La inactivación de las células vegetativas de Bacillus cereus por el ácido gástrico y la bilis durante gastrointestinal in vitro transit

inactivación de Bacillus cereus
células vegetativas de ácido gástrico y la bilis in vitro durante
tránsito gastrointestinal
Resumen Antecedentes Francia El
transmitidas por los alimentos patógeno Bacillus cereus
puede causar intoxicación alimentaria diarreica por la producción de enterotoxinas en el intestino delgado. El requisito previo para la enfermedad diarreica es, pues, la supervivencia durante el paso gastrointestinal.
Métodos
células vegetativas de B. cereus 3 diferentes
cepas fueron cultivadas en una matriz compuesta de alimentos reales, lasaña verde, y su supervivencia durante la posterior simulación de pasaje gastrointestinal in vitro se evaluó mediante
experimentos que simulan en tránsito a través del tracto gastrointestinal superior humano (desde la boca hasta el intestino delgado).
: resultados de la No se observó la supervivencia de las células vegetativas, a pesar de los altos niveles de inóculo de 7,0 a 8,0 log CFU /g y la presencia de diversos componentes de los alimentos potencialmente protectores. fracciones significativas (aprox. 10% del inóculo consumida) de B. cereus
células vegetativas sobrevivieron pasaje gástrico, pero posteriormente fueron inactivados por exposición de bilis en el medio intestinal débilmente ácido (pH 5,0). Por el contrario, el bajo número de esporas presentes (hasta 4,0 log esporas /g) mostraron una excelente supervivencia y permanecieron esporas viables largo de la simulación paso gastrointestinal.
Conclusión
células vegetativas son inactivados por el ácido gástrico y la bilis durante el paso gastrointestinal , mientras que las esporas son resistentes y sobreviven. Por lo tanto, la forma fisiológica (células vegetativas o esporas) de la B. cereus
consume determina la supervivencia gastrointestinal posterior y por lo tanto la dosis infecciosa, que se espera que sea mucho más baja para las esporas que las células vegetativas. No hay diferencias significativas en la capacidad de supervivencia gastrointestinal se encontró entre las diferentes cepas. Sin embargo, se observó una considerable variabilidad de las cepas de tendencia esporulación durante el crecimiento en medio de laboratorio y alimentos, lo que tiene importantes implicaciones para el potencial de supervivencia gastrointestinal de las diferentes cepas de B. cereus
.
Palabras clave
Bacillus cereus
La bilis in vitro
simulación gastrointestinal pasaje Antecedentes
B. cereus
puede causar diarrea y emético y la intoxicación alimentaria por la producción de la resp. emético (cereulide) y toxinas diarreicas (enterotoxina no hemolítica (Nhe), hemolisina BL (HBL), citotoxina K (CYTK), etc.) [1]. En contraste con la toxina cereulide extremadamente estable, las enterotoxinas son fácilmente degradadas por las enzimas digestivas y ácidos (proteasas) y por lo tanto enterotoxinas preformadas en alimentos no conservan su toxicidad durante el paso gastrointestinal [2]. Por lo tanto, el requisito previo para la intoxicación alimentaria diarreicas se enterotoxina la producción de B. cereus
en el intestino delgado, por lo que se investigó la supervivencia vegetativa gastrointestinal de B. cereus
. Se demostró previamente que aprox. 10% de las células vegetativas sobrevivió pasaje gástrico [3]. A continuación, las bacterias supervivientes se enfrentan con bilis en el lumen del duodeno, la parte proximal del intestino delgado.
Bilis se compone principalmente de los ácidos biliares (aproximadamente 72% de los lípidos totales), además de los fosfolípidos (aprox. 24% ) y colesterol (aprox. 4%) [4]. En los humanos, estos ácidos biliares se componen principalmente de ácido cólico (entre 50% y 80%) y el ácido quenodesoxicólico (entre 20% y 50%) [5, 6]. Se sintetizan en el hígado a partir del colesterol y conjugado con glicina (aprox. 75%) o taurina (aprox. 25%), con relaciones de conjugación dependiendo de la dieta entre otros factores [6, 7]. La secreción de la bilis se desencadena por la grasa y la liberación de ácido desde el estómago hasta el duodeno, lo que resulta en 7 a 15 mM sales biliares en el intestino delgado después de una comida, lo que corresponde con 5-10 g oxgall /L [7-10]. Desconjugación de ácidos biliares por las bacterias intestinales indígenas se produce principalmente en el íleon distal, donde aprox. 95% de los ácidos biliares se reabsorbe, de los cuales aprox. 15% es no conjugado [7, 10]. Tanto los ácidos biliares conjugados y no conjugados son absorbidos por difusión pasiva a lo largo de todo el intestino, pero este proceso es más eficiente para los ácidos biliares no conjugados. Además, los sistemas de transporte activos específicos están presentes en el íleon distal, que son más eficientes en la absorción de los ácidos biliares conjugados. Después de la absorción desde el intestino, los ácidos biliares son transportados al hígado a través de la sangre, reconjugated y se secretan de nuevo en la vejiga biliar. Este proceso de reciclado de los ácidos biliares se llama la circulación enterohepática.
