Association of vähentynyt ilmentyminen RASSF1A kanssa promoottorin metylaation ensisijainen mahasyövässä potilailta Keski Kiina

Association of vähentynyt ilmentyminen RASSF1A kanssa promoottorin metylaation ensisijainen mahasyövässä potilailta Keski-Kiinan
tiivistelmä
tausta
Vaikka metylaatio välittämää inaktivointi ilmentymisen RASSF1A, ehdokas tuumorisuppressorigeeniä, on havaittu useissa ihmisen syövissä, koskevia tietoja muuttamista RASSF1A ilmaisun ja metylaatio Kiinan ensisijainen mahasyövän ovat niukkoja. Lisäksi suora todiste osoittaa yhdistyksen välillä proteiinin ilmentymistä RASSF1A ja ensisijainen ihmisen syöpien puuttuu. Tutkimuksen tavoitteena oli tutkia RASSF1A ilmentymistä kudoksessa ensisijaisen mahasyövän (GC) mRNA ja proteiini tasoilla, ja luoda mahdollisimman suhdetta DNA metylaatiostatuksen ja proteiinin ilmentymistä RASSF1A kiinaksi. Tool Menetelmät
viisikymmentäneljä primaarisessa mahasyövistä sisällytettiin tutkimuksessa RASSF1A mRNA ilmaisun ja metylaatiostatuksen välillä syöpäkudoksessa ja vastaavan viereisen normaalia kudosta. 20 ulos 54 potilasta otettiin mukaan tutkimukseen RASSF1A proteiinin ilmentymisen. Ekspression RASSF1A mRNA ja proteiini tasot määritettiin RT-PCR: llä ja Western-blottauksella, vastaavasti. RASSF1A promoottori metylaatio havaittiin metylaatiospesifistä PCR.
Tulokset
RASSF1A mRNA ja proteiini ilmaisuja GC vähenivät merkittävästi verrattuna vastaaviin normaalien kudosten (OD-arvo: 0,2589 ± 0,2407 vs. 0,5448 ± 0,2971, p
< 0,0001; 0,1874 ± 0,0737 vs. 0,6654 ± 0,2201, P
< 0,0001, vastaavasti). Metylointi taajuus RASSF1A primaarisessa GC on korkeampi kuin vastaava normaaleissa kudoksissa (66,7% vs. 14,8%, P
< 0,0001). Lisäksi RASSF1A mRNA: n ekspression metylaatio ryhmä GC alennettiin edelleen verrattuna unmethylation ryhmä GC (0,1384 ± 0,1142 vs. 0,5018 ± 0,2463, P
< 0,0001).
Päätelmä
Expression of RASSF1A pienennettiin kudosten GC mRNA ja proteiini tasoilla. Vähentynyt ilmentyminen RASSF1A liittyi promoottorin metylaation.
Tausta
Mahasyöpää (GC) on yksi yleisimmistä pahanlaatuisten kasvainten ruoansulatuskanavan sairaudet. Vaikka ilmaantuvuus GC on vähenemässä niissä kehittyneiden maiden, se on edelleen johtava kuolinsyy syövistä useimmissa kehitysmaissa. Sekä geneettiset ja ympäristötekijät kuten helikobakteeri
infektiota on katsottu edistää GC. Viime aikoina useat tutkimukset ovat osoittaneet, että hiljaisuus tuumorisuppressorigeeneille mukaan epigeneettinen muokkaus on perustavanlaatuinen mekanismi inaktivoimiseksi syöpään liittyvien geenien patogeneesissä ihmisen syövän [1]. Niistä Erityisen huomattava on, että promoottori hypermetylaation olennainen rooli lakkaa toimimasta tuumorisuppressorigeeneille.
