PLOS NËMMEN: Downregulation vun RPL6 vun siRNA bremst Zouhuelen an Zell Cycle zerstéiert vu Mënscherechter Gastric Cancer Zell zesummeféieren

Wat VerfÜgung

Eis virdrun Etude Teamchef Mënsch ribosomal FAQ L6 (RPL6) war an-reglementéiert multidrug-resistent gastric Kriibs Zellen an iwwer-Ausdrock vun RPL6 konnt gastric Kriibs vum Medellin-entschlof apoptosis schützen. Et war weider bewisen, dass weider-Regulatioun vun RPL6 Wuesstem denke an kënschtlech Kolonie ze grënnen Fähegkeet vun GES Zellen verstäerkte iwwerdeems verwandelt-Regulatioun vun RPL6 de Géigendeel Resultater Schatzkummer. Déi heiteg Etude war entworf Potential Roll vun RPL6 an Therapie vun gastric Kriibs fir Klinik ze ermëttelen. Den Ausdrock vun RPL6 an cyclin E zu gastric Kriibs Stoffer an normal gastric mucosa war vun immunohistochemisty bewäert. Et gouf festgestallt, dass RPL6 an cyclin E op engem héichen Niveau am gastric Kriibs Stoffer wéi dat an normale gastric mucosa ausgedréckt huet an der zwee an gastric Kriibs correlative goufen. Survival Zäit vun Thes Patienten war vun Kaplan- Meier Analyse analyséiert an et gouf erausfonnt, dass Patienten mat RPL6 positiven Ausdrock kuerz Iwwerliewe Zäit zougedréckt wéi Patienten déi mat RPL6 negativ Ausdrock. RPL6 war dann genetesch verwandelt-reglementéiert gastric Kriibs SGC7901 an AGS Zell Verse siRNA. Et ass bewisen, dass verwandelt-Regulatioun vun RPL6 Kolonie Fähegkeet vun gastric Kriibs Zellen kënschtlech administrativ reduzéiert a Zell Wuesstem zu VIVO reduzéiert. Ausserdem verwandelt-Regulatioun vun RPL6 konnt G1 bis S Phase Transitioun vun deenen Zellen oofgesinn. Weider, Siicht mir dass RPL6 siRNA verwandelt-reegelen Ausdrock cyclin E zu SGC7901 an AGS Zellen. Geholl zesummen, proposéiert dës Donnéeën, déi RPL6 iwwer-ausgedréckt gastric Stoffer an Mënsch ass an aarme hätt ëmmer. Down-Regulatioun vun RPL6 konnt Zell Wuesstem a Zell Zyklus Werdegang mannst duerch verwandelt-Regulatioun cyclin E oofgesinn a wat als Roman Approche zu gastric Kriibs Therapie benotzt ginn VerfÜgung

Fro:. Wu Q, Gou Y, Wang Q, Jin H, CUI L, Zhang Y, et al. (2011) Downregulation vun RPL6 vun siRNA bremst Zouhuelen an Zell Cycle zerstéiert vu Mënscherechter Gastric Cancer Zell zesummeféieren. PLoS NËMMEN 6 (10): e26401. Doi: 10.1371 /journal.pone.0026401 VerfÜgung

Redakter: Xin-Yuan Guan, D'Universitéit vun Hong Kong, China VerfÜgung

Arnaque: 7. August, 2011; Akzeptéiert: 26. September, 2011; Publizéiert: 17. Oktober 2011 VerfÜgung

Copyright: © 2011 Wu et al. Dëst ass eng oppen-Zougang Artikel ënnert de Bedingunge vun der Lizenz BY Creative Commons verdeelt, déi bereet benotzen Genehmegungen, Distributioun, an Reproduktioun vun all mëttelgrouss, gëtt d'Original Auteur an d'Quell Kaiser sinn VerfÜgung

Funding:. Dës Etude an en Deel gouf vun der National Grondakommes Research plangen vu China (Nr 2010CB732400, Nr 2010CB529300), an der National Natural Science Foundation of China (Nr 30801349) vun Stipendien ënnerstëtzt. D'funders hu keng Roll am Etude Design, Daten Kollektioun an Analyse, Décisioun, oder Virbereedung vun der mëttelalterlech Handschrëft ze publizéieren VerfÜgung

Wettsträit Interessen:.. D'Auteuren hunn deklaréiert, datt keng Competitioun Interessen existéieren VerfÜgung

Aféierung VerfÜgung

Gastric Kriibs, mat héich Moral, war ee vun de stäerkste malignant Cancers an asiatesch Länner. Seng Optriede war en Prozess mat Multi-Faktoren an der Multi-Schrëtt, an hire Restaurant op ville Molekülle Équipe, dorënner Aktivatioun vun proto-oncogenes, inactivation vun entholl-suppressor Genen, hire Restaurant zu Zell Zyklus Zesummenhang Proteinen an esou op. An de leschte Joerzéngt, eng grouss Zuel vun proto-oncogenes an entholl-suppressor Genen hunn fonnt ginn. An trotz der sizable Zuel vun Genen scho beschriwwen, nei Genen mat oncogenic Potential oder entholl-suppressing Aktivitéiten nach identifizéiert ginn. Allerdéngs, d'molekulare Mechanismus vun gastric carcinogenesis bleift onkloer. VerfÜgung

