Foreningen af ​​formindsket udtryk for RASSF1A med promotor methylering i primær mavekræft fra patienter i det centrale China

sammenslutning af formindsket udtryk for RASSF1A med promotor methylering i primær mavekræft fra patienter i det centrale Kina
Abstrakt
Baggrund
Selvom methylation- medieret inaktivering af ekspressionen af ​​RASSF1A, en kandidat tumorsuppressorgen, er blevet observeret i flere humane kræftformer, data vedrørende ændring af RASSF1A udtryk og methylering i kinesisk primær mavekræft er knappe. Desuden er direkte beviser sammenhængen mellem protein ekspression af RASSF1A og primære humane cancere mangler. Formålet med denne undersøgelse var at undersøge RASSF1A udtryk i væv af primær mavekræft (GC) på mRNA og protein niveauer, og at etablere den mulige sammenhæng mellem DNA methylering status og protein udtryk for RASSF1A på kinesisk.
Metoder
fireoghalvtreds patienter med primære gastriske cancere blev inkluderet i studiet af RASSF1A mRNA-ekspression og status for methylering mellem cancervæv og det tilsvarende tilstødende normale væv. 20 ud af 54 patienter blev medtaget i undersøgelsen af ​​RASSF1A proteinekspression. Ekspressionen af ​​RASSF1A på mRNA og proteinniveauer blev bestemt ved RT-PCR og Western-blotting, hhv. Den RASSF1A promotor methylering blev påvist ved methylering-specifikke PCR
Resultater
RASSF1A mRNA og protein udtryk i GC blev væsentligt reduceret med sammenlignet med de tilsvarende normale væv (OD-værdi:. 0,2589 ± 0,2407 vs 0,5448 ± 0,2971, P
< 0,0001; 0,1874 ± 0,0737 vs 0,6654 ± 0,2201, P
< 0,0001 henholdsvis). Methylering hyppigheden af ​​RASSF1A i primær GC er højere end i de tilsvarende normale væv (66,7% vs. 14,8%, P
< 0,0001). Endvidere blev RASSF1A mRNA-ekspression i methylering gruppe af GC yderligere reduceret sammenlignet med den unmethylation gruppe GC (0,1384 ± 0,1142 vs. 0,5018 ± 0,2463, P
< 0,0001)
Konklusion
Ekspression af RASSF1A. blev reduceret i væv af GC på mRNA og protein niveauer. Formindsket udtryk for RASSF1A var forbundet med promoter methylering.
Baggrund
mavekræft (GC) er en af ​​de mest almindelige maligne sygdomme i mave-tarm-sygdomme. Selvom forekomsten af ​​GC er faldende i de udviklede amter, er det stadig en førende dødsårsag fra kræft i de fleste udviklingslande. Både genetiske og miljømæssige faktorer, herunder H. pylori
infektion er blevet anset for at bidrage til udviklingen af ​​GC. For nylig har flere undersøgelser vist, at tavshed tumorsuppressorgener ved epigenetisk modifikation er en fundamental mekanisme til inaktivering af cancerrelaterede gener i patogenesen for human cancer [1]. Af særlig note er, at promotor hypermethylering spiller en væsentlig rolle i tab af funktion af tumorsuppressorgener.
