PLoS ONE: Гиперэкспрессия эукариотических фактор инициации трансляции 5А2 (EIF5A2) коррелируют с Cell Агрессивность и плохой выживаемостью в желудочном Cancer

Абстрактный
<р> эукариот фактор инициации трансляции 5А2 (EIF5A2) играет важную роль в прогрессии опухоли и прогноза оценка. Тем не менее, имеется мало информации о его потенциальной роли в развитии рака желудка. Целью данного исследования являлось изучение функции EIF5A2 в прогрессии опухоли и ее потенциальных механизмов. EIF5A2 экспрессия измеряли в желудочном линиях раковых клеток человека, иммортализованные слизистой оболочки желудка линии эпителиальных клеток (GES-1) и желудочных раковых тканей человека и сбиты интерференции РНК или активируемых EIF5A2 плазмиды трансфекции. Пролиферация клеток, были оценены миграции и вторжения в пробирке
. Вниз по течению цели EIF5A2 были исследованы с помощью вестерн-блоттинга. EIF5A2 и его потенциал 1 выражение (mta1) белок мишени метастаза-ассоциированных были исследованы в 160 пар рака желудка человека и прилегающих к нему образцов неопухолевыми с использованием иммуногистохимии (IHC) окрашивание, и его взаимосвязь с клинико-патологическими особенностями и выживаемость была исследована. Нокдаун EIF5A2
или mta1
вызвало явное подавление пролиферации HGC27 клеток, миграции и вторжения. После нокдауна EIF5A2
в HGC27 клетках, уровни E-кадгерина были и виментин повышающей регуляции, циклин D1, циклин D3, C-MYC и уровни mta1 были подавляются. Положительная регуляция EIF5A2 в клетках MKN45 привело наоборот. Результаты IHC показали положительную корреляцию между EIF5A2 и экспрессии mta1 в рака желудка ( P
&л; 0,001). Оба EIF5A2 и mta1 избыточная экспрессия коррелировали с пТл стадии ( P
= 0,018 и P
= 0,042), П.Н. этап ( P
= 0,037 и P <бр> = 0,020) и лимфоваскулярная вторжения ( P
= 0,016 и P
= 0,044). EIF5A2 или mta1 избыточная экспрессия была в значительной степени связано с плохой общей выживаемости и выживаемости без признаков заболевания (все P
< 0,05). Многофакторные анализы выявили EIF5A2 в качестве независимого предиктора как для общей выживаемости ( P
= 0,012) и выживаемости без признаков заболевания ( P
= 0,008) в больных раком желудка. Наши результаты показывают, что EIF5A2 повышающая регуляция играет важную роль в онкогенной рака желудка. EIF5A2 может представлять новый упреждения для бедных выживания и является потенциальным терапевтическим мишенью для рака желудка
<р> Цитирование:. Мэн Q-B, Кан Ш-М, Ю J-С, Лю Y-Q, Ма Z-Q, Чжоу L, и др. (2015) Гиперэкспрессия эукариотических фактор инициации трансляции 5A2 (EIF5A2) коррелируют с Cell агрессивностью и бедных выживания в рака желудка. PLoS ONE 10 (3): e0119229. DOI: 10.1371 /journal.pone.0119229
<р> Академический редактор: Июнь Ли, Сунь Ят-сеном университета Медицинской школы, Китай
<р> Поступило: 22 января 2014 года; Принято 29 января 2015 года; Опубликовано: 20 марта 2015
<р> Copyright: © 2015 Мэн и др. Это статья открытого доступа распространяется в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution, которая позволяет неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе, при условии, что оригинальный автор и источник кредитуются

Финансирование: Эта работа была поддержана за счет субсидий из Пекинского муниципального фонд естественных наук (№ 7132209), провинция Хубэй здоровья и планирования семьи научно-исследовательский проект (№ WJ2015MB137) и основных научно-технических проектов в городе Пекине (№ D141100000414004). Доноры не играет никакой роли в дизайн исследования, сбора и анализа данных, решение о публикации или подготовки рукописи
<р> Конкурирующие интересы:.. Авторы заявили, что не существует никаких конкурирующих интересов

