Plos ONE: žužkojede netopirje Digest hitina v želodcu Uporaba kisla sesalce Chitinase

Povzetek

prebavni trakt živali je prilagojen njihovi glavni vir hrane za optimalno rabo virov in vnos energije. Zmernih vrst netopirjev večinoma hranijo na členonožce. Te vsebujejo hitin ogljikovih hidratov energetsko bogate, ki je neprebavljiva za endogenih encimov tipične prebavilih sesalcev. Vendar pa je treba prebavni trakt vrst netopirjev morajo biti prilagojeni prehrani in lahko prebavljiv hitin. Domnevali smo, da (i) evropski vespertilionid vrst netopirjev imajo prebavni encim chitinase in da (ii) chitinolytic dejavnost se nahaja v črevesju, kot je bilo v severnoameriški vrst netopirjev našel. Gastrointestinalne trakti sedmih vrst netopirjev ( Pipistrellus Pipistrellus
, Plecotus auritus
, Myotis bechsteinii
, Myotis nattereri
, Myotis daubentonii
, Myotis myotis,
in Nyctalus leisleri
) smo testirali na chitinolytic dejavnosti s diffusion testom. Prebavil trakta v P. Pipistrellus
, P. auritus
, M. nattereri
, M. myotis,
in N. leisleri
so bili pregledani za kislo chitinase sesalcev, ki ga zahodne analize blot. Tkivo deli prebavil P. Pipistrellus
so imunohistokemicno analizirali najti kisel chitinase sesalcev. Chitinolytic aktivnost je bila odkrita v želodcih vseh vrst netopirjev. Western blot analiza je potrdila kislo chitinase sesalcev v vzorcih želodcu. Imunohistokemija na P. Pipistrellus
prebavila so pokazali, da je kisla chitinase sesalcih nahaja v želodcu glavnih celicah v spodnjem delu želodca žlez. Skratka, evropska vrst netopirjev vespertilionid imajo kislo sesalcev chitinase, ki se proizvaja v želodčnih žlez v želodcu. Zato so prebavne trakte za žužkojede vrste netopirjev razvili za encimsko prilagajanje prehrani

Navedba. Strobel S, Roswag A, Becker NI, Trenczek TE, Encarnação JA (2013) žužkojede netopirje Digest hitina v želodcu Uporaba kisla sesalcev Chitinase. PLoS ONE 8 (9): e72770. doi: 10,1371 /journal.pone.0072770

Urednik: François Blachier, Nacionalni inštitut za agronomske raziskave, Francija

Prejeto: March 26, 2013; Sprejeto: 12 julij 2013; Objavljeno: 3. september 2013

Copyright: © 2013 Strobel et al. To je odprtega dostopa članek razširja pod pogoji Creative Commons Attribution License, ki omogoča neomejeno uporabo, distribucijo in razmnoževanje v katerem koli mediju, pod pogojem, da prvotni avtor in vir knjižijo

Financiranje:. Avtorji nimajo podpore ali sredstva za sporočanje

konkurenčni interesi:.. avtorji so izjavili, da ne obstajajo konkurenčni interesi

Uvod

Živali morali zaužiti in prebaviti hrano, da se zagotovi neprekinjeno delovanje svojih notranjih presnove, ki ga pokrivajo, na primer, njihova energija, beljakovine in zahteve vitaminski [1]. Proces večstopenjski prebave vključuje mehanske, kemijske in encimske korake za pretvorbo hranilnih snovi [2]. Vrst netopirjev imajo visoko množično specifične potrebe po energiji zaradi svoje majhnosti in sposobnost, da aktivno letenje [3], [4]. V plujejo živali, mora hrana, ki se hitro obdelajo za zmanjšanje povpraševanja po energiji z večjo maso letenja [2] je povzročil. Evropski vrst netopirjev ima prehrana je sestavljena pretežno iz členonožcev [5]. Imajo kratek čas zadrževanja [6], ampak visoka prebavnega učinkovitost [7]. To pomeni, da je njihova prebavil (GI) trakta zelo prilagoditi svojo prehrano, saj prebavi členonožcev hitro in temeljito. Zato je mogoče trditi, da evropski vrst netopirjev je odvisna od členonožcev specifičnih prebavnih encimov. Ker členonožci predstavlja do 75% hitina (energijski vsebnosti, 21,2 kJ /g, [8]), je zelo verjetno, da so vrste netopirjev sposobni prebaviti chitinous materiala, kot je bilo prikazano v drugih vretenčarjev, kot so navadni zelenec ( Lacerta viridis
), skupna kos ( Turdus merula
) in rdeča lisica ( vulpes vulpes
) [9], [10].