Alleelisia menetys kromosomissa 3p21.3 on yksi yleisimmistä geneettisiä muutoksia erilaisissa ihmisen syövissä [2 ]. Vuonna 90-luvun lopulla, Dammannin [3] ja Burbee [4] et al tunnistettu RASSF1A, uusi geeni yhteisistä homotsygoottisia poistetaan alue 3p21.3. Tämä geeni on homologiaa nisäkkäiden RAS efektoreja. On seitsemän RASSF1 isomuodot (A-G) saaduilla vaihtoehtoisen silmukoinnin RASSF1A on osoitettu vähentävän tuumorigeenisyyteen in vivo, ja on usein inaktivoitu eri primaaristen ihmisen syövissä. Geneettisiä mutaatioita tässä isoformin ovat harvinaisia. On tunnettua, että epigeneettisten hiljentäminen RASSF1A assosioituu CpG-saarekkeiden metylaation promoottorialueen. Bisulfate DNA sekvensointi osoitti, että hypermetylaatiota promoottorialueen inaktivoi RASSF1A ilmentymisen suuria ihmisen syövissä. Tätä tukee havainto uudelleen ilmentymisen RASSF1A erilaisissa syöpäsolulinjoissa käsitelty demetyloivan aineilla [4-7]. Tähän mennessä useat tutkimukset ovat osoittaneet läsnäolo poikkeava promoottori metyloinnin RASSF1A ja menetys tai epänormaalin alhainen ilmentyminen RASSF1A perusterveydenhuollossa GC, mikä viittaa siihen, että inaktivointi RASSF1A ilmentyminen liittyy läheisesti promoottorin metylaation [5, 8-10]. Parhaan tietomme, tietoja ilmoittamista koskevia RASSF1A ja metylaation asema GC Kiinan väestöstä on saatavilla. Tässä tutkimuksessa olemme päättäneet ilmentyminen RASSF1A sekä mRNA ja proteiini tasoilla, ja niiden yhdessä RASSF1A edistää metylaatiostatuksen Kiinan ensisijainen GC Keski-Kiinassa. Tool Menetelmät
Potilaat
Viisikymmentäneljä potilasta primaaristen GC oli rekisteröity Wuhan University Zhongnan sairaalan ja Hubein maakunnan Cancer sairaalan joulukuuta 2003 kesäkuussa 2005 ja kaikki potilaat tehtiin parantava resektoimalla järjestelmällinen imusolmukedissektiossa. GC kudosten ja vastaavien viereisten normaali maha kudokset saatiin toiminnoista ennen kemoterapiaa. Potilaat mukana 35 urosta ja 19 naarasta, keski-ikä 57,6 ± 13,7 vuotta (vaihteluväli 30-85 vuotta). Diagnoosi ja eriyttämiset GC määritettiin histopatologisia tutkimuksia ja TNM luokittelu. Väestörakenteen ja kliinis tiedot potilaista on yhteenveto taulukossa 1. Niistä 54 potilaalla GC, 20 tapausta otettiin mukaan tutkimukseen proteiinin ilmentymistä RASSF1A. Protokolla Tutkimuksen hyväksyi etiikkaa komitean Wuhan University Zhongnan sairaala. Kasvain ja vieressä normaaleissa kudoksissa saatiin aikaan leikkauksen, pikajäädytettiin nestemäisessä N 2, ja niitä säilytettiin -80 ° C: ssa, kunnes ne käytettiin. Näyte leikkeitä värjättiin H &E ja tutkittiin kaksi kokenutta pathologists.Table 1 liitto RASSF1A geenin metylaatio demografiset ja kliinis-ensisijaisen mahasyövän (n = 54) B
metylointi
P arvo
OR (95% CI)

Kyllä
Ei


Sukupuoli
male
24
11
0,766
1,273 (0,393 ~ 4,117) B female
12
7
Age
< 60
17
13
0,145
0,344 (0,101 ~ 1,167)
≥ 60
19
5
tuumorikohdat
antrum
14
7
kehon ja sydämen
22
11
1.000
1,000 (0,313 ~ 3,192) B Vaiheet
aikaisin
1
2
0,255
0,229 (0,019 ~ 2,708) B edennyt
35
16
Imusolmuke etäpesäke
kyllä ​​
22
7
0,154
2,469 (0,774 ~ 7,882 ) B ei
14
11
etäpesäkkeiden
kyllä ​​
5
1
0,651
2,742 (0,296 ~ 25,424) B ei
31
17
eriyttämiset
hyvin ja maltillinen
18
12
0,384
0,500 (0,154 ~ 1,624) B huono
18
6
Lauren
Suoliston tyyppi
12
10
0,148
0,400 (0,125 ~ 1,275) B Diffuusi tyyppi
24
8
DNA- ja RNA-uutetta
DNA jäädytetty kudoksista puhdistettiin fenoli /kloroformilla ja saostetaan etanolilla ja liuotetaan 50 ul: aan tislattua vettä ja säilytettiin -20 ° C: ssa käyttöön asti. Kokonais-RNA eristettiin käyttämällä Trizol sarjat (Molecular Research Center Inc., Cincinnati, USA) valmistajan ohjeita.
