Ploche ONE: Enhanced M1 makrofágov polarizácie Human Helicobacter pylori spojených s atrofickú gastritídou a u očkovaných myší

abstraktné

Pozadie

infekciu s Helicobacter pylori
vyvoláva chronický zápal žalúdka, ktorý môže viesť až k atrofii a adenokarcinómom žalúdka. Polarizácia makrofágov je charakteristické ako rakoviny a infekcie, a môže podporovať progresii alebo rozlíšenie ochorenia. Avšak role makrofágov a ich polarizácie v H. pylori
infekcie nebol dobre definovaný.

Metodické /hlavných zistení

Pri použití myšieho modelu infekcie a žalúdočných biopsií z 29 jedincov, sme analyzovali makrofágov náboru a polarizáciu počas H. pylori
infekcie prietoková cytometria a real-time PCR. Zistili sme, sekvenčné nábor neutrofilov, eozinofilov a makrofágov na žalúdočnú sliznicu infikovaných myší. Analýza génovej expresie žalúdočné tkaniva a triedených makrofágov bolo zistené, že žalúdka makrofágy boli polarizovaný M1 po H. pylori
infekcie, a tento proces bol podstatne urýchlená predchádzajúcom očkovaní. Ľudský H. pylori
infekcia bola charakterizovaná zmiešané M1 /​​M2 polarizáciu makrofágov. Avšak, v H. pylori
-associated atrofická gastritída, expresia inducibilní syntázy oxidu dusnatého sa výrazne zvýšil v porovnaní s nekomplikované gastritídy, svedčí o zvýšenej M1 makrofágov polarizácie v tejto pre-malígne lézie.

Závery /Význam

Tieto výsledky ukazujú, že vakcinácia myší proti H. pylori
zosilňuje M1 polarizáciu žalúdočných makrofágov, a že podobný zvýšená M1 polarizácie je prítomný v ľudskom H. pylori
indukovaná atrofickú gastritídu

Citácia :. Quiding-Järbrink M, Raghavan S, M Sundquist (2010) Rozšírená M1 makrofágov polarizácie v ľudskom Helicobacter pylori
-Associated atrofická gastritída a očkovaných myší. PLoS ONE 5 (11): e15018. doi: 10,1371 /journal.pone.0015018

Editor: Niyaz Ahmed, University of Hyderabad, India

prijatá: 26.srpna 2010; Prijaté: 07.10.2010; Publikované: 23.listopadu 2010

Copyright: © 2010 Quiding-Järbrink et al. Toto je článok o otvorený prístup distribuovaný pod podmienkami Creative Commons Attribution licencie, ktorá umožňuje neobmedzené použitie, distribúciu a reprodukciu v nejakom médiu, za predpokladu, že pôvodný autor a zdroj sú pripísané

Financovanie :. Táto štúdia bola podporovaná centrá excelentnosti MIVAC, financovaného nadáciou švédskeho pre strategický výskum, na Adlerbert Research Foundation, Wilhelm & Martina Lundgren je základom, Inga-Britt & Arne Lundberg je základom a Sahlgrenska Fakultnej nemocnice. Platcovia mal žiadnu úlohu v dizajne štúdie, zber a analýzu dát, rozhodnutie publikovať, alebo prípravu rukopisu

Konkurenčné záujmy: .. Autori vyhlásili, že žiadne konkurenčné záujmy neexistujú

Úvod

Helicobacter pylori
kolonizovať žalúdok epitel viac ako polovicu svetovej populácie [1]. Infekcia je často celoživotná a spúšťa chronický zápal žalúdočnej sliznice, ktorá sa v asi 1-2% infikovaných jedincov nakoniec sa vyvinie do adenokarcinóme žalúdka [1]. Rozvoj rakoviny žalúdka, najmä črevnej typ, je viacstupňový proces, ktorý postupuje cez dekády cez premalígnych lézií na žalúdočnú sliznicu, ako je atrofická gastritída, črevné metaplázia, dysplázia a [2]. Výsledok infekcie závisí od virulencie infikovanie H. pylori
kmeň, environmentálne faktory, ako je fajčenie a diéty, a hostiť genetické faktory, ktoré ovplyvňujú typ a intenzitu zápalovej reakcie [1].

