Inaktivering av Bacillus cereus vegetative celler ved magesyre og galle i løpet av in vitro gastrointestinal transit

inaktivering av Bacillus cereus
vegetative celler ved magesyre og galle i løpet av in vitro
gastrointestinal transitt
Abstract
Bakgrunn
matbåren patogen Bacillus cereus
kan forårsake diaré matforgiftning ved produksjon av enterotoksiner i tynntarmen. Forutsetningen for diarésykdom er dermed overlevelse under gastrointestinal passasje.
Metoder
vegetative celler av tre forskjellige B. cereus
stammer ble dyrket i en ekte sammensatt mat matrise, lasagne verde, og deres overlevelse under påfølgende simulering av gastrointestinal passasje ble vurdert ved hjelp av in vitro-eksperimenter som simulerer
transitt gjennom den humane øvre mage-tarmkanalen (fra munn til tynntarmen).
Resultater
Ingen overlevelse av vegetative celler ble observert, til tross for høye nivåer av podestoff 7,0 til 8,0 log CFU /g og tilstedeværelsen av forskjellige potensielt beskyttende matvarekomponenter. Betydelige fraksjonene (ca. 10% av den forbrukte inokulum) av B. cereus
vegetative celler overlevde gastrisk passasje, men de ble deretter inaktivert ved galle eksponering i svakt surt intestinal-medium (pH 5,0). I kontrast til lavt antall sporer tilstede (opp til 4,0 log sporer /g) viste god overlevelse og forble levedyktige sporer gjennom hele mage-passasje simuleringen.
Konklusjon
Vegetative celler aktiveres av magesyre og galle i løpet av gastrointestinal passasje , mens sporene er motstandsdyktig og overleve. Derfor er den fysiologiske form (vegetative celler eller sporer) av B. cereus
forbrukes bestemmer den påfølgende gastrointestinal overlevelse og dermed infeksiøs dose, som er forventet å være mye lavere enn for sporer vegetative celler. Ingen signifikante forskjeller i gastrointestinal overlevelse evne ble funnet blant de ulike stammene. Men betydelig belastning variasjon ble sett i sporulation tendens under vekst i laboratoriet medium og mat, som har viktige implikasjoner for gastrointestinal overlevelse potensialet i de forskjellige B. cereus
stammer.
Nøkkelord
Bacillus cereus
Bile In vitro
simulering Gastrointestinal passasje Bakgrunn
B. cereus
kan føre brekkmiddel og diaré og matforgiftning ved produksjon av hhv. brekkmiddel (cereulide) og diarrheal toksiner (ikke-hemolytisk enterotoksin (Nhe), haemolysin BL (Hbl), cytotoksin K (CytK), etc.) [1]. I motsetning til den ekstremt stabil toksin cereulide blir enterotoksiner lett degradert av syre og fordøyelsesenzymer (proteaser) og således preformete enterotoksiner i næringsmidler ikke beholder sin toksisitet i løpet av gastrointestinal passasje [2]. Derfor er en forutsetning for diarrheal matforgiftning enterotoksin produksjonen av B. cereus
i tynntarmen, slik at det gastrointestinale overlevelsen av vegetative B. cereus
ble undersøkt. Det ble tidligere vist at ca.. 10% av de vegetative celler overlevde gastrisk passasje [3]. Deretter blir de overlevende bakterier overfor galle i hulrommet i tolvfingertarmen, den proksimale delen av tynntarmen.
Bile består hovedsakelig av gallesyrer (ca. 72% av de totale lipider), i tillegg til fosfolipider (ca. 24% ) og kolesterol (ca. 4%) [4]. Hos mennesker er disse gallesyrer består i hovedsak av cholsyre (mellom 50% og 80%) og Chenodeoxycholic syre (mellom 20% og 50%) [5, 6]. De blir syntetisert i leveren fra kolesterol og konjugert til glycin (ca. 75%) eller taurin (ca. 25%), med konjugering forhold avhengig av diett blant andre faktorer [6, 7]. Utskillelsen av galle utløses av fett og syre frigjøring fra magesekken inn i tolvfingertarmen, noe som resulterer i 7 til 15 mM gallesalter i tynntarmen etter et måltid, som tilsvarer 5 til 10 g galle, /L [7-10]. Dekonjugering av gallesyrer av urfolk tarmbakterier forekommer hovedsakelig i distale ileum, hvor ca. 95% av gallesyrer reabsorberes, hvorav ca. 15% er ikke-konjugert [7, 10]. Både konjugerte og ukonjugerte gallesyrer absorberes ved passiv diffusjon langs hele tarmen, men denne prosessen er mer effektiv for ikke-konjugerte gallesyrer. I tillegg er spesifikke aktive transportsystemer er tilstede i den distale ileum, som er mer effektiv i opptaket av konjugerte gallesyrer. Etter absorpsjon fra tarmen, blir gallesyrer transporteres til leveren via blodet, reconjugated og utskilles igjen i gallen blæren. Denne resirkuleringsprosessen av gallesyrer kalles enterohepatisk sirkulasjon.
