Ploche ONE: Nadprodukcie Lin28 Znižuje chemosenzitivity žalúdočné nádorových buniek oxaliplatiny, paklitaxelu, doxorubicínu a fluorouracil v časti cez mikroRNA-107

abstraktné

Vyššie Lin28 expresie je spojená s horšími patologických nádorových odpovedí u miestne pacientov s pokročilou rakovinou žalúdka podstupujú neoadjuvantnej chemoterapii. Avšak vlastnosti Lin28 a mechanizmus jeho účinku odporu chemoterapia je stále nejasná. V tejto štúdii sme zistili, že je prenos Lin28 do buniek karcinómu žalúdka (MKN45 a MKN28) sa zvýšila ich odolnosť voči chemo-lieky oxaliplatina (oxa), paclitaxel (PTX), doxorubicín (ADM) a fluórouracil (5-FU) v porovnaní s buniek karcinómu žalúdka transfekciou kontrolným vektorom. Keď porazený Lin28 expresie Lin28 malé interferujúce RNA (siRNA) bola hodnotená in vitro, sme zistili, že odolnosť voči chemo-drogy bola znížená. Ďalej sme zistili, že Lin28 up-reguluje c-myc a P-gp a down-reguluje valcovou D1. Nakoniec sme zistili, že mier-107 je cieľom microRNA z Lin28 a že sa podieľa na mechanizme rezistencie chemoterapie. Naše výsledky naznačujú, že Lin28 /MIR-107 dráha by mohla byť jedným z mnohých signálnych dráh regulovaných Lin28 a spojené s rakovinou žalúdka chemoterapii rezistencie

Citácia :. Teng R, Hu Y, Zhou J, Seifer B, chen Y, Shen J, et al. (2015) Nadprodukcie Lin28 Znižuje chemosenzitivity žalúdočné nádorových buniek oxaliplatiny, paklitaxelu, doxorubicínu a fluorouracil v časti cez mikroRNA-107. PLoS ONE 10 (12): e0143716. doi: 10,1371 /journal.pone.0143716

Editor: Nataša Kyprianou, University of Kentucky College of Medicine, Spojené štáty

prijatá: 23. júna 2015; Prijaté: 08.11.2015; Uverejnené: 04.12.2015

Copyright: © 2015 Teng et al. Toto je článok o otvorenej distribuovaný pod podmienkami Creative Commons Attribution licencie, ktorá umožňuje neobmedzené použitie, distribúciu a reprodukciu v nejakom médiu, za predpokladu, že pôvodný autor a zdroj sú pripísané

Data Dostupnosť: Všetky relevantné údaje spadajú do papiera a jeho podporné informácie súbory

Financovanie :. pomoc poskytovala provincia Zhejiang Natural Science Foundation of China: LQ13H160014 [http://www.zjnsf.gov.cn/b/home.aspx] .

konkurenčné záujmy :. autori vyhlásili, že žiadne konkurenčné záujmy neexistujú

Úvod

karcinóm žalúdka je častým klinickým tráviaci systém zhubný nádor s mierou úmrtnosti, ktoré radí na tretie miesto vo svete [1]. Naša krajina je oblasť, ktorá je náchylná k rakovine žalúdka. V posledných rokoch, neo-adjuvantnej chemoterapie bol podávaný pacientom s rakovinou žalúdka predĺžiť prežitie. Avšak, 5-ročné prežitie z tých, s pokročilým karcinómom žalúdka, je stále nižší ako 30% [2]. Odolnosť proti Chemoterapia je hlavnou príčinou zlyhania žalúdočné rakoviny a iných nádorových ošetrenie. Z tohto dôvodu je mechanizmus chemoterapia odolnosti rakoviny žalúdka, je v súčasnej dobe veľkým problémom v štúdiách s karcinómom žalúdka.