A silný prozápalový odozva je spojená so zvýšenými hladinami reaktívne formy kyslíka a dusíka v žalúdočnej sliznice [3], ktoré môžu podporovať rozvoj rakoviny [4]. Napríklad, myší infikovaných H. pylori
po dobu šiestich mesiacov majú zvýšenú frekvenciu žalúdočných mutácií v porovnaní s neinfikovaných myší [5]. Okrem toho myši, ktoré sú deficitné v enzýmu indukovatelné syntázy oxidu dusnatého (INOS) majú zníženú incidenciu karcinómu žalúdka po H. pylori
infekcie a karcinogénne úlohou v porovnaní s normálnou myši [6]. Kým INOS prispieva k rozvoju rakoviny žalúdka, vysoká úroveň chemokiny CCL18 v nádorov žalúdka je spojené s predĺžením doby prežitia u pacientov s karcinómom žalúdka [7]. Je zaujímavé, že INOS je produkovaný klasicky aktivovanými makrofágy /M1, zatiaľ čo výroba CCL18 je charakteristickým znakom pre voliteľnú aktiváciu /M2 makrofágov [8]. Dohromady tieto výsledky naznačujú, že makrofág polarizácia môže mať dôležitú úlohu pri vývoji H. pylori
-associated karcinóm žalúdka.

M1 makrofágy zvyčajne zúčastňujú v počiatočnej imunitnej odpovedi na inváziu mikroorganizmov a podporovať pomocné T-bunky (Th) 1 imunitu, zatiaľ čo M2 makrofágy sú vyvolané pri riešení fázy zápalu sa podieľajú na upratovaní trosiek, prestavbe tkanív a propagácie Th2 imunity [8], [9]. Polarizácia makrofágov je riadený mikroprostredie. M1 makrofágy sú vyvolané interferón-gama a mikrobiálnych produktov, ako je lipopolysacharid [9]. Na druhej strane, M2 makrofágy sú vyvolané Th2- alebo protizápalových cytokínov a rastových faktorov, vrátane IL-4, IL-10 a transformujúci rastový faktor-P [8], [9].

Počas H. pylori
infekcie, makrofágy sú prijímaní na žalúdočnú sliznicu, kde prispievajú k produkcii prozápalových cytokínov a chemokiny [10], [11], [12], [13], [14], [15] , Navyše nedávna štúdia ukázala, že úbytok lipozómy sprostredkované makrofágov znižuje žalúdočnú patológiu H. pylori
-infected myšou [16]. Cez toto, funkcia makrofágov počas in vivo H. pylori
infekcie zostáva relatívne zle definovaný. Funkcia makrofágov je úzko spojený s ich polarizačné stav, ktorý tiež sa zdá, že má úlohu v rozvoji rakoviny žalúdka [6], [7]. Preto sme skúmali makrofágov polarizáciu v žalúdočnej sliznici H. pylori
-infected myšiach a ľuďoch. Ukázali sme, že vakcinácia myší proti H. pylori
rýchlosť a zosilňuje M1 polarizáciu žalúdočných makrofágov. Okrem toho sa prekancerózne lézie atrofickej gastritídy je charakterizovaný zvýšenou makrofágov M1 polarizáciu u ľudí.

Výsledky

Zvýšená frekvencia makrofágov, eozinofilov a neutrofilov v žalúdočnej sliznice po H. pylori
infekcie

Nábor vrodeného buniek na mieste infekcie je základným predpokladom pre infekčné kontroly. Nielen, že môže vrodené buniek, ako sú makrofágy a neutrofily, podieľať sa na bakteriálne zabíjanie; Oni tiež produkujú mediátory zápalu, ktoré pripravujú pôdu pre následné imunitnej odpovede. Vyšetrovať akumuláciu vrodených buniek v žalúdočnej sliznici počas H. pylori
infekcie, sme nakazení C57BL 6 myší /s myšou prispôsobené H. pylori
Sydney kmeň 1 (SS1), a po štyroch, ôsmich a 26 týždňov sme analyzovali žalúdočné zápalový infiltrát jednotlivých myší pomocou multi-color prietokovej cytometrie. Celkový počet lamina propria, buniek izolovaných z žalúdka nemenila v priebehu prvých štyroch týždňov infekcie, ale v ôsmich týždňov po infekcii bola zdvojnásobená celkový počet buniek izolovaných, a po 26 týždňoch infekcie bola osem-násobné zvýšenie v celkovom počte buniek izolovaných v porovnaní s neinfikovaných myší (obr. 1A). Medzi bunky, ktoré sú prijaté na žalúdku boli makrofágy, eozinofily a neutrofily. Žalúdočné makrofágy boli identifikované ako bunky s expresiou CD11b a hlavného histokompatibilního komplexu triedy II (MHC-II), ale postrádajú expresiu GR1 (neutrofily markeru), CD103 (vyjadrené podskupine dendritických buniek (DCS)) a immunoglobulin- viažuceho kyselinu sialovej ako lektín (Siglec-F, eozinofilné markeru) (obr. 1B). Tieto bunky exprimovali makrofágov markerovou F4 /80 (obr. 1E), a na základe bunkovej morfológie boli potvrdené ako makrofágy (viď obr. 1B). Frekvencia makrofágov v žalúdočnej sliznice zostali nezmenené po štyroch a ôsmich týždňoch H. pylori
infekcie (Obr. 1F). Avšak, po 26 týždňoch bola frekvencia žalúdočného makrofágy sa zvýšil v porovnaní s neinfikovaných myší (obr. 1F).