Ribosom ass wiesentlech fir FAQ Synthes vun all Zellen, déi vun ribosomal RNAs (rRNAs) an ribosomal Proteinen (RPs) opgebaut ass. Vill RPs Leeschtung och verschidde Rollen, déi vun FAQ biosynthesis onofhängeg sinn, déi extra-ribosomal Funktioun genannt ass [1]. Waarden méi Fuerschung bewisen, dass Stéierungen vun FAQ Iwwersetzung un tumorigenesis a vill ribosomal Proteinen sech zu erhéijen geschwënn, mä de Mechanismen huet nach onbekannt [2]. Et gouf virgeschloen, dass vill RPs als haploinsufficient entholl suppressors zu Fësch a vill RPs Genen handelen kéint och oncogenes zu mënschlech Aart ginn [3]. Déi éischt Rapport iwwert Relatiounen tëscht RPs an erhéijen war an 90 s de 20 publizéiert Jorhonnert, déi d'Associatioun vun RPS19 mat Colon carcinoma Werdegang an dat bewisen [4] .Thereafter, méi a méi RPs geschwënn fonnt goufen zu erhéijen , wéi héich Ausdrock vun RPL19 zu Broscht erhéijen [5], iwwer-Ausdrock vun RPL7a an RPL37 an Aarbecht-Kriibs Otemschwieregkeeten Echantillon [6], méi Ausdrock vun RPL15 zu esophageal Kriibs [7], RPs als fréi ze erkennen Bissau vum Mënsch squamous Zell carcinoma vun der Joan cervix [8], an iwwer-Ausdrock vun RPL36a mat bewosst Verbreedung zu hepatocellular carcinoma verbonne [9] an esou op. Rapporten der Associatioun vun RPs mat carcinogenesis wat sech waarden nach [2], [10]. Allerdéngs sinn déi exakt Roll vun RPs zu entholl Entwécklung Objeten an brauchen nach weider Ännerung. VerfÜgung

Virdrun, mir analyséieren der mRNA Profiler vun engem Mënsch gastric Kriibs Zell Linn SGC7901 a seng multidrug-resistent Variant SGC7901 /VCR vun Ënnerscheed Hinnen alleguer an Ennerdréckung subtractive hybridization ugewisen [11], [12]. RPL6 war als eent vun den iwwer-ausgedréckt Genen vun SGC7901 identifizéiert /ADR zu SGC7901 Verglach, dee weider vun RT-Hinnen alleguer a Northern blot Analys confirméiert gouf [13]. Kierzunge Studien Teamchef weider-Regulatioun vun RPL6 gastric Kriibs Zellen geschützt aus adriamycin-entschlof apoptosis a verstäerkt d'Resistenz vun gastric Kriibs Zellen ze Multiple chemotherapeutic Drogen, dorënner vincristine, adriamycin, etopside, cisplatin a 5-fludrouracil [13]. Dës Donnéeë uginn dass RPL6 konnt de malignant phenotypes vun gastric Kriibs Zellen förderen, wat eis dozou gefouert Perquisitiounen studéieren ze Exercice déi exakt Roll vun RPL6 zu carcinogenesis an Entwécklung vun gastric Kriibs ze weider entdecken. Dann entdeckt mir dat genetesch up-Regulatioun vun RPL6 zu GES Zellen konnt de Wuesstem Boost an kënschtlech Kolonie ze grënnen Fähegkeet vun GES Zellen revaloriséiert iwwerdeems verwandelt-Regulatioun vun RPL6 de Géigendeel Resultater weise kéint. Desweideren, an-Regulatioun vun RPL6 konnt G1 bis S Phase Transitioun vun GES Zellen förderen. Weider Etude bewisen, dass RPL6 up-reegelen cyclin E Ausdrock vun GES Zellen [14]. Geholl zesummen, proposéiert dës Donnéeën, déi RPL6 konnt de malignant phenotypes vun gastric Kriibs Zellen an RPL6 Promotioun kéint eng oncogenic Roll an der tumorigenesis an Entwécklung vun gastric Kriibs Leeschtung, déi eis Nerve haitegen studéieren ze Exercice der Potential Roll vun RPL6 zu Gentherapie Loescht Therapie vun gastric Kriibs a kéint als Roman Approche zu gastric Kriibs Therapie benotzt ginn. VerfÜgung

Resultater VerfÜgung

RPL6 an cyclin e Ausdrock vun mënschlecher gastric Kriibs uplanzen an bascht net-neoplastic Stoffer reagéiert VerfÜgung