Allelic tab på kromosom 3p21.3 er en af ​​de hyppigste genetiske ændringer i forskellige typer af humane kræftformer [2 ]. I slutningen af ​​90'erne, Dammann [3] og Burbee [4] et al identificeret RASSF1A, et hidtil ukendt gen fra den fælles homozygot sletning område 3p21.3. Dette gen aktier homologi med pattedyrs RAS effektorer. Der er syv RASSF1 isoformer (A til G) genereres gennem alternativ splejsning RASSF1A har vist sig at reducere tumorgenicitet in vivo og ofte inaktiveret i en række primære humane kræftformer. Genetiske mutationer i denne isoform er sjældne. Det er kendt, at epigenetisk inaktivering af RASSF1A associerer med CpG øer methylering af promotorregionen. Bisulfate DNA-sekventering har vist, at hypermethylering af promotor-regionen inaktiverer RASSF1A udtryk i de store menneskelige kræftformer. Dette understøttes af den observation af genekspressionen af ​​RASSF1A i forskellige cancercellelinjer behandlet med demethyleringsmiddel agenser [4-7]. Hidtil har flere undersøgelser vist tilstedeværelse af afvigende promotor methylering af RASSF1A og tab eller abnorm lav ekspression af RASSF1A i primær GC, hvilket antyder, at inaktivering af RASSF1A ekspression er tæt forbundet med promotoren methylering [5, 8-10]. Til vores bedste viden, ingen data vedrørende udtryk for RASSF1A og methylering status i GC i kinesiske befolkning er tilgængelige. I den foreliggende undersøgelse har vi bestemt udtryk for RASSF1A på både mRNA og protein niveauer, og deres forbindelse med RASSF1A fremme methylering status i kinesisk primære GC i det centrale Kina.
Metoder
Patienter
Fifty-fire patienter med primær GC blev registreret i Wuhan University Zhongnan Hospital og Hubei Provincial Cancer Hospital i december 2003 til juni 2005 og alle patienterne gennemgik helbredende resektion med systematisk lymfeknude dissektion. GC væv og tilsvarende tilstødende normale gastriske væv blev opnået fra driften før kemoterapi. Patienterne omfattede 35 mænd og 19 kvinder, gennemsnitsalder 57,6 ± 13,7 år (fra 30 til 85 år). Diagnose og opdelinger af GC blev bestemt ved histopatologiske undersøgelser og klassificering TNM. De demografiske og klinisk-patologiske data for de patienter er opsummeret i tabel 1. Blandt 54 patienter med GC, blev 20 tilfælde inkluderet for undersøgelse af protein ekspression af RASSF1A. Protokollen af ​​undersøgelsen blev godkendt af etik udvalg af Wuhan University Zhongnan Hospital. Tumor og tilstødende normale væv blev opnået på tidspunktet for kirurgi, lynfrosset i flydende N 2 og opbevaret ved -80 ° C indtil anvendelse. Prøve snit blev farvet i H &E og blev undersøgt af to erfarne pathologists.Table en sammenslutning af RASSF1A gen methylering med demografi og klinisk-patologiske træk af primær mavekræft (n = 54)

Methylering
P-værdi
OR (95% CI)

Ja
Nej


Køn
mandlige
24
11
0,766
1,273 (0,393 ~ 4,117)
kvindelige
12
7
Alder
< 60
17
13
0,145
0,344 (0,101 ~ 1,167)
≥ 60
19
5
Tumor sites
antrum
14
7
krop og hjerte
22
11
1,000
1,000 (0,313 ~ 3,192)
Stages
tidligt
1
2
0,255
0,229 (0,019 ~ 2,708)
avancerede
35
16
lymfeknudemetastase
ja
22
7
0,154
2,469 (0,774 ~ 7,882 )
ingen
14
11
Distant metastaser
ja
5
1
0,651
2,742 (0,296 ~ 25,424)
ingen
31
17
Differentieringer
godt og moderat
18
12
0,384
0,500 (0,154 ~ 1,624)
dårlig
18
6
Laurens
Intestinal typen
12
10
0,148
0,400 (0,125 ~ 1,275)
Diffuse typen
24
8
DNA og RNA-ekstrakt
DNA fra frosne væv blev oprenset ved phenol /chloroform og ethanolfældning og opløst i 50 pi destilleret vand og opbevaret ved -20 ° C indtil anvendelse. Totalt RNA blev isoleret under anvendelse af TRIzol kits (Molecular Research Center Inc., Cincinnati, USA) ifølge producentens anvisninger.