El papel fisiológico de los ácidos biliares es aumentar la solubilidad de la grasa dietética y facilitar su degradación y absorción. Debido a sus propiedades detergentes, ácidos biliares también alterar las membranas celulares y por lo tanto tienen efectos citotóxicos y bactericidas, notables por un aumento de la fluidez de la membrana y la permeabilidad [11-14]. Dependiendo de la concentración de bilis, la alteración de la integridad de la membrana celular se produce casi instantáneamente, provocando fugas y muerte celular, o más lenta y sutilmente mediante la alteración de la permeabilidad de la membrana y la fluidez, la actividad de proteínas críticas en la membrana celular y la hidrofobicidad de la membrana [15 ]. Además de la destrucción de la integridad de la membrana celular bacteriana, la bilis también induce daño en el ADN, la desnaturalización y el mal plegamiento de las proteínas, lo que lleva a la muerte de las bacterias [16].
Bacterias Gram-positivas tienden a ser más sensibles a la bilis de Gram- negativas, pero la tolerancia bilis es muy cepa específica, por lo que las afirmaciones generales para especies que no son posibles [17-19]. A pesar de los efectos bactericidas de la bilis, algunos microorganismos han desarrollado resistencia bilis por la inducción de enzimas que metabolizan la bilis y sistemas de transporte o mediante la alteración de la permeabilidad de membrana, la fluidez o la carga. Algunos patógenos entéricos pueden incluso depender de la bilis como una señal de acogida para la regulación de la virulencia. Por ejemplo, Salmonella enterica serovar Typhimurium posee la AcrAB bomba de eflujo multifármaco para la eliminación de la bilis y el transporte a través de la membrana externa [20]. Además, la invasión de las células epiteliales del huésped por esta bacteria es inducida por concentraciones biliares bajos, así que después de tránsito hacia el íleon distal o en la capa de moco [21]. Comentario El co-ingestión de alimentos es un factor importante en el antibacteriana la actividad de la bilis en el intestino. la inactivación de bacterias Bile está influenciada por la presencia de componentes de los alimentos, que puede crear micro-ambientes de protección o biliar se unen. Por ejemplo, la concentración máxima de bilis tolerado por B. cereus
durante el crecimiento en un medio intestinal era 3 g /L porcino bilis cuando se complementó sopa de guisantes, mientras que sólo 0,9 g /L y 0,6 g /L de bilis fueron tolerados en presencia de leche y la ausencia de alimento, respectivamente [22]. También para Lactobacillus curvatus, la presencia de una matriz alimentaria, es decir, la carne, el aumento de su tolerancia bilis y posteriormente su supervivencia gastrointestinal [23]. Del mismo modo, la tolerancia de la bilis de Bifidobacterium breve fue reforzada por las proteínas de soja [24].
En este estudio, la supervivencia gastrointestinal de vegetativo B. cereus
células se investigó y se vincula a la función bactericida de la bilis. El B. cereus
inóculo se cultivó en la lasaña verde matriz alimentaria compuesta antes de la
vitro de simulación en el del pasaje gastrointestinal para incluir los efectos de protección potenciales de las partículas de alimentos sobre la supervivencia gastrointestinal de B. cereus
.
Materiales y métodos
B. cereus
cepas, el cultivo y enumeración Francia El B. cereus ATCC 14579 cepas
, NVH 1230-1288 y FF 73 (Tabla 1) y se cultivaron posteriormente se subcultivaron en 10 ml de triptona caldo de soja (TSB, Oxoid) durante 24 h a 30 ° C. Después de la centrifugación y resuspensión en 1 ml de solución fisiológica de peptona Sal (PPS, 8,5 g /L NaCl (Fluka) y 1 g /L neutralizados peptona bacteriológica (Oxoid)), 830 l de la subcultivo se inoculó en 83 g lasaña verde (comprado en el supermercado local) en bolsas Stomacher y se incubó durante 24 horas a 22 ° C. Al por menor lasaña verde fue comprado en el supermercado local, que contenía un promedio de registro de 4,7 UFC /g de bacterias totales (desviación estándar de 1,3 log ufc /g, el análisis de 11 productos diferentes durante un período de 6 meses) y ≤ registro de 2,0 UFC /g B . cereus
. El pH promedio de este producto alimenticio fue 5,52 (desviación estándar ± 0,06) .Tabla 1 La simulación del pasaje gastrointestinal se realizó con tres cepas de B. cereus diferentes: el tipo de cepa de B. cereus ATCC 14579, el clínico aislado de B. cereus NVH 1230 -88 de un brote de intoxicación alimentaria diarreicas y el aislado de alimentos B. cereus FF 73 de la matriz alimentaria pertinente, a saber lasaña verde
cepa de B. cereus
origen
mininal temperatura de crecimiento ( ° C) guía empresas Hbl producción
producción Nhe
ATCC114579
tipo de cepa Hotel > 10
+ +

