Abstrakt
Bakgrund
För närvarande är det väl fastställts att cancer uppstår i kroniskt inflammerad vävnad. Ett antal NOD-liknande receptorer (NLRs) bildar inflammasomes, intracellulära multiproteinkomplex som är kritiska för att alstra mogna pro-inflammatoriska cytokiner (IL-1 p och IL-18). Som kronisk inflammation i magslemhinnan är en följd av Helicobacter pylori Material och metoder Femtio-en genetisk polymorfism var genotypas i 310 etniska kineser (87 icke-Cardias GC fall och 223 kontroller med funktionell dyspepsi). Dessutom var genexpression av 84 molekyler som är involverade i NLR signaleringsvägen bedömas i THP-1-celler utmanade med två H. pylori s Resultat CARD8 Slutsatser Nya samband mellan polymorfismer i NLR signalväg ( CARD8 Citation. Castaño-Rodríguez N, Kaakoush NO, Goh KL, Fock KM, Mitchell HM (2014) NOD-like receptor signalering Pathway i Helicobacter pylori Redaktör: David M. Ojcius, University of California Merced, USA Mottagna: 2 mars 2014. Accepteras: 8 maj 2014. Publicerad: 5 juni 2014 Copyright: © 2014 Castaño-Rodríguez et al. Detta är en öppen tillgång artikel distribueras enligt villkoren i Creative Commons Attribution License, som tillåter obegränsad användning, distribution och reproduktion i alla medier, förutsatt den ursprungliga författaren och källan kredit Finansiering:. Detta arbete stöddes delvis av The Cancer Council of New South Wales, Australien (Grant No.66 /04). NEJ. Kaakoush stöds av en tidig karriär stipendium från National Health och Medical Research Council, Australien. Finansiärerna hade ingen roll i studiedesign, datainsamling och analys, beslut att publicera, eller beredning av manuskriptet Konkurrerande intressen:.. Författarna har förklarat att inga konkurrerande intressen finns Introduktion Den totala incidensen av magcancer (GC) varierar kraftigt mellan olika länder. Enligt den globala cancerstatistik, är totalt 952,000 nya GC fall och 723,000 GC relaterade dödsfall beräknas ha skett under 2012, vilket motsvarar 6,8% av det totala antalet cancerfall och 8,8% av den totala cancerrelaterade dödsfall [1]. Över 70% av nya fall och dödsfall inträffar i utvecklingsländer, med den högsta incidensen rapporteras i östra Asien, Östeuropa och Central- och Sydamerika [2]. bakteriell patogen Helicobacter pylori Germ-line kodade receptorer kallas mönsterigenkänningsreceptorer (PRRS) är en del av det medfödda immunförsvaret och är avgörande för detektion av invariant mikrobiella motiv kallas patogen -associated molekylära mönster (PAMPs). PRRs har delats in i fem distinkta genetiska och funktionella clade: nukleotid bindande oligomerisering domän (NOD) -liknande receptorer (NLRs), Toll-liknande receptorer, C-typ lektin receptorer, retinsyra-inducerbar gen (RIG) -I-liknande receptorer och frånvarande i melanom 2 (AIM2) -liknande receptorer [5] [6]. NLR familjen inte bara erkänna PAMPs men också skade associerade molekylära mönster (dämpas) i cytoplasman, som är endogena ligander produceras efter vävnadsskada eller celldöd [7]. Den NLRs karakteristiska strukturen innefattar en central nukleotid-bindande och oligomerisering (NACHT) domän som är närvarande i alla NLR familjemedlemmar, en C-terminal leucinrika upprepningar (Lrrs) och en N-terminal caspase rekrytering (CARD) eller pyrin (PYD ) domän. Baserat på fylogenetisk analys av Nacht domäner, bestämdes det att NLR familjen består av tre underfamiljer: 1) NOD familjen som inkluderar NOD1-2, NOD 3 /NLRC3, NOD4 /NLRC5, NOD5 /NLRX1 och CIITA, 2) de NLRPs inklusive NLRP1-14 (även känd som NALPs), och 3) den IPAF subfamiljen som består av IPAF (NLRC4) och