Stomach Health > Желудок Здоровье >  > Gastric Cancer > Рак желудка

PLoS ONE: Моделирование Discovery Swansons Литературно-Based: Anandamide Лечение Тормозит рост клеток рака желудка в пробирке и в Silico

Абстрактные
<р> Литература на основе обнаружения фокусировки Swanson на Воскрешая ранее опубликованные, но пренебрегли знания. В данном исследовании мы предлагаем двухступенчатую модель процесса обнаружения и генерировать гипотезу между анандамидом и рака желудка. Кроме того, потенциал соотношение было подтверждено последующей экспериментирования. Лечение анандамид привело к перераспределению клеточного цикла клеток рака желудка. Самое главное, что изменение клеточного цикла опосредуется некоторых генов от В-терминах закрытого открытия, что указывает на потенциальную роль B-членов. литературы на основе обнаружения Swanson не только сопоставляет данные для возможных взаимодействий, но и обеспечивает возможность наблюдать больший фон позади этих прямых связей и является бесценным инструментом для исследователей открытие
<р> Образец цитирования:. Dong W, Y Лю, Чжу W, Моу Q, Ван J, Ху Y (2014) Моделирование Литературно-Based Discovery Swanson в: Anandamide Лечение Тормозит рост клеток рака желудка In Vitro
и В Silico
. PLoS ONE 9 (6): e100436. DOI: 10.1371 /journal.pone.0100436
<р> Редактор: Valli De Re, Centro ди Riferimento Oncologico, Национальный институт рака IRCCS, Италия
<р> Поступило: 12 января 2014 года; Принято: 25 мая 2014 года; Опубликовано: 20 июня 2014
<р> Copyright: © 2014 Dong и др. Это статья с открытым доступом распространяется в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution, которая позволяет неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе, при условии, что оригинальный автор и источник кредитуются

Финансирование:. Это исследование финансировалась китайским Гериатрической Oncology Society (программа онкологической, гранты CGOS-03-2013-1-1-00600). Доноры не играет никакой роли в дизайн исследования, сбора и анализа данных, решение о публикации или подготовки рукописи
<р> Конкурирующие интересы:.. Авторы заявили, что не существует никаких конкурирующих интересов

Введение
<р> быстрое развитие науки привело к экспоненциальному росту в нашей базе знаний. Следовательно, это является весьма сложной задачей для медицинских исследователей, чтобы получить и включить самую актуальную, обновленную информацию от ежедневной потоп опубликованной литературы. Например, общее количество публикаций, индексированных по поисковому запросу «рак желудка» увеличилось более чем в 4 раза в 2012 году по сравнению с 1980 г. Часто наиболее соответствующая информация, как правило, следует упускать из виду или не учитываются в текущих исследованиях [1]. Кроме того, с увеличением специализации в области науки и техники, существуют большие трудности в обмене информацией кросс-функционально, как и научное понимание становится более целенаправленной и менее диверсифицирована. Тем не менее, значимые отношения должны существовать между различными областями исследования. Таким образом, это более важно для определения проигнорировано знаний, чем сама информация роста [2].
<Р> Swanson (1990) разработан и внедрен новый инструмент для добычи существующей базы знаний для неучтенных или заниженными отношений, и воскресить ранее опубликованные, но пренебрегли гипотезы, процесс, известный как литературы на основе открытий [3]. Этот процесс функционирует как способ соединения 2, казалось бы, не имеющие отношения выводов, не указано иное в таком виде: если "А связана с Б" и "В относится к С", то гипотеза, что "вызывает C" настоятельно предложено [4 ]. Хотя такой подход не дает убедительных доказательств, открытие, само по себе, очень полезны в выявлении ранее неизвестных отношений [5]. Кроме того, он может помочь следователям получить доступ к контексту и мое знание, которое не может быть раскрыта с использованием традиционного поиска.
<Р> В настоящем исследовании мы провели 2-этапный подход к методологии моделирования обнаружения литературы на основе Swanson в 2 поля биологических исследований литературы, которые обычно не библиографически связанные: рак желудка и психологии. Рак желудка является одним из наиболее часто диагностируемых рака, второй основной причиной рака, связанных смерти во всем мире, и серьезной проблемой общественного здравоохранения [6]. Предыдущие исследования также показали, что различные психологические факторы могут оказать значительное влияние на физические заболевания. Тем не менее, связь между раком желудка и психологии ранее было пренебречь. Таким образом, эти 2 направления исследований были выбраны с целью найти заброшенный общую связь.
<Р> Процесс обнаружения 2 шага породило гипотезу о корреляции между анандамидом и раком желудка и при условии, возможную общую молекулярную сеть, которая может опосредовать эффекты. Гипотеза была затем экспериментально. был найден Anandamide для ингибирования роста в 4-желудочных линий раковых клеток, в том числе BGC823, SGC7901, AGS и N87. Проточная цитометрия данные показали, что присутствие анандамид индуцированного G2 остановки клеточного цикла /M в AGS и N87 клеток. Кроме того, мы подтвердили, что анандамид может действовать, чтобы регулировать клеточного цикла связанных генов, в том числе CHEK1, CDKN1A, CDKN2A, полученного в процессе закрытого обнаружения. Итак, эти данные указывают на то, что анандамид влияет на распределение клеточного цикла клеток рака желудка путем регулирования регуляторов цикла B-термины фотоэлемента, гипотеза, что было экспериментально подтверждено в этом исследовании, тем самым обеспечивая исследователей с альтернативным зрения относительно роли анандамидом. Используя этот подход, мы смогли успешно собрать воедино ранее скрытую связь между 2 несопоставимых полей и добавить в общую базу знаний.

