Association mellem HER2 status i mavekræft og klinisk-patologiske træk: en retrospektiv undersøgelse med hel-væv sections

associering mellem HER2 status i mavekræft og klinisk-patologiske træk: en retrospektiv undersøgelse med hel-vævssnit
Abstract
Baggrund
Gastric kræft er normalt diagnosticeres i et fremskredent stadium af sygdom og behandlingsmuligheder er sparsomme. Trastuzumab blev for nylig godkendt til metastatisk eller lokalt avancerede carcinomer opstår i maven eller i gastroøsofageal krydset hos patienter med HER2-positiv tumorer. Men data om hyppigheden af ​​HER2-positive tilfælde blandt brasilianske patienter er begrænset. Vores mål var at karakterisere HER2 protein og gen-status i en række brasilianske patienter med mavekræft og til at evaluere sit samarbejde med klinisk-patologiske data.
Metoder
Histologiske slides fra 124 primære gastrectomies blev gennemgået, og deres patologiske rapporter blev hentet fra filerne på en brasiliansk universitetshospital. Automatiseret immunhistokemi for HER2 blev udført på hel-vævssnit fra hver tumor. HER2-tvetydig sager ved immunhistokemi blev indgivet til automatiseret dual in situ
hybridisering til genamplifikation evaluering. HER2 status blev konfronteret med klinisk-patologiske parametre for at vurdere statistisk signifikante associationer.
Resultater
Immunhistokemi analyse viste, at 13/124 sager (10,5%) var HER2-positiv (3+), 10/124 tilfælde (8,1%) blev tvetydige (2+) og 101/124 tilfælde (81,4%) var negative, bliver 7 tilfælde 1+. Ingen af ​​de tvivlsomme tilfælde viste genamplifikation. Den samlede HER2 positivitet sats var 10,5%. Der var en sammenhæng mellem HER2 udtryk og Laurens tarm histologisk undertype (P
= 0,048), godt til moderat differentierede tumorer (P
= 0,004) og tilstedeværelsen af ​​lymphovascular invasion (P
= 0,031). Ingen association blev fundet mellem HER2 status og tumor topografi.
Konklusioner
Konfronteret med data offentliggjort af andre forfattere, kan lavere procentdel af HER2-positive tilfælde fundet i vores serie delvis forklares ved lavere frekvens af tumorer, der opstår på den gastroøsofageal krydset i sammenligning med distale gastriske carcinomer i brasilianske patienter. Dette kunne også forklare den manglende statistisk signifikant sammenhæng mellem HER2 status og tumor topografi i vores undersøgelse.
Nøgleord
HER2 mavekræft Immunhistokemi Gene forstærkning klinisk-patologisk funktioner Baggrund Om en million nye tilfælde af mavekræft (GC ) skønnes at forekomme hvert år i verden, svarende til 8% af alle kræftdiagnoser globalt [1, 2]. GC er også betragtes den næststørste årsag til kræft-relaterede dødsfald på verdensplan og forventes at forekomme mere end 700.000 dødsfald på grund af denne sygdom årligt [1, 3]. Men fordelingen af ​​patienter med GC i forskellige dele af verden er ikke homogen: over 70% af nye tilfælde og dødsfald sker i udviklingslande. De højeste incidensrater findes i det østlige Asien, Østeuropa og Sydamerika [1]. The National Institute of Cancer Brasilien anslår, at GC omfatter over 5% af alle maligne sygdomme i dette land [4].
Behandlingsmuligheder for GC er generelt begrænset, da det normalt er diagnosticeret på et fremskredent stadium af sygdommen, og derfor de fem-års overlevelse er konstant lav, omkring 20% ​​i de fleste dele af verden [2, 5]. Ifølge ToGA studiet, en nylig fase III internationale randomiserede undersøgelse, behandling i kombination med kemoterapi og trastuzumab (TZB) har forbedret overlevelse hos patienter med HER2-positiv fremskreden GC [6]. TZB er et rekombinant monoklonalt antistof rettet mod HER2, et transmembrant protein, som tilhører familien af ​​humane epidermale vækstfaktorreceptorer [7]. HER2 intracellulære domæne viser tyrosinkinaseaktivitet, kan generere intracytoplasmatiske second messengers, der koordinerer nuklear ekspression af gener associeret med angiogenese, celleproliferation og overlevelse [8]. Overekspression af HER2-proteinet, et produkt fra en proto-onkogen beliggende ved kromosom 17, er blevet forbundet med carcinogenese og tumorprogression af bryst-, ovarie-, spytkirtler, prostata og mave-tarmkanal cancere [9].