Fysiologiske rollen til gallesyrer, er å øke løseligheten av fett og lette dens nedbrytning og absorpsjon. På grunn av deres rensende egenskaper, gallesyrer også forandre cellemembraner og således har cytotoksiske og baktericide effekter, merkbare ved en økt membranfluiditet og -permeabilitet [11-14]. Avhengig av galle konsentrasjon, forstyrrelser i cellemembranintegritet inntreffer nesten øyeblikkelig, forårsaker celle lekkasje og død, eller mer langsomt og diskret ved å endre membranens permeabilitet og det flytende, aktiviteten av kritiske proteiner i cellemembranen og membranen hydrofobisitet [15 ]. I tillegg til ødeleggelse av bakteriecellemembranintegritet, galle induserer også DNA-skade, denaturering og uriktig folding av proteiner, noe som fører til død av bakterier [16].
Gram-positive bakterier har en tendens til å være mer følsomme overfor galle enn Gram negative bakterier, men galle toleranse er veldig belastning bestemt, så generaliserte uttalelser for artene er ikke mulig [17-19]. Til tross for de bakteriedrepende effekten av galle, har noen mikroorganismer utviklet galle motstand ved induksjon av galle enzymer og transportsystemer eller ved å endre membran permeabilitet, flyt eller kostnad. Noen enteriske patogener kan også avhenge av galle som vert signal for virulens regulering. For eksempel, besitter Salmonella ente serovar Typhimurium for multi efflukspumpen AcrAB for galle fjerning og transport gjennom den ytre membranen [20]. Videre er invasjon av vertens epitelceller av denne bakterien induseres ved senket gallekonsentrasjoner, så etter transitt til den distale ileum eller inn i slimlaget [21].
Samtidig inntak av mat er en viktig faktor i den antibakterielle aktivitet av galle i tarmen. Bile inaktivering av bakterier er påvirket av tilstedeværelsen av mat komponenter, noe som kan skape beskyttende mikro miljøer eller bind galle. For eksempel, den maksimale gallekonsentrasjon tolerert av B. cereus
under vekst i tarmmediet var 3 g /l porcine galle når ertesuppe ble supplert, mens bare 0,9 g /l og 0,6 g /l galle ble tolerert i nærvær av melk og fravær av mat, henholdsvis [22]. Også for Lactobacillus curvatus, tilstedeværelsen av en mat matrise, nemlig kjøtt, økte sin galle toleranse og senere dets overlevelse gastrointestinal [23]. På lignende måte ble gallen toleranse av Bifidobacterium breve forsterkes av soyaproteiner [24].
I denne studien ble den gastrointestinale overlevelsen av vegetative B. cereus
celler undersøkt og knyttet til den baktericide rolle av galle. Den B. cereus
podestoff ble dyrket i kompositt mat matrise lasagne verde før in vitro
simulering av mage-passasjen for å inkludere eventuelle beskyttende effekten av matrester på gastrointestinal overlevelse av B. cereus
.