d'Relatiounen tëscht RPL6 an cyclin E Ausdrock mat der Entwécklung vun gastric Kriibs ze wëssen, nogewise mir RPL6 an cyclin E Ausdrock vun mënschlecher gastric Kriibs Stoffer a reagéiert bascht Net-neoplastic Stoffer vun immunohistochemical staining. D'Resultater Teamchef RPL6 an cyclinE bal zu Zytoplasma en der an nëmmen heiansdo an Kären an gastric Kriibs Zellen (Figebam. 1A). Weider Analyse entdeckt, datt de positive Verhältnis (dorënner uplanzen dat grousst) vun RPL6 84% huet (46 vun 55 Patiente) während de positive Verhältnis vun cyclin E 75% huet (41 vun 55 Patiente) zu Mënsch gastric Kriibs uplanzen. De positiven Verhältnis vu béiden RPL6 an cyclin E war 70% (38 vun 55 Patiente) während den negativen Verhältnis (dorënner ugedait datt stain rauszesichen) souwuel RPL6 an cyclin E 11% huet (6 vun 55 Patiente) zu Mënsch gastric Kriibs uplanzen . De positiven Verhältnis vu béiden RPL6 an cyclin E 18% huet (8 vun 55 Patiente) zu reagéiert bascht Net-neoplastic Stoffer (Donnéeën net gewisen). Wéi fir d'Differenzen tëscht RPL6 Ausdrock an cyclinE Ausdrock vun mënschlecher gastric Kriibs uplanzen, gouf et keen Ënnerscheed. Déi heiteg Etude bewisen, dass RPL6 an cyclin E Ausdrock vun mënschlecher gastric Kriibs uplanzen famill waren (Lalumi 1B, p &Si besteet;. 0,05), deen eng con-generéis Roll an der Entwécklung vun gastric Kriibs an RPL6 an cyclin E als servéieren Leeschtung vläicht uweist fir gastric Kriibs Diagnos an eng Gentherapie Zil fir gastric Kriibs Therapie. Um Enn vum Suivi, Survival Zäit vun de Patienten goufen duerch Kaplan- Meier Method analyséiert an d'Resultater bekannt ginn, datt während Patienten, datt an duerno goufen, mat Patienten souwuel RPL6 positiv an cyclin E positive eng kuerz Iwwerliewe Zäit zougedréckt a aarmen hätt wéi déi mat béiden RPL6 negativ an cyclin E negativ Ausdrock, oder déi mat RPL6 positiv an cyclin E negativ oder mat RPL6 negativ an cyclinE positiven Ausdrock respektiv (Lalumi 2 a, p &Si besteet;. 0.01), deen réischt kann dass Patienten mat béiden RPL6 positiv an cyclin E positive zougedréckt aarmséileg hätt. Et ass bewisen, och dass Patienten mat RPL6 negativ Ausdrock méi Iwwerliewe Zäit wéi RPL6 positive mannste zougedréckt (Lalumi 2B, p &Si besteet;. 0.01), an Patienten mat cyclin E positiven Ausdrock zougedréckt aarmséileg hätt (Lalumi 2C, p &Si besteet;. 0.01). Dofir, kann eng Konklusioun opgesat ginn, datt RPL6 als uweist zerwéiert vläicht hätt vun gastric Kriibs Patienten fir bewäert. VerfÜgung

Expression vun RPL6 zu gastric Kriibs Zell Linnen a seng géifen VerfÜgung

Fir weider beschen Potential Roll vun RPL6 zu Gentherapie vun gastric Kriibs, SGC7901 an AGS Zellen sech mat RPL6-spezifesch siRNA an der gemëscht Pool vu G418-resistent Zell Varianten transfected gouf produzéiert. D'G418-resistent Varianten RPL6-spezifesch siRNA ausser sech als SGC7901-siRPL6-1, AGS-siRPL6-1 an SGC7901-siRPL6-2, AGS-siRPL6-2 iwwergaangen genannt. D'G418-resistent Zellen Alaister siRNA plasmids ausser sech entwéckelt wéi SGC7901-siControl an AGS-siControl bzw.. Als zu Dorënner 3A gewisen, war RPL6 Ausdrock vill verwandelt-reglementéiert SGC7901-siRPL6-1, AGS-siRPL6-1 an SGC7901-siRPL6-2, AGS-siRPL6-2 Zellen am Verglach mat den Elteren Zellen an der Kontroll Zellen. Am Moment studéieren, SGC7901-siRPL6-2 an AGS-siRPL6-2 zougedréckt a méi efficace inhibitory Resultater, déi uginn, datt d'SGC7901-siRPL6-2 an AGS-siRPL6-2 Zellen als eng gutt Zell Modell ginn hätt d'Potential ze klären Roll vun RPL6 zu Gentherapie vun gastric Kriibs fir Klinik. VerfÜgung

Downregulation vun RPL6 oofgesinn Wuesstem gastric Kriibs Zell kënschtlech VerfÜgung

fir ze studéieren, ob verwandelt-Regulatioun vun RPL6 Ausdrock hätt de Wuesstem vun SGC7901 inhibit an AGS Zellen, Elteren Zellen, Kontroll Zellen an hir Varianten huet rakommen an Kultur Telleren an hire Wuesstem war Alldag mat MTT assay iwwerwaacht. Wéi déi vun de Wuesstem Kéiren am Dorënner 3B uginn, Kontroll (SGC7901-siControl an AGS-siControl) Zellen zougedréckt engem ähnleche Wuestum fir Elteren (SGC7901 an AGS) Zellen bzw. hierkommen SGC7901-siRPL6-1, AGS-siRPL6-1 an SGC7901 -siRPL6-2, AGS-siRPL6-2 Zellen ënneschten Taux wéi Control Zellen Schatzkummer, an SGC7901-siRPL6-2, AGS-siRPL6-2 Zellen zougedréckt a dem niddregsten Taux (Lalumi 3B, p &Si besteet;. 0,05). Hafen-onofhängeg Wuesstem vun deenen Zellen war weider mat mëll Agar Kolonie Opstellung assay analyséiert. Et war Teamchef SGC7901-siRPL6-1, AGS-siRPL6-1 an SGC7901-siRPL6-2, AGS-siRPL6-2 Zellen an mëll Agar vill manner Zell Kolonien produzéiert wéi hir Elteren Zellen a Kontroll Zellen (Lalumi 3C, p &Si besteet. 0,05), mat SGC7901-siRPL6-2 an AGS-siRPL6-2 genannt Zellen produzéiert d'mannst Kolonien. Dës Donnéeë ugeholl datt verwandelt-Regulatioun vun RPL6 konnt gastric Kriibs Zell Wuesstem oofgesinn an der Kolonie Opstellung Fähegkeet vun SGC7901 an AGS Zellen inhibit. VerfÜgung