Методы и материалы

Статьи в базе данных MEDLINE
<р> Национальные институты здравоохранения (NIH) база данных MEDLINE полету АМС /PubMed содержит ссылки на статьи, опубликованные в более чем 5500 ведущих журналов. Для того, чтобы получить наиболее полную серию статей для "рак желудка," инклюзивной серии строк поиска (новообразование, живот или желудочные новообразование или Неоплазмы, живот или Опухоли, язва желудка или желудка Опухоли или Желудочный Новообразование или Новообразование, желудка или рак желудка или Рак желудка или Рак желудка или рак желудка; или Раки; желудка или рака желудка или рака желудка или рака, желудка или раки, а также язва желудка или рак желудка или Желудок Опухоли) был использован для получения соответствующих статей. Этот поиск получен 86,536 записей (по состоянию на 27 октября 2011 года), в который вошли все публикации, введенные в эту базу данных. Кроме того, чтобы получить наиболее полную серию статей для "психологии," инклюзивный серия строк поиска (психологии или побочные эффекты, психологический или психологический побочные эффекты или психологический побочный эффект или побочный эффект; психологический или психосоциальные факторы или фактор, психосоциальной или факторы; психосоциальной или психосоциальной фактор или психологические факторы или факторы; Психологические или фактор, и психологические или психологический фактор или психологи или психолог) получены 911,793 записей. Все эти публикации были сохранены в формате Medline для сбора медицинского предметных терминов заголовков (MeSH).

термины MeSH
<р> MeSH это контролируемый словарь тезаурус Национальной медицинской библиотеки. MeSH состоит из множества терминов, называемых дескрипторами, которые расположены в обоих алфавитных и иерархических структур, поэтому, термины MeSH может идентифицировать основное внимание публикации, и могут быть использованы для индексации Medline записей. В этом исследовании, эти дескрипторы были отфильтрованы с помощью сетчатой ​​stoplist из 5,569 дескрипторами, специфичные для предметных областей исследования.

Stoplists
<р> а stoplist список слов, которые должны быть исключены, либо потому что они являются слишком широкими или не имеют смысла в качестве мишеней для поиска. Stoplists может включать в себя столько, сколько несколько сотен функциональных слов, которые не подпадают под ориентированными. В этом исследовании, длинный stoplist из 5,569 слов был составлен, чтобы фильтровать термины MeSH. Использование MeSH категории, предоставляемые базой данных Medline и исследователя суждения, мы составили списки стоп-терминов, с категориями MeSH верхнего уровня представлены в таблице 1. Более подробную информацию о MeSH категориях можно найти по адресу: //www.nlm.nih .gov /сетка /2012 /mesh_bro-Wser /MeSHtree.Dhtml.