Puolikvantitatiivinen RT-PCR-
Kolme mikrogrammaa kokonais-RNA: ta käänteisesti transkriptoitiin käyttäen RevertAid ™ ensimmäisen juosteen cDNA-synteesi kit (Fermentas Inc., Vilna, Liettua). Kaikki kokonais-RNA käsiteltiin DNaasi saastumisen estämiseksi genomisen DNA. Alukkeet RASSF1A ja glyceraldehydes-3-fosfaattidehydrogenaasi (GAPDH) suunniteltiin perustuen RASSF1A geeni (GenBank Accession #: NM_007182) ja GAPDH-geenin (GeneBank Accession #: NM_002046). Alukkeet RASSF1A olivat 5'-CTT TTA CCT GCC CAA GGA TGC-3 'ja 5'-CAC CTC CCC AGA GTC ATT TTC C-3'. Alukkeet GAPDH (5'-CAT GAC AAC TTT GGT ATC GTG-3 ', ja 5'-GTG TCG CTG TTG AAG TCG TCA GA-3') käytettiin sisäisenä kontrollina. Terminen syklit olivat: 94 ° C 5 min, jota seurasi 35 sykliä 94 ° C 30 sekunnin ajan, 55 ° C: ssa 45 sek ja 72 ° C: ssa 60 sekunnin, ja lopuksi 72 ° C: ssa 5 min ja laajennus. PCR-tuotteet erotettiin 2% agaroosigeelissä elektroforeesilla ja visualisoitiin etidiumbromidivärjäyksellä, ja kvantitoitiin käyttäen kuva-analyysiä järjestelmä (UVP Bioimaing järjestelmät, USA). Syntyvä PCR tuotteet olivat 265bp varten RASSF1A ja 370 emäsparin GAPDH. Optinen tiheys (OD) arvo on mRNA: n ilmentymisen on laskettu.
Bisulfaatti muutos
DNA kasvaimen kudokset ja vastaavat viereisen normaaleissa kudoksissa tehtiin bisulfaatti mukaisen hoidon Herman et ai [11]. Lyhyesti, 2 ug genomista DNA: ta suspendoitiin 50 ul: ssa tislattua vettä, denaturoitu 0,2 M NaOH 10 min ajan 37 ° C: ssa, ja lisättiin 30 ul: aan vasta valmistettua 3 M natrium- bisulfaatti (pH 5,0). Näytteet olivat yli kerrostunut mineraaliöljyä kattavat pinnan vesifaasista, ja inkuboitiin 50 ° C: ssa 16 ~ 20 tuntia. DNA-näyte poistettiin suolat pylvään läpi Wizard DNA puhdistusjärjestelmää (Promega, Wisconsin, USA) mukaan valmistajan ohjeiden. Näytteet käsiteltiin 0,3 M NaOH: lla 5 min ajan huoneen lämpötilassa ja saostetaan etanolilla. Isella modifioitua genomista DNA: ta suspendoitiin uudelleen 50 ul: aan TE-puskuria (10 mM Tris-CI, 1 mM EDTA, pH 7,6) ja säilytettiin -80 ° C: ssa käyttöä varten.
