Inaktivacija Bacillus cereus stanica vegetativnog prema želučanoj kiselini i žuči tijekom in vitro gastrointestinalnim prolazom

Inaktivacija Bacillus cereus
vegetativnih stanica po želučanom kiselinom i žuči tijekom in vitro
gastrointestinalnim prolazom
apstraktne pregled pozadine
prenose hranom patogen Bacillus cereus pregled može uzrokovati proljeva trovanje hranom proizvodnjom enterotoksina u tankom crijevu. Preduvjet za proljeva bolesti je tako preživljavanje tijekom gastrointestinalnog prolaz.
Metode
vegetativnih stanica 3 različita B. cereus pregled Rodovi su uzgajani u matrici realnom kompozitni hrane, lazanje Verde, a njihovo preživljavanje tijekom naknadnog simulaciju gastrointestinalni prolaz je procijeniti pomoću in vitro
eksperimente simuliranja tranzit kroz ljudsko gornjeg gastrointestinalnog trakta (od usta do tankog crijeva). pregled Rezultati
uočeno Ne opstanak vegetativnih stanica, unatoč visokim razinama inokuluma od 7,0 do 8,0 log CFU /g i prisutnost različitih potencijalno zaštitnih sastojaka hrane. Značajne frakcije (cca. 10% od potrošenog za kalemljenje) od B. cereus pregled vegetativnih stanica preživjela želučani prolaz, ali su naknadno inaktivira izlaganja žuči u slabo kiseloj crijevnoj sredini (pH 5,0). Nasuprot tome, niski broj prisutnih spora (do 4.0 log spora /g) je pokazao izvrsno preživljavanje i ostali izvediv spore u gastrointestinalnom prolaz simulacije. Pregled Zaključak
vegetativnih stanica su inaktiviran s želučanom kiselinom i žuči tijekom gastrointestinalnog prolaza , a spore su otporne i preživjeti. Dakle, fiziološki oblik (vegetativne stanice ili spore) iz B. cereus pregled konzumira određuje naknadna gastrointestinalni opstanak, a time i infektivna doza, koji se očekuje da će biti puno niže za spore od vegetativnih stanica. Nema značajne razlike u probavnom sposobnost preživljavanja je pronađena među različitim sojevima. Međutim, znatan pritisak varijabilnost zabilježena je u sporulaciju sklonosti tijekom rasta u laboratorijskim mediju i hrane, koja ima važan utjecaj na gastrointestinalni potencijal preživljavanja od različitih B. cereus pregled sojeva. Pregled Ključne riječi
Bacillus cereus pregled Bile In vitro pregled simulacija Gastrointestinalni prolaz Pozadina pregled B. cereus pregled može uzrokovati povraćanje i dijarejom i trovanje hranom proizvodnjom odn. emetik (cereulide) i proljeva toksina (ne-hemolitički enterotoksin (NHE), hemolizin BL (Hbl), citotiksin K (CytK), itd) [1]. Za razliku od vrlo stabilan toksin cereulide, enterotoksini lako ragrađuje kiseline i probavnim enzimima (proteaza) i na taj način predoblikovani enterotoksini u hrani ne zadržavaju svoju toksičnost za gastrointestinalnog prolaza [2]. Stoga je preduvjet za proljeva trovanje hranom se enterotoksina proizvodnju B. cereus
u tankom crijevu, tako da je istražen gastrointestinalni preživljavanja vegetativnog B. cereus
. Prethodno je pokazano da je cca. 10% od vegetativnih stanica preživjela želučani prolaz [3]. Dalje, preživjele bakterije su suočeni sa žuči u lumenu dvanaesniku, proksimalni dio tankog crijeva.
Žuč se uglavnom sastoji od žučnih kiselina (oko 72% od ukupnih lipida), osim fosfolipida (cca. 24% ) i kolesterol (pribl. 4%) [4]. U ljudi, te žučne kiseline uglavnom se sastoje od holne kiseline (između 50% i 80%) i kenodeoksikolna kiselina (između 20% i 50%) [5, 6]. Sintetiziraju u jetri iz kolesterola i konjugirani na glicin (cca. 75%) i taurina (cca. 25%), s omjerom konjugacije ovisno o prehrani među ostalim faktorima [6, 7]. Izlučivanje žuči aktivira masti i kiseline otpuštanja iz želuca u duodenum, što rezultira od 7 do 15 mM žučnih soli u tankom crijevu nakon obroka, što odgovara 5 do 10 g /L Oxgall [7-10]. Deconjugation žučnih kiselina autohtonih crijevnih bakterija uglavnom odvija u distalnom ileumu, gdje je cca. 95% žučnih kiselina se apsorbira, od čega cca. 15% je nekonjugirani [7, 10]. Oba konjugirani i nekonjugirani žučnih kiselina apsorbira pasivnim difuzije duž cijele crijevima, ali taj proces je učinkovitiji za nekonjugiranih žučnih kiselina. Dodatno, specifični aktivni transportni sustavi su prisutni u distalnom ileumu, koji su učinkovitiji u dimnjak konjugiranih žučnih kiselina. Nakon apsorpcije iz crijeva, žučne kiseline transportiraju ga u jetru putem krvi, reconjugated i ponovno izlučuje u žučnog mjehura. Taj postupak recikliranja žučnih kiselina naziva enterohepatičku cirkulaciju.