Materiale og metode
B. cereus
stammer, dyrking og telling
B. cereus
stammer ATCC 14579, NVH 1230-1288 og FF 73 (tabell 1) ble dyrket og deretter subdyrket i 10 ml Trypton Soya Broth (TSB, Oxoid) i 24 timer ved 30 ° C. Etter sentrifugering og resuspensjon i 1 ml fysiologisk Peptone saltløsning (PPS, 8,5 g /l NaCl (Fluka) og 1 g /l nøytralisert bakteriologisk pepton (Oxoid)), ble 830 ul av subkulturen inokulert på 83 g lasagne Verde (kjøpt i lokalt supermarked) i stomacher poser og inkubert i 24 timer ved 22 ° C. Retail lasagne verde ble kjøpt i det lokale supermarkedet, som inneholdt i gjennomsnitt 4,7 log CFU /g totalt bakterier (standardavvik på 1,3 log CFU /g, analyse av 11 forskjellige produkter i løpet av en seks måneders periode) og ≤ 2,0 log CFU /g B . cereus
. Den gjennomsnittlige pH i denne matvaren var 5,52 (standardavvik ± 0,06) .table 1 Simulering av gastrointestinal passasje ble utført med tre forskjellige B. cereus stammer: den type belastning B. cereus ATCC 14579, klinisk isolat B. cereus NVH 1230 -88 fra en diaré matforgiftning utbrudd og maten isolat B. cereus FF 73 fra den aktuelle maten matrise, nemlig lasagne verde
B. cereus stamme
Origin
mininal veksttemperatur ( ° C)
Hbl produksjon
Nhe produksjon
ATCC114579
type stamme
> 10
+
+
NVH2 1230 -88
kliniske (human faeces)
8
+ -
FF3 73
mat (lasagne verde)
10
+
+
1ATCC = American Type Culture Collection, USA; 2NVH = norske veterinærhøgskole, Oslo, Norge; 3FF = Flanders 'Food Collection, Belgia.
Totalt teller og B. cereus
tellingen ble bestemt av plating de riktige fortynninger i PPS på Tryptone Soya Agar (TSA) og Mannitol-Eggeplomme-Polymyxin B agar (MYP .., henholdsvis Spore-konsentrasjoner ble bestemt ved utsåing etter oppvarming ved 80 ° C i 10 min
In vitro
simulering av gastrointestinal passasje
dynamisk simulering gastrointestinal eksperiment besto av fem faser: 1) munnen, 2) magen, 3) i tolvfingertarmen, 4) dialyse og 5) ileum [25]. I korte trekk ble lasagne Verde inneholdende B. cereus
podestoff (83 g) blandes med spytt medium (56 ml, pH 6,5, 37 ° C) ved stomaching i 1 min (stomacher Lab Blender 400, Seward) og inkuberes i 10 minutter før overføring til magen fartøyet. Den gastriske pH-verdien ble redusert 5,0 til 3,0 i løpet av de første 90 min, og til 2,0 i løpet av de siste 90 min med kontinuerlig tilsatt syre (0,28 M HCl). Gastrisk tømming ble igangsatt 30 minutter etter starten av den gastriske fase i 5 fraksjoner ved diskontinuerlig pumping på en slik måte at ca. 25% av det gastriske innhold ble fjernet etter 1 time, 50% etter 2 timer og 75% etter 3 timer. Den fraksjon gastrisk tømming som resulterte i en 150 min overlapping mellom magesekken og tolvfingertarmen fase, i hvilken B. cereus
inokulum ble delt i subpopulasjoner som ble utsatt for forskjellige inkubasjonstider i magen fase (min. 30 min, maks . 180 min) og tolvfingertarm fase (min. 10 min, maks. 160 min). Tarm Fartøyet var anaerob (spylt med nitrogengass) og inneholdt tarm medium med 10,0 g /l galle (galle,, Difco) og pH pH ble justert automatisk ved en pH-regulator (FERMAC 260, Electrolab) for å forbli ved pH 5,0 i løpet av første 45 minutter og ved pH 6,0 i løpet av de siste 115 min. Og enden av tolvfingertarmen fase, den fullstendige mageinnholdet ble overført og galle-konsentrasjonen ble senket ved fortynning til 5 g /l. I neste fase, ble ≥ 90% av dette galle fjernet ved dialyse og konkurranse med menneskelige tarmbakterier ble simulert under slutt ileum fase. Imidlertid, etter eliminering av B. cereus
vegetative celler, ble det gastrointestinale forsøket stoppet, noe som resulterer i eksperimenter som består av de første tre fasene bare. Forsøkene ble utført i tre eksemplarer med forskjellig B. cereus
inocula på ulike dager.