Semi-kvantitativ RT-PCR
Tre mikrogram totalt RNA blev omvendt transkriberet under anvendelse RevertAid ™ første streng cDNA syntese kit (Fermentas Inc., Vilnius, Litauen). Alle totalt RNA blev behandlet af DNase at undgå forurening af genomisk DNA. Primerne til RASSF1A og glyceraldehyder-3-phosphatdehydrogenase (GAPDH) blev designet baseret på RASSF1A gen (GeneBank Accession #: NM_007182) og GAPDH-genet (GeneBank Accession #: NM_002046). Primerne for RASSF1A var 5'-CTT TTA CCT GCC CAA GGA TGC-3 'og 5'-CAC CTC CCC AGA GTC ATT TTC C-3'. Primerne for GAPDH (5'-CAT GAC AAC TTT GGT ATC GTG-3 ', og 5'-GTG TCG CTG TTG AAG TCG TCA GA-3') blev anvendt som intern kontrol. De termiske cyklusser var: 94 ° C i 5 min, efterfulgt af 35 cyklusser af 94 ° C i 30 sek, 55 ° C i 45 sekunder og 72 ° C i 60sec, og endelig 72 ° C i 5 min for forlængelse. PCR-produkterne blev adskilt i 2% agarosegel i elektroforese og visualiseret med ethidiumbromidfarvning, og kvantificeret ved anvendelse af et billedanalysesystem (UVP Bioimaing systemer, USA). De genererede PCR-produkter var 265bp til RASSF1A og 370 bp for GAPDH. Optisk densitet (OD) værdi af mRNA-ekspression blev beregnet.
Bisulfat modifikation
DNA fra tumorvæv og tilsvarende tilstødende normale væv blev underkastet bisulfat behandling ifølge Herman et al [11]. Kort fortalt 2 ug genomisk DNA suspenderet i 50 pi destilleret vand, denatureret med 0,2 M NaOH i 10 minutter ved 37 ° C, og tilsat 30 pi frisk fremstillet 3 M natriumbisulfat (pH 5,0). Prøverne var over lagdelt med mineralolie til at dække overfladen af ​​den vandige fase, og inkuberes ved 50 ° C i 16 ~ 20 timer. DNA-prøven blev afsaltet gennem en søjle af Wizard DNA Clean-up System (Promega, Wisconsin, USA) ifølge producentens anvisninger. Prøverne blev behandlet med 0,3 M NaOH i 5 minutter ved stuetemperatur og fældes med ethanol. Den bisulfat-modificerede genomisk DNA blev resuspenderet i 50 pi TE-buffer (10 mM Tris · CI, 1 mM EDTA, pH 7,6) og opbevaret ved -80 ° C til anvendelse.
Methylering-specifik PCR (MSP)
status methylering af RASSF1A blev bestemt ved MSP. Bisulfat behandling af genomisk DNA omdanner cytosin til uracil-baser, men har ingen effekt på methylcytosin. Den specifikke PCR blev derefter brugt til at skelne mellem methylerede og umethylerede DNA-sekvenser i en Hotstar TaqE PCR-maskine (Takara Bio, Co., Ltd., Tokyo, Japan). Primerne til den methylerede form, var 5'-GGG TTT TGC GAG AGC GCG-3 'og 5'-GAT AAC AAA CGC GAA CCG-3', og primerne til den umethylerede formen var 5'-GGG GTT TTG TGA GAG TGTG -3 'og 5'-ACT AAC AAA CAC AAA CCA AAC-3' (Gene Bank tiltrædelse: AC002481). PCR betingelse bestod af én inkubation på 15 minutter ved 95 ° C, efterfulgt af 40 cykler af en 30 sek denaturering ved 94 ° C, 50 sekunder ved en annealingstemperatur (64 ° C i methyleret og 59 ° C i ikke-methylerede specifikke primere) og en 30 sek forlængelse ved 72 ° C, og en endelig forlængelse ved 72 ° C i 10 min. PCR-produkter blev separeret i 8% polyacrylamidgeler i elektroforese. Genomisk DNA, methyleret in vitro ved CpG methyltransferase (SSS I) ifølge producentens anvisninger (New England Biolabs, Inc., Beverly, MA), blev anvendt som en positiv kontrol. Vand blank blev anvendt som en negativ kontrol. Hver primersæt genererede et 169 bp produkt.