Введение
<р> рак желудка (GC) является весьма метастатическим заболеванием и одним из наиболее смертоносной из желудочно-кишечного тракта злокачественных опухолей. [1] Несмотря на успехи в хирургических и цитотоксические терапии для GC, в настоящее время методы лечения доступны для пациентов с поздними стадиями GC являются весьма ограниченным. [2, 3] для разработки новых терапевтических стратегий, крайне важно, чтобы выяснить молекулярные механизмы, которые способствуют инвазивных и метастатических свойств GC клеток.
<р> эукариот перевод фактора инициации 5А2 (EIF5A2) находится в хромосом человека 3q26.2, а также является членом EIF5A
семейства генов. [4] Гиперэкспрессия EIF5A2
мРНК в некоторых раковых клетках человека, в отличие от избыточной экспрессии ограничивается человеческим семенника и части мозга, предлагает <ЕМ> EIF5A2
потенциальный онкоген. [4] Предыдущие исследования показали, что EIF5A2 был избыточно экспрессируется во многих раковых заболеваний человека, таких как протоковой аденокарциномы поджелудочной железы, рак яичников, печеночно-клеточного рака, рака легких, рака толстой кишки и меланому , и коррелирует с плохим выживаемости пациентов с раком и /или раковых клеток агрессивностью. [5-11] Недавние исследования показали, что EIF5A2 имеет канцерогенные способности через его активации EIF5A2-mta1 /оси с-Мус. [8] Тем не менее, мало информации об экспрессии белка EIF5A2, его прогностической значимости и потенциальной онкогенной роли в человеческом GC.
<р> Таким образом, мы впервые исследовали экспрессию EIF5A2
в линиях GC клеток человека и его потенциальной роли в клеточной пролиферации, миграции и инвазии. Далее мы определили возможные целевые белки вниз по течению, чтобы выяснить влияние EIF5A2 истощения или повышающей регуляции на клеточных функций GC клеток. И, наконец, мы проанализировали соотношение EIF5A2 и экспрессию mta1 в человеческом GC и его значимость для клинико-патологическими факторами и выживаемости у больных ГЦ.

Материалы и методы

Этика Заявление
<р> исследование было одобрено Комитетом по этике PUMCH, китайской академии медицинских наук и Пекинского объединенного медицинского колледжа, Пекин, Китай по письменное информированное согласие было получено от каждого пациента.

Пациенты и образцы
<р> GC ткани и совпадающая смежных образцов неопухолевой ткани были получены из 160 последовательных пациентов, перенесших хирургическую резекцию первичной GC Пекинского объединенного медицинского колледжа больницы (PUMCH) в период с января 2002 года по декабрь 2006 ни один из пациентов не получали неоадъювантной химиотерапии или лучевой терапии. Данные выживаемости были получены на основе записей обоих пациентов и телефонного наблюдения. Средняя продолжительность наблюдения составила 53 месяцев (диапазон 1-113 месяцев). Еще две пары свежих тканей GC и нераковых тканей желудка слизистой оболочки были получены у пациентов, перенесших хирургическую резекцию для слабо дифференцированной аденокарциномы желудка при PUMCH в 2014 г.
<р> Мы определили лимфоваскулярная вторжение как присутствие клеток эмболии опухоли в пространствах окруженный четко визуализируется эндотелиальной выстилки на периферии опухолевых участков. [12, 13] Пациенты были поставлены в соответствии с 7-е издание классификации AJCC TNM для рака желудка. [14] Лорен histotype была разделена на кишечный и диффузного смешанный тип категории. [15]

культура клеток
<р> Пять типов линий человека GC клеток были получены из клеточного центра Шанхая институтом биологических наук (AGS и MGC803, Шанхай, Китай) и Ячейка центр Института фундаментальных медицинских наук (MKN45, SGC7901 и HGC27, Пекин, Китай). Увековечены слизистой желудка эпителиальных клеток линии GES-1 была получена из Пекина ComWin Biotech Co., Ltd (Пекин, Китай). Все клетки культивировали в среде RPMI 1640 с добавлением 10% эмбриональной телячьей сыворотки (FBS; Life Technologies, Карлсбад, Калифорния, США) при 37 ° C в увлажненной атмосфере воздуха, содержащей 5% CO <суб> 2. Клетки в логарифмической фазе роста были использованы для дальнейших экспериментов.