Lin28 je vysoko konzervovaná RNA viažuci proteín, ktorý bolo preukázané, že sa zúčastňuje vyvolanie pluripotentných kmeňových buniek a pri udržiavaní drieku bunka-ako bunky rakoviny. Nedávne štúdie preukázali, že odchylné aktivácia Lin28 dobre koreluje s prognózou rôznych druhov rakoviny, vrátane rakoviny prsníka, vaječníkov, pľúc, hrubého čreva, rakovina pečene a [3-6]. Naše predchádzajúce štúdie ukázali, že expresia Lin28 je tiež spojená so zlou prežitia u pacientov s karcinómom žalúdka [7], a ďalšie štúdie ukázala, že expresia Lin28 koreluje s rezistenciou paklitaxelu v ľudských bunkách rakoviny prsníka [8]. Okrem toho Lin28 expresie je spojená s patologickou odpoveďou nádoru u miestne pacientov s pokročilou rakovinou žalúdka podstupujú neoadjuvantnej chemoterapii. Avšak molekulárne mechanizmy, z ktorého tieto nálezy zostáva nejasné, [9].

Lin28 podporuje tumorigenezi potlačením tumor supresorových miRNA, ako je rodina rokov-7, ktorá je spojená s rezistenciou k lieku [8]. Avšak, ako cieľovú miRNA z Lin28, MIR-107 je zriedka uvedené ako faktor liekovej rezistencie v karcinómu žalúdka. Mir-107 sa znižuje expresia v rôznych malignít, ako je rakovina hrubého čreva, rakoviny hlavy a krku, rakoviny pankreasu a rakoviny žalúdka [10-13]. MIR-107 reguluje downstream génov, ktoré sa podieľajú na bunkovej diferenciácie a proliferácie, metabolizmu, reakcia na stres a tvorbe krvných ciev [10-14]. V tejto štúdii sme skúmali Lin28 /MIR-107 dráhy a jej úlohu v žalúdočnej odolnosti nádorových buniek k chemoterapii. Možno sme identifikovali nový potenciálny cieľ pre chemoterapiu rakoviny žalúdka rezistentné.

Materiály a metódy

1. Bunková kultúra a transfekcia plazmidu

Ľudské rakovina žalúdka bunkové línie MKN-28 a MKN-45 boli získané ako dar od profesora Sung Hoon Noh (Yonsei University College of Medicine, Soul, Kórea). Bunky boli kultivované v médiu RPMI 1640 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA), doplnenom 10% fetálnym hovädzím sérom (MP Biomedicals, Costa Mesa, CA, USA) vo zvlhčenej atmosfére obsahujúcej 5% CO2 pri teplote 37 ° C. Oxaliplatina, paklitaxel, doxorubicín, a fluorouracil boli zakúpené od firmy Sigma (St. Louis, MO). Plazmid pcDNA3.1-Lin28 bola transfekována Xtreme GENE HP DNA transfekčního činidla (Roche Applied Science, Mannheim, Nemecko) podľa protokolu výrobcu. Stabilné klony Lin28 exprimujúcich boli ďalej vybrané a kultivované s príslušným neomycín obsahujúcim RPMI 1640 médiu.

2. Real-time kvantitatívne PCR

v reálnom čase, Q-PCR analýzy boli vykonané pomocou systému ABI Prism 7500 Sequence Detection, (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). V stručnosti, 20 ul reakčnej zmesi obsahujúcej 2 ul cDNA šablóny a 1 ul každý zmyslových a anti-sense priméry (systém Promega Gotaq q-pCR® Master Mix, Madison, WI, USA) bol zosilnený takto: denaturácia pri 95 ° C ° C počas 10 min a 40 cyklov 95 ° C počas 30 s, 60 ° C počas 30 s a 72 ° C počas 40 s. Real-time Q-PCR reakcie boli vykonávané v trojitom opakovaní pre každú vzorku, a priemerná hodnota sa použije pre výpočet hladiny mRNA. Kvantitatívna analýza bola vykonaná s použitím porovnávacej metódou CT. Kopírovaných čísla Lin28 a Mir-107 v nádorového tkaniva boli normalizované na mRNA kopírovať čísla na upratovanie gén glyceraldehyd 3-fosfát dehydrogenázy (GAPDH) a získa sa hodnota 2 ^{-Δ CT. Sekvencie primérov sú nasledujúce v tabuľke 1.}