NVH2 1230 -88
clínicos (heces humanas) guía 8
+ -
FF3 73 buena comida (lasaña verde)
10
+ +

1ATCC = American Type Culture Collection, EE.UU.; 2NVH = Escuela Noruega de Ciencias Veterinarias, Oslo, Noruega; 3FF = Flandes 'Food Collection, Bélgica. Francia El recuento total y B. cereus
recuento se determinó mediante siembra de las diluciones apropiadas en PPS en triptona soja agar (TSA) y agar manitol-yema de huevo-polimixina B (PAI .., respectivamente las concentraciones de esporas se determinaron en placas después de calentar a 80 ° C durante 10 min
In vitro
simulación de pasaje gastrointestinal Francia el experimento de simulación dinámica gastrointestinal constaba de cinco fases: 1) la boca, 2) el estómago, 3) el duodeno, 4) de diálisis y 5) el íleon [25]. En pocas palabras, la lasaña verde que contiene el B. cereus
inóculo (83 g) se mezcló con medio de saliva (56 ml, pH 6,5, 37 ° C) por stomaching de 1 min (Stomacher Lab Blender 400, Seward) y se incubaron durante 10 min antes de la transferencia al recipiente de estómago. El pH gástrico se redujo desde 5,0 hasta 3,0 durante la primera 90 min y a 2,0 durante el último 90 min por el ácido añadido de forma continua (M HCl 0,28). El vaciado gástrico se inició 30 minutos después del inicio de la fase gástrica en 5 fracciones por bombeo discontinuo de tal manera que aprox. Se eliminó 25% del contenido gástrico después de 1 h, 50% después de 2 h y 75% después de 3 h. El vaciado gástrico fraccionada dio lugar a un solapamiento de 150 min entre el estómago y el duodeno fase, en la que el B. cereus
inóculo se divide en subpoblaciones que se sometieron a varios diferentes tiempos de incubación en la fase de estómago (min. 30 min, max . 180 min) y la fase duodeno (min. 10 min, máx. 160 min). El recipiente intestinal era anaeróbico (purgado con gas nitrógeno) y contenía medio intestinal con 10,0 g /l de bilis (oxgall, Difco) y el pH pH se ajustó automáticamente por un controlador de pH (FERMAC 260, Electrolab) permanecer a pH 5,0 durante la primero 45 min y a pH 6,0 durante la última 115 min. Y el final de la fase de duodeno, el contenido gástrico completos se transfirieron y la concentración de la bilis se redujo por dilución a 5 g /L. Durante la siguiente fase, ≥ 90% de este bilis se elimina por diálisis y la competencia con las bacterias intestinales humanas fue simulado durante la fase de íleon final. Sin embargo, después de la eliminación de la B. cereus
células vegetativas, el experimento se detuvo gastrointestinal, lo que resulta en los experimentos que consisten en los primeros tres únicas fases. Los experimentos se realizaron por triplicado con diferentes B. cereus
inóculos en diferentes días.
Tolerancia bilis de B. cereus
B. cereus cepa
NVH 1230-1288 fue cultivada y, posteriormente, se subcultivan en 10 ml de TSB durante 24 horas a 30 ° C. A continuación, 100 l de subcultivo se inocularon en tubos de vidrio que contienen 9,9 ml de TSB y se incubaron a 37 ° C. El pH de la TSB era o neutro (pH = 7,2) o ácido (pH = 5,0) y se suplementó con diferentes concentraciones biliares, lo que resulta en las concentraciones finales de 0,0 (control TSB), 1,0, 5,0 y 10,0 g /L oxgall (Difco ). La supervivencia de B. cereus vegetativo
células se evaluó mediante siembra de las diltutions apropiados en PPS de TSA. Se determinó la producción de toxinas
La producción de enterotoxinas y Nhe Hbl mediante el análisis de muestras de 1 ml después de la filtración (0,2 filtros de jeringa micras, Whatman) con las enterotoxinas cereus Duopath® (Merck) de acuerdo con las instrucciones del fabricante.
resultados
crecimiento de B. cereus Hoteles en lasaña verde Francia El lasaña verde se inoculó con aprox . 6,0 CFU /g B. cereus
y se incubaron durante 24 horas a 22 ° C para obtener un inóculo vegetativo altamente concentrada de B. cereus
células cultivadas en una matriz alimentaria compuesto con microbiota alimentos mediante la simulación de almacenamiento de lasaña contaminado en temperatura ambiente. Esto dio lugar a lasaña verde que contiene aprox. 8,5 log de bacterias totales CFU /g, de los cuales B. cereus
constituida 7,0 a 8,0 CFU /g, dependiendo de la cepa (Tabla 2). B. cereus
NVH 1230-1288 mostró una concentración de esporas esporas estable de 3,5 log /g, procedente del inóculo TSB. Por el contrario, la esporulación adicional fue evidente a partir de aprox. 4.0 esporas de registro /g a 4,5 log esporas /g después de 30 h de B. cereus
FF 73. Sorprendentemente, B. cereus ATCC 14579
no produjo ningún esporas después de 30 h de incubación, con sólo un número muy bajo ( 3.0 esporas /g) observada en sólo 1 de las bolsas de 3 replicados. Después de la inoculación e incubación, la lasaña verde fue por lo tanto altamente contaminado con B. cereus
células vegetativas (7,0 a 8,0 log UFC /g) en la fase de crecimiento estacionario y bajas cantidades de B. cereus
esporas (hasta 4,0 log esporas /g) .Tabla 2 Crecimiento de los tres diferentes cepas de B. cereus en la matriz del alimento antes de la simulación de pasaje gastrointestinal; valores medios de experimentos independientes por triplicado, expresados ​​en log CFU /g ± desviación estándar se presentan
cepa de B. cereus
Tiempo (h)
0