Bile toleranse av B. cereus
B. cereus
belastning NVH 1230-1288 ble dyrket og deretter subkultiveres i 10 ml TSB i 24 timer ved 30 ° C. Deretter ble 100 ul av subkulturen ble inokulert i glassrør inneholdende 9,9 ml TSB og inkubert ved 37 ° C. PH-verdien i TSB var enten nøytral (pH = 7,2) eller sure (pH = 5,0) og supplert med varierende gallekonsentrasjoner, noe som resulterer i sluttkonsentrasjoner på 0,0 (TSB kontroll), 1,0, 5,0 og 10,0 g /l galle, (Difco ). Overlevelsen av vegetative B. cereus
celler ble vurdert av plating de aktuelle diltutions i PPS på TSA.
Toxin produksjon
Produksjon av enterotoksiner Nhe og Hbl ble bestemt ved å analysere 1 ml prøver etter filtrering (0,2 mikrometer sprøyte filtre, Whatman) med Duopath® cereus enterotoksiner (Merck) i henhold til produsentens instruksjoner. Search Results
Vekst av B. cereus
i lasagne verde
lasagne verde ble inokulert med ca. . 6,0 CFU /g B. cereus
og inkubert i 24 timer ved 22 ° C for å oppnå en meget konsentrert inokulum av vegetative B. cereus
celler dyrket i et sammensatt mat matrise med mat bakterieflora ved å simulere lagring av forurenset lasagne ved romtemperatur. Dette resulterte i lasagne verde inneholder ca. 8,5 log CFU /g totalt bakterier, som B. cereus
utgjorde 7,0 til 8,0 CFU /g, avhengig av stammen (tabell 2). B. cereus
NVH 1230-1288 viste en stabil sporekonsentrasjon på 3,5 log sporer /g, som stammer fra TSB podestoff. I motsetning til dette ble ytterligere sporedannelsen tydelig fra ca. 4,0 log sporer /g til 4,5 log sporer /g etter 30 timer for B. cereus
FF 73. Bemerkelsesverdig, B. cereus
ATCC 14579 ikke gi noen sporer etter 30 timers inkubasjon, med bare svært lave tall ( 3,0 sporer /g) ble observert i kun en av de 3 replikere poser. Etter inokulering og inkubasjon ble lasagne Verde således sterkt forurenset med B. cereus
vegetative celler (7,0 til 8,0 log CFU /g) i den stasjonære vekstfase og lave mengder av B. cereus sporer
(opp til 4,0 logger sporer /g) .table 2 Vekst av de tre ulike B. cereus stammer i maten før simulering av gastrointestinal passasje; gjennomsnittsverdier av uavhengige forsøk i tre eksemplarer uttrykt i log CFU /g ± standardavvik presenteres
B. cereus stamme
Tid (h)
0

22
24
26
28
30
B. cereus
ATCC14579
Totalt teller
5,8 ± 0,1
8,3 ± 0,6
8,4 ± 0,3
8,8 ± 0,2
8,8 ± 0,3
8,9 ± 0,2
Total B. cereus
5,7 ± 0,1
6,9 ± 0,1
6,9 ± 0,1
6,7 ± 0,3
7,2 ± 0,3
7,0 ± 0,2
B. cereus
sporer
< 2,0 ± 0,0
< 2,0 ± 0,0
< 2,0 ± 0,0
< 2,0 ± 0,0
< 2,0 ± 0,0
2,3 ± 0,6
B. cereus
NVH 1230-1288
Totalt teller
5,9 ± 0,1
8,2 ± 0,2
8,4 ± 0,1
8,9 ± 0,0
8,9 ± 0,1
8,8 ± 0,2
Total B. cereus
6,2 ± 0,3
7,9 ± 0,2
8,2 ± 0,1
8,5 ± 0,2
8,3 ± 0,3
7,9 ± 0,1
B. cereus
sporer
3,5 ± 0,6
3,5 ± 0,2
3,3 ± 0,6
3,4 ± 0,6
3,3 ± 0,6
3,4 ± 0,6
B. cereus
FF 73
Totalt teller
5,7 ± 0,1
8,5 ± 0,1
8,7 ± 0,1
9,0 ± 0,0
9,0 ± 0,3
8,9 ± 0,3
Total B. cereus
5,7 ± 0,1
8,1 ± 0,2
8,0 ± 0,1
8,3 ± 0,1
8,2 ± 0,1
8,3 ± 0,2
B. cereus
sporer
3,8 ± 0,2
3,9 ± 0,4
3,9 ± 0,4
4,0 ± 0,5
4,0 ± 0,3
4,5 ± 0,1
Ingen produksjon av enterotoksiner ble oppdaget i lasagne verde etter 24 timer av B. cereus
ATCC 14579 og B. cereus
NVH 1230-1288, mens Nhe ble sporadisk påvist (hos 1 av 3 replikater) i tilfelle av B. cereus
FF 73. Dette var sannsynligvis på grunn av den sure pH 5,5 av lasagne verde og den heller lave inkubasjonstemperatur på 22 ° C, som ikke er optimale for enterotoksin produksjon [1]. Men prefabrikkerte enterotoksiner i mat er ikke ansvarlig for diaré matforgiftning, siden de er raskt nedbrutt i løpet av gastrointestinal passasje [2].