Открытый процесс обнаружения
<р> процесс открытое открытие начинается с научной проблемы и выработки гипотезы. В этом исследовании поля рака желудка и психологии были выбраны для поиска скрытых отношений. Мы извлекаться публикации, относящиеся к раку желудка и психологии, как было описано выше. Затем профиль MeSH был построен для инициирования А или В тему. Мы построили тему профилей путем определения соответствующего подмножества характерных терминов из выделенного текста. Условия были извлечены из документов и оценивали их относительной значимости в качестве дескрипторов темы. В этом исследовании, наши профили были взвешены векторы терминов MeSH, как показано ниже на тему X <суб> я:

(1) где т <к югу> J представляет собой термин MeSH, ш <к югу> I , J представляет свой вес, в общей сложности п членов в сеточку словаря [7].
<р> После того, как были построены темы а и в, окончательное сочетание с-профилей был построен с использованием Java-апплет, который мы разработан. В этой процедуре, термины, появляющиеся в обоих профилях А и В были устранены, вместе с терминами, которые были только присутствовать в профиль. И, наконец, термины MeSH, которые присутствовали только в профиле B и редко появлялся в виде профиля были выбраны и называется профилем C. Термины в профиле C показал тесную связь с темы B и мало или вообще нет ссылок на тему А. Другими словами, эти понятия оставались тесно связаны с «психологией», но редко сообщалось вместе с "рак желудка". Тем не менее, ранее незарегистрированного соединения могут существовать, которые могут быть обнаружены с помощью последующей процедуры

Закрытый процесс обнаружения
<р> процесс закрытого открытие осуществлен с использованием веб-модель Эроусмит (HTTP:. //arrowsmith.psych. uic.edu/arrowsmith_uic/index.html, университет штата Иллинойс, Чикаго, кафедры психиатрии), которая предназначена для оказания помощи в понимании и признании скрытых связей между компонентами а и с в литературе [8], [9]. Мы инициировали процесс открытия закрытого с первых 2 поисков Medline с использованием обработки Эроусмит: тематического поиска профиля и C термин поиска литературы. Далее программа Эроусмит генерируется список терминов, которые можно найти в названиях обеих А и С литературе извлечений. Эти слова были проанализированы для генерации B-списка, используя третий этап фильтрации, с помощью:

  • выбора определенных семантические категории (деятельность и Amp; поведению; Anatomy; Генов- &Amp; молекулярные последовательности, и гена &Amp; Белковые имен; Химические вещества &Amp; Препараты; физиология);
  • удаления B-члены, которые появились менее чем в 5 раз в любой литературе,
  • сохраняя только B-термины, которые впервые появились в течение последних 10 лет; <бр>
  • удаления B-термины, имеющие литература когезии оценки менее 0,1.

    <р> Наконец, мы получили наш список B-концепций, а затем рассматривается соответствующие АВ и ВС литература извлечений.

    культура клеток
    <р> клеточные линии, используемые в настоящем исследовании, были желудочные клеточные линии рака. Клеточные линии N87 и AGS были получены из Американской коллекции типовых культур (АТСС, Manassas, VA, USA). клеточная линия AGS была получена из фрагментов опухоли резекцию от пациента, который был 54-летний Кавказский женщин и не получал никакой предшествующей терапии. клеточная линия N87 была получена из метастаз печени хорошо дифференцированной карциномы желудка кавказского самца взятой до цитотоксической терапии. AGS и N87 клетки культивировали в среде Игла в модификации Игла (DMEM; Invitrogen, Carlsbad, CA, USA), дополненной 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS). Клеточные линии BGC823 и SGC7901 были созданы в Китае. Клеточная линия BGC823 была создана в 1984 году через 60 пассажей культивирования клеток в течение 2-х лет от хирургического образца больного раком желудка, который был диагностирован как низко дифференцированной аденокарциномы. клеточная линия SGC7901 была основана в 1979 году и происходит от лимфатической метастаз аденокарциномы желудка из 56-летней китайской женщиной. Клетки BGC823and SGC7901 культивировали в модифицированной среде Дульбекко Игла (DMEM; Invitrogen, Carlsbad, CA, USA), дополненной 5% фетальной бычьей сыворотки (FBS); Все клеточные линии поддерживали при 37 ° С в 5% CO <югу> 2.