Western blotting
Halvtreds mg prøver blev homogeniseret og centrifugeret ved 12.000-15.000 g i 10-15 min i iskold 50 mM HEPES-buffer (pH 7,4) indeholdende 150 mM NaCl , 50 mM Tris · Cl (pH 8,0), 1% Triton X-100, 2 mM EDTA, 2 mM PMSF, 5 ug /ml leupeptin, 1% NP-40, og 10% glycerol. Supernatanten blev opsamlet og proteinkoncentrationen blev derefter målt under anvendelse af BSA som standard af BCA Protein Assay Reagent (Pierce Biotechnology. Inc., Rockford, USA). Ens mængder (100 ug) af total protein fra væv blev elektroforesebehandlet på SDS-polyacrylamid geler (10% gel) og overført til polyvinylidine (PVDF) filtermembraner i 30 minutter bysemi-tør blotting. Membranerne blev blokeret i 2 timer ved stuetemperatur med blokeringsopløsning tilvejebragt i ECL-kittet (Protein Detector LumiGLO Reserve ™ Western Blotting Kit, KPL, Maryland, USA), og derefter inkuberet i 45 minutter med en 1: 100 fortynding af primært antistof til RASSF1A. Det primære antistof anvendes til Western blot-analyse blev et affinitetsoprenset gede polyklonalt antistof mod RASSF1A, C-12 (SC-18724, Santa Cruz Biotechnology Inc., Santa Cruz, Californien., USA). PVDF-membraner blev derefter vasket i 30 minutter under anvendelse af en vaskeopløsning, efterfulgt af en 1 h inkubation med anti-ged-antistof konjugeret til peberrodsperoxidase i blok opløsning (kanin-anti-gede-IgG, Chemicon Internation, Inc., Temecula, California, USA ). ThePVDF membraner blev vasket igen, og immunreaktive bånd blev påvist ved hjælp af forøget kemiluminescens og visualiseret ved billedanalysesystem (Bio-Rad Laboratories, Inc. Hercules, CA, USA). GAPDH (Abcam Biotechnology, Cambridge, UK) blev anvendt som kontrol.
Statistisk analyse
Statistiske analyser blev udført under anvendelse af SPSS11.5 software (SPSS, Inc., Chicago, IL). Forskellene mellem variablerne blev vurderet ved chi square test eller t-tests i henhold til dataene. Den statistiske signifikans af forskelle blev sat som P
< 0.05.
Resultater
RASSF1A mRNA-ekspression i mavekræft
RASSF1A mRNA-ekspression i 54 GC væv var 50% af det i de tilstødende tilsvarende normale væv, som afslørede mRNA-ekspression i tumorer var signifikant reduceret sammenlignet med de normale væv som vist i fig. 1. Figur 1 Ekspression af RAASF1A mRNA i primær gastrisk cancer (T) og tilsvarende normalt væv (N). RT-PCR-produkter til RASSF1A blev kvantificeret ved densitometrisk scanning af i ethidiumbromid-farvede geler sammenlignet med GAPDH.
RASSF1A proteinekspression i gastrisk cancer
Konsekvent af faldet i mRNA-ekspression, figur 2 viser, at proteinekspression i tumorer var kun 21,4% af det i normale væv, som foreslået, at proteinniveauet af RASSF1A ekspression blev også reduceret med sammenligning med de tilsvarende normale væv. Figur 2 Protein ekspression af RASSF1A i primær gastrisk cancer (T) og tilsvarende normalt væv (N). Proteinniveau af RASSF1A blev kvantificeret ved Western-blotting forhold til GAPDH.