Нокдаун EIF5A2 или mta1 малыми-интерферирующих РНК (миРНК)
<р> киРНК специфически против EIF5A2 и mta1 [16] и их ненацеливании контроль миРНК (Life Technologies, Карлсбад, Калифорния, США) были химически синтезированы для данного исследования. Последовательности EIF5A2 миРНК были следующими:
: 5'-GGAUCUUAAACUGCCAGAATT-3 ', 5'- UUCUGGCAGUUUAAGAUCCTT-3';: 5'-GGUUCACCUUGUUGGAAUUTT-3 ', 5'- AAUUCCAACAAGGUGAACCTT-3; и: 5'-GCUUCCAGCACUUACCCUATT-3 ', 5'-UAGGGUAAGUGCUGGAAGCTT-3; ненацеливании контроль (NC1) миРНК: 5'-UUC UCC GAA ГЕ GUC ACG УТТ-3 '; 5'-ACG ОГВ САС ГУУ CGG AGA АТТ-3 '). В mta1 миРНК последовательности (Target 2 миРНК, Т2-миРНК) были: 5'-GCUGAGAGCAAGUUAAAGCdTdT-3 ', 5'-GCUUUAACUUGCUCUCAGCdTdT-3') и FAM-меченных миРНК (AM4620) был использован в качестве ненацеливании контроля миРНК (НС2 ).
<р> Через двадцать четыре часа после нанесения покрытия в шести-луночные планшеты, GC клетки трансфицировали 100pmol EIF5A2-миРНК, mta1-миРНК или контроля миРНК с использованием Липофектамин 2000 реагента для трансфекции (Life Technologies, Карлсбад, Калифорния, США ) в соответствии с инструкциями изготовителя. Клетки собирали для вестерн-блоттинга через 48 ч после трансфекции.

строительство плазмидных и временная трансфекция
<р> выражение EIF5A2 вектор (pIRES2-EGFP-EIF5A2) был синтезирован Life Technologies. Клетки трансфицировали pIRES2-EGFP-EIF5A2 или контрольной плазмиды с использованием Липофектамина 2000 (Life Technologies) в соответствии с инструкциями изготовителя.

в режиме реального времени количественный RT-PCR
<р> Общую РНК выделяли с использованием TRIzol Реагент (Life Technologies) в соответствии с протоколом производителя. ПЦР проводили с использованием последовательностей для EIF5A2: вперед: 5'- AACTGCCAGAAGGTGAACTAGG-3 '; обратный: 5'- GTTTCCGTTTATTTGCAGGGT-3 'и последовательности для mta1: вперед: 5'-CCGGGCCTGCGAGAGCTGTTACAC-3'; обратный: 5'-CACGGCTTCCAGCGGCTTGCGTAC-3 '. ПЦР проводили с использованием UltraSYBR смеси (CWbio.Co.Ltd) в соответствии с протоколом производителя. Обратную транскрипцию проводили с использованием набора PrimeScript RT Master Mix (Takara Biotechnology Co. Ltd., Далянь, Китай). КДНК-продукты подвергали ПЦР в реальном времени с использованием набора SYBR Премикс Ex Taq II (Takara Biotechnology Co. Ltd.). ПЦР в реальном времени проводили в системе StepOnePlus ПЦР в реальном времени (Applied Biosystems, Carlsbad, CA) с использованием следующей программе: 95 ° С в течение 10 минут, затем 40 циклов при 95 ° С в течение 15 секунд, и 60 ° C в течение 1 минуты. GAPDH
мРНК в каждом образце определяли количественно в качестве эндогенного контроля.