    Цитометрический анализ состояния клеточного цикла и апоптоза

    AGS и клетки N87 (1 × 10 5) были обычно собирают путем усвоением трипсина после обработки анандамидом (Sigma, A0580), промывали PBS и фиксировали в холодном 75% -ном этаноле при 4 ° с в течение ночи. После окрашивания раствором пропидийиодидом (PI) в течение 30 мин, анализ клеточного цикла проводили с помощью сортировки клеток с возбуждением флуоресценции (FACS), чтобы определить процент и распределение клеток в G1, S и G2 /M фазах.
    <р> для обнаружения фосфатидилсерина экстернализации, Трипсинизированные клетки были дважды окрашивали флуоресцеинизотиоцианатом (FITC) -conjugated аннексина V (20 мкг /мл) и PI (50 мкг /мл) в соответствии с протоколом производителя (Biosea; Nelson, Новая Зеландия ). Десять тысяч клеток собирали и анализировали с помощью FACSorter и профили клеточного цикла были проанализированы с помощью Cell Quest Software (Becton-Dickinson, Franklin Lakes, NJ, USA).

    МТТ
    <р> BGC823, SGC7901, AGS и N87 клетки высевали в 96-луночные культуральные планшеты и инкубировали с анандамидом при различных концентрациях с последующим 3- (4,5-диметилтиазол-2-ил) -2,5-d-iphenyltetrazolium бромида (МТТ) на 24, 48, 72 и 96 ч. После 4-часовой инкубации при 37 ° С в атмосфере 5% СО <суб> 2, добавляли 200 мкл диметилсульфоксида (ДМСО) для солюбилизации формазанового продукта. Поглощение при 570 нм определяли с использованием микропланшет-ридер. (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, USA)

    экспрессии генов профилирование анализ
    <р> 2 разные RT2 Profiler ПЦР Массивы (SA Biosciences , QIAGEN) были использованы для анализа уровней экспрессии 84 генов, участвующих в регуляции клеточного цикла (массив цикла клетки человеческого организма, PAHS-020) в AGS клетках, обработанных анандамидом или транспортного средства. Клетки собирали через 24 ч после обработки анандамида и тотальную РНК с использованием набора RNeasy экстракции Plus (Qiagen). Синтетическая кДНК использовали в качестве матрицы для проведения количественной полимеразной цепной реакции (ПЦР-анализ). RT2 профилировщику PCR программного обеспечения для анализа массивов данных (v3.5) был использован для анализа данных массивов ПЦР. Мы выбрали GAPDH и ACTB в качестве эталонных генов. Гены с выражением сложите изменения между образцами размером более 2 выбраны в качестве дифференциальных генов.

    Вестерн-блот анализ
    <р> Белковые лизаты были разделены на 12% электрофореза Трис-глицина в полиакриламидном геле и переносили на поливинилиденфторид ( PVDF) мембраны (GE Healthcare, Литтл Чалфонт, Великобритания). Мембраны инкубировали с мышиными моноклональными антителами против человеческого Chk1, п-Chk1 (Abcam, Кембридж, Великобритания), Cdc25A, CyclinB1 (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, США), а затем с пероксидазой хрена (HRP), меченным анти-козел -Мышь IgG (PTGLab; Чикаго, Иллинойс, США). β-актина (Sigma Chemicals, Сент-Луис, штат Миссури, США) использовали в качестве контрольного белка нагрузки. Конъюгат HRP был обнаружен с помощью chemioluminescence ECL набора (Amersham) и autofluorography. Интенсивность белка определяли количественно, используя программное обеспечение LANE 1D Analyzer (Sage Creation, Пекин, Китай).