3. Cell Drug-test rezistencie

Životaschopnosť buniek sa merala pomocou MTT [3- (4,5-dimetyl-thiazol-2-yl) -2,5-difenyltetrazoliumbromid] test (Amresco, Solon, OH, USA) podľa protokolu výrobcu. Bunky boli nasadené na 96jamkové doštičky v hustote 5 * 10 ^{3 buniek na jamku. Po ošetrení boli bunky inkubované s 5 mg /ml MTT po dobu 4 hodín. Potom sa médium odstráni a pridá sa 150 ml sterilizovaného roztoku DMSO, s následnou inkubáciou pri teplote 37 ° C počas 4 hodín. Hodnota OD bola získaná na vlnových dĺžkach 570 nm a 630 nm. Hodnota OD (570 nm až 630 nm), môže nepriamo odráža počet buniek a aktivity podľa nasledujúceho vzorca: prežitie = dávkované skupinu OD570-630 /žiadna skupina dávku OD570-630. Koncentrácia krivka prežitia bunková /droga bola potom generovaná.}

4. Western blot analýza

Bunkové lyzáty boli oddelené elektroforézou na 4-15% dodecyl síran sodný-polyakrylamidovom gradientu Minigel a (SDSPAGE) (Bio-Rad, Hercules, CA) a elektroforeticky prenesené na nitrocelulózové membránu (Amersham Pharmacia , Piscataway, NJ). Western blot boli skúšané s protilátkami proti Lin28, GAPDH (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA), kaspázy a odštiepi kaspázy, cyklin D1 NF-kB (bunkové signalizácia, Beverly, MA), CDK6, c-myc (abca Trading ( Shanghai) Company, Shanghai, Čína), P-gp, a Bcl-2 (Huan Biotechnology, Peking, Čína). Proteínové pásy boli detekované zvýšenej chemiluminiscencie (Amersham Pharmacia, Piscataway, NJ).

5. Prietokovej cytometrie Test

Cells (2 * 10 ^{5 na jamku) boli umiestnené v šiestich jamkami a spracuje sa s paklitaxelom. Po 72 hodinách sa bunky fixovali v 70% etanolu a zafarbené propidium jodidom (PI). Obsah DNA bol analyzovaný s eposy Profile II prietokového cytometra (Beckman Coulter, Fullerton, CA) so softvérom multicycle (Systems Phoenix Flow, San Diego, CA). Všetky experimenty boli opakovať aspoň dvakrát. PI bol tiež použitý v spojení s annexinu V (BD Biosciences, San Jose, CA) na určenie, či bunky boli životaschopné, apoptotické alebo nekrotická.}

6. Mirna transfekcia a detekcia

Bunky boli umiestnené v šiestich jamkové kultivačné doštičky a transfekovány 50 nM pre-MIR-107 zakúpenom od Applied Biosystems (Carlsbad, CA) alebo s klávesom pre-Mirna podľa protokolu výrobcu. Real-time kvantitatívne polymerázová reťazová reakcia (PCR) bola vykonaná s použitím TaqMan microRNA reverznej transkripcie Kit a Fast Real-Time PCR System (Applied Biosystems, Carlsbad, CA) podľa protokolov výrobcu. Prehyb zmena hladiny MIR-107 mikroRNA bola vypočítaná a normalizovaná na kontrolné HSA-mir-423 zaťaženie.

7. Zvieratá

Balb /c myší vo veku 3-4 týždňov s hmotnosťou 18-22 g boli zakúpené od SLAC laboratórnych zvierat spoločnosť (SCXK-2007-004, Shanghai, Čína) a po piatich umiestnia do klietok v špecificky prostého patogénov (SPF) prostredie. Zvieratá bola ponechaná aklimatizovať na puzdro zariadenia po dobu 7 dní pred začiatkom experimentu. Postupy odbavenie na zvieratách boli vykonané v súlade s právnymi predpismi P. R. Čínou o používaní a starostlivosti o laboratórne zvieratá a schválená etickou komisiou pre pokusné zvieratá zo Zhejiang University (Zhejiang, Čína).