RASSF1A mRNA-ekspression og DNA-methylering i promotoren for RASSF1A gen i primær gastrisk cancer
Som vist i fig. 3, methylering hyppigheden af ​​RASSF1A i GC var 3,5 gange højere end i de tilsvarende normale væv (66,7% vs. 14,8%, P < 0,0001). RASSF1A mRNA-ekspression mellem methylering og unmethylation grupper i GC var signifikant forskellige, førstnævnte er 2,6 gange lavere end sidstnævnte (0,1384 ± 0,1142 vs 0,5018 ± 0,2463, P
< 0,0001). Resultaterne viste, at hypermethylering på CpG ø i RASSF1A promotoren er stærkt forbundet med en markant reduceret mRNA-ekspression af RASSF1A. Figur 3 Methylering af RASSFIA i primær gastrisk cancer og tilsvarende normalt væv af MSP. Bane 3, 4 og bane 6, 7 viser et repræsentativt resultat af en tumor og normal prøve hhv. U: amplificeret produkt med primer, der genkender ikke-methylerede sekvenser; M: amplificeret produkt med primer, der genkender methylerede sekvenser. Genomisk DNA, methyleret in vitro ved CpG-methylase (SSS I) blev anvendt som en positiv kontrol. Vand blank blev anvendt som en negativ kontrol. PCR produkterne blev løst på en 8% polyacrylamidgeler
associering mellem methylering og klinisk-patologiske parametre for mavekræft
association mellem promotor methylering og relevante demografiske og klinisk-patologiske karakteristika, herunder køn, alder, tumor site, lymfeknude metastaser, fjernt metastase, differentiering, scene og Laurens type blev vist i tabel 1. der var ingen signifikant sammenhæng mellem promotor methylering og klinisk-patologiske parametre.
diskussion
i nærværende undersøgelse vi bevis for, at RASSF1A udtryk i GC blev reduceret ved mRNA og proteinniveauer og methylering i promotorregionen af ​​RASSF1A genet var 3,5 gange hyppigere i primær GC end i tilsvarende normale væv. Desuden var forekomsten af ​​GC patienter med RASSF1A promotor methyleret løbet methyleret var 2 gange højere. Disse tyder på, at RASSF1A ekspression i GC var stærkt associeret med status promotoren methylering af RASSF1A genet. For yderligere at bekræfte forholdet mellem ekspression af RASSF1A og methylering af promotor sammenlignede vi RASSF1A mRNA-ekspression mellem methylering og unmethylation væv i GC, og fandt, at afvigende methylering af RASSF1A genpromotorregion er ansvarlig for reduktion eller tab af RASSF1A mRNA udtryk i den primære GC. Vores undersøgelse var i overensstemmelse med en undersøgelse, som viste, at 45,6% primær GC havde ingen eller unormalt lavt mRNA ekspressionen af ​​RASSF1A [5]. Blandt 30 matchede sæt fra de samme patienter 73,3% af GC viste sig at have reduceret RASSF1A udtryk [5]. Til vores bedste viden, ikke er blevet indberettet undersøgelse af RASSF1A protein-ekspression i GC. Vi analyserede yderligere RASSF1A ekspression på proteinniveauet ved Western blotting i 20 GC patienter og fandt, at proteinekspression i tumorer er kun 21,4% af ekspression i normale væv. Dette resultat indikerede, at RASSF1A proteinekspression i GC var signifikant lavere end i tilsvarende hosliggende normale væv. Dette er i overensstemmelse med mRNA ekspressionen af ​​RASSF1A.