    Статистический анализ
    <р> Т-тест Стьюдента был использован для анализа достоверности различий между двумя группами данные. P <ет> &л;.
    0,05 рассматривалось как статистически значимое


    Результаты

    Приобретение MeSH терминов для рака желудка и психологии

    В процессе открытого открытия, первый шаг должен был извлечь термины MeSH из литературы извлечений. Мы создали 12,001 термины MeSH (профиль A), используя текст для "рака желудка." Эти MeSH термины, связанные аспекты рака желудка, которые включают диагностику, лечение, лекарства, выживание, стадия рака, функции клетки, гены, белки и некоторые химические вещества как сложные эфиры. Мы создали 9,635 термины MeSH (профиль B), используя текст для "психологии", которые тесно связаны с социальной средой, поведение, личность, чувства, виды заболеваний, терапии, лекарственные препараты, химические вещества и т.д. В первую десятку MeSH термины из каждая тема отображаются в таблице 2.

    Открытие анандамидом в профиле C (BA)
    <р> с использованием вышеупомянутого Java-апплет, мы исключили термины, входящие в профиль из профиля B, в результате чего только члены, присутствующие в профиле B, но никогда не появляется в профиль. Этот новый набор был идентифицирован как "профиль C." Условия в профиле C были зарегистрированы, чтобы иметь более 1 отношения с психологией, но мало или совсем нет публикаций одновременно не ссылаясь на психологию как и рак желудка. Тем не менее, ранее отраженных соединения могут существовать, которые не были обнаружены, или были проигнорированы.

    Для дальнейшего изучения потенциальных взаимосвязей между этими полями, мы классифицировали условия профиля C на 6 категорий, в том числе поведение, органа и ткани, настроения, болезни, лекарственные препараты и химические вещества, а также другие. Каждый член обладает своей собственной частотой; термины, имеющие более высокие частоты и репрезентативности представлены в таблице 3. Наконец, мы выбрали 1 термин из категории наркотиков и химического вещества, анандамидом, для дальнейшего изучения. Причины нашего широкого выбора приведены ниже:

  • Термины в категории наркотиков и химических было самым простым в использовании для экспериментальной проверки возможной связи между психологией и раком желудка
  • В категории. наркотиков и химических, тем выше частота анандамидом показали его большую относительную важность.
  • Другие члены с более высокой частотой, такие как диазепам, все хорошо известны, в то время как анандамид является относительно новым веществом.

    Хотя мало исследований было обнаружено исследованием как анандамид и рак желудка вместе [10], [11], наша работа воскресения сосредотачивается на анализе путей или механизмов, которые не могут быть известны.

    Прогнозирование отношений между анандамид желудка и рак
    <р> Наша гипотеза о анандамид и рак желудка был испытан в процессе закрытого обнаружения. Этот процесс был осуществлен с использованием веб-модель Эроусмит; начиная от заболевания рака желудка (А) и вещества анандамида (C), мы искали общих промежуточных B-терминов. В B-лист содержал название слова и фразы (термины), которые появились в литературе как А и С. По мере того как пути найдены между А и С, стало более распространенным, это повысило вероятный справедливость нашей гипотезы. После необходимых вышеупомянутых шагов фильтра, 446 терминов присутствовали на текущем B-списке, ранжированы в соответствии с прогнозируемой релевантности. Далее, мы ограничили эти термины смысловыми категориями Genes &Amp; Молекулярные последовательности и Gene &Amp; Белковые Имена и собранные целевые гены, участвующие в различных сигнальных путей, включая клеточный цикл, апоптоз, воспаление и т.д. (таблица 4). Одновременно сеть путь был построен, чтобы отобразить общую молекулярную регуляторную сеть между раком желудка и анандамида действием. Как видно на рисунке 1, эти гены проявляли высокую зависимость с указанием регулирующих отношения между ними. Для дальнейшего изучения обоснованности этих генов-мишеней, несколько белков /генов были выбраны в качестве примеров для проверки их отношения к раку желудка или анандамидом через Эроусмит СИСТЕМЫ. И, как показано в Таблице 5, группа критических генов, участвующих в нескольких путей, которые связаны как с раком желудка и анандамидом. Все эти ключи подразумевает потенциально скрытую связь между анандамидом и раком желудка, которая заслуживает дальнейшего изучения.