RPL6 siRNA inhibited tumorigenesis vun gastric Kriibs Zellen zu VIVO VerfÜgung

Fir weider d'Auswierkunge vun RPL6 op tumorigenesis vun gastric Kriibs confirméieren, assay entholl Équipe war an Sauna Mais gesuergt. SGC7901, AGS an SGC7901-siRPL-2, AGS-siRPL6-2 Zellen sech subcutaneously an der rietser inoculated oder uewen am Réck vun athymic Sauna Mais lénks op engem eenzege Site. (. Lalumi 4A an C) Véier Woche méi spéit, waren Mais ëmbruecht an de transplantéiert erhéijen sech excised an entholl Gréisste sech bewäert (Lalumi 4B an D, p &Si besteet;. 0,05). Et war e groussen Verloscht vun Gréisste vun xenografts zu RPL6 Zellen verwandelt-reegelen. Dës Donnéeë uginn, datt dru-Ugrëff vun RPL6 konnt gastric Kriibs Zell tumorigenesis zu VIVO oofgesinn an RPL6 kann eng Roll spillen d'malignant Wuesstem vun gastric Kriibs Zellen zu VIVO doran. VerfÜgung

RPL6 decelerated G1-S Phase Transitioun vun SGC7901 Zellen VerfÜgung

fir d'Mechanismen getrueden de suppressive Roll vun RPL6 zu gastric Kriibs Zell Wuesstem Basisdaten, d'Auswierkunge vun RPL6 op Zell Zyklus Verdeelung vun SGC7901 Zellen analyséiert goufen (Figebam. 5A). Als zu Dorënner 5B gewisen, zougedréckt SGC7901-siRPL6-1 Zellen Prozentsaz vun G1 Phas liicht geklommen a rofgaang Prozentsaz vun S Phas, iwwerdeems SGC7901-siRPL6-2 Zellen Prozentsaz vun G1 Phase vill fräi gewisen a rofgaang Prozentsaz vun S Phase (P &Si besteet; 0,05 ) am Verglach mat den Elteren Zellen an Control Zellen. Dës uginn dass RPL6-spezifesch siRNA konnt de G1-S Transitioun vun SGC7901 Zellen decelerate. VerfÜgung

RPL6 verwandelt-reegelen Ausdrock vun cyclin E zu gastric Kriibs Zellen an d'FAQ Niveau VerfÜgung

Et ass bekannt datt G1-S Werdegang ass vun cyclin d /CDK4 an cyclin E /CDK2 investéiert kontrolléiert, déi duerch INK4 Familljememberen, p21 an p27 regulariséiert ginn, respektiv. Den Ausdrock vun dësen Legislateuren an SGC7901 an AGS Zellen a sengen Varianten sech duerch Western Blot Analyse alles. Als zu Dorënner 6 uginn, ass Ausdrock vun cyclin E bedeitend erof-reglementéiert SGC7901-siRPL6-2 an AGS-siRPL6-2 Zellen. Ausdrock vun CDK2, p16, p21 an p27 sech zu SGC7901 an AGS Zell Varianten onverännert. Dës Donnéeë ugeholl datt verwandelt-Regulatioun vun RPL6 den Ausdrock vun cyclin E zu SGC7901 an AGS Zellen erofgaangen, déi d'Potential Roll vun RPL6 an cyclin E zu der Entwécklung vun gastric Kriibs an RPL6 kann wéi e Gene Zil fir gastric Kriibs benotzt kéint delineate zu der Klinik. VerfÜgung

Diskussioun VerfÜgung

déi heiteg Etude bewisen, dass RPL6 an cyclin e zu gastric Kriibs Stoffer iwwer-ausgedréckt huet an et e positiven Korrelatioun tëscht hinnen an gastric Kriibs Stoffer ass. De Suivi Resultater verroden dass Patienten mat RPL6 negativ Ausdrock awer méi Iwwerliewe Zäit wéi déi mat RPL6 positiven Ausdrock, deen ugeholl datt RPL6 positive Patienten aarmséileg hätt gewisen. Weider Fuerschung bewisen, dass verwandelt-Regulatioun vun RPL6 vun RPL6-spezifesch siRNA inhibited der Verbreedung a Hafen-onofhängeg Wuesstem vun gastric Kriibs Zell Linnen kënschtlech, repressed Zell Zyklus Werdegang an Trupen cyclin E Ausdrock, Desweideren, knockdown vun RPL6 vun RPL6-spezifesch siRNA Trupen entholl Opstellung Fähegkeet vun gastric Kriibs Zellen zu VIVO. VerfÜgung