In vitro
simulering av gastrointestinal passering av B. cereus
vegetative celler
den lasagne verde forurenset med 7,0 til 8,0 log CFU /ml B. cereus
vegetative celler i den stasjonære vekstfase ble underkastet in vitro
simulering av gastrointestinal passasje (figur 1). Survival of B. cereus plakater (< 1 log reduksjon) ble observert under munnen fasen og de første 30 min av magen fase når pH i magesekken var mellom 5,0 og 4,0. Deretter når gastrisk pH synker under 4,0, de vegetative cellene ble raskt inaktivert i magen fasen, merkbar som en rask nedgang av den totale B. cereus
teller til lignende verdier av B. cereus
spore teller i mage fartøy. Den B. cereus
totalt og spore tellinger i løpet av tolvfingertarmen fase forble ca. 1,0 log CFU /ml for B. cereus
ATCC 14579, ca. 2,5 log CFU /ml for B. cereus
NVH 1230-1288 og ca. 3,5 log CFU /ml for B. cereus
FF 73. Interessant, spore tellinger av B. cereus
NVH 1230-1288 redusert i magen fase i løpet av den siste timen og mest sur pH. Siden den totale B. cereus
teller ikke endret, indikerer dette oppstart av spore spiring. B. cereus ATCC 14579
viste inkonsekvent sporeproduksjon, hvilket resulterer i fravær av sporer i løpet av de første to simuleringer og meget lave tall (litt over deteksjonsgrensen på 1,0 sporer /ml) i løpet av de to siste forsøkene. Figur 1 Inaktivering av vegetative celler i løpet av dynamisk in vitro simulering av gastrointestinal passasje med B. cereus ATCC 14579 (1), B. cereus
NVH 1230-1288 (2) og B. cereus
FF 73 (3); B. cereus
total (a) og (b) sporetall ble bestemt ved utsåing på MYP uten og med varmebehandling (10 minutter ved 80 ° C), respektivt, i lasagnen Verde (□), munnen fasen (◊), magen fase (Δ) og tolvfingertarmen fase (○); gjennomsnittsverdier og standardavvik av triplikat eksperimenter på forskjellige dager er presentert.
ingen deteksjonstester for enterotoksiner Nhe og Hbl ble utført, siden ingen vekst ble observert i løpet av en hvilken som helst av de gastrointestinale faser, noe som er en forutsetning for enterotoksin produksjon [1 ].
Bile toleranse av B. cereus
vekst og overlevelse av B. cereus
NVH 1230-1288 ble bestemt i nærvær av varierende galle konsentrasjoner (figur 2). Ved optimale betingelser, dvs. nøytral TSB med pH 7,2, effekten av galle var konsentrasjonsavhengig. Den laveste konsentrasjon av 1,0 g /l galle, resulterte i en populasjon reduksjon på ca.. 30% sammenlignet med kontrollen (TSB uten galle) ved tid 0 timer. Dessuten, etter en time ble levedyktig telling ble redusert med ca. 40% i forhold til konsentrasjonen i TSB med 1,0 g /l galle, ved 0 timer. Imidlertid, etter 2 timer gjenvinning og utvekst av de gjenværende celler ble observert, fordi B. cereus
-konsentrasjonen var lik som fra 0 timer og til slutt etter 3 h, befolkningen hadde økt med ca.. En logg i forhold til at på 0 h. Men tilstedeværelsen av 5,0 g /l galle, induserte en varig nedgang til 4,1 log CFU /mL i gjennomsnitt (inaktivering av 88% av den vegetative celler), og at på 10,0 g /l galle, til 3,9 log CFU /mL (inaktivering av 94 %). Figur 2 Overlevelse av B. cereus NVH 1230-1288 i Trypton Soya Broth (TSB) ved 37 ° C med pH 7,2 (A) og pH 5,0 (B) med varierende galle (galle,, Difco) konsentrasjoner: 0,0 g /l (hvit ), 1,0 g /L (lys grå), 5,0 g /l (mørk grå) og 10,0 g /L (sort).