8. Xenografe Assay a liečba

Stručne, skupiny šiestich myší Balb /c bolo podkožne podali 1 x 10 <sup>6 MKN45 /Lin28, MKN45 /vektor, alebo MKN45 bunky v pravom krídle. Objem nádoru bol vypočítaný podľa nasledujúceho vzorca: V = 1/2 * a
* b
2, kde a stroje a b
sú najdlhšie a najkratšie priemer nádoru (v milimetroch), v danom poradí. Keď nádory dosiahli približne 80 mm 3, myši boli ošetrené injekciou ADM (50 mg /kg) a OXA (5 um /kg) raz týždenne po dobu 2 týždňov. Kvantitatívne zmeny hmotnosti a objemu nádoru tela boli merané každé tri dni jediným jednotlivcom s použitím rovnováhu a Vernier strmene. Žiadna anestetika boli použité v experimentoch myši.</sup>

9. Štatistická analýza

Všetky experimenty boli vykonané trikrát so vzorkami v triplikátech. Analýza rozptylu a t test bol použitý na porovnanie hodnôt vzoriek testovaných a kontrolných. P-hodnoty menšie ako 0,05 bola považovaná za štatisticky významnú. softvéru Statistica 6.1 bola použitá pre všetky štatistické analýzy. Významnosť bola hodnotená t-testu študentov.

Výsledky

1. In vitro testovanie zmeny citlivosti chemoterapie v nádorových bunkách žalúdku stabilne exprimujúcich Lin28

dva kmene žalúdočných nádorových buniek s negatívnym Lin28 výrazu (MKN45 a MKN28) boli vybrané a kultivované. Identifikovali sme žalúdočné rakovinové bunky so stabilnou Lin28 prejavu z odolných transfekciou klonov (MKN45 /Lin28 /C2 a MKN28 /Lin28 /C3) za použitia Westernový prenos a Q-PCR (obrázok 1).

Výber MKN45 /Lin28C2, MKN45 /Vector, MKN45, MKN28 /Lin28C3, MKN28 /Vector a MKN28 bunky boli testované na chemoterapiu drog citlivosti. Vybrali sme nasledujúce štyri bežne používané klinické chemoterapeutickej lieky na liečbu rakoviny žalúdka: oxoskupina PTX ADM a 5-Fu. Liečba oxoskupina PTX, a ADM trval 48 hodín, zatiaľ čo liečba 5-Fu trvala 72 hodín. Po transfekciu Lin28, MKN45 a MKN28 bunky mali zníženú citlivosť na oxoskupina PTX, ADM, a 5-Fu, ktorý bol najvýraznejší pre OXA a PTX. Hodnoty IC 50 boli viac ako dvakrát vyššia ako v kontrolnej skupine (obr 1).

Na základe MTT testu sme použili prietokovej cytometrie pre detekciu rozdielov v apoptóze medzi Lin28-pozitívnych a negatívnych buniek Lin28 po chemoterapii PTX expozícii. MKN45 /Lin28, MKN45 /vektor a bunka skupiny MKN45 získal 0 uM a 0,1 uM liečbu PTX po dobu 24 hodín, a dvojité farbenie bolo vykonané pre detekciu buniek apoptózu. Apoptotické Rýchlosť transfekciou Lin28 buniek bola nižšia ako netransfekovaných buniek (p menšie ako 0,05). Okrem toho, western blot proteínu získané z buniek ošetrených s 0,1 uM PTX ukázalo, že apoptóza bola znížená na MKN45 /Lin28 buniek, ako je ukázané poklesom v aktivácii kaspázy 9 a kaspázy 3 (obr.2).