an eiser leschter Etude, differentially ausgedréckt Genen mat der multidrug Resistenz vun gastric Kriibs Zellen verbonne waren benotzt Ënnerscheed Ecran RT-Hinnen alleguer an subtractive hybridization isoléiert [11], [ ,,,0],12]. RPL6, eng Komponent vun der grousser subunit vun Ribosom, war also isoléiert als Copie iwwer-ausgedréckt an multidrug-resistent gastric Kriibs Zellen [11]. Et ass bewisen, dass RPL6 gastric Kriibs Zellen aus chemotherapeutic EPO-entschlof apoptosis [13] schützen kéint. Dës Donnéeë ugeholl datt RPL6 zu der Regelung vun der malignant phenotype vun gastric Kriibs Debate kéint. Weider Etude konzipéiert d'Roll vun RPL6 an der tumorigenesis an Entwécklung vun gastric Kriibs ze entdecken, an Resultater ugeholl, datt weider-Regulatioun vun RPL6 Wuesstem denke an kënschtlech Kolonie ze grënnen Fähegkeet vun GES Zellen hierkommen verwandelt-Regulatioun vun RPL6 Géigendeel Resultater Schatzkummer. Och, an-Regulatioun vun RPL6 denke G1 bis S Phase Transitioun vun GES Zellen mannst duerch up-Regulatioun vun cyclin E Ausdrock iwwerdeems verwandelt-Regulatioun vun RPL6 Géigendeel Resultater zougedréckt [14]. Geholl zesummen, proposéiert dës Donnéeën, déi RPL6 kéint eng oncogenic Roll an tumorigenesis an Entwécklung vun gastric Kriibs spillen a vläicht als Roman Approche zu der Gentherapie vun gastric Kriibs déngen. VerfÜgung

Hautdësdaags, ëmmer méi Patienten vun Kriibs gestuerwen well vun der malignant phenotypes vun hinnen. Cancer Therapie gestéiert Leit weltwäit. Nieft Chimiotherapie an Chirurgie ze behandelen, ass Gentherapie eng Verfilmung an villverspriechend Kriibs behandelt. Ee vun de stäerkste Toast benotzt Methode fir Gentherapie ass RNS Amëschen (RNAi). RNAi, eng héich conserved Gentherapie silencing Mechanismus spillt eng wichteg Roll an d'Regulatioun vun der Gentherapie Ausdrock. Gene silencing vun engem Post-transcriptional Mechanismus homologous double-gekëmmert RNS sensibiliséieren war éischt zu kënschtlech Systemer entdeckt wou double staarkt RNS (dsRNA) war duerch Sprëtzen agefouert oder vum Ausdrock vun transgenic gesond. Dëse Phenomeen gëtt duerch kleng interfering RNS (siRNA) an der Zytoplasma vun mammalian Zellen. An siRNA Technologie, waren zwee Liwwerung Mechanismen considéréiert, direkt Liwwerung vun syntheteschen siRNA Nukleotid an Aféierung vun engem plasmid DNA (pDNA) Zeechesaatz engem kuerzen hairpin bauen (shRNA) dass an siRNA enzymatically deforméiert ginn [15]. SiRNA huet seng inhibitory Rollen déi mat de Message vun mRNA passende an inhibited der konsequent mRNA Ausdrock an Iwwersetzungen, an hunn als negativ Regulatioun. Haut, hu méi a méi Wëssenschaftler entdeckt déi vun siRNA Gentherapie Ausdrock vill Uewerschenkel konnt entholl Wuesstem an Metastasen oofgesinn. X-Hausnummeren inhibitor vun apoptosis FAQ (XIAP), e wichtege Member vun der inhibitors vun apoptosis FAQ (IAP) Famill, ass d'Kontroll vun Zell Divisioun, Zell Prolifératioun an inhibition vun apoptosis [16], [17] Équipe. Down-Regulatioun vun XIAP vun siRNA hätt vill Prolifératioun vu entholl Zellen oofgesinn an entholl Zellen ze chemotherapeutic Agenten [18], [19] sensitize. Osteopontin (OPN) FAQ, déi war an der Majoritéit vun gastric Kriibs Patienten an Zesummenhang mat senger pathogenesis iwwer-ausgedréckt, huet eng wichteg Roll an der Verbreedung, Invasioun, Metastasen an Iwwerliewe vun gastric Kriibs [20]. Dunn verwandelt-Regulatioun vun OPN vun OPN-spezifesch siRNA inhibited bedeitend de Wuesstem, Migratioun an Invasioun vun gastric Kriibs Zellen [21]. CML66, e Roman entholl antigen déi eng oncogenic Roll gespillt, gouf zu engem Groussdeel vu Kriibs Zell Linnen an Cancers iwwer-ausgedréckt [22], Sax iwwer hir Ausdrock vun CMl66-spezifesch siRNA vill inhibited Prolifératioun, Iwwerfall a Metastasen vun Zellen Hela souwuel am VIVO an kënschtlech Experimenter [23]. FABP5, déi cutaneous fatty Seier bindend FAQ (C-FABP) encodes, ass weider-reglementéiert Aarbecht Kriibs an Akten als putative oncogene. Down-Regulatioun vun FABP5 vun FABP5-spezifesch siRNA effektiv inhibited Aarbecht Kriibs Zell Wuesstem an Sauna Mais [24]. Ausserdeem, wann ribosomal FAQ RPS13 déi gastric Kriibs Zell Linn SGC7901 Wuesstem verstäerkte war vun RPS13-spezifesch siRNA, et däitlech inhibited SGC7901 Zell Wuesstem a Kolonie ze grënnen ëmmer kënschtlech Uewerschenkel an Trupen entholl Opstellung Fähegkeet an Sauna Maus [25]. Virdrun Fuerschung fonnt och datt systemesch Liwwerung vun siRNA via atelocollagen, déi erhéijen spezifesch Ziler, ass sécher an machbar Kriibs Therapie an Aarbecht Kriibs [26]. Dofir, Beweiser virun ugeholl datt siRNA, vun der Gentherapie Ausdrock inhibiting engem Roman Approche un Kriibs gema gin hätt an der Gentherapie vun Kriibs machbar Medeziner Behandlung maachen. VerfÜgung