Metylaatiospesifinen PCR (MSP)
metylaatiostatuksen RASSF1A määritettiin MSP. Bisulfaatti hoito genomisen DNA muuntaa sytosiini urasiiliksi emäksiä, mutta sillä ei ole vaikutusta metyylisytosiini. Erityisten PCR käytettiin sitten erottaa metyloitu ja metyloitumaton DNA-sekvenssit on Hotstar TaqE PCR kone (TaKaRa Bio, Co., Ltd., Tokio, Japani). Alukkeet metyloitu lomake olivat 5'-GGG TTT TGC GAG AGC GCG-3 'ja 5'-GAT AAC AAA CGC GAA CCG-3', ja alukkeet metyloitumattomalla lomake olivat 5'-GGG GTT TTG TGA GAG TGTG -3 'ja 5'-ACT AAC AAA CAC AAA CCA AAC-3' (geenipankki liittymistä: AC002481). PCR kunto koostui yhdestä inkuboinnin 15 minuuttia 95 ° C: ssa, mitä seurasi 40 sykliä 30 sekunnin denaturaatio 94 ° C: ssa, 50 s ajan lämpökäsittelylämpötilaan (64 ° C: metyloidut ja 59 ° C: ssa metyloimaton spesifisiä alukkeita) ja 30 sekunnin ekstensio 72 ° C: ssa, ja lopullinen pidennys 72 ° C: ssa 10 min. PCR-tuotteet erotettiin 8% polyakryyliamidigeeleillä elektroforeesissa. Genomisen DNA: n, metyloitu in vitro CpG-metyylitransferaasin (Sss I) valmistajan ohjeiden (New England BioLabs, Inc., Beverly, MA), käytettiin positiivisena kontrollina. Vesi tyhjä käytettiin negatiivisena kontrollina. Kukin alukesarja synnytti 169 bp: n tuotteen.
Western blotting
Viisikymmentä mg: n näytteet homogenisoitiin ja sentrifugoitiin 12,000-15,000 g 10-15 min jääkylmää 50 mM HEPES-puskuria (pH 7,4), joka sisälsi 150 mM NaCl: a , 50 mM Tris-CI (pH 8,0), 1% Triton X-100, 2 mM EDTA, 2 mM PMSF, 5 ug /ml leupeptiiniä, 1% NP-40, ja 10% glyserolia. Supernatantti kerättiin ja proteiinipitoisuus mitattiin sitten käyttämällä BSA: ta standardina BCA Protein Assay Reagent (Pierce Biotechnology., Inc., Rockford, USA). Yhtä suuret määrät (100 ug) peräisin olevan proteiinin kokonaismäärän kudoksista suoritettiin elektroforeesi SDS-polyakryyliamidigeeleillä (10% geeli) ja siirrettiin polyvinylideeni (PVDF) suodatinmembraanit 30 min bysemi kuiva blottauksella. Membraanit blokattiin 2 tunnin ajan huoneenlämpötilassa lohkon liuoksen annetaan ECL kit (Protein Ilmaisin LumiGLO Reserve ™ Western Blotting Kit, KPL, Maryland, USA), ja sitten inkuboitiin 45 min ajan 1: 100 laimennosta ensisijainen vasta-aine RASSF1A. Ensisijainen vasta-aine, jota käytetään Western blot analyysi oli affiniteettipuhdistettua vuohen polyklonaalinen vasta-aine RASSF1A, C-12 (SC-18724, Santa Cruz Biotechnology Inc., Santa Cruz, Kalifornia., USA). PVDF-kalvoja pestiin sitten 30 min käyttäen pesuliuosta, jonka jälkeen 1 h inkubointi anti-vuohi-vasta-aine konjugoituna piparjuuriperoksidaasiin lohkossa liuokseen (Rabbit anti-vuohi lgG: llä, Chemicon Internation, Inc., Temecula, California, USA ). ThePVDF kalvot pestiin uudelleen, ja immunoreaktiiviset vyöhykkeet havaittiin tehostetulla kemiluminesenssilla ja visualisoitiin kuva-analyysi-järjestelmän (Bio-Rad Laboratories, Inc. Hercules, CA, USA). GAPDH (Abcam Biotechnology, Cambridge, UK) käytettiin kontrollina.