Transient transfekcia siRNA-Lin28 by mali zbrzdiť hladiny Lin28 expresie v MKN45 /Lin28 a MKN28 /Lin28 buniek 48 hodín po presune v súlade s experimentálnymi pokynov výrobcu činidla. Expresia Lin28 proteín bol detekovaný, a pridružený citlivosti voči liečivám bola testovaná. Lin28 RNA expresie v nádorových bunkách žalúdka bola detekovaná q-PCR, zatiaľ čo expresia proteínu bol detekovaný westernovým prenosom (obr 3).

Q-PCR ukázala, že expresia mRNA v Lin28 MKN45 /Lin28 /si-Lin28 ( 48 h) a MKN45 /Lin28 /si-Lin28 (72 h) buniek bola oveľa nižšia, než je v /Lin28 /si-kontrolných bunkách MKN45 (p 0,01). Táto transfekcia účinok bol overený aj na MKN28 /Lin28 buniek. Western blot ukázala, že si Lin28-RNA významne inhibujú expresiu proteínu v Lin28 MKN45 /Lin28 a MKN28 /Lin28 buniek.

Test MTT bol vykonaný na štyroch typoch buniek (MKN45 /Lin28 /si-control, MKN45 /Lin28 /si-Lin28, MKN28 /Lin28 /si-control, a MKN28 /Lin28 /si-Lin28 buniek), ktoré boli transfekovány Lin28 siRNA po dobu 48 hodín, aby posúdila citlivosť chemoterapie. Rozhodli sme sa použiť chemoterapeutickej lieky, ktoré mali najvýraznejšie účinky v pre-testy: oxa, PTX a ADM. Vybrali sme koncentračné gradient 5-6 podľa predbežných výsledkov predbežných pokusov. Zásah siRNA znižuje expresiu Lin28 a Lin28-pozitívne bunkové línie mala zvýšenú citlivosť na chemoterapeutiká (obrázok 3).

Ďalej sme zistená citlivosť buniek na rôznych chemoterapeutík po down-regulácia, Lin28 , Bunky boli rozdelené do 4 skupín, MKN45 /Lin28 /SI kontroly, MKN45 /Lin28 /Si-Lin28, MKN28 /Lin28 /SI kontroly a MKN28 /Lin28 /Si-Lin28, a boli testované s chemoterapeutikami OXA a PTX príslušne , Koncentrácia chemoterapiou (oxa 3,2 ug /ml a PTX 1 uM), boli vybrané na základe výsledkov predbežných pokusov. Počet apoptotické MKN45 /Lin28 a MKN28 /Lin28 buniek bolo menej ako to MKN45 /Lin28 /SI-Lin28 a MKN28 /Lin28 /Si-Lin28 buniek (p menšie ako 0,05). Tento výsledok ukazuje, že down-regulácia expresie Lin28 môže zvýšiť apoptózu buniek (obrázok 3).

2. Molekulárne mechanizmy, ktorými Lin28 zmeny v citlivosti na chemoterapiu

sme zistili Rezistencia na liek súvisiace úrovne génovej expresie q-PCR v MKN45 /Lin28 a MKN45 /Vector cells.P-gp a C-myc úrovni RNA boli výrazne zvýšila a cyklín D1 na úrovni RNA boli znížené, zatiaľ čo iné Bcl-2, CDK6, NF-kB, TOP II neukázali významný rozdiel medzi MKN45 /Lin28 a MKN45 /vector cells.Also tieto drogami odpor súvisiaci génovej expresie boli vyšetrované western blot v MKN45 /Lin28 a MKN45 /vector buniek, ktoré ukazovali konzistentné trend, že P-gp a expresie C-myc proteín zvýšenú zatiaľ čo cyklín D1 znížil. Avšak, Bcl-2 expresie klesla, NF-kB výraz sa nezmenil, a expresie cyklín D1 a proteínkinázy CDK6 bola znížená (obr 4).