22
24
26
28
30
B. cereus
ATCC14579
recuento total
5,8 ± 0,1 8,3 ± 0,6

8,4 ± 0,3 8,8 ± 0,2

8,8 ± 0,3 8,9 ± 0,2

total B. cereus
5,7 ± 0,1 6,9 ± 0,1

6,9 ± 0,1 6,7 ± 0,3

7,2 ± 0,3 7,0 ± 0,2

B. cereus esporas
Hotel < 2.0 ± 0.0 Hotel < 2.0 ± 0.0 Hotel < 2.0 ± 0.0 Hotel < 2.0 ± 0.0 Hotel < 2.0 ± 0.0 2.3 ± 0.6

B. cereus
NVH 1230-1288
recuento total
5,9 ± 0,1 8,2 ± 0,2

8,4 ± 0,1 8,9 ± 0,0

8,9 ± 0,1 8,8 ± 0,2

total B. cereus
6,2 ± 0,3 7,9 ± 0,2

8,2 ± 0,1 8,5 ± 0,2

8,3 ± 0,3 7,9 ± 0,1

B. cereus esporas

3,5 ± 0,6 3,5 ± 0,2

3,3 ± 0,6 3,4 ± 0,6

3,3 ± 0,6 3,4 ± 0,6

B. cereus
FF 73
recuento total
5,7 ± 0,1 8,5 ± 0,1

8,7 ± 0,1 9,0 ± 0,0

9,0 ± 0,3 8,9 ± 0,3

total de B. cereus
5,7 ± 0,1 8,1 ± 0,2

8,0 ± 0,1 8,3 ± 0,1

8,2 ± 0,1 8,3 ± 0,2

B. cereus esporas

3,8 ± 0,2 3,9 ± 0,4

3,9 ± 0,4 4,0 ± 0,5

4,0 ± 0,3 4,5 ± 0,1

No se detectó la producción de enterotoxinas en lasaña verde después de 24 h de B. cereus ATCC 14579
y B. cereus
NVH 1230-1288, mientras que Nhe se detectó en forma esporádica (1 de cada 3 repeticiones) en el caso de B. cereus
FF 73. Esto fue probablemente debido al pH ácido 5,5 de lasaña verde y la temperatura más bien baja de incubación de 22 ° C, que no son óptimas para la producción de enterotoxina [1]. Sin embargo, enterotoxinas preformadas en los alimentos no son responsables de la intoxicación alimentaria diarreicas, ya que se degradan rápidamente durante el paso gastrointestinal [2].
In vitro
simulación del pasaje gastrointestinal de B. cereus
células vegetativas
la lasaña verde contaminado con 7,0 a 8,0 log ufc /ml B. cereus
células vegetativas en la fase de crecimiento estacionario fue sometido a la simulación in vitro Red de pasaje gastrointestinal (Figura 1). Se observó durante la fase de la boca y la primera 30 min de la fase de estómago cuando el pH gástrico fue entre 5,0 y 4,0; supervivencia de B. cereus
(1 log de reducción <). A partir de entonces, cuando el pH gástrico disminuyó por debajo de 4,0, las células vegetativas se inactivan rápidamente en la fase de estómago, perceptible como una rápida disminución del total B. cereus
recuentos de valores similares de la B. cereus
recuentos de esporas en los vasos gástricos. El B. cereus
recuentos totales y de las esporas durante la fase de duodeno se mantuvo aprox. 1.0 log UFC /ml para B. cereus ATCC 14579
, aprox. 2,5 log ufc /ml para B. cereus
NVH y 1230-1288 aprox. 3,5 log ufc /ml para B. cereus
FF 73. Curiosamente, los recuentos de esporas de B. cereus
NVH 1230-1288 disminuyeron durante la fase de estómago durante la última hora y pH más ácido. Dado que el total de B. cereus
recuento no ha cambiado, lo que indica el inicio de la germinación de las esporas. B. cereus ATCC 14579
mostró la producción de esporas inconsistente, dando como resultado la ausencia de esporas durante los primeros dos simulaciones y un número muy bajo (ligeramente por encima del límite de detección de 1,0 esporas /ml) durante los dos últimos experimentos. Figura 1 La inactivación de células vegetativas durante la dinámica en la simulación in vitro de pasaje gastrointestinal con B. cereus ATCC 14579 (1), B. cereus NVH
1230-1288 (2) y B. cereus
FF 73 (3); el B. cereus