Baseret på ToGA forsøg resultater, har de internationale reguleringsorganer nylig godkendt brugen af ​​TZB i HER2-positiv metastatisk eller lokalt fremskreden karcinomer opstår i maven eller i gastroøsofageal krydset (GEJ) [10]. Carcinomer fra egnede patienter til behandling med TZB skal fremvise HER2-positiv status, afsluttet med protein overekspression (score 3+) ved immunhistokemi (IHC) eller genamplifikation ved in situ
hybridisering (ISH) for tumorer med tvetydige IHC resultater (score 2+) [11, 12]. Siden da har mange undersøgelser fokuseret på at præsentere hyppigheden af ​​HER2-positiv GC i forskellige populationer, med en bred variation af metoder, der anvendes for protein og gen-opdagelse. Derfor resultater bemærkelsesværdigt området fra 2 til 45% af HER2 overekspression i GC serien [13-17]. En stor systematisk gennemgang herunder data fra 49 studier fundet en median på 18% af HER2 positivitet i 11,337 patienter med GC [18]. Ikke desto mindre er forekomsten af ​​HER2-positive tilfælde blandt brasilianske patienter forbliver ukendt, med offentliggjorte få data [19-26]. Da den brasilianske offentlige sundhedssystem endnu ikke har godkendt brugen af ​​TZB til GC behandling her i landet, mener vi, at påvisning af HER2-positiv GC i brasilianske patienter kan give videnskabeligt grundlag for etablering af nye offentlige sundhedspolitikker og definere bedre klinisk protokoller til at forbedre behandlingen af ​​disse patienter i Brasilien.
derfor i den foreliggende undersøgelse, vi havde til formål at karakterisere HER2 ekspression i GC i en række brasilianske patienter, under anvendelse hel-væv tumorsnit fra kirurgiske prøver, og at evaluere foreningen mellem HER2 protein og gen status med klinisk-patologiske data.
Metoder
den foreliggende undersøgelse blev godkendt af den etiske komité i vores institution (Comité de Etica e Pesquisa COEP-UFMG) under CAAE protokol nummer 32898114.9.0000.5149. Skriftligt informeret samtykke blev opnået i overensstemmelse med de institutionelle retningslinier.
Vi undersøgte 142 konsekutive patienter, som gennemgik primær gastrektomi mellem 2007 og 2011 på Clinics Hospital, Federal University of Minas Gerais, Brasilien, hvis histopatologisk diagnose var GC. Ingen af ​​patienterne havde modtaget neoadjuverende kemoterapi eller anden type behandling for deres tumor før kirurgi. Alle 142 sager havde deres patologiske rapporter hentes og for at bekræfte diagnosen af ​​GC, blev de oprindelige hæmatoxylin-eosin farvede slides samtidigt gennemgået af to patologer (RSL og MMDAC), hvoraf den ene er en ekspert i mave-patologi (MMDAC) . Kliniske data (patienternes alder og køn) og patologiske parametre (tumor topografi, maksimal tumor diameter, stage, histologisk kvalitet og undertype, tilstedeværelsen af ​​lymphovascular og blod-fartøj invasion) blev registreret. Tumorer blev inddelt i to grupper efter gastrisk topografi: distale og proksimale tumorer sidstnævnte kategori omfattede karcinomer fra GEJ. Kriterierne TNM systemet og recomendations fra 7. udgave af amerikanske Blandede Cancer Staging Manual blev brugt til tumor iscenesættelse [27, 28]. Indekset for kirtel dannelse og cytologiske pleomorphism blev anset for histologiske sortering i godt, moderat eller dårligt differentierede tumorer. Laurens histologisk klassifikation system blev anvendt til tumor subtypning [29].