Po Lin28 expresie bola inhibovaná transfekcia Lin28 siRNA, boli prehodnotené hladiny RNA P-gp, c-myc a cyklin D1. Po znížení hladiny RNA Lin28, P-gp a C-myc boli významne down-regulované, zatiaľ čo hladiny cyklin D1 výrazne zvýšil. Detekcia P-gp, c-myc a cyklin D1 expresie metódou Western blot ukázala, že po inhibíciu Lin28 prejave, P-gp a expresie c-myc proteínu bola významne down-regulované, zatiaľ čo expresia cyklin D1 významne up-regulovaná ( obr 4).

3. Mier-107 je cieľom microRNA z Lin28

Počas merania Lin28 RNA a hladiny Mir-107 v žalúdočných rakovinových bunkových línií sme zistili vzájomnej inhibícii Lin28 a Mir-107 v bunkových líniách MKN45 a AGS. Navyše, mier-107 bolo down-regulovaný MKN45 /Lin28 a MKN28 /Lin28 buniek. Vyradenie expresia Lin28 obrátil túto inhibíciu. V nadväzujúcej experiment, Lin28-pozitívnych buniek, MKN45 /Lin28 a MKN28 /Lin28, boli transfekovány s pre-MIR-107 a boli následne označované ako MKN45 /Lin28 /Pre-MIR-107 a MKN28 /Lin28 /pre- MIR-107 buniek. Transfekované pre-MIR-kontrolné bunky boli nazvané MKN45 /Lin28 /Pre-MIR-Control a MKN28 /Lin28 /Pre-MIR-Control. Anti-MIR-107 alebo kontrolné transfekcia do Lin28-negatívnych buniek, MKN45 /vektor, prinieslo MKN45 /vektor /anti-MIR-107 a MKN45 /vektor /anti-Mir-kontrolných bunkách, resp. Štyridsať osem hodín po transfekciu RNA sa oddelí a podrobí sa q-PCR pre detekciu rozdielov v Mir-107 expresiu v MKN45 /Lin28, MKN28 /Lin28, MKN45 /Vector a MKN28 /Vector buniek. Účinok Vyradenie Lin28 expresie Lin28 siRNA bola tiež hodnotená. Po transfekciu s Lin28, Mir-107 expresia bola významne down-regulované, zatiaľ čo po Vyradenie Lin28 expresie je expresia MIR-107 zvyšuje. Štyridsať osem hodín po transfekciu pre-MIR-107, hladiny Lin28 RNA boli významne znížené, a 96 hodín po transfekciu, expresia Lin28 proteín bol ešte nižší ako u kontrolnej skupiny netransfekovanými. Toto zistenie naznačuje, že mier-107 sa môže regulovať expresiu Lin28 (obrázok 5).

4. Mir-107 sa podieľa na Lin28 sprostredkovanej rezistencie chemo-drogovej

Citlivosť chemoterapia 4 bunkových skupín, MKN45 /Lin28 /pre-MIR kontroly, MKN45 /Lin28 /pre-MIR-107, MKN28 /Lin28 /pre-MIR-kontrola a MKN28 /Lin28 /pre-MIR-107, bola testovaná za použitia MTT metódou 48 hodín po transfekciu s pre-MIR-107. Vybrali sme chemoterapeutickej lieky, ktoré mali najvýraznejšie účinky počas pre-testovanie, oxoskupina PTX a ADM, a vybral koncentračný gradient 5-6 Podľa predbežných výsledkov z predbežných pokusoch. Výsledky naznačujú, že zavedenie pre-MIR-107 do Lin28-pozitívnych buniek môže zvýšiť citlivosť buniek na chemoterapiu. testy apoptózy ukázali, že počet MKN45 /Lin28 apoptotických buniek zvýšená po transfekciu s pre-MIR-107 (p menšie ako 0,05). MTT skúšky MKN45 /Lin28 /anti-MIR-kontroly a MKN45 /Lin28 /anti-MIR-107 citlivosti chemoterapiu ukázali, že inhibícia expresie Mir-107 v MKN45 znížila citlivosť na PTX (obrázok 5).