Hitin lahko razgradi z chitinases (ES 3.2.1.14) in nekatere lizocimi (ES 3.2.1.17) [11], [12]. Pri sesalcih, ki so bile ugotovljene le dve chitinases: hitotriozidaze in kislo chitinase sesalci (AMCase) [13], ki sta razvrščeni kot endochitinases [14]. Hitotriozidaze se v glavnem izločajo fagociti in deluje proti patogenom, ki vsebujejo citin [15]. AMCase je bila doslej opredeljena le pri miših (Mus musculus), opicah (Macaca fascicularis) in ljudi [16], [17]. To je zelo izražena v želodcu in pljučih, kar kaže na dvojno prebavne in imunološko funkcijo [16], [17]. Chitinolytic dejavnost lahko tudi izvira iz endogenih encimov, zaužite hrane, prisotne v prebavilih, ali encimov, mikroorganizmov [18], [19].

Chitinolytic aktivnost v prebavilih ni bilo mogoče najti v več žužkojede vrst netopirjev [8], [9]. Vendar pa ni poznavanje ustreznega encima. Jeuniaux [9] preverjeno chitinolytic aktivnost v GI traktu Rhinolophus ferrumequinum
, a evropskih netopirjev vrste iz družine Rhinolophidae. Whitaker sod. [8] je pokazala chitinolytic aktivnost v GI traktu severnoameriški vespertilionid bat vrst rodov Myotis
, Eptesicus
, Nycticeius
, Lasiurus
Pipistrellus
in Lasionycteris
. So izolirali proizvaja chitinase bakterijskih sevov iz črevesa kot vira za chitinolytic aktivnost. V nasprotju s tem, [9] Jeuniaux našli dokaze o chitinolytic dejavnosti v želodčni sluznici želodca Rhinolophus ferrumequinum
ker je črevo razstavljena ne chitinolytic aktivnosti. Vendar Buchholz, Wells & Conaway [20] ni bilo mogoče zaznati nobenega chitinase v žužkojede vrst netopirjev Pipistrellus subflavus
in Myotis grisescens
. Poleg chitinases, nekateri lizocimi lahko raztopi hitina [11], [12]. Na primer, Phillips, Weiss & Tandler [21] zaznal lizocima v slinavkah za žužkojede vrst netopirjev in razmišljal, da bi lahko deloval kot chitinolytic encim v slini. Vendar lizocimi so predvsem anti-bakterijski in so pomemben del imunskega sistema [22] ali za prebavo bakterij v prežvekovalcev [12].

smo hipotezo, da (i) evropski žužkojede netopirjev vrste iz družine Vespertilionidae imajo chitinolytic aktivnosti v prebavnem traktu, kot je bilo prikazano na vrsto severnoameriški žužkojede netopirjev [8] in enega evropskega vrst netopirjev iz družine Rhinolophidae [9], in (ii) chitinolytic dejavnost se nahaja v črevesju, kot je bilo prikazano na severnoameriških vrst [8]. V tej študiji smo se nahajajo chitinolytic dejavnosti in opredeliti ustrezen encim kot AMCase pomočjo encima Preskusno, imuno in imunohistokemično.
Uporablja