Am Moment studéieren, Ausdrock vun RPL6 an cyclin E zu gastric Kriibs Stoffer an der stemmt bascht Net-neoplastic Stoffer goufen erwëscht an de Resultater uginn dass RPL6 an cyclin E méi Ausdrock an gastric Kriibs Stoffer zougedréckt wéi zu bascht Net-neoplastic Stoffer iwwereneestëmmen. Doriwwer eraus, et ass eng Korrelatioun tëscht RPL6 an cyclin E Ausdrock vun gastric Kriibs Stoffer, déi ugeholl, datt si engem con-generéis Roll an der Entwécklung vun gastric Kriibs an RPL6 kéint spille kann als uweist fir gastric Kriibs Diagnos déngen. De Suivi Resultater bewisen, dass Patienten mat béiden RPL6 positiv an cyclin E positiven Ausdrock awer eng kuerz Iwwerliewe Zäit an aarmen hätt wéi déi entspriechend Kontroll an annoncéiert och dass Patienten mat RPL6 negativ Ausdrock awer méi Iwwerliewe Zäit a besser hätt wéi Patienten mat RPL6 positiven Ausdrock, déi proposéiert datt RPL6 kann als uweist fir gastric Kriibs hätt an engem Gene Zil fir gastric Kriibs Therapie an Klinik fiert. VerfÜgung

weider fir d'Potential Machbarkeet vun RPL6 als Gentherapie Zilscheif vun gastric Kriibs an Klinik beschen, mir Uewerschenkel gastric Kriibs Elteren Zell Linnen (SGC7901 an AGS) wierksam inhibited Zell Wuesstem verwandelt RPL6 Ausdrock vun SGC7901 an AGS Zellen vun RPL6-spezifesch siRNA, zougedréckt Resultater datt verwandelt-Regulatioun vun RPL6 an kënschtlech Kolonie ze grënnen ëmmer. Weider, uginn Zell Zyklus Analyse datt verwandelt-Regulatioun vun RPL6 G1 decelerated ze S Phase vun gastric Kriibs Zellen. Western blot Analyse bewisen, dass RPL6 Zell Zyklus Werdegang duerch verwandelt-Regulatioun vun cyclin E. entholl Opstellung Experimenter an Sauna Mais inhibited ugeholl datt verwandelt-Regulatioun vun RPL6 zu VIVO entholl Opstellung oofgesinn hätt. VerfÜgung

Cyclin E, e Schlëssel Zell Zyklus FAQ datt wichteg Roll an G1-S Transitioun gespillt huet an ville verschiddene erhéijen an Stéierungen [27], [28], [29], [30], [31]. Virdrun Fuerschung bewisen, dass cyclin E wichtegen Protein an tumorigenesis war. Am Moment studéieren, entdeckt mir dass cyclin E Ausdrock, zesumme mat RPL6 mënschlechen héich war gastric Kriibs Stoffer wéi dat an stemmt bascht Net-neoplastic Stoffer, déi d'Roll vun cyclin E zu der Entwécklung vun gastric Kriibs huet virgeschloen. Weider Fuerschung bewisen, dass RPL6 Zell Wuesstem betraff vun cyclin E Regulatioun, déi weisen, datt héich Ausdrock vun cyclin E Zell Wuesstem scho laang niddereg Ausdrock vun cyclin E Zell Prolifératioun decelerated. Cyclin E an RPL6 kann con-generéis Rollen an der Entwécklung vun gastric Kriibs. VerfÜgung

An Conclusioun, déi heiteg Etude bewisen Leeschtung datt RPL6 an cyclinE Ausdrock mat all aner zu gastric Kriibs Stoffer verbonne waren an si kéinten Leeschtung Zesum- grousszügeg Rollen an der Entwécklung vun gastric Kriibs, deen ugeholl datt RPL6 als diagnostic Outil zu gastric Kriibs benotzt kann. Suivi vun Donnéeën Analyse bewisen, dass Patienten mat RPL6 negativ Ausdrock awer méi Iwwerliewe Zäit a besser hätt wéi Patienten mat RPL6 positiven Ausdrock postoperatively, déi proposéiert datt RPL6 als uweist fir gastric Kriibs hätt an engem Roman Gentherapie Zil fir gastric Kriibs Therapie zerwéiert. Weider Étude uginn, datt verwandelt-Regulatioun vun RPL6 Ausdrock vun RPL6-spezifesch siRNA SGC7901 Zell Wuesstem inhibited an kënschtlech Kolonie Opstellung Fähegkeet, decelerated SGC7901 Zell G1 bis S Phase Transitioun, an Trupen entholl Équipe an VIVO. Zu der Konklusioun, eis heiteg Etude confirméiert datt RPL6 siRNAs kéint als Roman Approche zu gastric Kriibs Therapie fir Klinik benotzt ginn. VerfÜgung

