylori VerfÜgung kann zu inflammation gefuerene gastric malignancies Équipe ginn. D'molekulare Evenementer déi chronesch gastric Wonn mat dës Bakterien Kriibs Zellen Afloss an Ursaach Schued fir dësen Zellen gouf ganz wéineg verstan. VerfÜgung Mir hu fonnt, datt Wonn mat E. faecalis VerfÜgung eng intracellular Produktioun vun Ros entschlof. D'oxidative phosphorylation vun der Mitochondrie war niddereg no Wonn, weist datt Ros Produktioun haaptsächlech zu enger oxphos-onofhängeg Manéier am Krankheet Zellen entsteet war. Intracellular oxphos-onofhängeg Ros kann zu epithelial Zellen vun Net-phagocytic NADPH (NOX) oxidases an Äntwert ze e.g. produzéiert ginn cytokine Stimulatioun [57], a sinn de groussen Net-Kënschtlech Quelle vun Ros [58]. Dës NOX Enzymen Transport Elektronepueren ganze Plasma Schläimhait, generéieren superoxide an aner Ros [59]. Am Mënsch epithelial Zellen zwee NOX homologus (NOX2 an NOX5) fonnt ginn [60]. An eiser Etude goufen dës Enzymen net transcriptionally up-reegelen, awer et net eraus flitt kann, datt de Bistum Ros Niveauen eng Konsequenz vun enger Aktivatioun vun deene Enzymen war, obwuel dat weider Enquête brauch.
Aféierung VerfÜgung
spontan a Methode VerfÜgung
Resultater VerfÜgung
Diskussioun VerfÜgung
Wéi Mass Screening Efforten gehollef hunn méi Fäll vun Zöliakie bei Kanner z'identifizéieren
COVID-19:Wéi gesäit d'Krankheet aus
Mënschlech Koronavirus brauch organesch Material fir effizient tëscht Uewerflächen ze transferéieren
Antike Primatmikrobiome kënne méi Informatioun iwwer d'mënschlech Entwécklung ginn
Fuerschung weist datt intestinal Parasitinfektiounen d'COVID-19 Gravitéit reduzéieren
Wëssenschaftler extrahéieren de komplette mënschleche Genom aus engem Dausende vu Joer alen "Knätschgummi"
Biologesch Therapie kann de Risiko vu schwéiere COVID-19 erofgoen
Eng rezent Observatiounsstudie vu spuenesche Fuerscher, aktuell verfügbar op medRxiv* Virdruck Server, suggeréiert datt Patienten mat immun-mediéierten Krankheeten, déi biologesch Therapie kréien, e
Wëssenschaftler entwéckelen Peptiden déi d'Gläichgewiicht an den Darmbakterien restauréieren an d'Atherosklerose ëmgoen
Fuerscher entdecken weider dRoll vun Darmbakterien op dGesondheet, abegraff säi Link op Depressioun, Autoimmun Krankheeten, geeschteg Gesondheet, an Adipositas. Elo, en Team vu Wëssenschaftler bei S
Et ass sécher rau Liewensmëttel fir Hausdéieren ze fidderen,
fënnt nei Studie Eng grouss multinational Studie weist datt Hausdéierbesëtzer net mengen datt rau Iessen iessen dErhéijung vun der Infektioun fir Hausmemberen erhéicht. Matière Liewensmëttel enthält a