NAIP [7]. NLRP3 inflammasome, den mest fullständigt karakteriserad inflammasome, består av NLRP3 scaffold protein, den apoptos associerad speck-liknande protein (ASC) och kaspas-1. NLRP3 samverkar och rekryterar adaptern ASC via PYD-PYD interaktion [8]. Denna interaktion leder till rekrytering av kaspas-1, en intracellulär aspartat specifik cystein proteas, som senare skulle leda till mognad och frisättning av proinflammatoriska cytokiner såsom IL-1β och IL-18. H. pylori Därför tidigare studier visar tydligt att, som svar på H. pylori Material och metoder genotypning av Polymorfismer inblandade i NOD-liknande receptor signalering Pathway Etik uttalande. Denna studie var godkänts av den mänskliga etiska kommittén (Blandnings) vid University of New South Wales (UNSW) (Blandnings 08.115 och Blandnings 02144). Skriftligt informerat samtycke erhölls från varje enskild rekryterades till studien. Ämnen var etniska kinesiska individer som genomgick övre gastrointestinala endoskopi på Changi General Hospital (Singapore) och Universitetssjukhuset Malaysia (Kuala Lumpur), mellan januari 2004 och april 2007. Patienter kända för att vara infekterade med humant immunbristvirus eller som hade ordinerats icke-steroida antiinflammatoriska läkemedel, antimikrobiella medel eller syrahämmande i två månader före rekryteringen uteslöts. åttiosju patienter som nyligen diagnostiserats med en primär icke-cardia GC (International Classification of Diseases, 9 th revision, kod 151) baserad på histologisk bekräftelse inbjöds att delta i studien. Kontrollgruppen bestod av 223 personer med diagnosen funktionell dyspepsi (FD), som definieras som ihållande eller återkommande symptom (smärta eller obehag centrerad i övre delen av buken) i frånvaro av organisk sjukdom (även på övre endoskopi), i enlighet med Rom II klassificeringssystemet [14]. Helicobacter pylori H. pylori Polymorphisms val. Elektroniska databaser (Pubmed, Scopus, Science Direct, Ovid, Biosis förhandsvisningar, Scirus databaser, CINAHL, IMBIOMED, Scielo och syrener) genomsöktes fram till februari 2013 för polymorfism involverade i NLR signalväg som var förknippade med cancer, infektionssjukdom eller var funktionellt relevant. Femtio en polymorphisms i 6 gener, som rapporterades att ha en mindre allelfrekvens >. 1% i National Center for Biotechnology Information (NCBI) dbSNP, valdes ut för analys (tabell S1 i tabellerna S1) katalog genotypning tekniker. för genotypning av de 51 utvalda polymorfismer i NLR signalväg för varje enskild som ingår i studien, genomiskt DNA extraherat från perifera helblodsprov med hjälp av QIAamp Blood DNA Mini Kit som beskrivs av tillverkaren (Qiagen; Chadstone, Australien). DNA rehydratiserades i sterilt vatten och normaliserades till 10 ng /pl för anpassad SNP-genotypning genom tillämpning av matrisassisterad laserdesorptionsjonisering time-of-flight (MALDI-TOF) masspektrometri, den Sequenom Massarray IPLEX? Analys (San Diego, CA , USA) [16], [17] vid Australian Genome Research Facility Ltd, St Lucia, University of Queensland, Australien. En polymorfism som inte kunde tas med i Sequenom Massarray IPLEX analys, känd som NLRP3- Fyra polymorfismer ( CARD8 Statistisk analys. oparade Student t Gene Expression av molekyler som är involverade i NOD-liknande receptor signalering Pathway däggdjurscellkultur den humana monocytiska leukemi cellinje THP-1 (kod: TIB-202). (American Type Culture samling, Manassas, USA), odlades i RPMI 1640-medium kompletterat med 10% värmeinaktiverat fetalt bovint serum (FBS) (Invitrogen; Mulgrave, Australien), 1 mM natriumpyruvat (Invitrogen), 