Ny 4 um tykkelse hel-vævssnit blev opnået fra formalin fast paraffin indlejret tumor prøver og indsendes til automatiseret IHC, ved hjælp af en BenchMark XT ™ platform (Ventana Medical Systems , Arizona, USA) og den præfortyndede kanin monoklonalt primært antistof anti-HER2 /neu (4B5 klon). Alle objektglas blev subsequentially modfarvet med hematoxylin. En præ-testet HER2-positiv brystcancer prøve blev anvendt som ekstern positiv kontrol. Atten tilfælde indeholdt ikke nok tumorvæv for efterfølgende IHC-protokoller og blev udelukket fra denne undersøgelse, hvilket resulterer i 124 relevante tilfælde til analyse.
Tre patologer (RSL, HG og CBN) på en gang analyseret immunofarvet dias ved hjælp af en multi-head mikroskop og opnåede enighed score for HER2-ekspression ifølge Hofmann-og Rüschoff anbefalinger til GC kirurgiske prøver [11, 12]. Sagerne blev kategoriseret i fire grupper (0, 1 +, 2+ og 3+), afhængigt af udvidelse og intensiteten af ​​udtrykket: 0, ingen reaktivitet eller membranøs reaktivitet i < 10% af cellerne; 1+, svag /lige akkurat synlig membranøs reaktivitet i > 10% af celler, og cellerne er reaktive kun dele af membranen; 2+, svag til moderat fuldstændig eller basolaterale membranøs reaktivitet i > 10% af cellerne; 3+, stærk fuldstændige eller basolaterale membranøs reaktivitet i > 10% af celler [11]. Kun en membranøs ekspressionsmønster var egnet til evaluering. Sagerne inkluderet i 3+ kategori blev betragtet som positive for HER2 protein overekspression, mens 0 og 1+ tilfælde blev betragtet som negative.
Sager scoret som 2+ blev anset tvetydig for HER2 protein-ekspression og nye 4 um-tykkelse engros- vævssnit blev forelagt sølv lysfelt in situ
hybridisering (SISH) bruger den samme automatiseret platform (BenchMark XT ™) og INFORM HER2 Dual ISH DNA Probe Cocktail assay (Ventana Medical Systems, Arizona, USA). Den HER2
og kromosom 17 (CEP17) kopi numre blev talt i 20 ikke-overlappende kerner samtidigt af to observatører (RSL og CBN). HER2
genomisk profil blev defineret som ikke-forstærket hvis middelværdien HER2-service /CEP17 forholdet var < 2,0 og forstærkes, hvis HER2-service /CEP17 forholdet var ≥2.0. Hvis forholdet faldt mellem 1,8 og 2,2, blev yderligere 20 kerner scorede og den samlede beregnede forhold. IHC 2+ sager viser genamplifikation af SISH- og IHC 3+ tilfælde blev begge betragtet som positive for HER2 endelige status [11, 12].
Den statistiske analyse blev udført ved hjælp af SPSS-version 19.0 software (SPSS Inc., Chicago, IL ). The Pearson chi-square test blev anvendt til at korrelere IHC resultater og HER2 endelige status med klinisk-patologiske parametre. Alle P
værdier var tosidet, og P
< . 0,05 blev betragtet som statistisk signifikant
Resultater
klinisk-patologisk karakteristika og deres forbindelse med HER2 endelige status og IHC scoringer er vist i tabel 1. Patienternes alder ved diagnose varierede fra 28 til 92 år (median: 62,33 år), og der var 64 mænd (51,6%) og 60 kvinder (48,4%) blandt 124 patienter inkluderet i dette studie. Tumorer blev fortrinsvis identificeret ved den distale mave (80,6%) sammenlignet med tumorer opstået i det gastriske kardia eller fra GEJ. Tumor størrelse varierede mellem 0,5 og 14,0 cm (gennemsnit, 5,31 cm) og avancerede