eozinofilov boli definované ako CD11b ^{+ Siglec-F + bunky (obr. 1C, [17]). Tieto bunky exprimovali medzistupne F4 /80 ° C a mal vysokú bočnú bodový profil pri analýze prietokovou cytometriou (obr. 1E). Kresylová fialové sfarbenie zoradené CD11b + Siglec-F + buniek potvrdila, eozinofilné morfológia (obr. 1c). Frekvencia eozinofilov v žalúdočnej sliznici po ôsmich týždňoch sa zdvojnásobila a ďalej zvýšená po 26 týždňoch infekcie (viď obr. 1F).}

Neutrofily boli definované ako CD11b ^{+ GR1 + buniek (obr . 1D). Vzhľadom k tomu, protilátka GR1 rozpoznáva oba Ly6C a Ly6G epitop sme potvrdili, že všetci CD11b + GR1 + bunky exprimovali špecifické neutrofilov značku Ly6G (obr. 1D a E). Frekvencia neutrofilov vzrástol 10-krát osem týždňov po infekcii a po 26 týždňoch (obr. 1F) bola ďalej zvýšená. Tak, počas H. pylori
infekcie je sekvenčné akumuláciu neutrofilov a eozinofilov, nasledovaný makrofágy v žalúdku lamina propria.}

Charakteristika žalúdočné DC

Ak chcete charakterizovať žalúdočných radiče domény, najprv identifikovali populáciu z CD11c ^{+ MHC-II + buniek (obr. 2A). Keď boli tieto bunky ďalej analyzovali na expresiu F4 /80 a αE integrínu reťazca CD103, polovica CD11c + MHC-II + bunky boli identifikované ako F4 /80 + makrofágy (obr. 2A ). Avšak, medzi CD11c + MHC-II + bunky, ktoré chýbali expresiu F4 /80, dve populácie predpokladaných DC s rozdielna expresia CD103 môžu byť rozlíšené (viď obr. 2A). Vzhľadom na mnohé fluorochrómy požadovaných rozhodli sme sa charakterizovať iba žalúdočné CD103 +
DC ďalej, pretože tieto bunky sú zapojené tak dôležité, antigén prezentujúce bunky sliznice [18]. Žalúdočné CD103 + DC boli ľahko identifikované farbením pre CD11c a CD103 (obr. 2B). Žalúdočné CD103 + DC vyjadrené vysokej hladiny MHC-II, a pozostával z CD11b nízke a CD11b s vysokým podmnožiny (obr. 2C). V porovnaní s tým žalúdočné CD103 - DC boli všetky CD11b vysoká (obr 2D.). Okrem toho, CD103 + DC postrádali expresiu CD8α a F4 /80 (obr. 2C). Avšak, frekvencia CD103 + DC významne nezmenili v žalúdočnej sliznici po infekcii (obr. 2E).}

žalúdočné makrofágy a CD103 + DC nepodarí upregulate kostimulačný molekuly po H. pylori
infekcie

Za účelom skúmania možných účinkov H. pylori
infekcie na expresiu kostimulačný molekúl a MHC-II žalúdočné makrofágy a CD103 ^{+ DC je expresia týchto markerov bola analyzovaná prietokovou cytometriou po štyroch, ôsmich a 26 týždňov po infekcii. V rovnovážnom stave, makrofágy a CD103 + DC v žalúdku lamina propria vyjadril podobné hladiny kostimulačný molekuly CD86, rovnako ako MHC-II (obr. 3A). Prekvapivé je, že expresia CD86 a MHC-II buď žalúdočné makrofágy alebo CD103 + DC nebol po infekcii H zvyšuje. pylori
v porovnaní s vekovo zodpovedajúcimi naivných myší analyzovaných v paralelnom (obr. 3b). Tak, makrofágy a CD103 + DC v žalúdku lamina propria nepodarí upregulate CD86 a MHC-II po H. pylori
infekcie, a to napriek pokračujúcej zápalovej reakcie.}