Tilastollinen analyysi
Tilastolliset analyysit suoritettiin käyttäen SPSS11.5 ohjelmistoa (SPSS, Inc., Chicago, IL). Erot muuttujien arvioitiin chi neliön testi tai t-testien tietojen mukaan. Tilastollinen merkitys erojen asetettiin P
< 0,05.
Tulokset
RASSF1A mRNA: n ekspression mahasyövän
RASSF1A mRNA: n ekspression 54 GC kudoksissa oli 50%, joka on viereisen vastaavan normaaleissa kudoksissa, mikä osoitti, mRNA: n ekspression kasvaimissa oli merkittävästi vähentynyt verrattiin normaali kudosten, kuten on esitetty kuviossa. 1. Kuva 1 ekspressio RAASF1A mRNA: n ensisijainen mahasyövässä (T) ja vastaavassa normaalissa kudoksessa (N). RT-PCR-tuotteista RASSF1A kvantitoitiin densitometrisellä skannaus etidiumbromidilla-värjätyissä geeleissä verrattuna GAPDH.
RASSF1A proteiinin ilmentyminen mahasyövän
yhdenmukainen vähenemisestä mRNA: n ekspression, kuva 2 osoittaa, että proteiinin ilmentymisen kasvaimia oli vain 21,4%, joka on normaaleissa kudoksissa, mikä viittasi siihen, että proteiinin taso RASSF1A ilmentymistä pienennetään myös verrattuna vastaaviin normaaleihin kudoksiin. Kuvio 2 Proteiinin ilmentyminen RASSF1A primaarisessa mahasyövässä (T) ja vastaavassa normaalissa kudoksessa (N). Proteiini taso RASSF1A kvantifioitiin Western-blottauksella verrattuna GAPDH.
RASSF1A mRNA: n ekspression ja DNA: n metylaation promoottorin RASSF1A geenin ensisijainen mahasyövän
Kuten kuviossa. 3, metylaatio taajuus RASSF1A GC oli 3,5-kertainen korkeampi kuin vastaava normaaleissa kudoksissa (66,7% vs. 14,8%, P < 0,0001). RASSF1A mRNA ilmaisun välillä metylaatio ja unmethylation ryhmien GC olivat merkittävästi erilaisia, entinen on 2,6 kertaa pienempi kuin jälkimmäinen (0,1384 ± 0,1142 vs. 0,5018 ± 0,2463, P
< 0,0001). Tulokset osoittivat, että hypermetylaation klo CpG saari RASSF1A promoottori liittyy vahvasti vähensi mRNA ilmaus RASSF1A. Kuvio 3 metylointi RASSFIA perusterveydenhuollossa mahasyövän sekä vastaavat normaalia kudosta MSP. Kaista 3, 4 ja kaista 6, 7 esittävät tyypillistä tulosta tuumorin ja normaalin näytteen vastaavasti. U: monistettu tuote pohjamaalilla tunnustaa metyloitumattoman sekvenssit; M: monistettu tuote pohjamaalilla tunnustaa metyloituja sekvenssit. Genomisen DNA: n, metyloitu in vitro CpG (Sss I) käytettiin positiivisena kontrollina. Vesi tyhjä käytettiin negatiivisena kontrollina. PCR-tuotteet erotettiin 8% polyakryyliamidigeeleillä
Association välillä metylaatio ja kliinis parametrit mahasyövän
välinen yhteys promoottorin metylaation ja asiaan demografiset ja kliinis ominaisuuksia kuten sukupuoli, ikä, kasvainpaikkaa, imusolmuke etäpesäke, kaukainen etäpesäke, erilaistuminen, vaihe ja Lauren n tyyppi on esitetty taulukossa 1. ei ollut merkittävää yhteyttä välillä promoottorin metylaation ja kliinis parametrit.