I TSB ved sur pH 5,0, ca. 99% av B. cereus
Inokulumet ble raskt inaktivert av galle eksponering, uavhengig av galle-konsentrasjonen, noe som resulterer i konstant total B. cereus
tellinger av omtrent. 3,0 log CFU /ml. B. cereus
inokulum inneholdt mellom 0,1 og 0,2% sporer, ble så konstant sporetelling oppnådd under hele forsøket: 2,6 (± 0,2) log sporer /ml ved begynnelsen og 2,5 (± 0,3) log sporer /ml ved slutt. Tar dette spore befolkningen i betraktning, de vegetative cellene fortsatt utgjort flertallet (ca. 60%) av 1% galle motstandsdyktig B. cereus
.
Diskusjon
overlevelse av vegetative celler under mage passasje var lik som i tidligere studier med potetmos medium [3]. I løpet av disse eksperimentene, ca. 10% av de vegetative cellene overlevde mage passasje, de fleste av dem i den første mage brøkdel når gastrisk pH var mellom 5,0 og 4,0. Disse cellene ble overført levende i tarm fartøyet og således mellom 5,5 og 6,5 log CFU /ml B. cereus
var forventet i tarm fartøyet. Men mye lavere teller, som rundet den B. cereus
spore teller, ble innhentet i løpet av tolvfingertarmen fasen. Dette indikerer at de vegetative celler som overlevde gastrisk passasje ble inaktivert i tarm-miljø. Batch ruge eksperimenter i TSB og varierende konsentrasjoner av galle viste at mesteparten (99,1%) av vegetative celler ble inaktivert umiddelbart etter galle eksponering ved pH 5,0, uavhengig av galle konsentrasjon i området 1,0 til 10,0 g galle, /l. I konklusjonen, ble vegetative B. cereus
celler som overlevde gastric passasje eliminert under den påfølgende tolvfingertarm fase av bakteriedrepende effekt av galle.
Bakteriedrepende effekt av galle på vegetative B. cereus
celler var pH-avhengig. Ved pH 7,0, ble inaktive korrelert med galle konsentrasjon, og den laveste konsentrasjonen galle (1 g /l) til og med tillates overlevelse og vekst. I motsetning til dette, ved pH 5,0, øyeblikkelig inaktivering av mesteparten (mer enn 99%) observert for vegetative celler, uavhengig av galle konsentrasjon (i området på 1,0 til 10,0 g /l). I likhet med våre resultater, inaktivering av Listeria monocytogenes av gallesyrer ble sterkt øket ved sur pH 5.5 [26]. Inaktivering av bakterier av galle er lik den som av organiske syrer, som begge er særlig effektive ved lav pH. Den logaritmisk Syrekonstanten (pKa) av konjugerte gallesyrer er ca 5,1, men konjugering med glycin senker pKa ca. 3.7 [27]. Konjugering med taurin fører til en enda lavere pKa-verdi på ca. 1.5 [28]. Som en konsekvens, er de fleste av konjugerte gallesyrer dissosiert og ionisert ved de fleste fysiologiske og intestinal pH-verdier, nemlig 95,24% ved pH 5,0 og 99,95% ved pH 7,0 for glycoconjugated gallesyrer. Bare de organiserte former av gallesyrer kan passivt krysse cellemembranen, mens dissosiert og ionisert konjugerte gallesyrer krever spesifikke aktive transportsystemer [29]. Som et resultat, kan 4,67% av de konjugerte gallesyrer gå inn i B. cereus
celler ved pH 5,0, i motsetning til bare 0,03% ved pH 7,0. Videre er den indre pH av levedyktige B. cereus
celler alltid ligger mellom 6,0 og 7,5, avhengig av eksterne pH og dyrkningsbetingelser [30]. Etter at de udissosierte gallesyrer har diffundert inn i B. cereus
celler, de fleste av dem (99,50 til 99,98%) gjennomgår intracellulær dissosiasjon, noe som resulterer i dødelig indre surgjøring.