tumorer (PT2, PT3 og pt4 kategorier) tegnede sig for 107 tilfælde (86,3%). Ifølge histologiske sortering blev 13 tilfælde (10,5%) godt differentieret, 45 tilfælde (36,3%) moderat differentierede, og 66 sager (53.2%) dårligt differentierede tumorer. Laurens tarm histologisk undertype blev den hyppigst diagnosticerede, der tegner sig for 61 tilfælde (49,2%). Diffuse og blandede undertyper blev observeret i 21 (16,9%) og 33 (26,6%) tilfælde, hhv. De resterende ni tilfælde (7,3%) blev klassificeret som ubestemt. Lymphovascular invasion blev fundet i 94 tilfælde (75,8%), og 85 patienter (68,5%) havde lymfeknudemetastaser ved diagnose, med et gennemsnit på 9,27 positive lymfeknuder pr tilfælde (interval, 1 til 63 positive lymfeknuder) .table 1 associering mellem HER2 status og klinisk-patologiske parametre
Samlet
HER2-positiv
HER2 negativ
P Drømmeholdet værdi
HER2 (3 +)

HER2 (2+)
HER2 (0, 1+) ​​
P Drømmeholdet værdi
n =
124 ( %)
13 (10,5)
111 (89,5)
13 (10,5)
10 (8.1)

101 (81,4)
Alder ved diagnose
0,803
0.590
≥60 år
82 (66,1)
9
73
9
8
65
< 60 år
42 (33,9)
4
38
4
2
36
Køn
0,865
0,459
Mand
64 (51,6)
7
57
7
7
50
Female
60 (48,4)
6
54
6
3
51
Tumor topografi
0.720
0,709
Distal mave
100 (80,6)
10
90
10
9
81
proksimal mave /GEJ
24 (19,4)
3
21
3
1
20
Histologisk undertype
0,048
0,009
Intestinal
61 (49,2)
11
50
11
9
41
Diffus
21 (16,9)
0
21
0
0
21
Blandet
33 (26,6)
2
31
2
1
30
Unditermined
9 (7.3)
0
9
0
0
9
Histologisk klasse
0,004
< 0,001
Nå
13 (10,5)
4
9
4
1
8
Moderat
45 (36,3)
7
38
7
8
30
Dårligt
66 (53,2)
2
64
2
1
63
Lymphovascular invasion
0,031
0,060
Positiv
94 (75,8)
13
81
13
6
75
Negativ
30 (24,2)
0
30
0
4
26
Blood-fartøj invasion
0,395
0,170
Positiv
44 (35,5)
6
38
6
1
37
Negativ
80 (64,5)
7
73
7
9
64
pT status
0,271
0.165
PT1
17 (13,7)
0
17
0
1
16
pT2
32 (25,8)
3
29
3
2
27
pT3
69 (55,6)
10
59
10
5
54
pT4
6 (4.9)
0
6
0
2
4
pN status
0,453
0,762
PN0
39 (31.5)
2
37
2
4
33
PN1
46 (37,1)
7
39
7
4
35
pN2
24 (19,3)
3
21
3
1
20
pN3
15 (12,1)
1
14
1
1
13
pM status
0,548
0,705
pM0
121 (97,6)
13
108
13
10
98
PM1
3 (2.4)
0
3
0
0
3
Fed tal repræsenterer P
værdier med statistisk signifikans
immunhistokemisk analyse viste 13 positive tilfælde (3+; 10,5%) for HER2 protein overekspression (figur 1a), 10 tvetydige tilfælde (2 +;.. 8,1%) (fig 1b) og 101 negative sager (81,4%), hvoraf 7 blev scoret 1+ (5,6%) (fig . 1c). Median alder ved diagnose tendens til at stige i henhold til HER2-status (negative, 61,76 år tvetydig, 66,3 år, og positiv, 68,58 år), selv om dette ikke nåede statistisk signifikans. Ingen af ​​patienterne i kategorien IHC 3+ var yngre end 46 år, og den ældste patienten i serien (A 92-årig kvinde) var blandt dem. Der var ingen sammenhæng mellem HER2 udtryk og patienternes køn. Fig. 1 Immunohistokemisk analyse af HER2-ekspression i gastriske carcinomer hjælp af 4B5-antistoffet i hel-vævssnit. (A) en HER2-positive tilfælde (3+); (B) en HER2-tvetydige tilfælde (2+); (C) en HER2-negative tilfælde (1+); (D) intratumoral protein heterogenitet i en HER2-positiv sag (3+). (AC: x400 felt forstørrelse; D: x200 felt forstørrelse)
Der var en positiv sammenhæng mellem HER2 protein-ekspression og godt til moderatly differentierede tumorer (P
< 0,001), samt med Laurens tarm undertype (P
= 0,009).