M1 polarizácie žalúdočných makrofágov počas H. pylori
infekcie

Vzhľadom k tomu, naše výsledky naznačujú, že žalúdočné makrofágy nemusí byť plne aktivovaný počas H. pylori
infekcie, tieto bunky sme vyznačuje ďalej tým, že skúma ich M1 /​​M2 polarizáciu. Ak chcete zistiť makrofágov polarizáciu počas H. pylori
infekcie, sme použili PCR v reálnom čase pre meranie expresie génov spojených s M1 alebo M2 polarizáciu makrofágov v žalúdočnej tkanive [8], [9]. Merali sme tiež expresiu IL-10, ktoré sa môžu vyrábať regulačné makrofágy [9]. Žiadny z markerov analyzovaných boli odlišne exprimované štyri týždne po H. pylori
infekcie vzhľadom k naivným myší (obr. 4A). Na osem týždňov po infekcii expresie markerov M1 INOS a CXCL11 bola významne zvýšená, a tieto markery boli ďalej up-regulovaná v 26 týždňoch infekcie (obr. 4a). Okrem toho, expresia IL-10 bola up-regulovaná v ôsmich a 26 týždňoch infekcie vzhľadom k naivným myší (obr. 4A). Na rozdiel od značky M2 nájsť v zápalovom zóne 1 (FIZZ1) a arginasa-1 neboli rozdielne exprimované v žalúdku na štyri, osem alebo 26 týždňoch infekcie v porovnaní s naivných myší (Obr. 4A).

na identifikáciu zdroja INOS a CXCL11 v žalúdočnej sliznici, makrofágy (CD11b ^{+ GR1 -Siglec-F -MHC-II +), eozinofily (CD11b + GR1 -Siglec-F + MHC-II -) a zvyšné bunky po vtokové mimo makrofágy a eozinofily (CD11b - a CD11b + GR1 +) boli triedené z zlúčené žalúdočné lamina propria buniek myší infikovaných H. pylori
počas 26 týždňov (obr. 4b). Expresie mRNA INOS a CXCL11 v populáciách buniek vytriedených z infikovaných myší, rovnako ako na celkovom žalúdočné lamina propria bunky z naivný a myší infikovaných bolo stanovené pomocou real-time PCR. Dostatočný počet triedených makrofágov nebolo možné získať od naivných myší pre spoľahlivú analýzu expresie mRNA. Žalúdočné makrofágy vyjadril najvyššiu úroveň INOS a CXCL11 v porovnaní s ostatnými populáciou triedeného buniek a celkový lamina propria buniek žalúdka pred triedenia (obr. 4C). Dohromady tieto výsledky ukazujú, že žalúdočné makrofágy sú polarizované pre M1 v H. pylori
infekcie.}

Očkovanie proti H. pylori
zosilňuje makrofágov M1 polarizácie

Ochranné očkovanie proti H. pylori
je všeobecne spojené s rýchlym rozvojom žalúdočné reakcie Th1 [19]. Vzhľadom k tomu, Th1 cytokín, interferón-γ indukuje makrofágov M1 polarizácie [9], sme skúmali, či očkovanie by mohli ovplyvniť makrofágov polarizáciu v H. pylori
infekciu. Za týmto účelom boli myši imunizovaní s sublingválne H. pylori
lyzátu a cholera toxín adjuvans a následne napádal s H. pylori
SS1. Tento imunizačný schéma viedlo k významnému zníženiu baktérií v žalúdku štyroch týždňov po výzve (obr. 5A). V rovnakej dobe, expresie M1 a M2 markerov v žalúdku bola analyzovaná pomocou PCR v reálnom čase. V neimunizovaných myší len vyjadrenie CXCL11 významne up-regulovaná štyri týždne po infekcii v porovnaní s naivných myší (Obr. 5B). Na rozdiel od toho imunizované myši vykazovali veľký upregulace ako M1 markery INOS a CXCL11, zatiaľ čo expresia markerov M2 FIZZ1 a arginasa-1 sa nemení, štyri týždne po infekcii (obr. 5B). Zvýšená expresia INOS a CXCL11 v imunizované /napadnúť myší nebola spôsobená samotným imunizácie, pretože imunizovaní ale non-napadnúť myší nezmenila expresiu niektorého z analyzovaných M1 alebo M2 markerov v porovnaní s úplne neošetrených myší (dáta nie sú uvedené ).