2500 mg /L natriumbikarbonat (Invitrogen ) och 100 | ig /ml penicillin-streptomycin-lösning (Invitrogen). Cellerna bibehölls i 25 cm 2 vävnadsodlingsflaskor (Greiner-Bio-On, Frickenhausen, Tyskland).. Vid 37 ° C med 5% CO 2 Review Bakteriell kultur H pylori Infektion analys. THP-1-celler såddes i en 6-brunnars odlingsplatta vid en koncentration av 5 x 10 5 celler /ml och därefter differentierade till makrofager med forbol myrastate acetat (Sigma-Aldrich) under 72 timmar [24]. före bakteriell infektion, var däggdjursceller inkuberades i antibiotikafritt medium. den H. pylori Efter infektion, icke-utmanade och H. pylori För genuttryck dataanalys, det ΔΔ Ct-baserad metod för relativ kvantifiering genomfördes med hjälp av webbaserade RT 2 Profiler PCR Array dataanalys version 3.5 (http://pcrdataanalysis.sabiosciences.com/pcr/arrayanalysis.php). Åtminstone två-faldiga förändringar (≥2, ≤0.5) och P SDS-PAGE och Western Blotting THP -1-celler såddes, differentierat och infekterades vid ett MOI av 1, såsom tidigare beskrivits. Proteiner extraherades med användning av RIPA-buffert, separerades på 12% natriumdodecylsulfat-polyakrylamidgelelektrofores geler och överfördes till metanolbehandlade polyvinyliden difluorid-membran med användning av cellöverföring systemet Trans-blot (Bio-Rad). Membranen immunolabeled med kanin-anti-humana polyklonala antikroppar mot NLRX1 (1:200) eller mus-anti-humana monoklonala antikroppar mot β-aktin (1:1000) (Santa Cruz). Get-anti-kanin och anti-mus-IgG-antikroppar kopplade till HRP (1:2000; Bio-Rad) användes som sekundära antikroppar, respektive. Membran avsöktes i enlighet med Pierce ECL Western blotting Substrate protokoll (Thermo Scientific, Scoresby, Australien). Kliniska Egenskaper De kliniska egenskaperna hos försökspersoner inklusive kön, H. pylori polymorfismer i gener som är involverade i NOD-liknande receptor signalering pathway är associerade med magcancer i etniska kineser Femtio-en polymorphisms i gener som är involverade i NLR signalväg var genotypas i 310 etniska kineser (87 GC fall och 223 FD kontroller). Samtalsfrekvens av alla valda polymorfism var 97-100% i denna studie. Alla polymorfismer i NLR signaleringsvägen befanns vara i HWE i kontrollgruppen som visar icke-signifikant χ 2 värden med undantag för CARD8 allel och genotyp frekvenser som såväl som de yttersta randområdena och 95% Cl för de återstående 27 polymorfismer visas i tabell 1 och tabell S4 i tabellerna S1. CARD8 haplotyp baserade analyser är ett kraftfullt tillvägagångssätt för att dissekera arkitekturen för komplexa sjukdomar. I den aktuella studien, EM-algoritmen identifierade 25 haplotyper med en frekvens > 0,01 i GC fall (tabell S5 i tabellerna S1). Använda större haplotyp i kontrollgruppen som referens haplotypen, två CARD8-NLRP12 polymorfismer i gener som är involverade i NOD-liknande receptor signalering Pathway är associerade med Helicobacter Pylori med tanke på att H. pylori Joint Effekt av Helicobacter Pylori Ytterligare analyser utfördes för att bedöma inte endast närvaron eller frånvaron av de utvalda polymorfismer utan även H. pylori Helicobacter Pylori för att ytterligare karaktärisera effekten av H. pylori med tanke på att inflammation är ett kännetecken för gastric cancer, analyserade vi ytterligare ett uttryck för pro-inflammatoriska cytokiner och kemokiner vid exponering för två H . pylori Helicobacter Pylori Tretton gener som kodar NLRs bedömdes i denna studie, inklusive medlemmar av IPAF underfamiljen (NAIP, NLRC4), NLRPs (NLRP1, NLRP3-6, NLRP9, NLRP12) och Nods (NOD2, NLRC5, NLRX1 och CIITA) (Figur 