keskustelu
Tässä tutkimuksessa olemme esittäneet näytön siitä RASSF1A ilmentyminen GC vähennettiin mRNA ja proteiinin tasot ja metylaatio promoottorialueen RASSF1A geenin oli 3,5-kertainen useammin ensisijaisesti GC kuin vastaavissa normaaleissa kudoksissa. Lisäksi, esiintyvyys GC potilailla, joilla on RASSF1A promoottorin metyloitu yli metyloimattoman oli 2 kertaa suurempi. Nämä viittaavat siihen, että RASSF1A ilmentyminen GC: tä, liittyvät erittäin suuresti promoottorin metylaation tilan RASSF1A geenin. Edelleen vahvistaa suhdetta ilmentymisen RASSF1A ja metylaation promoottorin, vertasimme RASSF1A mRNA: n ilmentymisen välillä metylaation ja unmethylation kudosten GC, ja totesi, että poikkeava metylaatio RASSF1A geenin promoottorialue on vastuussa väheneminen tai menetys RASSF1A mRNA ilmaisun ensisijainen GC. Tutkimuksemme vastasi yksi tutkimus, joka osoitti, että 45,6% ensisijainen GC: llä nolla tai poikkeuksellisen alhainen mRNA ilmaus RASSF1A [5]. Niistä 30 sovitettu sarjaa samasta potilaista 73,3% GC: n havaittiin olevan vähentää RASSF1A ilmaisun [5]. Parhaan tietomme, ei tutkimus RASSF1A proteiinin ilmentymisen GC on raportoitu. Olemme lisäksi analysoitu RASSF1A ilmennetty proteiini tasolla Western-blottauksella 20 GC potilailla ja totesi, että proteiinin ilmentyminen kasvaimissa on vain 21,4% ilmaisun normaaleissa kudoksissa. Tämä tulos osoitti, että RASSF1A proteiinin ilmentymistä GC oli huomattavasti pienempi kuin vastaava viereinen normaaleissa kudoksissa. Tämä on johdonmukaista, että mRNA: n ilmentymisen RASSF1A.
Mekanismi vähentää tai vaiennettu RASSF1A ilmentymistä voi johtua promoottori metylaation ja /tai mutaatio RASSF1A geenin. Kuitenkin, useat tutkimukset ovat osoittaneet, että mutaatio RASSF1A geenin on hyvin harvinaista [4, 5, 7, 12, 13]. Siten RASSF1A geeni on todennäköisesti tehottomaksi mekanismeja methyltion. Byun et ai [5] todettiin, että 41 ensisijaisen GC menettäminen tai epänormaali väheneminen RASSF1A ilmaisun, 39 metyloitiin, kun taas sekä GC normaaleissa kudoksissa normaalilla RASSF1A ilme yhtään metyloitiin. Jotta et al [10] osoitti, että hypermetylaatiota RASSF1A promoottorin todettiin 25,8% GC ja 11,1% mahalaukun suoliston metaplasiaa (IM), tässä järjestyksessä. Meidän tiedot ovat osoittaneet, että tiheys RASSF1A metylaation GC oli korkeampi kuin edellä ilmoitetut tiedot. GC on erittäin yleistä Kiinassa ja korkea metylaation RASSF1A saattaa selittää osittain syyn, miksi GC esiintyvyys on korkeampi Kiinan. Mielenkiintoista, että RASSF1A promoottori hypermetylaation on suurempi EBV positiivinen GC kuin EBV negatiivinen karsinooma (66,7% vs. 3,6%) voi ehdottaa tiiviin EBV ja poikkeava metylaatio GC. Itse asiassa aiemman raportin on ilmoittanut, että viruksen oncogenesis saattaa liittyä poikkeavaa metylaatio, jolloin inaktivoitumisen tuumorisuppressorigeeneille [9].