(a) y (b) de esporas se determinaron los recuentos de placas en PAI sin y con tratamiento térmico (10 min a 80 ° C), respectivamente, en la lasaña verde (□), la fase total de la boca (◊), la fase estómago (Δ) y la fase duodeno (○); Se presentan los valores medios y desviación estándar de tres experimentos en diferentes días.
No hay pruebas de detección de enterotoxinas y Nhe Hbl se llevaron a cabo, ya que no se observó crecimiento durante cualquiera de las fases gastrointestinales, lo cual es un requisito previo para la producción de enterotoxina [1 ].
tolerancia bilis de B. cereus
el crecimiento y la supervivencia de B. cereus
NVH 1230-1288 se determinó en presencia de concentraciones variables biliares (Figura 2). En condiciones óptimas, es decir TSB neutral con pH 7,2, el efecto de la bilis era dependiente de la concentración. La menor concentración de 1,0 g /L oxgall resultó en una reducción de la población de aprox. 30% en comparación con el control (TSB sin bilis) en el tiempo 0 h. Por otra parte, después de 1 h el recuento de viables se redujo con aprox. 40% en comparación con la concentración en TSB con 1,0 g /L oxgall a 0 h. Sin embargo, después de la recuperación 2 h y el crecimiento de las células restantes se observó, debido a que el B. cereus
concentración fue similar a la de 0 h, y finalmente después de 3 h, la población había aumentado de aprox. 1 log en comparación con los que a las 0 h. Sin embargo, la presencia de 5,0 g /L oxgall induce una disminución permanente de 4,1 log CFU /ml en promedio (la inactivación de 88% de las células vegetativas) y la de 10,0 g /L oxgall a 3,9 log UFC /mL (la inactivación de 94 %). Figura 2 La supervivencia de B. cereus NVH 1230 a 1288 en caldo de soja triptona (TSB) a 37 ° C con pH 7,2 (A) y pH 5,0 (B) con diferentes biliares (oxgall, Difco) concentraciones: 0,0 g /L (blanco ), 1,0 g /L (gris claro), 5,0 g /L (gris oscuro) y 10,0 g /L (negro). En
TSB a pH ácido 5,0, aprox. 99% de la B. cereus
inóculo se instante inactivada por la exposición bilis, independientemente de la concentración de la bilis, lo que resulta en total constante B. cereus
cargos de aprox. 3.0 log UFC /ml. El B. cereus
inóculo que contiene entre 0,1 y 0,2% esporas, de modo constante la cantidad de esporas se obtuvieron durante todo el experimento: 2,6 (± 0,2) log esporas /ml al inicio y 2,5 (± 0,3) log esporas /ml en el fin. Tomando esta población de esporas en cuenta, las células vegetativas todavía constituían la mayoría (aprox. 60%) del 1% de bilis resistente B. cereus
.
Discusión
La supervivencia de las células vegetativas durante el paso gástrico fue similar a la de estudios previos con medio de puré de patata [3]. Durante los experimentos, aprox. 10% de las células vegetativas sobrevivió pasaje gástrico, la mayoría de ellos en la primera fracción gástrico cuando el pH gástrico fue entre 5,0 y 4,0. Estas células se transfirieron con vida en el recipiente intestinal y por lo tanto entre 5,5 y 6,5 log CFU /ml B. cereus
se esperaba en el recipiente intestinal. Sin embargo, los recuentos mucho más bajos, que se aproximó a la B. cereus
recuentos de esporas, se obtuvieron durante la fase de duodeno. Esto indica que las células vegetativas que sobrevivieron pasaje gástrico fueron inactivadas en el ambiente intestinal. experimentos de incubación por lotes en TSB y concentraciones variables de bilis mostraron que la mayoría (99,1%) de las células vegetativas se inactivó inmediatamente después de la exposición de bilis a pH 5,0, independientemente de la concentración de bilis en el intervalo de 1,0 a 10,0 g oxgall /L. En conclusión, vegetativo B. cereus