вестерн-блоттинга
<р> Концентрация белка количественно определяли с использованием набора для анализа ВСА белка (Thermo Scientific Pierce). Натрий додецил сульфат-электрофорез в полиакриламидном геле (SDS-PAGE), использовали для разделения лизаты клеток. Белки переносили на ПВДФ-мембраны и блокировали трис-буферном солевом растворе и 0,1% Tween 20 (TBST), содержащем 5% бычьего сывороточного альбумина, а затем инкубировали со следующими первичными антителами при 4 ° С в течение ночи: кролика против EIF5A2 или -C- MYC (1: 1000; Epitomics, США, КаталогȪ9-1 или 1472-1), кроличье анти-mta1, -E-кадгерин или -vimentin (1: 1000; Cell Signaling, США, Каталогȴ7, 3195 или 5741 ), или мышиное анти-GAPDH (1: 1000; Santa Cruz, каталог # SC-25778). Мембраны промывали три раза TBST и инкубируют с пероксидазой хрена (HRP) анти-кроличий или анти-мышиные вторичные антитела (1: 3000; Санта Круз, США, каталожный N SC-2004 или SC-2005) в течение 1 ч при комнатной температуре. Белковые полосы визуализировали с помощью ECL реагентов обнаружения (Pierce, США). Относительные уровни экспрессии белка были нормированы на GAPDH.

Пролиферация клеток для анализа
<р> Распространение HGC27 и MKN45 клеток исследовали с помощью Cell Counting Kit-8 (ССК-8) (DOJINDO, Япония ) в соответствии с инструкциями изготовителя. Если коротко, то через 24 ч после трансфекции миРНК или плазмиды, клетки высевают при плотности 1 × 10 4 клеток /лунку в 96-луночные планшеты и культивировали в течение 0, 24, 48 и 72 ч. Затем, в различные моменты времени 10 мкл ССК-8 раствор добавляли в каждую лунку и инкубировали в течение 2 ч. Оптическую плотность считывали при 450 нм на планшет-ридере.

Transwell анализы
<р> Миграционная и инвазивная способность GC клеток детектировали с использованием 24-луночного Transwell клеточных культур камеры (8.0μm размер пор, Costar , Кембридж, Массачусетс, США) в соответствии с инструкциями изготовителя. Для анализа клеточной инвазии, вставка мембраны, предварительно покрытые Матригель (BD, San Diego, CA, USA). Для миграции клеток анализа, не использовали Матригель. Через 24 ч после трансфекции клетки высевали при соответствующей плотности (HGC27, 5 × 10 5 /мл; MKN45, 1 × 10 7 /мл) в верхней камере и культивируют в OPTI-MEM (Gibco, США) без FBS в течение еще 24 ч. Клетки давали возможность мигрировать в направлении RPMI 1640, содержащей 20% FBS, в нижней камере. В немигрирующие клетки на верхней поверхности мембраны были удалены с наконечником хлопка, а также мигрирующие клетки, прикрепленные к нижней поверхности мембраны, фиксировали 4% параформальдегидом и окрашивают H &Amp; E. Число вторгшихся клеток подсчитывали в пяти произвольно выбранных полях под микроскопом.

Иммуногистохимия (IHC) окрашивание и оценка
<р> IHC Окрашивание проводили на 5 мкм-срезы толщиной от залитых парафином образцов. Моноклональные кроличьи антитела против человеческого антитела EIF5A2 (Epitomics, США, каталогȪ9-1), кролика против человеческого антитела mta1 (Cell Signaling, США, каталогȴ7) и PV-6000 Система обнаружения Полимер (ZSBG-БИО, Китай) были используется для окрашивания в соответствии с инструкциями изготовителя. Короче говоря, слайды с парафиновых срезах были депарафинировали с ксилолом и регидратации с этанолом. Активность эндогенной пероксидазы блокировали 3% перекиси водорода в течение 10 мин. Для поиска антигена, слайды были микроволновой обработке и кипятили в 0,01М цитратном буфере (рН 6,0) в течение 10 мин, а затем инкубировали с 0,1% трипсина при 37 ° С в течение 5 мин. Срезы инкубировали с моноклональными кроличьей античеловеческой EIF5A2 или mta1 антителом (разведение 1: 100) в течение 1,5 ч при 37 ° С в увлажненной камере. В качестве отрицательного контроля для окрашивания, первичное антитело было заменено неспецифической кролика IgG. Два независимых патологи оценивали иммуногистохимическое окрашивание EIF5A2 и mta1. Полуколичественное метод подсчета очков был использован со ссылкой на предыдущем исследовании. [7]