Okrem toho sme analyzovali frekvenciu makrofágov v žalúdočnej sliznici imunizovaných myší a kriticky pomocou prietokovej cytometrie. V porovnaní s infikovanými-iba u myší, imunizovaných myší mala výrazne vyššiu frekvenciu žalúdočných makrofágov tri týždne po výzve (obr. 5C). Avšak aj napriek že makrofágy boli prijatí na žalúdočnú sliznicu imunizovaných myší a kriticky, makrofágy ani upregulate expresiu CD86 a MHC-II v pomere k infikovaných len pre myši (Obr. 5D). Tieto výsledky ukazujú, že po úspešnom očkovaní H. pylori
lyzát a toxín cholery, makrofágy sa hromadí v žalúdočnej sliznici a sú rýchlo polarizované do M1 po infekcii.

Augmentácia makrofágov M1 polarizácie v ľudskom atrofická gastritída

Ďalej sme skúmali úlohu zo H. pylori infekcie a
atrofickú gastritídou pre makrofágov polarizácie v ľudskom žalúdočnej sliznice. Za týmto účelom expresie ľudských M1 (INOS, CXCL11) a M2 markerov (CCL17, CCL18, CD206) bola meraná v biopsiách dutine pomocou real-time PCR. H. pylori
-infected jedincov s nekomplikovanou gastritídu vykazoval významne zvýšené expresiu mRNA pre oba M1 (INOS, 8-krát; CXCL11, 20-krát) a M2 markerov (CCL17, 30-násobné, CCL18, 70-krát, CD206 , 2-krát), v porovnaní s neinfikovanými dobrovoľníkmi (obr. 6a). Avšak, jedinci s atrofickej gastritídy, (4/6 mal črevnú metaplázia okrem atrofia), vyjadrená aj vyššie hladiny INOS mRNA v porovnaní s pacientmi s nekomplikovanou gastritídou (20-násobné), vzhľadom k tomu, CXCL11 a markery M2 polarizácia Podobne boli vyjadrené (Obr. 6A). V skutočnosti, je expresia INOS bolo 180-násobné zvýšenie u jedincov s atrofickej gastritídy, v porovnaní s neinfikovanými kontrolami (obr. 6A), čo naznačuje zvýšenú M1 polarizáciu žalúdočných makrofágov u pacientov s atrofickej gastritídy ,.

Pre zistenie, či zvýšená expresia mRNA M1 a M2 markery tiež premieta do zvýšenia hladiny proteínu, celkom proteíny boli extrahované z antrálnej vzorkách biopsie a koncentrácie INOS a CCL18 bola stanovená testom ELISA. Žalúdočné biopsie z jedincov s atrofickej gastritídy, je k dispozícii len pre extrakciu proteínov z jedného dobrovoľníka, ktorý je rôzne uvedené na obrázku 6B. Polovica H. Pylori
-infected jedincov malo detekovateľné množstvo proteínu INOS v dutine, zatiaľ čo koncentrácia INOS bol pod detekčným limitom vo všetkých neinfikovaných jedincov (obr. 6B). Expresie INOS mRNA a INOS proteínu bola významne koreluje (R ^{2 = 0,88, P
< 0,01), čo ukazuje, že analýza mRNA odráža expresie proteínu, aj keď hladiny proteínov sú nízke. Koncentrácia markeru CCL18 M2 sa v žalúdočnej tkanive z H zvyšuje. Pylori
-infected jedincov v porovnaní s neinfikovanými kontrolami (obr. 6B). Okrem toho, koncentrácia CCL18 proteínu bola významne koreluje s expresiou mRNA CCL18 (R 2 = 0,754, P Hotel &0,01).}

Dokopy tieto výsledky naznačujú, že prítomnosť oboch M1 a M2 makrofágov v žalúdočnej sliznici H. pylori
-infected jedincov. Okrem toho, atrofická gastritída je spojený so silným zosilnenie INOS expresie v žalúdočnej sliznici, čo naznačuje zvýšenú M1 polarizáciu makrofágy.

Diskusia

V tejto štúdii sme skúmali polarizáciu žalúdočných makrofágy počas chronickej H. pylori
infekciu. Ukázali sme, že H. Pylori
-infected jedinci vyjadriť mRNA v žalúdočnej sliznici orientačné zmiešané M1 /​​M2 polarizáciu makrofágov, a táto bola ďalej potvrdená na úrovni proteínu. Avšak, v H. pylori
indukovaná atrofickú gastritídu došlo k výraznému prevýšenie v expresii INOS v porovnaní s nekomplikovanou žalúdka. Atrofická gastritída priznáva zvýšené riziko vzniku rakoviny žalúdka v porovnaní s nekomplikovanou H. pylori
-associated gastritídu [20]. Zvýšená expresia INOS v atrofickej gastritídy, môže prispieť k rozvoju rakoviny žalúdka cez produkciu reaktívnych foriem dusíka, ktorý môže podporovať karcinogenéze indukciou poškodenie DNA, narušenie opráv DNA, post-translačný modifikácie proteínov a mutácií p53 [4]. V skutočnosti, INOS-deficitného myši majú zníženú incidenciu adenokarcinóme žalúdka po H. pylori
infekcie a výzvou s chemickou karcinogén, v porovnaní s normálnou myši [6]. Tiež, polymorfizmy v promotorové oblasti INOS, čo vedie k vyššej transkripčný aktivity, korelujú s vyšším výskytom črevnej typu rakoviny žalúdka u japonských žien [21].