Huomasimme, että metylaatio taajuus RASSF1A perusterveydenhuollossa GC ja vastaavissa normaaleissa kudoksissa olivat 66,7% ja 14,8%, vastaavasti. Tuloksemme osoittivat, että ulos 54 GC potilaista 36 oli metyloitu ja 18 olivat metyloitumaton, mikä viittaa metyloituja GC on yleisempää, yhteisymmärryksessä muiden raporttien. Edellisessä tutkimuksessa [14], viittasi siihen, että vatsa on yksi normaaleista kudoksista, joilla on korkea taajuus ikääntymiseen liittyvien metylaatio, ja mahasyöpä on yksi kasvaimia, joilla on suuri tiheys CpG-saarekkeen metylaation. Kang et al [15] tutki metylaatiostatuksen 11 geenien hyvänlaatuinen mahan limakalvoa ja he huomasivat, että poikkeava CpG-saarekkeen metylaation esiintyi usein krooninen gastriitti, joka osoitti ikääntyminen suhteeseen, ja että ikääntymiseen liittyvien metylaatio oli geeni tyyppikohtaista. RASSF1A geeni harvoin metyloitu, ilman ikääntymisen suhdetta. Lisäksi muut kirjoittajat raportoitu [3-5], että normaaleissa kudoksissa, ei metyloituja RASSF1A alleelit havaittiin. Kuitenkin meidän tiedot osoittivat, että vastaavassa normaalissa kudoksia, RASSF1A metylaatio frenquency oli suuri osuus (14,8%). Ristiriita tietomme ja muiden tekijöiden voi johtua eron näytteiden, joita tutkittiin olivat ei-nesoplasia mahalaukun kudoksissa potilailla, joilla on mahalaukun syövän ja se on hyvin todennäköisesti sisältää krooninen gastriitti kudoksissa, erityisesti suoliston metaplasiaa kudoksia vastaavat viereisen normaalit kudokset. Aikaisempi tutkimus kertoo, että useat geenit olivat usein metyloitu krooninen gastriitti, erityisesti suoliston metaplasiaa kudoksissa. Jotta et al [10] tutki 8 kasvaimeen liittyvä geeni metylaatiostatuksen lukien RASSF1A maha- suoliston metaplasiaa potilailla ja ilman mahasyövän, ja he huomasivat, että taajuus metylaation RASSF1A syövän ja suoliston metaplasiaa olivat 25,8% ja 11,1% vastaavasti. Tulos oli yhdenmukainen meidän. Itse asiassa, sekvensoimme MSP tuotteita useita näytteitä. Sekvenssi oli yhdenmukainen sekvenssiin ennustettu (data ei näytä). Huomasimme, että metyloitumattomat bändejä aina rinnalla metyloituja bändejä Eniten ensisijaisia ​​GC ja vastaavien viereisten normaaleista kudoksista huolimatta vähentäviä tai RASSF1A ilmaisun, yhdenmukaisia ​​aiempien raporttien [4, 10]. Tämä on todennäköisesti nämä resektoitiin kasvaimet eivät microdissected ja saastuttamien stroomasoluihin. Lisäksi MSP on erittäin herkkä. Bai et al [16] ajatellut, että havaitseminen nämä kaksi nauhaa on joko sisäinen alleelinen heterogeenisuus CpG-saarekkeen metylaation tai metylointi saaren vaihtelee alleelin alleeli. Vaihtoehtoisesti meidän tulos voi osoittaa, että osittainen metylaatio RASSF1A geenin promoottori riittää vaientaa geenitranskription koska menetys yhden geenin kopio riittää edistää kasvainten muodostumista [17, 18]. Tommasi ym [19] havaittiin, että heterotsygoottinen RASSF1A hiirten olivat merkitsevästi kasvaimen altis, niin spontaani kasvaimen muodostumisen ja kemiallisesti aiheutettujen kasvaimien. Tämä saattaa viitata, että RASSF1A geeni on ominaisuuksiltaan annetaan haploinsufficiency kun vain yksi alleeli menetetään.