Mekanismen af ​​nedsat eller tavshed RASSF1A udtryk kunne være forårsaget af promotor methylering og /eller mutation af RASSF1A gen. Imidlertid har flere undersøgelser vist, at mutation af RASSF1A gen er meget sjælden [4, 5, 7, 12, 13]. Således er RASSF1A gen sandsynligvis inaktiveret ved mekanismer methyltion. Byun et al [5] fandt, at af 41 primære GC med tab eller unormal nedsættelse af RASSF1A udtryk, blev 39 methylerede, mens der i både GC og normale væv med normal RASSF1A udtryk ingen blev methyleret. Til et al [10] viste, at hypermethylering af RASSF1A promotoren blev fundet i 25,8% af GC og i 11,1% af det gastriske intestinal metaplasi (IM), hhv. Vores data har vist, at frekvensen af ​​RASSF1A methylering i GC var højere end det ovenstående rapporterede data. GC er meget udbredt i Kina og høj methylering af RASSF1A kan delvis forklare årsagen til hvorfor GC forekomst er højere i kinesisk. Interessant, kan det faktum, at RASSF1A promotor hypermethylering er højere i EBV positiv GC end i EBV negativ carcinom (66,7% vs. 3,6%) tyder på en tæt forbindelse mellem EBV og afvigende methylering i GC. Faktisk har en tidligere rapport angivet, at viral onkogenese kan involvere aberrant methylering, hvilket resulterer i inaktivering af tumorsuppressorgener [9].
Vi fandt, at methylering hyppigheden af ​​RASSF1A i primær GC og i de tilsvarende normale væv var 66,7% og 14,8% hhv. Vores data viser, at ud af 54 GC patienter 36 var methylerede og 18 var umethyleret, hvilket tyder methylerede GC er mere almindelig, efter aftale med de andre rapporter. Den tidligere undersøgelse [14] foreslog, at maven er en af ​​de normale væv med en høj frekvens af aldersrelaterede methylering, og gastrisk cancer er en af ​​tumorer med en høj frekvens af CpG ø metylering. Kang et al [15] undersøgt status for methylering af 11 gener i nonneoplastic maveslimhinden, og de fandt, at aberrerende CpG ø metylering forekom hyppigt i kronisk gastritis, som viste aldrende forhold, og at aldring-relaterede methylering var gen typespecifik. RASSF1A genet blev sjældent methyleret, uden aldrende forhold. Endvidere rapporterede andre forfattere [3-5], at i normale væv, blev der ikke methylerede RASSF1A alleler påvises. viste imidlertid vores data, at i de tilsvarende normale væv, den RASSF1A methylering frenquency var høj procentdel (14,8%). Forskellen mellem vores data og andre forfattere "kan skyldes forskellen i prøverne, som vi studerede var de ikke-nesoplasia gastriske væv hos patienter med mavekræft og det er meget sandsynligt, at omfatte kronisk gastritis væv, især tarm metaplasi væv i tilsvarende hosliggende normale væv. Den tidligere undersøgelse rapporterede, at adskillige gener ofte var methyleret i kronisk gastritis, især i intestinale metaplasi væv. Til et al [10] gennemgik status 8 tumor-relaterede gen methylering herunder RASSF1A i gastrisk intestinal metaplasi i patienter med og uden gastrisk cancer, og de fandt, at hyppigheden af ​​methylering i RASSF1A i cancer og intestinale metaplasi var 25,8% og 11,1% , henholdsvis. Resultatet var i overensstemmelse med vores. Faktisk vi sekventeret MSP produkter til adskillige prøver. Sekvensen stemte overens med sekvensen forudsagt (data ikke vist). Vi fandt, at ikke-methylerede bands altid sameksistere med denatureret bands i de fleste primære GC og tilsvarende hosliggende normalt væv på trods af reduktion eller tab af RASSF1A ekspression, i overensstemmelse med tidligere rapporter [4, 10]. Dette er mest sandsynligt disse operativt fjernede tumorer blev ikke mikrodissekeres og blev forurenet med stromale celler. Derudover MSP er yderst følsom. Bai et al [16] mente, at påvisning af disse to bånd betegner enten intra-allelisk uensartethed CpG ø metylering eller methylering af øen varierende fra allel til allel. Alternativt kan vores resultat tyder på, at en delvis methylering af RASSF1A gen promotoren er nok til at lukke munden på gentranskription da tabet af et enkelt gen kopi er tilstrækkelige til at fremme tumordannelse [17, 18]. Tommasi et al [19] observeret, at heterozygote RASSF1A knockout-mus var signifikant tumor-tilbøjelige, både for spontan tumordannelse og for de kemisk inducerede tumorer. Dette kan tyde på, at RASSF1A genet har karakter af overdragelse haploinsufficiency når kun én allel er tabt.