Materiali in metode

Etika izjava

Vsi posamezniki v tej študiji je umrl v prostovoljnih rehabilitacijskih centrih za netopirje. Bili so dostavljena prostovoljci brez kakršnega koli nadomestila. Po Zakonu o nemški dobro počutje živali (TschG §4 (3)) in Zveznega zakona ohranjanju narave (BNatSchG §45 (4)) ni potrebno dovoljenje za delo na truplih. Želodec miška je ostanek študije Inštituta za anatomijo in biologijo celice na Justus-Liebig Univerzi v Giessen, ki je bil odobren s strani regionalnega sveta (št V54-19C20 /15C Gießen 20/23 400AZ). Nobena žival je bila ubita za namene te študije.

shranjevalnim vsebnikom tkiva

Carcasses so bili shranjeni takoj po smrti pri -20 ° C. Netopirji so dostavljena na ledu tj zamrzne na Univerzi v Giessen. Trupla so bili shranjeni za največ šest mesecev pri -80 ° C do priprave tkiv. Makro- in mikroskopske ugotovitve preverila zelo dobro ohranjanje organov in celic, ki je vložil encimov in histološke preiskave tkiv mogoče.

Priprava tkiva

Trupi sedmih žužkojede vrst netopirjev, brez kakršnih koli znakov gnitja ( Pipistrellus Pipistrellus
( n
= 14), Plecotus auritus
( n
= 3), Myotis bechsteinii
( n
= 1), Myotis nattereri
( n
= 3), Myotis daubentonii
( n
= 2) Myotis myotis
( n
= 1) in Nyctalus leisleri
( n
= 1)) so bile uporabljene v tej študiji (tabela 1) . Po odprtju steno trebuha, je GI trakta odstranimo, sprali z 0,9% NaCl in posušimo na filtrirni papir. GI trakta je bil razdeljen na požiralnika, želodca, dvanajsternika, jejunumu /ileumu, ileumu /debelega črevesa in debelo črevo /rektum po Ishikawa et al. [23] in tehtajo na digitalne lestvice (EW2200-2NM, natančnost: 0,01 g; Kern & Sohn GmbH, Balingen, Nemčija). Poleg tega, želodec iz Mus musculus
(sev C57BL /6, črna 6; n
= 1). Je bila uporabljena kot pozitivne kontrole za odkrivanje AMCase ga zahodni blot

Priprava topnih beljakovinskih frakcij

segmenti GI traktu, ki niso fiksni, sveže primerke p. Pipistrellus
( n
= 11), P. auritus
( n
= 3), M. bechsteinii
( n
= 1), M. nattereri
( n
= 3), M. daubentonii
( n
= 2), M. myotis
( n
= 1) in N. leisleri
( n
= 1) in želodec M. musculus
posamično zmeljemo v možnarju in zdrobiti z izjemno čisto morje pesek (Merck, Nemčija) in 0,9% NaCl (standardizirano količino tkiva: 1 ml na 100 mg tkiva). Homogenate inkubiramo preko noči pri 4 ° C, [10] in nato centrifugiramo (20 minut, 3500 g, 4 ° C). Supernatante hranijo pri -20 ° C do nadaljnje analize

Določanje chitinolytic dejavnosti

Za merjenje chitinolytic aktivnost, smo pripravili agaroznem gelu plošče kot Zou, Nonogaki &opisano.; Welbaum [24], z nekaterimi spremembami. Fosforna kislina otekle hitina pripravimo z mešanjem 10 g hitin iz rakovih lupin (Roth, Nemčija) s 100 ml 85% fosforno kislino ter inkubiramo 48 ur pri 4 ° C. Nato dodamo 2 L hladno vodo iz pipe in nastalo pogačo sprali dokler ni bil dosežen pH 6,5 [25], [26]. Agarose (1,6%) smo raztopili v inkubacijskem pufru (pH 5,0), [24] v mikrovalovni pečici in ohladili na 50-60 ° C. Nato dodamo fosforno kislino otekle hitina (0,5%) in 10 ml te suspenzije smo odpipetirali v 85 mm petrijevke. Po polimerizaciji so vodnjaki 4-mm-premer udaril v agaroznem in gel kosov smo odstranili s pomočjo vodnega curka črpalko