células que sobreviven paso por el estómago se elimina durante la fase posterior del duodeno por el efecto bactericida de la bilis. Francia El efecto bactericida de la bilis en vegetativo B. cereus
células era dependiente del pH. A pH 7,0, la inactivación se correlacionó con la concentración de la bilis, y la concentración de la bilis más baja (1 g /L) incluso permitió la supervivencia y el crecimiento. Por el contrario, a un pH de 5,0, la inactivación instantánea de la mayoría (> 99%) se produjeron de células vegetativas, independiente de la concentración de bilis (en el rango de 1,0 a 10,0 g /L). Similar a nuestros resultados, la inactivación de Listeria monocytogenes por ácidos biliares también fue fuertemente aumentó a pH ácido 5,5 [26]. La inactivación de las bacterias mediante la bilis es similar a la de ácidos orgánicos, que son a la vez particularmente efectivo a pH bajo. La constante de disociación ácido logarítmica (pKa) de los ácidos biliares no conjugados es de aproximadamente 5,1, pero la conjugación con glicina reduce el pKa aprox. 3,7 [27]. Conjugación con taurina conduce a un pKa aún más baja de aprox. 1,5 [28]. Como consecuencia, la mayoría de los ácidos biliares conjugados se disocia y ionizado en la mayoría de los valores de pH fisiológicos e intestinales, es decir, 95,24% a pH 5,0 y 99,95% a pH 7,0 para los ácidos biliares glicoconjugados. Sólo las formas no ionizadas del ácidos biliares pueden atravesar de forma pasiva la membrana celular, mientras que los ácidos biliares conjugados disociados y ionizados requieren sistemas de transporte activos específicos [29]. Como resultado, 4,67% de los ácidos biliares conjugados puede entrar en el B. cereus
células a pH 5,0, en contraste con sólo 0,03% a pH 7,0. Por otra parte, el pH interno de las células B. cereus viable
siempre se encuentra entre 6,0 y 7,5, dependiendo del pH y condiciones de cultivo externos [30]. Después de que los ácidos biliares no disociadas se han difundido en las células de B. cereus
, la mayoría de ellos (99,50 a 99,98%) se somete a disociación intracelular, dando como resultado la acidificación interna letal.
Se informó de que ciertos componentes de los alimentos aumentaron la bilis tolerancia de B. cereus
células vegetativas en un medio intestinal con pH 6.5 [22]. Sin embargo, el material compuesto de matriz de alimentos lasaña verde no mitigar los efectos perjudiciales de la bilis en B. cereus
durante nuestros experimentos a pH 5,0. Es posible que los efectos de tipo alimentos sólo se observan a un pH más óptimo para este patógeno transmitidas por los alimentos, cuando se espera que las diferencias más pronunciadas entre los tratamientos.
En contraste con las células vegetativas, B. cereus