tumorer opstået i den distale mave udgjorde 76,9% af IHC 3+ tilfælde, mens 23,1% er fundet i den gastriske kardia eller i GEJ, men denne variation var ikke statistisk signifikant. Ingen IHC 3+ tumor viste en diffus eller ubestemt morfologi og kun to (15,4%) blev betragtet dårligt differentierede karcinomer. Hver IHC 3+ tumor viste lymphovascular invasion og de blev alle diagnosticeret på et fremskredent stadium af sygdommen, hovedsageligt i pT3 kategori (76,9%). Elleve tilfælde (84,6%) var positive for lymfeknudemetastaser, med et gennemsnit på 7,5 positive lymfeknuder per case. Imidlertid blev der ikke observeret nogen statistisk signifikans mellem HER2 protein overekspression og pT PN eller pM status.
Sammenlignet med IHC 3+ tilfælde, HER2-tvetydige tumorer (2+) præsenteret en lidt lignende profil, når morfologisk data blev taget i betragtning. Ingen tilfælde viste diffus eller ubestemt histologi, med en overvægt af tarm undertype (9 sager, 90,0%) og moderat differentierede tumorer (8 tilfælde, 80,0%). Størstedelen af ​​tumorer i denne indstilling kompromitteret også den distale maven og blev diagnosticeret på et fremskredent stadium af sygdommen (9 sager, 90,0%). Men der var et fald i andelen af ​​sager, der viser lymphovascular invasion og lymfeknude metastaser (6 tilfælde, 60,0%) sammenlignet med tal findes blandt IHC 3+ sager (13 sager, 100,0% og 11 tilfælde, 84,6%, henholdsvis) .
HER2-negative karcinomer (scores 0 og 1+) aggregeret alle tumorer med en diffus eller ubestemt morfologi samt de fleste af dem med et dårligt differentieret histologisk kvalitet og tidlig fase af sygdommen ved diagnosen.
IHC 2 + sager blev forelagt SISH men blev opdaget nogen genamplifikation. Derfor tilfælde med en endelig HER2-positive status blev udelukkende sammensat af IHC 3+ tumorer, som repræsenterer 10,5% af al GC i denne serie. HER2-positivitet var forbundet med intestinal undertype (P
= 0,048), godt til moderat differentierede tumorer (P
= 0,004) og tilstedeværelse af lymphovascular invasion (P
= 0,031).
Hensyn intratumoral HER2 protein heterogenitet, udvidelse af IHC 3+ områder varierede alligevel fra 10 til 99% af positive neoplastiske celler (fig. 1d). Der var også en variation i forlængelse af HER2 immunoreaktive områder i tvetydig kategori, der spænder fra 10 til 40% af tumorcellerne. I begge kategorier blev intratumoral protein heterogenitet meste ses i blandede typen karcinomer, hvor HER2 udtryk stærkt korreleret med tarm-type områder.