spontan a Methode VerfÜgung

zu IFLA- breakpoint

Fir Otemschwieregkeeten uplanzen , goufen all Patienten Awëllegung iwwerschësseg agebousst uplanzen fir Fuerschung Zwecker ze benotzen. D'Ëmwelt- an dëser Etude benotzt sech duerch d'Spidol d'Protectioun vun de Mënscherechter Themen Comité ofgeseent. D'Benotze vu mënschlechen Stoffer war vun der institutioneller review Verwaltungsrot vun der véierter Military Medical University guttgeheescht a gouf zu der Helsinki Deklaratioun, a bis lokal Gesetzgebung conformed. Patienten Echantillon fir d'Etude stellt ënnerschriwwen Awëllegung Formen. Fir Déier Fuerschung, all Prozedure fir Déier trotzdeem sech am Aklang mat den institutionnelle Déieren Care an Benotzt Comité Richtlinnen vun der fonnt Déieren Zentrum vun der véierter Military Medical University gesuergt. Den Accord ID fir mat den Déieren war Nr 10218 vun fonnt Déieren Center vun der véierter Military Medical University. VerfÜgung

Ray uplanzen an Zell Linnen VerfÜgung

Ray uplanzen mat paraffin Ënnerbewosstsinn vun 55 Patiente gesammelt huet mat gastric Kriibs, deen tëscht 2004 an 2009. All Fäll vun gastric Kriibs an bascht Net-entholl Stoffer gastrectomy vun eisem Spidol mécht sech klinesch an pathologically diagnostizéiert. Donnéeën op clinicopathological Fonctiounen an prognoses vun de Patienten sech gesammelt an retrospectively analyséiert. Eng total vun 55 Patiente sech bis d'Enn vum Joer 2009, an zwee vun hinnen ass sech während de Suivi Zäit verluer. Mënsch gastric adenocarcinoma Zell Linn SGC7901 vun der Academy of Military Medical Science kritt huet, AGS war vun der Shanghai Zell Bank (Shanghai, China) kritt. Déi zwee Zell Strecken an eisem Institut agekacht. All d'Zell Strecken an RPMI1640 haten (Invitrogen, Karlsbad CA) ergänzt mat 10% Hëtzt-inactivated An et Kallef serum (FCS) bei 37 ° C mat 5% CO _{2 an enger humidified incubator (Forma Wëssenschaftlech, Marietta, leider). VerfÜgung}

Immunohistochemistry an Immunohistochemical ukomm VerfÜgung

Deparaffinized an rehydrated Rubriken sech fir 10 Minutten an frësch Waasser gewäsch. Heat-entschlof antigen retrieval war bei 95 ° C fir 20 Minutte gesuergt mat 10 mm citrate Natrium Prellbock (PH 6.0). No der drënner fir 40 Minutte bei Raumtemperatur gi si waren, waren se fir 20 Minutten an 3% Waasserstoff Hem gespaart an dann zu normal Geess serum confining Flëssegkeet fir 40 Minutten. No deem, waren se erlaabt Nuecht ze reagéieren iwwer bei 4 ° C mat Primärschoul antibodies fir IgG, RPL6 an cyclinE (Santa Cruz). No rewarming fir 40 Minutten ware se geklot dann mat zweet antibodies (Zhongshan Goldenbridge Déi CO.LTD) fir aner 40 Minutte bei Raumtemperatur. Dunn huet sech de Produkter mat 3,3'-diaminobenzidine entwéckelt an counterstained mat haematoxylin. Buteur ass vun engem spezialiséierte pathologist an engem Wëssenschaftler fäerdeg deen ze de Medeziner an pathologic Informatiounen blinded goufen. Am Fall vun Ënnerscheeder, war e Konsens vun conferencing erreecht. D'Undeeler vun positive Zellen (0 bis +3) an der staining intensities (0 bis +3) sech separat op enger Vergréisserung vun × 200 bewäert. De fréieren vun Zielen d'Zuel vun Kierchefënster entholl Zellen ënnert der Gesamtzuel vun entholl Zellen berechent war, zum Beispill, wou 25% vun de gesamten Zellen sech Kierchefënster, war den Undeel stoung +1, an 50% ongeféier +2, 75% Gläiche bis +3, fusionnéiert 0% d'Intensitéit ukomm vun der Faarf vun Kierchefënster entholl Zell Keimzell évaluéiert huet, speziell fir 0, zweelënsegen 0 heescht stoung, +1 Amber heescht, +2 heescht giel, an +3 heescht brong. Kombinéiert ukomm + 1~ + 2 waren definéiert "negativ", an + 3~ + 6 goufen als "positiv". VerfÜgung