Det ble rapportert at visse matvarekomponenter øket gallen toleranse av B. cereus
vegetative celler i tarm medium med pH 6,5 [22]. Men den sammensatte mat matrise lasagne verde ikke dempe de skadelige effektene av galle på B. cereus
under våre eksperimenter ved pH 5,0. Det er mulig at mat typen virkninger bare observert på en mer optimal pH-verdi for denne matbårne patogene, når mer uttalt forskjell mellom behandlinger er forventet.
I motsetning til vegetative celler, ble B. cereus
sporer inaktiveres ikke av galle , selv om de ikke spirer i den intestinale medium inneholdende 5 til 10 g /l galle,. Dette faller sammen med observasjoner av dynamisk simulering av gastrointestinal passasje av sporer [25], hvor sporer var upåvirket under munnen, magen og tolvfingertarmen fase og bare startet spiring under dialyse, når galle-konsentrasjonen ble redusert fra 5,0 g /l galle, til < 0,5 g /l og de av sats inkuberingsbetingelser eksperimentene [31], hvor sporene spirer i 2 timer i tarm simulering medium inneholdende 1,0 g /l galle. Andre studier rapporterte også at sporer var i stand til å spire og vokse i simulert tarmvæske inneholdende galle (1,5 g galle, /l) [32], og at den galle motstanden av B. cereus
sporer var bedre enn for vegetative celler [33 ]. I konklusjonen, høy galle konsentrasjoner (≥ 5 g /l galle,) tillater ikke spore spiring, mens lav galle konsentrasjoner (< 5 g /L). Indusere spiring og utvekst
Foruten sin betydning i nærings fordøyelse og absorpsjon, galle er også en viktig antimikrobielle forbindelse i tarmen [7]. Unormale lave tarmgalle nivåer kan forekomme hos personer med galle eller leverfeil eller mangler i den enterohepatiske sirkulasjonen, som kan gjengi dem spesielt utsatt for diaré på grunn av økt overlevelse av inge og tarmbakterier. Dessuten, gallesyrer er endogene avføringsmidler, så dårlig absorpsjon av gallesyrer fra tynntarmen, som fører til å øke galle nivåer i terminalen tynntarmen og tykktarmen, kan også føre til diaré [34].
Konklusjon
B. cereus
vegetative celler var ikke i stand til å overleve gastrointestinal passasje som simulert ved in vitro-forsøk
, til tross for den høye konsentrasjonen av podestoff 7,0 til 8,0 log CFU /ml og dyrking av inokulum i kompositt mat matrise lasagne Verde. Flertallet av vegetative celler ble inaktivert av magesyre, og de overlevende celler ble deretter inaktivert ved galle i løpet av tolvfingertarmen fasen. I kontrast, B. cereus
sporer levde simulering av gastrointestinal passasje og forble sporer under ugunstige forhold for spiring (og utvekst). Derfor infeksiøs dose for B. cereus
varierer trolig i henhold til den fysiologiske formen fortært, er lavere for de svært motstandsdyktige sporer. Selv om gastrointestinal overlevelse var lik for de ulike stammene, deres sporulation tendens varierte betydelig, noe som igjen har viktige implikasjoner for gastrointestinal overlevelsespotensial og dermed infeksiøs dose av de forskjellige B. cereus
stammer.
Erklæringer
forfatternes opprinnelige innsendte filer for Images Nedenfor er linkene til forfatternes originale innsendte filer for bilder. 13099_2012_68_MOESM1_ESM.pdf Forfatteroriginalfilen for figur 1 13099_2012_68_MOESM2_ESM.pdf Forfatteroriginalfilen for figur 2 Konkurrerende interesse
Vi, alle forfattere, erklærer at vi har ingen konkurrerende interesser. Bidrag
Forfatternes SC, MU og TVdW designet forsøkene; SC og SH utført eksperimentelt arbeid og behandlet resultatene; SC skrev manuskriptet hjulpet av MU, NB og TVdW. Alle forfattere lese og godkjent den endelige manuskriptet.

• Vedvarende lav uttrykk for hZip1 i mucinkjertler karsinom i eggstokken, tykktarm, mage og lunge
• Exsanguinating øvre GI blør på grunn av uvanlig arteriovenøs malformasjon (AVM) i mage og milt: en kasuistikk