1B). Uttrycket av fem gener som kodar NLRs var signifikant reglerat i H. pylori-utmanade celler (NLRC4, NLRC5, NLRP9, NLRP12 och NLRX1) (tabell 5). Av dessa NLRP12 (vika reglering: 0,03, p-värde: 0,016298) och NLRX1 (vika reglering: 0,02, p-värde: 0,01762) var betydligt nedregleras i H. pylori GC026-utmanade celler. Som en valideringsteknik, ytterligare Western blot-analyser undersöker NLRX1 uttryck, genomfördes. Konsekvent minskade NLRX1 nivåer påträffades i THP-1-celler utmanade med både H. pylori GC026 och 26695 (Supporting information Figur S3). Med tanke på att NF-kB är negativt reglerad av NLRP12 och NLRX1, vi ytterligare jämfört uttrycket av NFKB1 Mössor och RELA Helicobacter Pylori Redovisning av andra molekyler inblandade inte bara i NLR signalväg men också i cancer analyserades också genom att jämföra THP-1 celler svar på både H. pylori Diskussion GC anses nu vara en multifaktoriell process där bakterier, miljö- och värd genetik faktorer är inblandade i olika skeden av cancer patofysiologi. För närvarande är det väl etablerat att cancer uppstår i kroniskt inflammerad vävnad, och detta är särskilt anmärkningsvärt i mag-tarmkanalen [4]. Som kronisk inflammation i magslemhinnan är en följd av H. pylori Så vitt vi vet är detta den första rapporterade bevis för att polymorfismer som deltar i NLR signalväg är förknippade med en ökad risk för GC i en befolkningsgrupp. Multivariat statistisk analys visade att CARD8 Som H. pylori
infektion, undersökte vi betydelsen av genetisk polymorfism och uttryck av gener som är involverade i NLR signalväg i H. pylori
infektion och tillhörande magcancer (GC).
tåg, GC026 (GC) och 26695 (gastrit).
-rs11672725, NLRP3
-rs10754558, NLRP3
-rs4612666, NLRP12
-rs199475867 och NLRX1
-rs10790286 visade signifikanta samband med GC. På multivariat analys, CARD8
-rs11672725 förblev en riskfaktor (OR: 4,80, 95% CI: 1,39 till 16,58). Vidare, NLRP12-
rs2866112 ökade risken för H. pylori
infektion (OR: 2.13, 95% CI: 1,22-3,71). Statistiska analyser bedöma sammanlagda effekten av H. pylori
infektion och de utvalda polymorfismer avslöjade starka associationer med GC ( CARD8
, NLRP3
, CASP1 Köpa och NLRP12
polymorphisms). I analys av genuttryck, har fem gener som kodar NLRs väsentligt regleras i H. pylori
-challenged celler ( NLRC4
, NLRC5
, NLRP9
, NLRP12 Köpa och NLRX1
). Intressant, ihållande uppreglering av NFKB1 hotell med samtidig nedreglering av NLRP12 Köpa och NLRX1
observerades i H. pylori
GC026-utmanade celler. Vidare, NF-kB målgener som kodar pro-inflammatoriska cytokiner, kemokiner och molekyler som är involverade i karcinogenes var markant uppregleras i H. pylori
GC026-utmanade celler.
, NLRP3
, NLRP12
, NLRX1
och CASP1
) och GC identifierades i kinesiska individer. Våra genetisk polymorfism och genuttryck Resultaten understryker betydelsen av NLR signalväg i gastric cancer och dess nära samarbete med NF-kB
infektioner och relaterade Gastric Cancer: En fall-kontrollstudie och Gene Expression Analyser. PLoS ONE 9 (6): e98899. doi: 10.1371 /journal.pone.0098899
är en viktig etiologisk faktor för GC (IARC, 1994), dock tidigare studier tyder på att förutom att H. pylori
infektion och kostfaktorer, värd genetik bidrar till GC [3]. Genetiska polymorfismer har dykt upp under de senaste åren som bestämningsfaktorer för sjukdom mottaglighet och svårighetsgrad, vilket är särskilt sant i mag-tarm malignitet [4]. Därför kan polymorphisms i gener involverade i medfödda och adaptiva immunitet spelar en viktig roll i patogenesen av H. pylori
infektion och utveckling av H. pylori
-relaterade komplikationer, inklusive GC.