    Обнаружение эффекта анандамидом на клеток рака желудка
    <р> Anandamide, в качестве члена эндоканнабиноидов семья, также известный как N
    -arachidonoylethanolamine или АЕА, было показано, чтобы активировать 2 различных G-белком рецепторов каннабиноидов, типа каннабиноидных рецепторов 1 (СВ1) и типа каннабиноидных рецепторов 2 (CB2) [ ,,,0],12]. Анандамид синтезируют из N-арахидоноил фосфатидилэтаноламина (шейно-затылочной) и его разложение в основном катализируется амид жирной кислоты гидролазы (FAAH) фермента, который катализирует также вниз по течению преобразование анандамидом в этаноламина и арахидоновой кислоты. Структура анандамидом включает в себя функциональные группы амидов, сложных эфиров, простых эфиров и длинноцепочечных полиненасыщенных жирных кислот [13]. Эти соединения обладают "cannabimimetic активность"; Другими словами, они функционируют как "D-9-тетрагидроканнабинол (THC) имитаторов", активный ингредиент конопли. Структурные анандамид акции критических фармакофоров с THC [14] (рис. 2А)
    <р> Для изучения влияния анандамидом на пролиферацию клеток рака желудка, BGC823, SGC7901, AGS и N87 обрабатывали возрастающими концентрациями синтетический анандамид. В дальнейшем распространение этих клеточных линий была обнаружена МТТ. Результаты показали, что анандамид сильно уменьшило скорость пролиферации этих 4-х желудочных линий раковых клеток в зависимости от дозы, со статистически значительным сокращением ( P ≪ 0,01
    ) при 100 мкМ. Кроме того, АГС и линии N87 клеток отображается более чувствительное и резкое уменьшение ( P &л; 0,01
    ) даже при 50 мкМ концентрации (рис 2В). Кроме того, мы исследовали влияние анандамидом при более низких концентрациях на пролиферацию клеток в клетках рака желудка. Как показано на фиг.2С, значительное, зависимое от дозы уменьшение ( P ≪ 0,01
    ) наблюдалась в пролиферации AGS и N87 клеток с ингибированием. Тем не менее, анандамид при более низких концентрациях произвел небольшое влияние на клеточных линиях BGC823 и SGC7901 (данные не показаны). Таким образом, клеточные линии AGS и N87 были более чувствительны к анандамидом, чем клеточные линии BGC823 и SGC7901.
    <Р> Anandamide снижает способность роста AGS и N87 клеток, в то время как он оказывает незначительное влияние на апоптоз в AGS и N87 клеток (рис 2D). Следовательно, должно быть и другие причины, которые привели к уменьшенной пролиферации.

    Влияние лечения анандамида на распределение клеточного цикла клеток рака желудка
    <р> Для дальнейшего изучения характеристик ингибирования роста путем анандамидом, то фазе клеточного цикла определяли с помощью проточной цитометрии. АГС и клетки N87 на логарифмической фазе роста периода, инкубировали с 10 мкМ анандамидом или этанол растворителя в течение 24 ч, а затем остановилась на фазе G2 клеточного цикла (фиг 3А и 3В). Для того, чтобы исследовать влияние анандамидом на прогрессии клеточного цикла более подробно, AGS и N87 клетки были синхронизированы в фазе G1 от сывороточного голодания. Клеточный цикл был проанализирован, когда клетки были освобождены от этой блокады с полной среде в присутствии или в отсутствие анандамидом. Клетки обрабатывали этанолом растворителем вместо анандамидом использовались в качестве контрольных. Как видно на фиг.3С, AGS клетки были синхронизированы с более чем 70% содержанием ДНК фазы G1 после того, как они были выращены в свободной сыворотки культуры. К 6 ч, приблизительно 46% от контрольных клеток были в фазе G1, и на 12 ч, большинство (57,45%) были в фазе S. Между 12 и 24 ч, клетки в фазе G2 /M и подвергались быстрой митоза, и 24 часа, они вошли в следующий клеточный цикл. Тем не менее, когда клетки обрабатывали анандамидом после высвобождения из фазы G1, 33,47% обработанных клеток были задержаны в G2 /M фазе до 24 часов, и показал отсроченное вступление в следующий клеточного цикла. Аналогичная тенденция наблюдалась и в клетках N87 (рис 3D). Взятые вместе, эти результаты указывают на то, что лечение анандамид вызвало G2 /M арест, наблюдаемую в AGS и N87 клеток.

