PLOS ONE: níveis de mRNA Chitinase por Quantitative PCR utilizando o DNA Standard Single: Ácido Mammalian Chitinase é uma transcrição major no estômago do rato

Sumário

Quitinases hidrolisar os β-1-4 ligações glicosídicas de quitina, um importante componente estrutural de fungos, crustáceos e insetos. Embora mamíferos não produzem quitina ou seu sintase, expressam duas quitinases ativas, quitotriosidase (chit1) e quitinase mamíferos ácida (AMCase). Estes quitinases de mamíferos têm atraído uma atenção considerável, devido à sua expressão aumentada em indivíduos com um número de condições patológicas, incluindo a doença de Gaucher, doença de Alzheimer e asma. No entanto, a contribuição destas enzimas para a fisiopatologia destas doenças permanece a ser determinada. A quantificação dos níveis de ARNm e chit1 AMCase e a comparação desses níveis com os níveis de genes de referência bem conhecidas pode gerar informação útil e biomedicamente relevante. No início, foi estabelecido um sistema de PCR quantitativa em tempo real que utiliza o DNA de padrão produzido ligando os fragmentos de ADNc dos genes alvo. Este sistema permitiu-nos quantificar e comparar os níveis de expressão das quitinases e os genes de referência na mesma escala. Descobrimos que mRNA AMCase é sintetizado em níveis extraordinariamente altos no estômago do rato. O nível de ARNm presente no estômago do rato era de 7 a 10 vezes mais elevadas do que os níveis dos genes de manutenção e foi comparável à que o nível de ARNm de pepsinogénio C (progastricsin), um componente principal da mucosa gástrica. Assim, AMCase mRNA é um grande transcrito no estômago do rato, o que sugere que as funções AMCase como uma enzima digestiva que decompõe quitina polimérica e como parte da defesa do hospedeiro contra patógenos contendo quitina nos conteúdos gástricos. Nossa metodologia é aplicável para a quantificação de mRNAs para vários genes em várias amostras utilizando a mesma escala

Citação:. Ohno M, Tsuda K, Sakaguchi M, Sugahara Y, Oyama F (2012) mRNA Chitinase Níveis por Quantitative PCR utilizando o DNA standard Single: Ácido Mammalian chitinase é uma transcrição major no estômago do rato. PLoS One 7 (11): e50381. doi: 10.1371 /journal.pone.0050381

editor: Dominik Hartl, da Universidade de Tübingen, Alemanha

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