Na rozdiel od ľudskej H , pylori
infekcie, SS1 infikovaných C57BL /6 myši vykazovali profilu génovej expresie v žalúdočnej sliznici orientačné makrofágov M1 polarizácie. Analýza génovej expresie triedených makrofágov izolovaných z žalúdočnej sliznice infikovaných myší bolo potvrdené, že expresia markerov M1 INOS a CXCL11 bola obohatená v zoradené makrofágov populácie. Okrem toho M1 polarizácie žalúdočného makrofágov bola podstatne urýchlená predchádzajúcom očkovaní. Už štyri týždne po teste, imunizovaných myší stimulovaná expresie INOS a CXCL11 na podobnú úroveň, aké boli pozorované po 26 týždňoch v infikovaných-len u myší. Štúdia INOS-myší s deficitom ukázali, že INOS podporuje rozvoj atrofia a rakoviny v žalúdočnej sliznici v Helicobacter infekcie
[6], [22]. Navyše klírens H. pylori
po očkovaní dochádza nezávisle na INOS [23]. Preto sa zdá INOS prispieť k hostiteľovi patológie, skôr než ochranu pri infekcii H. pylori
. Z tohto dôvodu, v prípade, že zvýšená produkcia INOS v žalúdočnej sliznice je udržiavaná po očkovaní, môže byť ako nežiaduci vedľajší účinok, ktorý môže rozšíriť závažnosť H. pylori
indukovaná zápal a zhubný nádor, ak je dosiahnutá sterilný imunitu. Ale relatívny prínos INOS hostiť patológie oproti ochrany pri rôznych fázach H. Pylori
infekcie vyžaduje ďalšie vyšetrovanie.

sme pozorovali sekvenčné náboru vrodených buniek žalúdočnej sliznici SS1 infikovaných myší, s makrofágy hromadeniu relatívne neskoro v priebehu infekcie (26 týždňov). Na rozdiel od toho frekvencie žalúdočných neutrofilov a eozinofilov v žalúdočnej sliznici zvýšená osem týždňov po infekcii a zostali zvýšené na 26 týždňov. Hromadenie makrofágov došlo oveľa rýchlejšie u očkovaných myší, pričom v tomto prípade sa frekvencia žalúdočných makrofágov zvýšených už tri týždne po teste. Predtým bolo preukázané, neutrofily, ktoré majú byť prijatí na žalúdočnú sliznicu SS1 infikovaných myší v dvoch fázach, jeden skorá fáza dosiahla vrchol 1-2 dní po infekcii a jeden neskorej fáze začína na 2-3 týždne po infekcii [24]. Personálne vzor, ​​podobný tomu z neutrofilov, bolo tiež opísané pri žalúdočných makrofágy [24]. Avšak, makrofágy boli definované ako CD11b ^{+ GR1 - bunky [24], bunková populácia, ktorá v našich rukách primárne pozostáva z eozinofilov (viď obr. 1 a 2). Asim et al. definované ako makrofágy CD11b + F4 /80 + bunky, a pozoroval skorý vrchol v makrofágov čísla v žalúdočnej sliznici 1-2 dni po infekcii H. pylori
[15]. Okrem toho je počet makrofágov bola opäť zvýšená na 60 až 120 dní po infekcii v porovnaní s doteraz neliečených myšou [15]. Máme rozšíriť tieto výsledky ukazujú, že nábor z týchto populácií buniek vrodeného je udržiavaná až do 26 týždňov po infekcii. Ďalej popíšeme akumuláciu eozinofilov v žalúdočnej sliznice, bunkovú populáciu, ktorá zďaleka prevyšuje počet žalúdočných makrofágov a neutrofilov (obr. 1). V skutočnosti, role eozinofilov v H. pylori
indukovaná gastritídu by sa môžu ďalej skúmať. Eozinofily a makrofágy podiel expresie niekoľkých markerov, vrátane CD11b a F4 /80 (obr. 1, [25]). Preto je viac markerov je potrebné analyzovať súčasne aby rozlišoval týchto populácií vrodené buniek.}