Bortset fra deres HER2 score, mange tilfælde vises en cytoplasmatisk immunoreaktivitet i normale maveslimhinden celler (87 sager , 70,2%), metaplastisk epithel (30 sager, 24,2%) og foci
af dysplasi (24 tilfælde, 19,4%) (fig. 2). Dette mønster af ekspression sås i både metaplastisk og dysplastiske epitel trods arten af ​​metaplasi eller graden af ​​dysplasi. Nuklear udtryk blev ofte set blandt diffuse typen carcinomer, men alle disse immunofarvede områder blev ikke taget i betragtning ved scoring af HER2 immunhistokemisk profil. Fig. 2 mulige faldgruber i immunhistokemisk analyse af HER2-protein-ekspression ved hjælp af 4B5-antistoffet. Cytoplasmatisk ikke specifik farvning i normal foveolar gastrisk mucosa (venstre) og i fokus
af gastrisk high-grade dysplasi (højre) (x200 felt forstørrelse)
Diskussion
I vores undersøgelse fandt vi en sidste HER2- positive status på 10,5%. Den samlede HER2 positivitet pris fundet i ToGA undersøgelsen var 810 af 3.665 patienter (22,1%) [6]. Disse tal repræsenterer en af ​​de største sæt af HER2 test data i GC prøver, opnået fra patienter fra 24 forskellige lande i Asien, Europa og Latinamerika. Selvom 22,1% tegner sig for mere end dobbelt så meget positive tumorer vi fandt i vores serie, ToGA retssagen HER2 positivitet screening kriterier omfattede alle tilfælde med proteinekspression ved IHC (3+ og 2+ sager) eller genamplifikation af ISH alene. Mere detaljerede oplysninger om HER2 test i ToGA undersøgelsen er for nylig blevet offentliggjort afsløre at netop 610 sager ud af 3.665 tumor prøver (16,6%) var i virkeligheden betragtes HER2-positiv, ved enten at lave IHC 3+ eller IHC 2+ med genamplifikation ved fluorescens in situ hybridisering
(FISH) [30]. En post hoc
eksplorativ analyse konkluderede, at patienter i disse kategorier var dem, der aldeles nydt mest af behandling med TZB [6]. Således den nøjagtige procentdel af patienter er berettiget til behandling med TZB ifølge HER2-screening udføres på ToGA forsøget var 16,6%, og når IHC resultater betragtes alene, kun 398 tilfælde (10,9%) var faktisk HER2-positiv (3+) [30 ]. I vores undersøgelse, da ingen IHC 2+ tilfælde viste genamplifikation ved SISH, fandt vi en IHC 3+ sats og en endelig HER2-positiv status på 10,5%.
GC i brasilianske patienter har tendens til at opstå i antrum, der er forbundet med Helicobacter pylori
kronisk infektion er derfor vores serie består hovedsagelig af carcinomer i den distale mave (80,6%). Da HER2 udtryk er blevet stærkt associeret med GC af Cardia og GEJ [17, 30-33], forventes vi at finde en endnu lavere positivitet blandt vores tilfælde. Toga forsøgsresultater viste en forskel i HER2 positivitet satserne mellem Europa /Asien og Central- /Sydamerika (23,8 og 16,1% henholdsvis, herunder alle FISH-positive og IHC 3+ tilfælde). Forfatterne forbundet kontrasterende resultater som følge af den lavere antal patienter screenet i Latinamerika (484 ud af 3.665 patienter) i stedet for en mulig variation i tumorbiologi [30]. Desværre kunne vi ikke finde oplysninger specifikt om HER2 udtryk i GC af brasilianske patienter indskrevet i ToGA studiet. Hvis cross-data mellem tumor topografi og patienternes oprindelseslande kunne hentes, kan det også hjælpe med at forklare divergerende HER2-positiv GC satser i Latinamerika.
Svarende til vores resultater, i en nylig stor europæisk serie [34], samt i en japansk kohorte af 1.461 patienter [35], var der ingen forskel i HER2 positivitet mellem proksimale og distale gastriske tumorer. Men to store kinesiske serier [17, 33] for nylig viste signifikant højere HER2 udtryk i proksimal GC efter aftale med fund ToGA forsøg [30] og med resultaterne fra en serie af 2.798 sydkoreanske patienter [32]. Forfatterne har medført, at tarm-type kræft er normalt hyppigere i GEJ og, som forskellige ætiologier kan spille en rolle i carcinogenese af tumorer fra disse to steder, kan dette delvist retfærdiggøre forskellige HER2 udtryk satser i henhold til tumor topografi [30]. Foruden den genetiske afstamning ifølge etnicitet kan flere gastriske carcinogenese pathways blive kraftigt påvirket af kostvaner og kronisk Helicobacter pylori
infektion [3]. Selv om dette sandsynligvis også har en vis indflydelse på HER2 positivitet satser findes i forskellige populationer med GC, forholdet mellem disse faktorer og HER2 udtryk forbliver ukendt, med få papirer offentliggjort [36, 37].