infektion, de första fyra fysikalisk-kemiska barriärer är slemlager, gastric epitelceller, de TLR och NLRs. Ett begränsat antal studier har utvärderat samspelet mellan NLR signalväg och H. pylori
. Till exempel kan en förstudie av Basak et al. [9] visade att inte bara H. pylori
lipopolysackarid (LPS) aktiverar kaspas-1 men att detta kaspas-1-aktivering är involverad i LPS-inducerad IL-1β mognad. Senare, Hitzler et al. [10] visade att H. pylori
infektion aktiverar kaspas-1, vilket leder till IL-1β /IL-18 bearbetning och sekretion, både i odlade dendritiska celler (DC) och in vivo
. Genomgående, två nya studier, med humana gastric cellinjer, bekräftade ökat uttryck av kaspas-1, IL-1β och IL-18 i H. pylori
infekterade celler [11], [12]. Vidare, en nyligen genomförd studie av Kim et al. [13] har visat att utsöndringen av IL-1β genom DC infekterade med H. pylori
kräver TLR2, NOD2 och NLRP3 inflammasome.
, inflammasome beroende kaspas-1-aktivering är avgörande för att generera mogna pro-inflammatoriska cytokiner som är avgörande för Th1 svar i samband med gastric immunopatologi. Med tanke på att lite är känt om den roll som inflammasomes och andra molekyler som är involverade i NLR signalväg som svar på H. pylori
infektion, och att funktionellt relevanta polymorfismer i gener i denna gren av immunsystemet har potential att påverka storleken och riktningen av värdsvar mot infektionen, undersökte vi roll NLR signalväg, inklusive inflammasome- relaterade molekyler, i H. pylori
-relaterade GC utveckling genom att bedöma 51 genetisk polymorfism i kinesiska individer, en känd hög risk befolkningen för GC, och ta itu med genuttrycket av 84 molekyler som är involverade i NLR signalvägar i en monocytisk cellinje vid exponering för H . pylori
.
försökspersoner.
upptäckt.
IgG-antikroppar i dessa kinesiska individer bestämdes med användning av en intern enzymkopplad immunsorbentanalys [15] och immunoblot (MPD Helico Blot 2.1 MP Biomedicals, Australien).
42 bp-VNTR ades genotypas genom standard-PCR. Primers utformades med Oligo Primer Analysis Software version 6.71 (Molecular Biology Insights, Inc., Colorado Springs, USA). Experiment utfördes med användning av 2720 Thermal Cycler (Applied Biosystems, Foster City, USA). PCR-produkter utsattes för 1,5% agarosgelelektrofores och visualiserades under UV-genomlysning med hjälp av Gel Doc 2000 System (Bio-Rad, Hercules, USA). Primersekvenserna och värmecykelvillkor för genotypning av denna polymorfism beskrivs i Tabell S2 i i tabellerna S1.
-rs2043211, CARD8
-rs6509368 , CARD8
-rs12984929 och NLRP3
-rs10754558) genotypas genom MALDI-TOF masspektrometri var slumpmässigt utvalda för att bekräfta resultaten med realtids-PCR. Primersekvenserna och termiska cykelbetingelser återfinns i tabell S2 i Tabeller S1. Som ett erkännande av den metod som tillämpas för genotypning av NLRP3-
42 bp-VNTR har sekvensanalyser utfördes i 10% av slumpmässigt utvalda studie prover på Ramaciotti Centre, UNSW, Australien.