westernovým prenosom a q-PCR sme zistili hladinu rezistencie voči lieku súvisiace gén a expresie proteínov v MKN45 /Lin28 buniek, ktoré boli transfekovány s pre-mir-107, vrátane tých c-myc, P-gp, a cyklin D1. Výsledky ukázali, že 48 hodín po transfekciu s MIR-107, RNA a proteínové expresie c-myc a P-gp sa znížil (p 0,01), zatiaľ čo expresia cyklin D1 zvýšil (p menšie ako 0,05) (obrázok 5).

5. Lin28 spojený odpor chemo-liečivo in vivo

Po 2 cykloch chemoterapie, sme zistili, že xenograftových nádory MKN45 /Lin28 bunkách neznížila objem a stal väčší ako u iných skupín (MKN45 /vektor a MKN45 ). V oboch MKN45 /Lin28 a MKN45 /Vector skupín, jedna z myší zomrelo, takže chemoterapia bola zastavená. Boli nádory vyrezané a ich objemy analyzované. Zistili sme, že MKN45 /Lin28 xenografe boli nádory väčšie ako ostatné nádory po ADM a oxa chemoterapiu (p 0,01). (Obr 6)

Diskusia

V tejto štúdii sme skúmali združenia Lin28 prejavu s chemo-citlivosťou v nádorových bunkách žalúdka. Zistili sme, že transfekcia Lin28 znižuje citlivosť rakovinových bunkových línií žalúdočných MKN45 a MKN28 do štyroch typov chemoterapeutických činidiel (oxa, PTX, ADM, a 5-FU). Použitie technológie siRNA interferenčné sa porazený Lin28 expresia by mohla zvrátiť chemo-odpor. Tiež sme ukázali, že mier-107 by mohla down-regulujú expresiu Lin28, pričom je tiež slúžil ako jeden z potenciálnych cieľových mikroRNA regulovaného Lin28. Zvýšená expresia Lin28 up-regulované c-myc a P-gp, zatiaľ čo down-regulované cyklin D1, tento javy by mohli zvrátiť tým, Lin28 siRNA alebo transfekcia pre-MIR-107. To môže byť dôležité mechanizmy, ktoré Lin28 znížili chemosenzitivitu do buniek karcinómu žalúdka. Pokiaľ je nám známe, toto je prvá štúdia, ktorá ukazuje, Lin28 /MIR-107 signálne dráhy môžu byť zapojené do odboja Chemo-drogami v rakoviny žalúdka.