esporas no se inactiva por la bilis , a pesar de que no germinaron en el medio intestinal que contiene de 5 a 10 g /L oxgall. Esto coincide con las observaciones de la simulación dinámica del pasaje gastrointestinal de esporas [25], donde las esporas no se vieron afectados durante la boca, el estómago y la fase duodeno y sólo comenzó la germinación durante la diálisis, cuando la concentración de bilis se redujo de 5,0 g /L oxgall a < 0,5 g /L y las de los experimentos por lotes de incubación [31], donde las esporas germinaron dentro de 2 h en un medio de simulación intestinal que contiene 1,0 g /L bilis. Otros estudios también informaron de que las esporas fueron capaces de germinar y multiplicarse en fluido intestinal simulado que contiene bilis (1,5 g oxgall /L) [32] y que la resistencia de bilis de B. cereus
esporas fue superior a la de las células vegetativas [33 ]. En conclusión, las concentraciones de alta biliares (≥ 5 g /L oxgall) no permiten la germinación de esporas, mientras que las concentraciones de bajo biliares (< 5 g /L). Inducen la germinación y el crecimiento
Además de su importancia en la digestión y absorción de nutrientes, la bilis es también un compuesto antimicrobiano importante en el intestino [7]. niveles bajos biliares intestinales anormales pueden ocurrir en personas con anomalías biliares o hepáticos o con deficiencias en la circulación enterohepática, que pueden hacer que las personas especialmente susceptibles a la diarrea, debido a una mayor supervivencia de las bacterias ingeridas e intestinales. Por otra parte, los ácidos biliares son laxantes endógenos, por lo que la mala absorción de los ácidos biliares desde el intestino delgado, que conduce a aumentar los niveles de bilis en el intestino delgado terminal y el colon, también puede resultar en diarrea [34].
Conclusión
B. cereus
células vegetativas fueron incapaces de sobrevivir al paso gastrointestinal como simulado por el vitro
experimento en, a pesar de la concentración de inóculo alta de 7,0 a 8,0 log UFC /ml y el cultivo del inóculo en el material compuesto de matriz de alimentos lasaña verde. La mayoría de las células vegetativas se inactivó por el ácido gástrico, y las células supervivientes fueron posteriormente inactivada por la bilis durante la fase de duodeno. Por el contrario, las esporas de B. cereus
sobrevivieron a la simulación del pasaje gastrointestinal y se mantuvieron esporas en condiciones desfavorables para la germinación (y el crecimiento). Por lo tanto, la dosis infecciosa para B. cereus
probablemente varía de acuerdo a la forma fisiológica consumida, siendo menor para las esporas altamente resistentes. Aunque la supervivencia gastrointestinal fue similar para las diferentes cepas, su tendencia esporulación variado considerablemente, lo que a su vez tiene implicaciones importantes para la supervivencia gastrointestinal potencial y por lo tanto la dosis infecciosa de las diferentes cepas de B. cereus
.
Declaraciones
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Nosotros, los autores, declaramos que no tenemos intereses en competencia.
contribuciones de los autores SC, MU y TVdW los experimentos diseñados; SC y SH llevan a cabo el trabajo experimental y se procesan los resultados; SC escribió el manuscrito con la ayuda de MU, NB y TVdW. Todos los autores leído y aprobado el manuscrito final.

• Persistente baja expresión de hZIP1 en los carcinomas mucinosos de ovario, colon, estómago y pulmón
• Exsanguinante GI superior sangra debido a la inusual malformación arteriovenosa (AVM) del estómago y el bazo de un caso