Plasmid Bau an transfection VerfÜgung

Zwee Puer hairpin kleng RNS interfering (siRNA ) oligos fir RPL6 sech no der siRNA Design Richtlinnen vun Co. TaKaRa déi entworf, Ltd. Compare Zil- Message un de Mënsch Nepgen Datebank an engem Héichuewen Sich aus Rücksicht all Zil- Haaptrei mat 21 huel Puer homology Misère ze aner coding Message eliminéiert . Fir oligo-1, Sënn: 5'-GATCCGGAGAAGGTTCTCGCAACTTTCAAGAGAAGTTGCGAGAACCTTCTCCTTTTTTGGAAA-3 ", antisense: 5'AGCTTTTCCAAAAAAGGAGAAGGTTCTCGCAACTTCTCTTGAAAGTTGCGAGAACCTTCTCCG-3"; fir oligo-2, Sënn: 5'-GATCCGTCGAGTTCCTCTACGAAGATTCAAGAGATCTTCGTAGAGGAACTCGATTTTTTGGAAA-3 ", antisense: 5'-AGCTTTTCCAAAAAATCGAGTTCCTCTACGAAGATCTCTTGAATCTTCGTAGAGGAACTCGACG-3"; 5'-GATCCGGTGAGATCTTCGACACAGTTCAAGAGACTGTGTCGAAGATCTCACCTTTTTTGGAAA-3 ", antisense:: 5'-AGCTTTTCCAAAAAAGGTGAGATCTTCGACACAGTCTCTTGAACTG TGTCGAAGATCTCACCG-3" A Alaister DNA duplex war och als Kontroll, fir oligo-1, Sënn entworf. Fir annealing zu DNA duplexes Form, 0,01 M all vun Sënn an antisense oligos benotzt goufen. D'duplexes sech verdënntem an duerno mat pSilencer3.1-H1 Tendenz Vecteure Jonglenster (TaKaRa Déi (Dalian) Co., Ltd). D'Produite sech an DH5α-zoustännegen Zellen transforméiert. Ampicillin-resistent Kolonien huet gewielt, déi Restriktioun unzereegen identifizéiert, a weider duerch DNA sequencing confirméiert. Hëllef Lipofectamine 2000 reagent (Invitrogen, Karlsbad CA) Laut den Instruktioune 'Producteure, siRNA plasmids vun RPL6 waren an SGC7901 Zellen transfected, bzw.. Twenty-véier Stonnen no transfection, G418 (400 μg /ml) war dat fir eng stabil clones an der Kultur mëttelfristeg agefouert. D'gemëscht clones sech fir eng zousätzlech 2 Méint erweidert. D'SGC7901 an AGS Zellen sech als SGC7901-siRPL6-1, AGS-siRPL6-1, an SGC7901-siRPL6-2, AGS-siRPL6-2 stably ausdrécken exogenic RPL6 (och Elteren Zellen genannt) benannt. A mat siControl transfected Zellen sech als SGC7901-siRPL6 Control an AGS-siRPL6 Control (och genannt Kontroll Zellen) benannt. VerfÜgung

Zell Prolifératioun assay VerfÜgung

3- (4,5-Dimethylthiazol-2- yl) -2,5-diphenyl-tetrazolium bromide (MTT) assay Leeschtung war den Effet vun RPL6 op Zell Prolifératioun ze diskutéieren, wéi virdru beschriwwen [32]. D'absorbance bei 490 nm (A490) vun all gutt war op engem microplate Lieser BP800 (Biohit, Helsinki, Finnland) liesen. All Experimenter war zu quadruplicates gesuergt a gouf 3 Mol widderholl. VerfÜgung

Haart Agar Kolonie Opstellung assays VerfÜgung

Haart Agar Kolonie Opstellung assay benotzt gouf Hafen-onofhängeg Zell Wuesstem Potential ze bestëmmen. Zwielef gutt Placke waren mat 0,5 ml vun 0,5% Adel Agar (Invitrogen) zu RPMI1640 mat 10% Kallef serum als ënnen futti nà gefëllt an erlaabt Nuecht op 4 ° C ze solidify. Eng total vun 200 Zellen sech an 0,25 ml vun 0.3% agarose Sursis an rakommen op ënnen Agar. Zell Kultur Placke waren fir 2 Wochen an engem CO haten _{2 incubator. D'Zuel vun de Kolonien ënnert engem microscope gezielt gouf. VerfÜgung}

Tumorigenicity an Sauna Mais VerfÜgung

klinescher Équipe war an VIVO d'Auswierkunge vun RPL6 op tumorigenicity ze bewäerten duerchgefouert. BALB /c Sauna Mais vu 4 bis 6 Wochen goufen vun Shanghai Cancer Institut gëtt an am Mikro-isolator Käfeg ënner positive Loftdrock Haffbibliothéik, a bei enger konstanter Temperatur (22 ° C) an Fiichtegkeet fir d'tumorigenicity Etude haten. Ongeféier 3 × 10 6 Zellen am Logbuch Phas sech gesammelt an subcutaneously an der uewen am Réck vun BALB /c Sauna Mais heijen. Op d'mannst dräi Sauna Mais sech fir all Grupp benotzt. De Mais goufen 4 Wochen ëmbruecht gouf méi spéit an entholl Gewiicht vun all Maus bewäert. All Prozedure fir Déier trotzdeem sech am Aklang mat den institutionnelle Déieren Care an Benotzt Comité Richtlinnen vun der fonnt Déieren Zentrum vun der véierter Military Medical University gesuergt. VerfÜgung

Zell Zyklus Analyse VerfÜgung

Fir Analyse vun Zell Zyklus Phas Distributioun, SGC7901 a sengen Varianten um Logbuch Phas sech gesammelt an zweemol mat Äis-kal PBS gewäsch. Zell Pellets sech zu 70% Ethanol fix, behandelt mat RNase A (Boehringer Mannheim, Indianapolis, IN) an Kierchefënster mat propidium Kaliumiodid (Fläch-Aldrich, St. Louis, MO).

• PLOS NËMMEN: Déi DNA Reparatiounsdéngscht Gene APE1 T1349G Polymorphism an Risk vun Gastric Cancer an enger chinesescher Population
• PLOS NËMMEN: Verloscht vun der Protein Promyelocytic Samsdeg zu Gastric Cancer: Implikatioune fir IP-10 Expression an entholl-Infiltrating Lymphocytes