Tutkimme myös yhdistyksen välillä promoottorin hypermetylaation ja asiaankuuluvat ennusteeseen viittaavia parametreja kuten ikään ja sukupuoleen potilaiden, sivusto karsinooma, histologiset eriyttäminen, Lauren tyyppi ja etäpesäke GC. Huomasimme, että taajuus metylaation RASSF1A geenin oli huomattavasti korkeampi pitkälle kasvaimissa verrattuna alkuvaiheen kasvaimet (68,6% vs. 33,3%), ja suurempi huonosti eriytetty kasvaimet (75% vs. 60%) verrattuna hyvin ja kohtuullisesti erilaistunut kasvaimet . Nämä erot eivät kuitenkaan tilastollisesti merkitseviä. Byun et ai [5] ovat osoittaneet, että inaktivointi RASSF1A korreloi kasvaimen vaiheen ja laatu, mutta ei histologisia kasvaimia. Ero voi selittää rajoitetun näytteitä alussa GC tutkimukseen.
Transfektio RASSF1A geenin vähentää kasvua ihmisen syöpäsolujen in vitro ja in vivo [3, 4], joka tukee rooli RASSF1A kuin kasvainsuppressorigeenin. RASSF1A aktivoimalla RAS voi vaatia heterodimerisoitumisella RASSF1A ja uusi Ras efektori (NORE1), ja indusoivat apoptoosia sen vaikutuksen Ras, NORE1, liitin tehostaja KSR (CNK) ja pro-apoptoottinen MST1 kinaasi [20]. Useat ryhmät ovat raportoineet, että RASSF1A on mikrotubulusta sitova proteiini ja säätelee mitoosi etenemistä [21-25], ja se voi toimia signaalitransduktioreitteihin joissa RAS kuin pieniä GTPaasi proteiineja. Tommasi ym [19] on osoittanut, että Rassf1a
- /- ja Rassf1a +/-
hiiret ovat lisäsivät kasvainten lukumäärää ja kasvaimen kokoa, mikä viittaa edelleen rooli kasvaimen tukahduttaminen RASSF1A, mikä saattaa selittää sen usein epigeneettiset inaktivaatiota ihmisen kasvaimissa.
Päätelmä
Yhteenvetona, ilmentyminen RASSF1A väheni merkittävästi epänormaali taso tai täysin menetetty ensisijaisesti GC verrattuna viereiseen normaaliin kudokseen, ja se korreloi hypermetylaatiota promoottorin RASSF1A geenin. Lisätyötä on otettava esiin sen tarkka toiminta ja vuorovaikutus muiden tekijöiden kehittää strategioita varhaiseen diagnosointiin, ehkäisyyn ja hoitoon mahasyövän.
Julistukset
Kiitokset
työtä tukivat avustus (No: 2004AA301C91 ) Hubein Science ja Technology Foundation Mei Ye ja keskinäisessä Research Center of Digestive Diseases Wuhan University Zhongnan sairaala. Kirjoittajat kiittää professori Tan Jinquan kriittisiä ehdotuksia ja henkilökunnan jäsenten Key laboratorio Allergia ja immuunijärjestelmään liittyviä sairauksia, Wuhan University School of Medicine tekniseen tukeen.
Kirjoittajien alkuperäinen toimitti asiakirjat kuville
Alta linkit kirjoittajien alkuperäiset toimitti asiakirjat kuville. 12885_2007_770_MOESM1_ESM.jpeg Kirjoittajien alkuperäinen tiedosto kuvio 1 12885_2007_770_MOESM2_ESM.jpeg Kirjoittajien alkuperäinen tiedosto kuvio 2 12885_2007_770_MOESM3_ESM.jpeg Kirjoittajien alkuperäinen tiedosto kuvio 3 Kilpailevat edut
tekijä (t) ilmoittaa, että heillä ei ole kilpailevia intressejä.

• Tymidiinifosforylaasi /β-tubuliinin III ilmaisuja ennustaa vastetta Kiinan edennyt mahasyöpä saavien potilaiden ensilinjan kapesitabiini plus paclitaxel
• Arvioiminen tietokoneen tuen arvioimiseksi vatsaoireita (ECASS): tutkimus protokolla satunnaistettu kontrolloitu trial