    Влияние анандамидом на регуляторов клеточного цикла
    <р> Для того чтобы проанализировать молекулярные механизмы, ответственные за увеличили клеточного цикла, вызванное анандамидом, мы использовали 2 различных RT2 Profiler ПЦР массивы (SA Biosciences, Qiagen), чтобы определить уровни экспрессии генов, участвующих в регуляции клеточного цикла. Гены с выражением сложите изменения между клетками, обработанными анандамидом и транспортного средства больше, чем 2 были выбраны в качестве дифференциальных генов. Результаты показали, что AGS клетки, обработанные анандамидом в течение 24 часов отображается общее увеличение экспрессии G2 /M генов, связанных с арестовывают включая GADD45 и р21 WAF и явное снижение регуляторов клеточного цикла G2 включая CHEK1, CHEK2, cdc25, CCNA2, CCNB1, CDKN1A, CDKN2A и т.д. (рис 4А). Для дальнейшего исследования вызвано ли анандамид остановку клеточного цикла на G2 /M управления контрольной точки, мы провели Вестерн-блот-анализ клеток AGS после лечения анандамида в течение 24 часов. Клетки обрабатывали этанолом растворителем вместо анандамидом использовались в качестве контрольных. Как показано на рисунке 4В и 4С, анандамид вызвал увеличение Chk1 фосфорилирования и снижение уровней экспрессии циклина В1 и CDC25A по сравнению с наблюдениями в контрольных клетках. Эти данные свидетельствуют о том, что лечение анандамид привело к увеличению активности на G2 /M контрольно-пропускных пунктах.