Vi undersøger også sammenhængen mellem promotor hypermethylering og relevante clinicopathologic parametre, herunder alder og køn af patienterne, stedet karcinom, histologisk differentiering, Laurens type og metastase af GC. Vi fandt, at hyppigheden af ​​methylering af RASSF1A gen var markant højere i avancerede tumorer sammenlignet med tidlig fase tumorer (68,6% vs. 33,3%), og højere i dårligt differentieret tumorer (75% versus 60%) ved sammenligning med godt og moderat differentierede tumorer . Men disse forskelle ikke statistisk signifikans. Byun et al [5], har vist, at inaktivering af RASSF1A var korreleret med tumor stadium og kvalitet, men ikke med histologiske typer tumorer. Uoverensstemmelsen kan forklare ved begrænsede prøver til tidlig GC i vores undersøgelse.
Transfektion af RASSF1A genet reducerer væksten af ​​human cancer celle in vitro og in vivo [3, 4], støtter en rolle for RASSF1A som et tumorsuppressorgen. RASSF1A aktivering RAS kan kræve heterodimerisering af RASSF1A og det hidtil ukendte Ras effektor (NORE1), og inducere apoptose gennem dets interaktion med Ras, NORE1, konnektoren forstærker af KSR (CNK) og pro-apoptotiske MST1 kinase [20]. Adskillige grupper har rapporteret, at RASSF1A er en mikrotubulus-bindende protein og regulerer mitotisk progression [21-25], og kan fungere i signaltransduktionsveje involverer RAS som små GTPase proteiner. Tommasi et al [19] har vist, at Rassf1a
- /- og Rassf1a +/- Salg mus har forøget tumor mangfoldigheden og tumorstørrelse, hvilket tyder yderligere rolle tumor suppression af RASSF1A, hvilket kan forklare dens hyppige epigenetisk inaktivering i humane tumorer.
Konklusion
sammenfattende blev ekspressionen af ​​RASSF1A markant reduceret til et unormalt niveau eller fuldstændigt tabt i primær GC sammenlignet med tilstødende normalt væv, og var korreleret til hypermethylering af promotoren af ​​RASSF1A genet. Yderligere arbejde er nødvendigt for at belyse dens nøjagtige funktion og samspil med andre faktorer til at udvikle strategier for tidlig diagnose, forebyggelse og behandling af mavekræft
erklæringer
Tak
Dette arbejde blev støttet af en bevilling (No:. 2004AA301C91 ) fra Hubei Videnskab og Teknologi Foundation til Mei Ye og fællesskab fra Forskningscenter for Digestive Sygdomme i Wuhan University Zhongnan Hospital. Forfatterne takker Prof. Tan Jinquan til kritiske forslag og medarbejdere i Key Laboratory of Allergy og Immune sygdomme i Wuhan University School of Medicine til teknisk bistand.
Forfattere 'originale indsendte filer til Images of Nedenfor er links til forfatternes oprindelige indsendte filer til billeder. 12885_2007_770_MOESM1_ESM.jpeg Forfatternes oprindelige fil til figur 1 12885_2007_770_MOESM2_ESM.jpeg Forfatternes oprindelige fil til figur 2 12885_2007_770_MOESM3_ESM.jpeg Forfatternes oprindelige fil til figur 3 konkurrerende interesser
forfatter (e) erklærer, at de ikke har nogen konkurrerende interesser.

• Thymidinfosforylase /β-tubulin III udtryk forudsige respons i kinesiske avancerede gastric cancer patienter, der får første-line capecitabin plus paclitaxel
• Evaluering af en computer hjælp til vurdering af mave symptomer (ECASS): studie protokol for et randomiseret kontrolleret forsøg