Antallet af IHC 3+ tilfælde fundet i vores undersøgelse kan forklares dels med, at hel-vævssnit udelukkende blev anvendt til HER2 evaluering, i stedet for endoskopiske biopsier. En nylig undersøgelse parret primære gastrectomies og deres endoskopiske biopsier at sammenligne HER2 udtryk scoringer og fundet en konkordans på kun 57%, primært på grund af intratumoral HER2 heterogenitet [38]. HER2 genetisk heterogenitet af ISH er tidligere blevet påvist på brystkræft, men det synes at være en mere kompleks problemstilling på GC prøver [39]. Proteinekspression heterogenitet ved IHC, normalt omtales som variation i immunhistokemisk intensitet og udvidelse af HER2-positive områder, er også et problem, der i høj grad kan påvirke prøve udvælgelse til HER2 test i GC. Faktisk har HER2-ekspression heterogenitet blevet påvist ikke blot ved vores undersøgelse, men også af andre forfattere [39, 40], herunder en undersøgelse omfattende 2.727 gastrectomies [32]. Som følge heraf kan hel-vævssnit opnået fra resektion primære gastriske tumorer tilbyde et større repræsentation af forskellige sub klonal cancer cellepopulation, der kunne bidrage til at undgå falsk-negative resultater på grund af HER2 heterogenitet. Da patienter med lokalt fremskreden eller metastatisk GC måske ikke undergår primær gastrektomi, hel-vævssnit er ikke altid tilgængelige og andre GC prøver bør anvendes i stedet, hvilket rejser spørgsmålet om, hvilken er bedst egnet til HER2 test: endoskopiske biopsier versus
metastatiske læsioner. For endoskopiske biopsier, anbefalingen er en levedygtig antal repræsentative tumor fragmenter (ideelt 6-8) og om muligt bør patologen også udføre HER2 test på en anden prøve, når et negativt resultat er fundet på en tumor endoskopisk biopsi [40].
Desuden blev GC-prøver fra ToGA forsøget testet for HER2-ekspression med HercepTest kit, som bruger en kanin polyklonalt anti-HER2-antistof [6], hvorimod en kanin monoklonalt antistof (4B5) blev anvendt i vores undersøgelse. Andre undersøgelser har rapporteret lavere følsomhed for HercepTest sammenlignet med 4B5 klon til påvisning af HER2-protein-ekspression [15, 41, 42]. Dette kunne også forklare den tilsvarende IHC 3+ procentdel af tilfælde fundet i vores serie og på den ToGA retssagen, på trods af overvægten af ​​tumorer fra den distale mave blandt vores patienter.
Data om HER2 udtryk i brasilianske patienter med GC er meget begrænset, og der er en bred variation af publicerede resultater. De to første der nogensinde er gennemført i Brasilien fandt en HER2 overekspression på 12 og 5,4%, herunder IHC 3+, og lægges sammen 2 + sager [23, 24]. Imidlertid blev grading score for brystkræft anvendes til HER2-status vurdering, hvor hele cellemembranen skal farves, og ikke kun laterale eller basolaterale vægge, hvilket tyder undervurdering af HER2 positivitet. I nyere forskning ved hjælp af specifikke HER2 scoring kriterier for GC, IHC 3+ sager varierede fra 0,8% til 11,6% [19-22, 25, 26]. Undersøgelser viser de laveste priser (0,8%, 3% og 6%), der anvendes tumor væv microarrays (TMAS) opnået fra kirurgiske prøver og andre anti-HER2-antistoffer i stedet 4B5 [19, 20, 22]. Disse resultater er vanskelige at blive sammenlignet med vores grundet metodologiske forskelle, især når TMA'er og tumoral proteinekspression heterogenitet er konfronteret. Således kunne TMAs angiver prøver mere ligner endoskopiske biopsier frem til større hel-vævssnit fra primære gastrectomies, som blev brugt i vores studie.