Chemoterapia je jednou z hlavných liečby pre pacientov s rakovinou žalúdka, ale viac ako 50% pacientov bude postupovať k rezistencii chemoterapii. Možné mechanizmy pre chemo-rezistencie u rakoviny žalúdka sú v súčasnej dobe považované za obsahovať prepravu trans-membránovú ABC transportérov, glutatión-S-transferázu, aktivitu DNA topoizomerázy, génovú mutáciu p53 rakovina a apoptózu, ktorý súvisí dráhy. Nedávna štúdia zistila, že microRNA hrá dôležitú úlohu v žalúdku chemoterapii rakoviny rezistencie [15]. V modeli odolnosti nádorových buniek, bolo zistené, že rakovina kmeňové bunky hrajú dôležitú úlohu v rezistencii voči chemoterapii. Gen c-myc, je jednou z povrchových markerov nádorových kmeňových buniek, ale tiež onkogénu spojené s neobmedzenou proliferáciu, nekonečné imortalizace a podpore delenie buniek [16]. Jedna štúdia uvádza, že 40% pacientov s rakovinou žalúdka má C-myc génu, zvýšená expresia a že vyššia C-myc expresie je spojená s horšou prognózou [16-18]. Štúdia tiež hlásené koreláciu medzi génom a apoptózy C-myc. C-myc expresie môže viesť k zníženiu nádorových buniek apoptózu. Bunka proapoptotický rýchlosť a citlivosť na indukované faktory sú závislé na úrovni proteínu c-myc [19]. Navyše, C-myc nadmerná expresia je spojená s odolnosťou proti žiareniu a chemoterapie. Navyše, C-myc je up-regulovaný P-gp, čo môže vyvolať effluxing chemoterapeutických činidiel viedla k odporu chemoterapia [20]. Bunkového cyklu môže mať vplyv na odpoveď nádorových buniek na určité chemoterapeutickej lieky (ako je napríklad PTX), ktorý hrá úlohu v G2 /S fázy zníži citlivosti voči liečivám. Bunkového cyklu proteín cyklin D má tri podtypy, D1, D2, D3 a, a je iniciačný faktor bunkového cyklu. Jeho potlačenie transformujúci rastový faktor (TGF -β1-D1) chráni bunky pred vstupom do bunkového cyklu tak, aby zostali v kľudovom stave [21]. Cyklin D konkrétne spája s CDK4 /6 fosforylovať a inaktivovať proteín retinoblastomem (pRb), a tým prispieť k G1 /S prechod a iniciácii syntézy DNA [21]. V tejto štúdii sme zistili, Lin28 nie sú relevantné s Bcl-2, NF-kB a TOPO II do buniek karcinómu žalúdka. Partnerstvo medzi Lin28 a mikroRNA bola dobre preukázaná, ako je let-7, MIR-200 ° C, MIR-143 [4,22]. Lin28 zvýšená expresia down-reguluje mikroRNA, zatiaľ čo microRNA môže tiež negatívne ovplyvniť expresiu Lin28. Lin28 spolu s TUT4 predstavuje negatívne regulátor, ktorý ovplyvňuje dozrievanie a homeostázu mikroRNA [4,22]. Reguláciou downstream génov, microRNA je zapojený do bunkovej diferenciácie a proliferácie, bunkový metabolizmus, reakcia na stres a tvorbe krvných ciev. Cheng et al [23] zistili, že po inhibíciu MIR-107, bol podporovaný rast rakoviny krčka maternice HeLa buniek a nádorových buniek A549 pľúc. Marijn et al [24] preukázali, že expresia Mir-107 v ovariálnych nádorových buniek rezistentných bola down-regulované. Naša štúdia zistila, že Lin28 môže tiež obmedziť zrenia MIR-107, a zavedenie MIR-107 zvyšujú žalúdočné rakovinové bunky chemo-citlivosť na oxoskupina PTX a ADM. Po transfekciu anti-MIR-107, táto citlivosť znížil. Pre-MIR-107 spôsobilo pokles expresie Lin28, čo ilustruje, že Lin28 /MIR-107 dráha môže byť zapojený do chemosensitivity zmeny rakoviny žalúdka.

V súhrne sme ukázali, že Lin28 môže inhibovať expresie MIR-107, a tým sa regulujúci C-myc, P-gp a down-regulácia cyklin D1, následne viesť k chemo-odolnosti buniek karcinómu žalúdka. Lin28 /MIR-107 cesta môže byť podávaná ako jedna z mnohých signálnych dráh, ktorá je spojená s rakovinou žalúdka chemo-odpor. Naša štúdia môže poskytnúť nový pohľad na žalúdočné rakovina chemorezistence mechanizmu. Lin28 /MIR-107 môže byť nový potenciálny terapeutické ciele pre rakovinu žalúdka chemoterapiu rezistentné.

Podporné informácie
S1 tabuľku. Minimálne údaje pre všetky týchto čísel
doi: 10,1371. /Journal.pone.0143716.s001
(XLSX)

• Ploche ONE: endoskopická resekcia V porovnaní s gastrektómii liečiť včasnou rakovinou žalúdka: výzva na systematickom preskúmaní a Meta-Analysis
• Ploche ONE: Význam sérového Pepsinogens ako biomarker pre rakoviny žalúdka a atrofickú gastritídou Projekcia: výzva na systematickom preskúmaní a Meta-Analysis