liofiliziranih prahu s standardno chitinase iz Serratia marcescens
(5 U.; Sigma-Aldrich, Nemčija) smo raztopili v 1 ml inkubacijski pufer kot standardne raztopine. Znano koncentracijo standardne chitinase dodamo vsako ploščo, kot je referenčna in inkubacijo pufer uporabimo kot negativno kontrolo. Prvo, 6 ul vzorca vsake raztopine smo pipetirali na jamico, nakar smo plošče inkubirali 20 minut pri sobni temperaturi, da se omogoči vzorci difundira v agar. Nato je bil dodaten L vzorca dodamo v vsako vdolbinico in plošče inkubiramo pri sobni temperaturi 20 minut, čemur sledi inkubacija pri 37 ° C za 20 h. Agaroza Plošče smo nato obarvamo z 0,1% calcofluor (Calcofluor lesk M2R; Sigma, MO, ZDA) 10 minut in izperemo z destilirano vodo 2 h. Litičnih območja smo prikazali s pomočjo UV presvetlitvijo in nato fotografirali. Premeri litičnih območij so bile izmerjene z uporabo GIMP (različica 2.6.11, www.gimp.org). Uporaba serije reference redčenje raztopine chitinase parka z encimske aktivnosti inkubacijska varovalnih smo izračunali s premerom cone v odvisnosti od logaritma koncentracije in razlike med ploščami so bile prilagojene z internimi standardi chitinase, ki se uporabljajo na vsaki petrijevki.

Za analizo encimsko aktivnost pri različnih vrednostih pH, ​​smo gel plošče pripravili kot prej, vendar z različnimi vrednostmi pH (pH 4,0, pH 5,0, pH 6,0, pH 7,0 in pH 8,0). Supernatante želodca, dvanajsternika, jejunumu /ileuma, ileuma /debelega črevesa in debelo črevo /danke ene ribe P. Pipistrellus so
uporablja. The litičen območja smo prikazali s pomočjo UV presvetlitvijo in analizirali, kot prej. Poleg tega, pH vrednosti odsekov GI trakta petih posameznikov P. Pipistrellus so
merijo z-Multicolor kodirani pH papir (pH 0,0-6,0: Acilit, natančnost 0,5; pH 6,5-10,0: Posebna Kazalec, natančnost 0,3; Merck).

Izražanje chitinase v prebavilih

blot analiza Western.

Western blot je bila izvedena za prepoznavanje in biokemično poiskati chitinase v prebavilih evropskih vrst netopirjev in izključiti chitinolytic dejavnost, ki jo lizocimi povzročil. Supernatante vzorcev tkiva iz šestih vrst netopirjev (oddelek GI trakt vzorci (želodcu, dvanajstniku, jejunum /spodnje tanko ćrevo, spodnje tanko ćrevo /debelega in debelega črevesa /danke). P Pipistrellus
( n
= 2 ), P. auritus
( n
= 2), M. nattereri
( n
= 1), M. Myotis
( n
= 1) in N leisleri
( n
= 1); dodatni želodčne vzorcev:.. P Pipistrellus
( n
= 9), M. nattereri
( n
= 1), M. daubentonii
( n
= 2)) in želodec iz M. musculus
uporabimo kot pozitivno kontrolo [27] izpostavimo natrijev dodecil sulfat, poliakrilamid elektroforeza (SDS-PAGE) (Laemmli [28], modificirano po Sambrooka, Fritsch & Maniatis [29]).