Fiziološku ulogu žučnih kiselina je da se poveća topljivost prehrambene masti i olakšati njegovu degradaciju i apsorpciju. Zbog svojih svojstava deterdžent, žučne kiseline također mijenjaju stanične membrane, a time imaju citotoksični i baktericidna efekte, vidljive pojačanim fluidnost membrane i propusnosti [11-14]. Ovisno o koncentraciji žuč, poremećaj cjelovitosti stanične membrane javlja gotovo istovremeno, uzrokujući propuštanje i stanične smrti, ili sporije i suptilnije promjenom propusnosti membrane i fluidnost, aktivnost kritičnih proteina u staničnoj membrani i membrane hidrofobnosti [15 ]. Osim razaranja integriteta bakterijske stanične membrane, žučne i inducira oštećenje DNA, denaturacije i pogrešno smotavanje proteina, što dovodi do smrti bakterija [16].
Gram-pozitivne bakterije imaju tendenciju biti osjetljivije na žuči od gram negativnih bakterija, ali žuč tolerancije je vrlo naprezanje specifičan, tako generalizirane izjave za vrste nije moguć [17-19]. Unatoč baktericidnih učinke žuči, neki mikroorganizmi su razvile otpornost žuč indukcijom žuči enzime koji metaboliziraju i transportnih sustava ili mijenjanjem permeabiliteta membrane, fluidnost ili naboj. Neki želučanom uzročnici mogu čak i ovisi o žuči kao signal domaćin za regulaciju virulencije. Na primjer, Salmonella enterica serovar Typhimurium posjeduje AcrAB višestruko pumpom istjecanja za uklanjanje žučnih i transporta kroz vanjsku membranu [20]. Štoviše, invazija epitelnih stanica domaćinove ovom bakterijom je izazvana spuštenih koncentracija žučnih, pa nakon tranzita do distalnog ileuma ili u sluzi sloja [21].
Suradnju konzumacija hrane je važan čimbenik u antibakterijskim aktivnost žuči u crijevima. Bile inaktivacije bakterija je pod utjecajem prisutnosti sastojaka hrane, što može stvoriti zaštitne mikro okruženja ili vežu žučne. Na primjer, maksimalna koncentracija žučnih tolerirati B. cereus
tijekom rasta crijevne mediju bila je 3 g /L svinjski žuč kada je nadopunjen graška juhu, a samo 0.9 g /L i 0,6 g /L žuč bile podnošljive u prisutnosti mlijeka i nedostatku hrane, odnosno [22]. Također za Lactobacillus curvatus, prisutnost matrice hrane, to jest mesa povećava svoj žuči toleranciju i nakon toga njezina gastrointestinalnog preživljavanje [23]. Slično tome, žuč tolerancija Bifidobacterium breve je poboljšana sojinih proteina [24].
U ovoj studiji, gastrointestinalni opstanak vegetativnog B. cereus
stanica ispitano je i povezana s baktericidno ulozi žuči. B. cereus pregled inokuluma se uzgaja u kompozitnom matrice hrana lazanje Verde prije in vitro
simulacije u gastrointestinalnog prolaza uključiti sve potencijalne zaštitne učinke čestica hrane na gastrointestinalni opstanak B. cereus
.
Materijali i metode pregled B. cereus pregled sojeva, uzgoj i brojenje
B. cereus pregled sojeva ATCC 14579, NVH 1230-88 i FF 73 (Tablica 1) su uzgojene i nakon toga uzgojene u 10 ml Tryptone Soya Broth (TSB, Oxoid) 24 h na 30 ° C. Nakon centrifugiranja i resuspendiranjem u 1 ml otopine Fiziološka pepton Salt (PPS, 8.5 g /L NaCl (Fluka) i 1 g /L neutralizirana bakteriološkog pepton (oksoid)), 830 ul supkulture inokulirana u 83 g lazanja verde (kupljen u lokalni supermarket) u Stomacher vrećice i inkubirane 24 sata na 22 ° C. Trgovina na malo lazanje verde je kupljen u lokalnom supermarketu, koji je sadržavao u prosjeku za 4,7 log CFU /g ukupnih bakterija (standardna devijacija 1,3 log CFU /g, analiza od 11 različitih proizvoda u razdoblju od 6 mjeseci) i ≤ 2,0 log CFU /g B . cereus pregled. Prosječna pH vrijednost ovog prehrambenog proizvoda bila je 5,52 (± standardna devijacija 0,06) .table 1 Simulacija gastrointestinalnog prolaz provedena je s tri različita soja B. cereus: vrsta soja B. cereus ATCC 14579, klinička izolata B. cereus NVH 1230 -88 od proljeva trovanja hranom i hranom izolata B. cereus FF 73 od nadležnog matrice hrane, a to su lazanje Verde
B. cereus soja
Porijeklo
Mininal temperatura rasta ( ° C)
Hbl proizvodnja
HNE-produkcije
ATCC114579 pregled soj izvoznici > 10 pregled + pregled + pregled NVH2 1230 -88
klinički (ljudski izmet) pregled, 8 pregled +
- FF3 73 pregled hrane (lazanje verde)
10 pregled + pregled + pregled 1ATCC = American Type Culture Collection, SAD; 2NVH = Norveški škola Veterinarski znanosti, Oslo, Norveška; 3FF = Flanders 'Collection Food, Belgija.