-test användes för att analysera de kliniska egenskaper. Den direkta räkningen metod användes för att uppskatta genotyp och allelfrekvenser. Avvikelse från Hardy-Weinberg jämvikt (HWE) testades med användning av chi-godhet-of-fit testet (χ 2). Fastställande av länkdisekvilibrium (LD) baserades på en sannolikhet förhållande test där betydelsen av den observerade sannolikheten förhållandet hittas genom att beräkna noll distribution av detta förhållande under hypotesen av länk jämvikt, med hjälp av en permutation förfarande [18]. Haplotyp inferens utfördes med hjälp av den Expectation-Maximization (EM) -algoritm för multi-locus genotypiska uppgifter [19]. Oddskvoterna (eller) och 95% konfidensintervall (CI) beräknades med hjälp av Fishers exakta sannolikhetstest (tvåsidiga p
-värden). För att korrigera för confoundingfaktorer, en binär logistisk regression (LR) justeras med H. pylori
status och genus utfördes. P
-värden < 0,05 betraktades som statistiskt signifikant. Kvalitets filter för uteslutning av polymorfismer från den statistiska analysen ingår kalla priser under 95% och avvikelsen från HWE. Data analyserades med hjälp av program Arlequin version 3.1 [20], GraphPad Prism version 5.02 (GraphPad Software Inc, San Diego, USA) och SPSS version 19.0.0. (SPSS Inc, Chicago, USA) katalog
stam GC026 ( cagA
+ Cage
+ CAGL
+ CAGT
+ , vacA
s1 m1 +, babA
+, oipA
+, Dupa
+ och SABA
+) isolerades från en GC-patient på Universitetssjukhuset i Malaysia, Kuala Lumpur [21], [22]. H. pylori
stam 26695 ( cagA
+ och vacA
s1m1 +) isolerades från en patient med gastrit [23] (ATCC-nummer 700392). Båda H. pylori
stammarna odlades under två dagar på hästblod-agarplattor (Blood Agar Base No.2 kompletterat med 6% steril defibrinerat hästblod (Oxoid, Heidelberg West, Vic., Australien) vid 37 ° C i en anaerob burk innehållande en gasbildande kit (Oxoid) för att ge en mikroaerob atmosfär av 6% O 2, 10% CO 2 och 84% N 2.
stammar GC026 och 26695 tillsattes sedan till mediet vid en multiplicitet av infektion av 1, och inkuberades under 6 timmar vid 37 ° C och 5% CO 2. Den bakteriella koncentrationen tillsatt bestämdes baserat på en standardkurva och optisk densitet (OD) avläsningar vid 595 nm med användning av en Bio-Rad-mikroplattläsare modell 550 (Bio-Rad). Den verkliga koncentrationen tillsatt bekräftades genom att räkna kolonibildande enheter (CFU) odlade på häst blodagarplattor efter serieutspädning av bakteriesuspensionen.
RNA extraktion, cDNA beredning och PCR-arrayer.
-challenged THP-1-celler användes för isolering av mRNA med användning av Qiagen RNeasy Mini Kit såsom beskrivs av tillverkaren (Qiagen). För analys av genuttrycket av 84 molekyler som är involverade i NLR signalväg, syntetiserades cDNA från 0,8 mikrogram totalt RNA med hjälp av RT 2 First Strand cDNA Kit (Qiagen) och analyserades ytterligare med hjälp av Human Inflammasome RT 2 Profiler PCR array (PAH-097R) (Qiagen) enligt rekommendation från tillverkaren. Genuttrycksprofilerna erhölls från tre oberoende experiment H. pylori
GC026-infekterade, H. pylori
26695-infekterade och motsvarande icke-infekterade (kontroll) prover. Experimenten utfördes med användning av Rotor-Gene Q cykler (Corbett Life Sciences, Doncaster, Australien).
-värden. ≪ 0,05 betraktades som statistiskt signifikant
Resultat
infektionsstatus och medianåldern visas i tabell S3 i tabellerna S1. Manligt kön befanns vara mer dominerande i GC patienter än hos FD kontroller visar ett positivt samband med utvecklingen av GC i denna etniska kinesiska befolkningen (OR: 2,15, 95% CI: 1,29-3,58, P
-värde: 0,0036). H. pylori
infektion befanns vara närvarande i 68,7% av individerna i denna studie (73/87 GC patienter och 140/223 FD kontroller). Jämförelse av förekomsten av H. pylori
infektion i GC patienter och FD kontroller visade att H. pylori
infektion var en riskfaktor för utveckling av GC (OR: 2,38, 95% CI: 1,41-3,99, P
-värdet: < 0,0001). Även om patienter i denna studie matchades enligt 5-års åldersgrupper, medianåldern för GC patienter (65,3 år) var signifikant högre än för FD kontroller (54,3 år) ( P
-värdet: <. 0,0001) katalog
-rs12984929 (χ 2: 35,98), CARD8-
rs4802445 (χ 2: 5,87) och CARD8-
rs6509368 (χ 2: 5,43). Tjugo en polymorfism i NLRP3
(n = 5), NLRP12
(n = 3), NLRX1
(n = 3), ASC
(n = 4) och CASP1
(n = 6) befanns vara icke-polymorf i denna etniska kinesiska befolkningen (tabell S1 i tabellerna S1).