Статистический анализ
<р> Все анализы были выполнены с использованием программного обеспечения SPSS 12.0 (Чикаго, Иллинойс, США). Тест McNemar был использован для сравнения EIF5A2 или mta1 окрашивания в человеческом GC и прилегающих к нему образцов неопухолевыми. Тест хи-квадрат был использован для сравнения различий между категориальными переменными, в то время как в паре, два Стьюдента т
-тестов были использованы для сравнения различий между категориальными переменными. Корреляция между EIF5A2 и mta1 анализировали, используя ранг критерия Спирмена. Для однофакторного анализа выживаемости, кривые выживаемости были построены с использованием метода Каплана-Мейера и сравнивали с помощью теста лог-ранга. Модели пропорциональных рисков Кокса с многомерного анализа был использован для изучения независимых прогностических факторов. Все значения P
были двусторонними, и P
значения &л; 0,05 считались статистически значимыми. Все эксперименты проводились по крайней мере, в технических и биологических трехкратном повторе.

Результаты

EIF5A2 Expression в GC клетках и тканях и валидации вмешательства
<р> Мы исследовали экспрессию EIF5A2 в пять GC клеточных линий и увековечил слизистой желудка эпителиальных клеток линии GES-1 в пробирке
обоими QRT-PCR (рис. 1А) и вестерн-блоттинга (рис. 1В). EIF5A2 белка в тканях человека GC был выше, чем у спаренных отдаленных неопухолевых тканей (рис. 1в). Из-за высокого эндогенного уровня экспрессии EIF5A2 и относительно высокой эффективности трансфекции в HGC27, мы выбрали эту клеточную линию для анализа RNAi, и выбраны MKN45 клетки для EIF5A2 экспериментов повышающую регуляцию из-за его относительно низкой экспрессии EIF5A2 и высокую эффективность трансфекции.
<р> Все три миРНК может эффективно подавлять экспрессию EIF5A2 в HGC27 клетках (рис. 1D, E). Мы использовали миРНК
как EIF5A2-целевой миРНК (T1-миРНК) в последующих экспериментах. EIF5A2 экспрессия существенно усиливает свою активность путем временной трансфекции EIF5A2 плазмид в MKN45 клетках (рис. 1F, G). T2-миРНК может эффективно подавлять экспрессию mta1 в HGC27 клетках (рис. 1 H, I).

EIF5A2 или выражение mta1 уровни влияют на агрессивность GC клеток в пробирке
<р> нокдаун EIF5A2 по Т1 миРНК пролиферации клеток значительно ингибировали (рис. 2А), миграция и инвазия (рис. 2В) в HGC27 клетках по сравнению с таковыми из родительских клеток. Положительная регуляция EIF5A2 путем экспрессии плазмиды EIF5A2 способствовало увеличение пролиферации (рис. 2С), миграция и инвазия (рис. 2D) клеток MKN45. Нокдаун mta1 Т2-миРНК пролиферации клеток значительно ингибирует (рис. 2Е), миграция и инвазия (рис. 2F) в HGC27 клетках по сравнению с таковыми из родительских клеток.
Выражение

Возможные ген-мишень после нокдауна или EIF5A2 сверхэкспрессия
<р> После нокдауна EIF5A2 в HGC27 клетках, уровни эпителиальной маркера Е-кадгерина были позитивно регулируется, в то время как уровни мезенхимального маркера виментину были подавляются и сопровождается пролиферацией, связанных с белками циклин D1 и циклин D3 и метастазирование -associated C-MYC и mta1 деактивация (рис. 3А). В отличие от этого, после того, как EIF5A2 избыточной экспрессии в клетках MKN45, экспрессия Е-кадгерина была подавлена, в то время как уровень виментину был повышающей регуляции и сопровождается циклин D1, циклин D3, C-Мус и mta1 повышающей регуляцией (рис. 3, б). Нокдаун или избыточная экспрессия EIF5A2 не оказало существенного влияния на экспрессию MMP9 в HGC27 и MKN45 клеток (рис. 3а, б).