Vores resultater bekræfter nuværende konklusioner litteratur om brasilianske patienter med GC testet for HER2-ekspression ved anvendelse af en meget følsomme anti-HER2-antistof i hel-væv tumorsnit. Som en kendsgerning, en nylig analyse fra en brasiliansk cancer center sammenlignet udførelsen af ​​HercepTest, SP3 og 4B5 antistoffer mellem hel-vævssnit og TMA'er i en serie på 199 gastrectomies [21]. Forfatterne fandt den højeste HER2 positivitet rate ved hjælp af de samme parametre i vores undersøgelse: 4B5 antistof i hel-væv tumor sektioner (11,6%), er en værdi mest ligner vores fund (10,5%). Den laveste HER2 positivitet sats blev identificeret blandt TMA'er og HercepTest kit (3%) [21].
På trods af den højere følsomhed fundet med 4B5 antistof, har nogle forfattere også rapporteret omfattende cytoplasmatisk baggrund farvning af gastrisk foveolar lag og foci
af intestinal metaplasi /dysplasi, som det ses i vores undersøgelse, hvilket tyder en iboende klonal egenskab snarere end et metodisk problem [15, 21, 41, 42]. Faktisk har HER2-farvning af dysplastiske epitel blevet korreleret til genamplifikation ved ISH [43]. Selv om der var ingen problemer med at skelne HER2-positive neoplastiske celler fra disse områder, understreger vi, at farvningen af ​​sidstnævnte ikke skal overvejes, når scorer HER2 udtryk.
Indtil skrivningen af ​​den nuværende manuskript forfatterne kunne kun hente tre andre undersøgelser vedrørende ISH for genamplifikation påvisning i GC-prøver fra brasilianske patienter [19, 21, 25]. Begnami et al. fundet en samlet forstærkning på 8% ved hjælp af FISH, men andelen af ​​IHC 2+ forstærkede sager blev ikke nævnt [19]. Svarende til vores resultater, har en anden gruppe ikke finde nogen forstærkede tilfælde blandt IHC 2+ tumorer, selvom FISH var den anvendte metode [25]. Udover vores undersøgelse, kun en anden anvendt sølv lysfelt dobbelt ISH i IHC 2+ tilfælde [21]. Resultaterne viste en bred vifte af amplifikationsprodukter satser (fra nul til 100%), ifølge det primære antistof anvendes til IHC og vævsprøver (hel-vævssnit versus
TMAs). 4B5-antistof på 198 hel-vævssnit afslørede 20 tilfælde med en tvetydig HER2 score (10,1%), hvoraf kun 6 tilfælde (30%) viste genamplifikation ved SISH [21]. Andelen af ​​sager med en endelig HER2-positiv status var 14,6%, en lidt højere rente end den, vi afdækket, som kunne være til dels skyldes den lavere frekvens af distal GC (43,2%) i deres serie. De har konkluderet, at den mest nøjagtige IHC metode til evaluering HER2 ekspression i GC var at bruge 4B5 antistoffet på hel-vævssnit [21], hvilket var præcis den metode, der anvendes i vores undersøgelse.
Desuden fandt vi en sammenhæng mellem HER2-positiv tumorer og visse patologiske parametre, såsom Laurens tarm undertype (P
= 0,048), godt til moderat differentierede tumorer (P
= 0,004) og tilstedeværelsen af ​​lymphovascular invasion (P
= 0,031). Den tarm undertype har vist sig at være den patologiske træk mest uvægerligt forbundet med HER2-positivitet i flere studier [17, 32, 34, 35, 44, 45], herunder ToGA forsøg [30], og nogle med brasilianske patienter [19, 22 , 23, 26]. Da der forventes HER2 positivitet, der findes på tarm-type tumorer, opfordrer vi kraftigt, at, når der beskæftiger sig med en blandet type tumor, områder, der viser en intestinal morfologi skal vælges for HER2 scoring.
Foreningen af ​​HER2-positivitet med histologisk klasse og tilstedeværelse af lymphovascular invasion er også blevet rapporteret af nogle forfattere [19, 25, 31, 46], men ikke af andre [20, 47].

• Gastrisk rør indsættelse under direkte udsyn ved hjælp King Vision ™ video laryngoskop: et randomiseret, prospektivt, klinisk forsøg
• Sammenhæng mellem tilsyneladende diffusionskoefficienter og HER2 status i gastrisk kræft: pilot undersøgelse