-rs11672725 TT genotyp visade ett starkt samband med GC i bivariat statistisk analys (OR: 4,80, 95% CI: 1,39 till 16,58). Förutom CARD8
-rs11672725, ytterligare fyra polymorphisms visade gränsresultat i bivariate analys ( NLRP3
-rs10754558, NLRP3
-rs4612666, NLRP12
-rs199475867 och NLRX1
-rs10790286) (tabell 1). Ytterligare multivariata statistiska analyser, justering för H. pylori
infektion och manligt kön, visade att CARD8
-rs11672725 TT genotyp förblev en riskfaktor för GC i denna etniska kinesiska befolkningen (tabell 2).
(Hap1 och Hap8), en NLRP3
(Hap3) och tre NLRX1-CASP1
(Hap21, 23 och 24) haplotyper befanns öka risken för GC i denna etniska kinesiska befolkningen. Intressant Hap1 hamnar CARD8
-rs11672725 T-allelen, och Hap21 och Hap23 hysa NLRX1
-rs10790286 C-allelen, som visar överensstämmelse med de resultat som erhållits från allelen och genotyp analyser.
Infektion i etniska kineser
är känd för att vara en viktig riskfaktor i samband med GC, var ytterligare analyser utfördes för att utvärdera sambandet mellan inblandade i NLR signalväg genetisk polymorfism och H. pylori
infektion. Intressant nog visade vår etniska kineser fall-kontrollstudie som NLRX1
-rs10790286, NLRP12
-rs2866112, NLRP12
-rs4419163 och ASC
-rs8056505 var associerade med en signifikant ökad risk för H. pylori
infektion hos dessa individer (Tabell S6 i tabellerna S1). Multivariat statistisk analys bekräftade att NLRP12
-rs2866112 var associerad med en ökad risk för H. pylori
i kinesiska individer (OR: 2.13, 95% CI: 1,22-3,71) katalog
infektion och genetiska polymorfismen markant ökar risken för magcancer i. etniska kinesiska Individer
status i förhållande till risken för GC, i ett försök att fastställa förekomsten av biologiska interaktion i form av synergism eller antagonism. Påfallande individer hyser tio av de utvalda polymorfismer ( CARD8
-rs10405717, NLRP3
-rs12079994, NLRP3
-rs3806265, NLRP3
-rs4612666, NLRP12
-rs2866112, NLRP12
-rs4419163, NLRX1
-rs10790286, CASP1
-rs2282659, CASP1
-rs530537 och CASP1
-rs61751523) och infekterade med H. pylori
observerades att vara som mest risk för GC, majoriteten av dessa yttersta rand ligger inom intervallet från 4,0 till 5,0 (Tabell 3). I motsats, i avsaknad av H. pylori
infektion, CARD8
-rs2043211 signifikant minskade risken för GC (OR: 0,19, 95% CI: 0,06-0,63) katalog
influenser. Expression av flera molekyler som är involverade i NOD-liknande receptor signalering Pathway
molekyler som är involverade i NLR signalväg, bedömde vi uttrycket av 84 gener som kodar NLRs, andra inflammasome komponenter, negativa regulatorer, pro-inflammatoriska cytokiner, pro-inflammatoriska kaspaser och molekyler som är involverade i nedströmssignalering, i THP-1 härledda makrofager efter exponering för två olika H. pylori
stammar (GC026 och 26695). I H. pylori
GC026-utmanade THP1-celler, var 49 gener differentiellt uttryckt i jämförelse med kontrollgruppen (tabell S7 i tabellerna S1 och figur S1 i figurerna S1). Av dessa var statistiskt signifikant uppreglering och nedreglering av åtminstone två-faldigt som finns i 17 och 28 gener, respektive (tabell 4 och 5). Trettiofem gener uttrycks differentiellt mellan kontrollgruppen och den grupp som utsätts för H. pylori
26695 (Tabell S7 i tabellerna S1 och figur S2 i figurerna S1). Av dessa var statistiskt signifikant uppreglering och nedreglering av åtminstone två-faldigt finns i 5 och 23 gener, respektive (tabell 4 och 5).