Ассоциация EIF5A2 и выражение mta1 с клинико-патологическими особенностями у больных с GC

Положительные сигналы EIF5A2 были преимущественно расположены в цитоплазме и ядре опухолевых клеток, в то время как mta1 сигналы были в основном локализованы в ядре опухолевых клеток (рис. 4). Мы определили значения иммунным 0-3 в качестве нормального уровня экспрессии EIF5A2 или mta1, в то время как Иммуноокрашивание значения 4-12 была определена как избыточная экспрессия EIF5A2 или mta1. EIF5A2 избыточная экспрессия была обнаружена в 75 образцах опухолей, по сравнению с только семь из 160 подобранных прилегающих тканей неопухолевой слизистых оболочек ( P
&л; 0,001). Представитель IHC окрашивание EIF5A2 в moderately- или слабо дифференцированной аденокарциномы желудка, инвазия сосуд опухолевых клеток и тканей неопухолевой показана на рис. 4А, В, С и D, соответственно. Из 160 проанализированных случаев, 70 (43,75%) были положительными для mta1, Статистический анализ паттернов экспрессии показал, что существует положительная корреляция между EIF5A2 и выражением mta1 (г = 0,510, P
&л; 0,001) , Типичные окрашивания изображения для избыточной экспрессии EIF5A2 и mta1 в аденокарциномы желудка было показано на рис. 4E и 4F.
<Р> Как показано в таблице 1, как EIF5A2 и mta1 избыточная экспрессия положительно коррелируют с более продвинутой стадии (рТ P
= 0,018 и P
= 0,042) , П.Н. этап ( P
= 0,037 и P
= 0,020) и положительный результат лимфоваскулярная вторжения ( P
= 0,016 и P
= 0,044), в то время как они не были связаны с другими клинико-патологическими особенностями.

Увеличение EIF5A2 или выражение mta1 коррелирует с низкой выживаемостью пациентов GC
<р> в последнем наблюдении, 75 из 160 пациентов умерли. Из них 73 человек умерли от рецидива опухоли. Анализ Каплана-Мейера показал, что и 5-летняя общая выживаемость (OS) и безрецидивная выживаемость (БРВ) для сверхэкспрессии группы EIF5A2 были короче, чем для нормальной экспрессии EIF5A2 группы ( P
&л; 0,001 и P
= 0,001, рис. 4 G, H). Последовательно, пациенты с mta1 оверэкспрессии отображается плохой прогноз для ОС и DFS ( P
&л; 0,001 и P
= 0,001)
<р> Переменные с значение в однофакторного анализа путем. методы Каплана-Мейера были включены в ходе многофакторного анализа Cox регрессии. Как показано в таблице S1 и S2 таблице, многофакторный анализ выявил, что избыточная экспрессия EIF5A2 был независимым фактором, влияющим как ОС (относительный риск 1,831, 95% ДИ от 1,135 до 2.857, P
= 0,012, S1 Таблица) и ДФС (относительный риск 1,880, 95% CI1.177 до 3,002, P
= 0,008, S2 Таблица) пациентов, получающих лечебную резекцию для GC. Однако избыточная экспрессия mta1 не производит независимое прогностическое значение для OS и ДПП в многомерном анализе.