Boli sme schopní identifikovať dva súbory radičov v žalúdočnej sliznici myší. Obe podskupiny vyjadrené vysokej hladiny CD11c a MHC-II, chýbala expresia markeru makrofágov F4 /80, ale líšil sa s ohľadom na expresiu CD103. Frekvencia žalúdočné CD103 ^{+ DC ani po štyroch, ôsmich alebo 26 týždňov H zmení. pylori
infekciu. Na rozdiel od našej štúdii, nedávne štúdie spoločnosti Kao et al. nemohol detekovať CD103 + radiče domény v žalúdočnej sliznici neinfikovaných myší [26]. Skôr CD103 + DC sa objavili po 24 hodinách H. pylori
infekciu. Od čias analýzy líši tejto štúdie a našich experimentoch, je ťažké priamo porovnávať výsledky.}

Napriek tomu, že M1 makrofágy zvyčajne upregulate MHC-II a kostimulačný molekuly, sme nemohli zistiť zvýšenú expresiu MHC -II alebo CD86 na makrofágy žalúdočných alebo CD103 ^{+ DC buď z neimunizovaných alebo očkovaných myší po infekcii. Na rozdiel od toho in vitro inkubácie H. pylori
s ľudskými monocytmi [27], ľudských monocytov odvodené DC [28], [29], [30], [31], myší kostnej drene DC odvodené [32], [33], alebo ľudských primárnych žalúdočných DC [34], indukuje upregulaci kostimulačný molekúl a MHC-II. Z tohto dôvodu sa nepodarilo upregulate MHC-II a CD86 na makrofágy a žalúdočných CD103 + DC v chronickej H. pylori
infekcie môže byť spôsobené zápalovou prostredia a nie baktérií ako takých. V skutočnosti, interakcia medzi radiče domény a H. pylori
in vitro nemusí nutne zodpovedať tomu, čo sa stane, in vivo, kde miestne mikroprostredie v mieste získania antigénu a prezentáciu antigénu, ako aj čiastkové DC podieľajú na prezentácii antigénu H. pylori
, bude mať vplyv na reakciu. Napríklad regulačných T-buniek, ktoré sú prevládajúce v H. pylori
-infected žalúdočnej sliznice [35], [36], môže zabrániť upregulaci kostimulačný molekúl a MHC-II na DC [37]. Okrem toho IL-10 môže zabrániť upregulaci kostimulačný molekúl a MHC-II na makrofágy a DCS [38].}

V akútnych zápalových reakcií, makrofágy sú zvyčajne polarizované k M1 a vyvinúť silné antimikrobiálne účinky. Napríklad infekcia Salmonella typhimurium
alebo Listeria monocytogenes
indukuje M1 polarizáciu makrofágov, ktorá je nevyhnutná na kontrolu infekcie [39]. Rozlíšenie zápal je charakterizovaný posunom makrofágov polarizáciu na M2, ktorá podporuje hojenie tkanív. Pacienti tuberkulózy zobraziť zvýšenú produkciu Th2 cytokínov, ako je infekcia postupuje [40], [41], ktoré môžu vyvolať M2 polarizáciu makrofágov. U myší, M1 polarizácia makrofágov predstavuje skorú odpoveď na Mycobacterium tuberculosis
, že alveolárne makrofágy sú polarizované pre M2 počas neskorej fázy infekcie [42]. Avšak, posun v makrofágov indukovanej polarizácie chronickej infekcie často má za následok zníženú schopnosť makrofágov zabiť napádajúci baktérie [39], [43]. Na druhej strane, chronický zápal s pretrvávajúcou M1 makrofágov polarizácia je spojená so zvýšeným rizikom vzniku rakoviny [4].

makrofágy prispieva k obrane hostiteľa proti H. pylori
? Na rozdiel od neutrofily, makrofágy, nie sú často vidieť v žalúdočných lumen po translokácii cez epitel [44]. Vzhľadom k tomu, H. pylori
prednostne umiestnené v do žalúdočnej sliznice vrstvy alebo sú pripojené k žalúdočnej epiteliálne bunky, makrofágy, môže prísť do priameho styku s celými baktériami. V skutočnosti, vyčerpania makrofágov lipozómov s drogami naloží nemala žiadny vplyv na H. pylori
kolonizácia [16], čo naznačuje, že makrofágy nemôžu priamo prispieť k hostiteľovi obranu proti H. pylori
. Naproti tomu, makrofágy môžu podporovať žalúdočné patológie. Napríklad vyčerpanie lipozómy sprostredkovanej makrofágov zlepšil na gastritídu vyvolanú H. pylori
infekcie [16]. Okrem toho, selektívne delécie I-kB-kinázy beta v myeloidných buniek, ktorá zabraňuje aktivácii NF-kB v týchto bunkách, inhibuje rozvoj žalúdočné atrofia po H. felis
infekcie [45]. Tak, makrofágy nezdá sa, že prispieva k Helicobacter
vôle, ale môžu podporovať skôr žalúdočné patológiu.