supernatante vsake 750 ig tkiva zmešamo 1:1 v 2 x SDS gel pufra in segrevamo do 95 ° C za 3 min. Vsakega vzorca, je bila 15 u.l podvržemo 12% ločitveno gela in 5% zlaganja gelu. Elektroforeza bil izveden pod redukcijskimi pogoji pri napetosti 100 V. Ločene proteine ​​smo electroblotted 1 uro pri konstantni tok 0,8 mA /cm ^{2 na PVDF membrano. The blots smo blokirali s 5% nemastnega posušenega mleka v tris pufrom (TBS, pH 7,5), ki vsebuje 0,1% Tween 20 (Roth) 1 uro pred inkubacijo z protitelesa kunčje poliklonalno usmerjeno proti N-terminalu kisle chitinase ( AVIVA sistemska biologija, CA, ZDA, razredčen 1:1000 v TBS z 1% BSA) pri 4 ° C preko noči. Po spiranju s TBS, ki vsebuje 0,05% Tween 20 in 0,1% BSA, smo membrane inkubirali 1 uro z alkalno fosfatazo konjugiranega kozjega poliklonskega protitelesa kunčjega IgG (H & L) (Roth, proti Rabbit-AP 4751; razredčili 1:7500 v TBS, ki vsebuje 1% BSA). V blots speremo štirikrat in vezavi protitelesa smo vizualizirali z inkubacijo z bromochloroindoyl fosfata (Bethesda Research Laboratories, MD, USA) in nitroblue tetracolij substrata (Biotech Trade & Service GmbH, Nemčija) po Harlow in Lane [30]}

Imunohistokemija.

Če želite najti AMCase na celičnem nivoju, je imunohistokemični analiza je bila opravljena na segmente prebavil v p. Pipistrellus
( n
= 3). deli trakta GI bile določene v 4% paraformaldehida v-fosfatnim pufrom (pH 7,0), 24 ur, preden so sprali 4 x 1 h z TBS. Nato bloki tkiva bili dehidrirali v stopenjski etanola serije (30%, 50%, 70%, 90%, 100%) in končno vgrajeni v parafin. V parafinske bloke smo narezali na oddelkih 4-9 debeline um s pomočjo sani Mikrotom (Leitz, Nemčija) in posušimo preko noči. Da bi dobili dostopnih antigenski vezni mesti, so bili odseki tkiva predigested s pepsinom (Sigma) po Goto et al. [27]. Oddelki speremo z 0,01% Tween 20 v TBS. Nespecifični mesta smo blokirali s 5% kozji serum (Merck) v 3% BSA (AppliChem, Nemčija). Oddelki so bili izpostavljeni protitelesa kunčje poliklonalno usmerjeno proti N-terminalu kislih chitinase (AVIVA Systems Biology; razredčenih 1:200 v TBS, ki vsebuje 1% BSA) v vlažni komori. Nevezani protitelesa smo odstranili s spiranjem z TBS, pred sekundarnih protiteles (ChromeoTM 546, Abcam, Velika Britanija, razredčen 1:2500 v 0,5% BSA v TBS) je bila uporabljena. Saj so bili odseki jedrskih counterstaining inkubirana z 0,05% 4 ', 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) (AppliChem). Po zadnjem izpiranju s TBS, so odseki montirani z 1,4-diazabiciklo [2.2.2] oktan raztopine (DABCO) (Sigma). Za kontrolo avtofluorescenco in vezave specifičnosti protiteles sekcije so bile obdelane s fluorescein izotiocianatom (FITC) označeni sekundarno protitelo, vendar brez primarnega protitelesa. Oddelki so bili ocenjeni s pomočjo fluorescence mikroskopom (Olympus BX60 F-3; Olympus Optical Co LTP, Nemčija).