Обсуждение
<р> эукариот фактор инициации 5A 2 (EIF5A2) локализован в хромосомной области часто отмечается для хромосомной нестабильности в GC и многих других видов рака, 3q. [17-20] EIF5A2, в качестве одного из всего двух изоформ семейства EIF5A, подтверждается как онкогенного белка, а также может быть важным биомаркером для прогноза и терапевтической мишени многие виды опухолей человека. [21] Несмотря на то, предыдущее исследование проверило EIF5A2
экспрессии генов в первичном GC, данное исследование дает первое доказательство клинической значимости экспрессии EIF5A2 в человеческом GC и его возможной роли в регулирование GC клетки агрессивностью. [22]
<р> Сначала мы проводили EIF5A2 нокдаун и избыточная экспрессия эксперименты в пробирке
. Результаты показали, что подавление EIF5A2 в HGC27 клеток приводило к значительному снижению клеточной пролиферации, миграции и инвазии, в то время как его повышающая регуляция в клетках MKN45 привело наоборот. Эти результаты согласуются с предыдущими выводами, содержащимися в других опухолей. [8, 10, 23] Мы также обнаружили, что mta1 нокдаун в HGC27 клетках значительно ингибирует пролиферации клеток, миграции и вторжения. Но механизм, с помощью которого EIF5A2 усиливает клеточную агрессивностью GC до сих пор неизвестна.
<Р> Таким образом, мы провели дальнейшие исследования возможных мишеней EIF5A2 в пробирке
. Наши результаты показали, что EIF5A2 положительно регулируется циклин D1 и циклин D3, который играет важную роль в пролиферации GC клеток и регуляции клеточного цикла. [24, 25] Все эти результаты подтвердили гипотезу о том, что EIF5A2 способствует пролиферации GC клеток с помощью повышающей регуляции циклин D1 и циклин D3. В то же время, предыдущие исследования показали, что EIF5A2 способствует проникновению клеток /метастаз и эпителиально-мезенхимальных перехода (EMT) через активацию mta1 /C-Myc при колоректальном раке. [8] mta1 и с-Мус, а также программы ЕМТ, также участвует в регуляции ГК метастазирования. [26-28] поэтому мы исследовали mta1, C-MYC и два маркера EMT-ассоциированных, Е-кадгерин и виментин. Проведенные нами исследования показали, что EIF5A2 положительно регулируется mta1, C-MYC и виментин и отрицательно регулируется Е-кадгерин. Все эти результаты свидетельствуют о том, что EIF5A2 может регулировать клеточную миграцию и инвазию путем регулирования mta1, C-MYC и EMT в пробирке
, но необходимы дальнейшие исследования для изучения точных механизмов.
<Р> Результаты настоящего исследования также показали, что EIF5A2 белка положительно коррелируют со стадией пТл и П.Н. стадии. Аналогичные результаты наблюдались также при раке яичников человека. [5] Эти результаты свидетельствуют о том, что EIF5A2 могут быть связаны с опухолевой инвазии и метастазов в лимфатических узлах в некоторых типах рака человека, в том числе GC. Более интересно, в данном исследовании, EIF5A2 суперэкспрессия был также найден в вторжение раковых клеток (нашествие сосуда), а избыточная экспрессия белка EIF5A2 в первичной ткани GC коррелировала с наличием лимфоваскулярной вторжения. В соответствии с результатами, полученными в предыдущих исследованиях других злокачественных опухолей человека, включая эпителиальных опухолей яичников, рак мочевого пузыря, рак легкого, и колоректального рака, избыточная экспрессия EIF5A2 в текущем исследовании коррелировало с плохой выживаемостью пациентов с GC. [5, 8, 29] Кроме того, многомерный анализ показал, что EIF5A2 белок является независимым прогностическим фактором для бедных выживаемости пациентов, перенесших операцию по GC.
<р> mta1, как метастазирование-ассоциированный ген-кандидат, было продемонстрировано, чтобы играть важную роль в клетку рака желудка агрессивностью. [27] Гиперэкспрессия mta1 значительно связан с плохим прогнозом у больных pN0 GC. [30] в настоящее время исследование показало, что экспрессия EIF5A2 положительно коррелирует с экспрессией mta1 в тканях человека GC. Иммуногистохимическое анализ объединены в пробирке исследования показали, что EIF5A2-mta1 ось может играть важную роль в желудочном агрессивностью рака.
<Р> Таким образом, результаты данного исследования показали, что избыточная экспрессия EIF5A2 была тесно связана с GC клеточную пролиферацию, миграцию и инвазию с помощью метастазирования-ассоциированных белков mta1. В то же время, EIF5A2 может иметь большое значение в регуляции ЕМТ в GC. Сверхэкспрессия EIF5A2 может быть независимым фактором прогнозирования плохое выживание и привлекательную терапевтическую мишень для GC, но необходимы дальнейшие исследования.

Поддержка Информация
S1 Таблица. Анализ факторов, связанных с общей выживаемости (OS)
DOI:. 10,1371 /journal.pone.0119229.s001
(DOC)
S2 Таблица. Анализ факторов, связанных с выживаемости без признаков заболевания (DFS)
DOI:. 10,1371 /journal.pone.0119229.s002
(DOC)

Выражение признательности
<р> Авторы хотели бы поблагодарить г-на Де-Tian Wang, г-жа Ю. Фэн Ло и профессор Пэй Гу для их технической поддержки.

• PLoS ONE: Влияние внутриопухолевой Expression уровней фторпиримидиновые метаболизирующих ферментов на результаты ле…
• PLoS ONE: Аберрантная CCR4 Expression участвующему в опухолевой Вторжение лимфоузла негативный рак желудка человека