Zbrajanje i B. cereus pregled računati određene su oplata odgovarajuće razrjeđenja u PPS na triptona soja agaru (TSA) i manitol Žumanjak jajeta-polimiksin B agaru (MYP .., odnosno koncentracije Spore su određena oplata nakon zagrijavanja na 80 ° C tijekom 10 min pregled In vitro pregled simulacija gastrointestinalnog prolaz
dinamičkog probavnog simulacijskog eksperimenta sastoji se od pet faza: 1) usta, 2) želudac, 3) u duodenumu, 4) dijalizu i 5) ileum [25]. Ukratko, lazanje verde sadrži B. cereus
inokuluma (83 g) pomiješa se s sline medijem (56 ml, pH 6,5, 37 ° C) do stomaching 1 min (Stomacher Lab miješalica 400, Seward) i inkubirane 10 minuta prije transfera u želucu plovila. Želučana pH je smanjen od 5,0 do 3,0 tijekom prvih 90 minuta, a do 2.0 u posljednjih 90 minuta, kontinuirano dodane kiseline (0,28 M HCl). Želučanog pražnjenja je pokrenut 30 min nakon početka želučane faze u 5 dijelova diskontinuiranom pumpanje na takav način da se cca. 25% od želučanog sadržaja je uklonjena nakon 1 sata 50% nakon 2 sata, 75% nakon 3 sata. Frakcijska pražnjenje želuca rezultirao 150 min preklapanja između želuca i dvanaesnika faze, u kojoj se B. cereus pregled inokuluma je podijeljen na subpopulacije koje su podvrgnute različitim vremenima inkubacije u fazi želuca (min. 30 min, max . 180 min) i dvanaesnika faza (min. 10 minuta, max. 160 min). Crijevna posuda se anaerobna (propuše s plinom dušikom) i sadržavala je crijevna medij s 10,0 g /l žuči (Oxgall, Difco) i pH pH se automatski podesi pH regulatora (FerMac 260 Electrolab) ostati na pH 5.0 tijekom prvi 45 min i pri pH 6.0 tijekom posljednjih 115 min. A kraj dvanaesterac faze, potpuni želučani sadržaj se prenosi i koncentracija žučnih smanjena je razrjeđenja u 5 g /L. U sljedećoj fazi, ≥ 90% od ovog žuči se ukloniti dijalizom i natjecanje s ljudskim crijevnih bakterija se simuliraju tijekom završnog ileuma fazi. Međutim, nakon odstranjivanja B. cereus pregled vegetativnih stanica, gastrointestinalni Eksperiment je prekinut, a rezultat je eksperimenta se sastoji od prva tri samo faze. Eksperimenti su provedeni u triplikatu s različitim B. cereus
inokuluma na različite dane. Pregled Bile tolerancija B. cereus pregled
B. cereus
soja NVH 1230-1288 kultiviran i nakon toga uzgojene u 10 ml TSB 24 h pri 30 ° C. Zatim 100 ul supkulture inokulirana u staklene epruvete koje sadrže 9,9 ml TSB i inkubira na 37 ° C. PH TSB je ili neutralne (pH = 7,2) i kisela (pH = 5,0) te uz dodatak različitih koncentracija žuč, što je rezultiralo u konačnim koncentracijama od 0,0 (TSB kontrola), 1,0, 5,0 i 10,0 g /L oxgall (Difco ). Opstanak vegetativnog B. cereus
stanica ispitana nanošenjem odgovarajućih diltutions u PPS na TSA. Pregled proizvodnje toksin pregled Proizvodnja enterotoksini NHE i Hbl određena je analizom uzoraka 1 mL nakon filtriranja (0,2 lm filtri šprica, Whatman) sa Duopath® cereus enterotoksini (Merck) u skladu s uputama proizvođača.

• Uporna niska ekspresija hZip1 u mucinozni karcinoma jajnika, debelog crijeva, želuca i lung
• Exsanguinating gornjeg GI krvarenja zbog neuobičajene arteriovenske malformacije (AVM) želuca i slezene: slučaj report