Rezultati

Chitinolytic dejavnost

smo bili sposobni odkriti chitinolytic aktivnost v vzorcih želodčne vseh posameznikov (na primer sl. 1), in v kolonu /danke vzorca enega, M. myotis, M. nattereri
in N. leisleri
vsak (tabela 2). Ne chitinolytic aktivnost se lahko meri v dvanajstnika, jejunumu /ileuma ali vzorcev ileum /debelega črevesa. Chitinolytic aktivnost v vzorcih želodčne je bila najvišja med pH 5,0 in pH 6,0 (sl. 2). Podpiranje naše prejšnje rezultate, ni bilo chitinolytic aktivnost zaznati v drugih regijah prebavil, ne glede na pH vrednosti. Srednja vrednost pH GI trakta P. Pipistrellus
( n
= 5) je bil 5,6 ± 0,2 v želodcu, 7,0 ± 0,3 v dvanajsternik, 7,1 ± 0,2 v jejunumu /ileumu, 7,0 ± 0,2 v ileumu /debelega črevesa in 7,0 ± 0.5 v debelo črevo /danke.

Izražanje chitinase prebavil

Western analiza blot na M. musculus
želodec kaže karakterističen trak pri relativno molekulsko maso 46 k, kar kaže na prisotnost AMCase. Poleg tega so v vseh vzorcih želodčne za P. Pipistrellus, P. auritus, M. nattereri
, M. myotis
in N. leisleri
je jasno določiti proteinski signal na 46 K (za reprezentativne Western Blot slik, glej sl. 3 za Pipistrellus
in sl. 4 za Plecotus, Myotis
in Nyctalus
). Ta protein skupina ni bila odkrita v požiralnika, dvanajsternika, jejunumu /ileumu, ileumu /debelega črevesa ali vzorcev kolona /danke vrste netopirjev (sl. 3). Vse Imunohistokemične rezultati so bili nadzira avtofluorescenco in nespecifična vezava sekundarnega FITC-vezane protitelesa. Želodec oddelki so bili pozitivni za anti-AMCase označevanje protiteles, medtem ko je v požiralnika, dvanajsternika, jejunumu /ileuma, ileuma /debelega črevesa in debelega črevesa /danke sekcije je bila odkrita nobena zavezujoča. V oddelkih z želodcem, je anti-AMCase označevanje omejena na dnu želodca žlez ob želodčne sluznice okoli-DAPI obarvajo celičnih jeder (sl. 5).

Pogovor

Domnevali smo, da so evropski žužkojede netopirjev vrste iz družine Vespertilionidae imajo prebavni encim chitinase. Ta hipoteza je bila potrjena s prisotnostjo chitinolytic dejavnosti v želodcih iz preučevanih vrst. Nadalje pravi chitinase, natančneje AMCase, lahko biokemično opredeljeni v vseh vzorcih želodcu. Aktivne chitinases so pogosti in ohranjen pri sesalcih [14]. Vendar lokacijo in funkcija AMCase razlikuje med vrstami in niso povsem odpravljena [31].

nadalje hipotezo, da je chitinolytic aktivnost se nahaja v črevesju, zlasti v tankem črevesu, saj je mestu, kjer je glavna encimska prebava in absorbcija poteka [32]. Naši rezultati niso potrdili to hipotezo, saj je chitinolytic dejavnost lokalizirana predvsem v želodcu in tri posameznike, na nizki ravni aktivnosti v debelo črevo /danke. Visoka variabilnost chitinolytic dejavnosti v obravnavanih posameznikov lahko povzroči različne prebavne aktivnost posameznikov v času smrti. To je podprto z različnimi količinami hrane najdemo v GI trakta. The chitinolytic aktivnost v vzorcih želodčne vendar ne v vzorcih debelega črevesa /danke se lahko izsledi nazaj do dejavnosti AMCase in ne na lizocim, ki ga zahodni odtisi. Aktivnost bat AMCase je optimalno med pH 5,0 in pH 6,0. Te vrednosti pH so primerljivi s kislem okolju v želodcev za žužkojede vrst netopirjev, merjeno v tej študiji in Naumova in Zharova [33] poroča. To je prva indikacija za biološko relevantnosti AMCase med prebave v tem delu prebavnega trakta. Vendar pa bi bilo treba nadaljnje poskuse, kot so prebavne preskušanjih učinkovitosti izvesti za test, če je dejavnost AMCase predstavlja biološki pomen za hitin prebavo. AMCase ima dvojno funkcijo v imunitete in razgradnjo, ki vsebujejo citin organizmov [34], [35]. Na primer, človek AMCase ni prilagojena kislem okolju v želodcu, za razliko od AMCase našel pri miših [31]. Želodec AMCase za M. musculus
vsebuje aminokislinskih substitucij, ki so potrebni za prilagoditev na kislem okolju želodca [31]. Poleg tega čevlja sod. [17] je pokazala, da je AMCase mRNA za M. musculus
najdemo le v želodcu. Če so prisotni v AMCase iz vrst netopirjev teh substitucij aminokislin še, da se prikažejo.