    Обсуждение
    <р> Использование методологии обнаружения литературы на основе Swanson, в следствие может определить новые отношения между, казалось бы, не связанных между собой областях, и воскресить ранее опубликованные но забытые гипотезы [15]. В настоящем исследовании мы моделировали методики обнаружения литературы на основе Swanson в 2 областях медицинской научной литературы, которые не были библиографически связанных: рак желудка и психологии. После процесса обнаружения 2 шага, анандамид был выбран и, по прогнозам, будет связан с раком желудка. Далее, потенциальная связь между раком желудка и анандамидом была подтверждена последующей экспериментирования. Таким образом, мы успешно смоделированы литературу на основе открытий, поскольку гипотезы породили новое отношение, что было доказано, чтобы быть надежным.
    <Р> Рак желудка является многофакторным заболеванием, с многочисленными переменными причинные того, сообщалось, в том числе H , пилори
    , диеты с высоким содержанием натрия, пить, курить и [16]. Предыдущие исследования в нашей лаборатории, специализирующихся на раке желудка; Поэтому цель данного исследования состояла в том, чтобы найти новые знания в области желудка исследований рака области. Такой подход, с использованием литературы на основе обнаружения Swanson, во главе к идентификации анандамидом, член из каннабиноидов. Анандамид сообщалось проявлять противоопухолевые свойства пролиферации при лечении некоторых видов рака, в том числе нейробластомы, рака предстательной железы и меланомы [17] - [20]. Mayato [21] также сообщили исследования по анандамидом при раке желудка. Они исследовали ингибирующее действие на анандамидом клеток рака желудка и разъяснены функции анандамидом для усиления цитотоксический эффект паклитаксела, и их выводы о влиянии анандамидом на рост клеток согласуются с результатами этого исследования. Тем не менее, некоторые гены (CHEK1, CDKN1A, CDKN2A, CCNB1 и т.д.) из B-точки зрения близкого открытия были регуляторы клеточного цикла, предполагая, что анандамид может быть связано с клеточного цикла при раке желудка. Как и ожидалось, ПЦР в реальном времени и Вестерн-блот-анализы обнаружили, что выражения этих регуляторов клеточного цикла были значительно изменены следующие анандамида лечения. Проточной цитометрии анализы подтвердили, что дополнительно анандамид индуцированных G2 /M клеточного цикла в клетках рака желудка через активный G2 /M контрольно-пропускных пунктах. Это представляет собой первый раз, что перераспределение клеточного цикла был обнаружен в желудочном раковых клеток после обработки анандамидом непосредственно и по отдельности. Кроме того, результаты показали, что B-члены потенциально могут функционировать в качестве посредника между эффекторы заболевания и целей обнаружения.
    <Р> Для биологических исследователей, поддержание актуальной с текущей опубликованных исследований является одним из важнейших компонентов описание работы любого исследователя, и почти каждый опубликовал статью возможность найти новые связи между наркотиками и заболевания. Тем не менее, текущий объем доступной биологической науки огромен. Используя информированного традиционного поиска, исследователи могут наблюдать ограниченные связи между наркотика /молекулой и болезни, но может не признать большую окружающую среду, через которую отношения работать, ни идентифицировать другие потенциальные отношения в этой среде. Таким образом, информационные науки и поиска являются очень полезными инструментами для биологических ученых. литературы на основе обнаружения Swanson сосредоточена на воскрешение ранее опубликованные, но забытые гипотезы. Если прямое соединение, которое, кажется, можно пренебречь обнаруживается, то работа воскресения оказывается анализа путей или механизмов, которые не могут быть известны. Другими словами, методология обнаружения литературы на основе Swanson не только добывает данные о возможных взаимодействий между болезнями и болезнями, болезни и лекарства, или болезни и молекулы, но и дает нам потенциал для наблюдения за больший фон позади этих прямых связей, как и молекулярная сеть путь в нашем исследовании, что указывает на возможную связь между раком желудка и анандамида действием. На основе анализа данных в этом контексте, мы получили взаимодействия и механизмы между несвязанными на первый взгляд тем и их клиническое значение и значение. Таким образом, открытие Swanson 's литературы на основе является эффективным инструментом, чтобы искать связную существующие знания из эмпирических результатов, выявив отношений, которые замешаны, и все же "забытыми" (Марк Weeber, 2001).
    <Р> Мы также столкнулись некоторые проблемы в процессе обнаружения. Одна проблема была с условиями MeSH, сами, а дополнительный визуальный осмотр требуется после экстракции с использованием нашего пользовательского Java-апплет. В процессе открытого открытия, мы часто не в состоянии распознавать аббревиатуры, которые могут представлять разные слова, и поэтому мы проигнорировали их, несмотря на их потенциальную важность. Кроме того, некоторые из терминов, собранных были вспомогательные слова, что приводит к избыточности. Кроме того, были случаи, когда синонимов первоначально были посчитаны отдельно из-за их написания, и эти повторы должны были быть решены вручную. Несмотря на эти проблемы, в литературе на основе обнаружения увеличение методологии явно представляет собой преимущество в процессе открытия новых отношений из различных областей исследования
    . <Р> Swanson первоначально разработана методика обнаружения на основе литературы и совершенствовали этот процесс 30 лет с целью помочь следователям обнаружить неизвестные или неопознанные отношения между исследованиями; проблема, которая не осталась плохо изучены до сих пор. С помощью этой методики обнаружения, мы нашли потенциальное взаимодействие между анандамидом и рака желудка, который был глубоко захоронен в огромном количестве имеющихся данных, и которые в настоящее время достоверно подтверждено экспериментально.

  • Рак желудка

    Other Languages