Na záver, táto štúdia ukazuje, že vakcinácia myší proti H. pylori
zosilňuje M1 polarizáciu žalúdočných makrofágov. Podobný jav je vidieť v ľudskom atrofickej gastritídy, kde sa zmieša M1 /​​M2 polarizácia prítomný v nekomplikovanej gastritídy je nahradené M1-ovládal polarizácie. To môže vyvolať nádor podporujúci zápal, a presúva makrofágov polarizáciu od M1 do M2 by teda predstavovať terapeutický cieľ u pacientov s chronickou H. pylori
infekcie.

Materiály a metódy

Ethics vyhlásenie

Štúdia bola schválená vládou etickou komisiou na zvieratách (Göteborgs djurförsöksetiska nämnd, 328/2008 a 254 /2009). Regionálne ľudských etická komisia z Västra Götaland vo Švédsku (706/03 a 85/06) bola schválená štúdia, a písomný informovaný súhlas bol získaný od všetkých účastníkov. To je jediný orgán dávať etické povolenie k výskumu na ľuďoch vo Švédsku, a to nie je priamo spojená do nemocníc alebo na univerzitách.

Myši

Žena C57BL /6 myši boli zakúpené od Charles River Laboratories (Sulzfeld, Nemecko), alebo v prípade pokusov o očkovaní od firmy Taconic (Ejby, Dánsko). Myši boli infikované vo veku 8-12 týždňov.

baktérie a infekcie myší

H. pylori
SS1 bol pestovaný na Columbia ISO agare počas 2 dní pri teplote 37 ° C, po ktorej boli prevedené na Brucella bujóne s prídavkom 5% fetálneho teľacieho séra (FCS) a antibiotikami (vankomycín, 10 ug /ml; Polymyxín B , 20 u /ml, Trimetoprim, 5 ug /ml) a inkubované po pretrepávaní cez noc pri teplote 37 ° C za mikroaerofilní podmienok. Pred infekciou, motilitu baktérií bola potvrdená mikroskopie. Koncentrácia baktérií bola odhadnutá spektrofotometricky. Myši dostali 3 x 10 ^{8 jednotiek tvoriacich kolónie z SS1 do žalúdka.}

Sublingválne imunizácia

myši dostali štyri 10 ul dávky 500 ug H. pylori
lyzátu (pripravený z kmeňa Hel305 ako bolo opísané skôr [46]) v kombinácii s 10 ug cholera toxínu (List Biological Laboratories Inc., Madison, NJ) pod jazyk na 1-týždňových intervaloch [47], [48]. Dva týždne po poslednej imunizácii boli myši napádaný žalúdka 3 x 10 ^{8 kolónií tvoriacich jednotiek H. pylori
SS1.}

Vyhodnotenie bakteriálnej kolonizácie

Pre kvantitatívne vyhodnotenie bakteriálnej kolonizácie v imunizačných pokusoch, jedna polovica žalúdka sa opatrne premyjú PBS a homogenizované pomocou Ultra Turrax homogenizátora ( IKA Laboratory Technology, Staufen, Nemecko). Sériová riedenie homogenátu boli schovať na agarové platne Skirrow. Keď boli žalúdočné lamina propria bunky izolované z celého žalúdka nemôže urobiť kvantitatívne odhad žalúdočné baktérií. V tomto prípade je žalúdok, ktorý bol rez pozdĺž veľkého zakrivenia a premyté v PBS, bolo opatrne nanesené na agarové platne Skirrow. Prítomnosť H. pylori
kolónie bola potvrdená testom ureázy. Týmto spôsobom by sme mohli potvrdiť H. pylori
kolonizácie a stále používať celý žalúdok pre izoláciu buniek.

Izolácia žalúdočné buniek lamina propria

žalúdočných žliaz bol rozrezaný na kusy 5 mm a inkubujú celkom trikrát H.

• PLoS ONE: Presnosť a limitných hodnôt pre Pepsinogens I, II a gastrínu 17 pre diagnostiku žalúdočného fundusu atrofiou: Vplyv Gastritis
• Ploche ONE: Bakteriálna mikroflóry profilovanie v gastritídou bez infekcie Helicobacter pylori alebo nesteroidný protizápalový liek Use