Helicobacter Pylori
Stammar associerade med magcancer och gastrit leder till olika uttrycksnivåer av cytokiner och kemokiner
stammar. Uttrycket av nio gener som kodar för pro-inflammatoriska cytokiner ( IFNB1
, IL1B
, IL12B
, IL6
, IL33
och TNF
) och kemokiner ( CXCL1
, CXCL2, CCL5
) var signifikant uppregleras i THP-1-celler utmanade med både H. pylori
GC026 och 26695 stammarna (tabell 4). Vidare, en intensiv immunsvar ( CXCL1
, CXCL2
, CCL5
, IL6
, IL12B
, TNF Mössor och IFNB1
) inleddes mot H. pylori
GC026 (Figur 1A). Intressant, ett antal gener som kodar för kemokiner ( CCL2 Mössor och CCL7
) och cytokiner ( IL18
, TNFSF11 Köpa och CD40LG
) var nedregleras i H. pylori
-challenged THP-1-celler (Tabell 5).
infektion resulterar i uppreglering av NFKB1 hotell med Samtidig Marked nedreglering av NLRP12 Köpa och NLRX1
mellan H. pylori
GC026- och 26695-utmanade celler. Anmärkningsvärt, men RELA
visade minskade nivåer i THP-1-celler som exponerats för både H. pylori
stammar (vika reglering: 0,49, p
-värdet: 0,044673 och fäll reglering: 0,26, p
-värdet. 0,131017 för H pylori
GC026 och 26695, respektive), statistiskt signifikant uppreglering av NFKB1
observerades endast i H. pylori
GC026-utmanade celler (vika reglering: 2,50, p
-värde: 0,006825). (Figur 1C) Review
Ökar Expression av PTGS2 Mössor och BIRC3
stammar. Intressant, PTGS2
var betydligt uppreglerat i THP-1-celler vid exponering för både H. pylori
stammar, H. pylori
GC026-utmanade celler (vika reglering: 54,03, p
-värde: 0,0247) visar betydligt högre uttrycksnivåer jämfört med H. pylori
26695-utmanade celler (vika reglering: 19,56, p
-värde: 0,016089) (Figur 1d). Vidare, en andra gen som är involverad i cancer, BIRC3
var enbart upp-regleras i H. pylori
GC026-utmanade celler (vika reglering: 12,28, p
-värde: 0,001638). (Figur 1D) Review
infektion och denna bakterie är initialt riktad genom PRRs undersökte vi rollen av molekyler som är involverade i NLR-signaleringsvägen i H. pylori
infektion och tillhörande GC.
-rs11672725 TT-genotyp är en konsekvent riskfaktor för GC i kinesiska individer. CARD8
, som ligger vid 19q13 kodar kaspas rekryteringsdomänprotein 8 (CARD8), även känd som TUCAN, som har rapporterats interagera med NLRP3, undertrycka NF-kB aktiverande signaler och vara överuttryckt i humana cancervävnader inklusive äggstocks-, lung- och bröstcancer vävnader [25] - [27]. Hittills har endast en studie, som genomfördes i en tyska befolkningen, har bedömt roll denna polymorfism i sjukdom [28]. Dessa författare riktar sambandet mellan CARD8
-rs11672725 och kolorektal cancer men misslyckades med att uppvisa några signifikanta resultat (OR: 1,02, 95% CI: 0,86-1,21) [28]. Skillnader i cancer typ och studiepopulationen kan redogöra för dessa motstridiga resultat.