imunohistokemičnim Rezultati te raziskave podporo lokalizacijo AMCase v želodcu vrst netopirjev, zlasti v želodčnih žlez sluznice . Poleg tega smo ugotovili, da je encim se nahaja v ali okoli glavnih celice, ki se nahajajo na dnu želodca žlez, kot je bilo predhodno prikazano na želodcu AMCase z M. musculus
[27] [31] [34]. Chief celice izločajo prebavne encime [36], ki se nahajajo v številnih citoplazme zrnca [37]. Skupna encim, ki ga ta želodca vrsto celic je pepsinogen, predhodnik proteolytic encima pepsina v [38]. Goto sod. [27] je pokazala, da je proizvodna želodčne AMCase za M. musculus
v teh izločevalnih zrncih. Zato je zelo verjetno, da se AMCase izločajo tudi želodčnih glavnih celic vrst netopirjev. To je v nasprotju z rezultati Whitaker et al. [8], ki je izjavil, da je chitinase v vrst netopirjev proizvaja za proizvodnjo chitinase bakterijskih sevov (večinoma družine enterobakterije) v črevesju. Znano je, da črevesne bakterije proizvajajo chitinase, da zadovoljijo svoje prehranske potrebe [39]. Vendar pa lahko enterobakterije proizvodnjo chitinase je mogoče najti tudi v GO trakta sesalcev, ki ne hranijo z chitinous materiala [19]. To kaže, da ni tesna zveza med hitin prebavo in chitinolytic bakterij. V tej študiji je bila nizka chitinolytic aktivnost izmerjena v črevesju le nekaj posameznikov, in ne AMCase se lahko zazna, če ločenje črevo iz želodca. To občasno chitinolytic aktivnost lahko pojasnimo s transportom AMCase proizvedenega v želodcu v črevesju s hrano, kot ga Suzuki et al razpravljalo. [34] in Boot et al. [17]. Poleg tega lahko nizka chitinolytic aktivnost v črevesju jih enterobakterij proizvajajo chitinase povzročil [8]. Vendar pa bi bilo potrebno količinsko teh bakterij za potrditev udeležbe v hitin prebavo s temi simbiontov. Zato je verjetno, da se hitina v žužkojede vrst netopirjev prebavi s kombinacijo endogeni želodčne AMCase in chitinase ga črevesne bakterije izločajo, kot je bilo predlagano za M. musculus
[17]. Ta študija jasno kaže, da imajo evropski žužkojede netopirji družine Vespertilionidae prebavni encim AMCase. Pokazali smo, da je ta encim aktiven in se nahaja v želodcu, predvsem v ali okoli glavnih celic na dnu želodca žlez.

Priznanja

Zahvaljujemo E. Mühlbach, R. Keil N. Dittrich in S. Wiegand za vzorce živali in Y. Kühnel, C. von Bredow, A. Diebel in ekologija skupina sesalcev za pomoč.

• Plos ONE: Sonic ježa posreduje širjenju in zaposlovanje preoblikovanega mezenhimskih matičnih celic v želodec
• Plos ONE: Pogojno Izražanje Wnt9b v Six2-pozitivnih celic moti Želodec in ledvic Funkcija